熊麗麗 薛秀珍 段麗艷 蔡曉磊

河南科技大學(xué)第一附屬醫(yī)院(洛陽，471000)

子宮內(nèi)膜癌是婦科常見的惡性腫瘤之一，近年發(fā)病率呈年輕化趨勢，嚴(yán)重威脅女性身心健康。深度探究子宮內(nèi)膜癌分子水平的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，是改善患者術(shù)后生活質(zhì)量和進(jìn)行靶向治療的關(guān)鍵。近年來，研究發(fā)現(xiàn)新型Ⅱ型絲氨酸蛋白酶Matriptase及其同源性抑制物肝細(xì)胞生長因子活化因子抑制劑1(HAI-1)在多種上皮源性惡性腫瘤發(fā)生、發(fā)展及侵襲過程中相互作用[1]。鑒于此，結(jié)合子宮內(nèi)膜癌同為上皮源性腫瘤的理論基礎(chǔ)，推測Matriptase及HAI-1在子宮內(nèi)膜癌中也可能表達(dá)異常，但相關(guān)的研究較少，尚無明確定論。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase及HAI-1的表達(dá)情況，結(jié)合子宮內(nèi)膜癌的臨床病理特征進(jìn)行分析，以期為子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后及治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來源及臨床資料

選取 2016年1月—2018 年6月在本院病理科存檔的內(nèi)膜組織石蠟標(biāo)本160例，術(shù)前未接受放、化療及激素類藥物治療，無其他器官的原發(fā)惡性腫瘤。其中正常子宮內(nèi)膜組，因子宮肌瘤行全子宮切除術(shù)，術(shù)后經(jīng)病理確診的正常子宮內(nèi)膜組織40例，年齡(51.1±5.2)歲；不典型增生組，全子宮切除或子宮內(nèi)膜電切術(shù)，術(shù)后經(jīng)病理確診為子宮內(nèi)膜不典型增生50例，年齡(51.9±6.1)歲；子宮內(nèi)膜癌組，術(shù)后病理確診為子宮內(nèi)膜癌組織70例，年齡(51.2±6.0)歲。按FIGO(2000)臨床病理分期劃分：Ⅰ期10例，Ⅱ期22例，Ⅲ期27例，Ⅳ期11例；組織學(xué)類型：腺癌65例，其他病理類型5例；組織學(xué)分級：高分化和中分化21例，低分化49例；有區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移33例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例。

1.2 檢測方法

采用免疫組織化學(xué)方法檢測組織Matriptase及HAI-1的表達(dá)。制備石蠟切片，逐級脫蠟至蒸餾水，3% H2O2室溫下浸泡8min，蒸餾水沖洗，抗原修復(fù)，抗體稀釋液濃度均為1：100，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，脫水透明，封片，光鏡觀察。所有操作均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行，免疫組織化學(xué)試劑盒(PV-9000)，DAB顯色試劑盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，兔抗Matriptase及兔抗HAI-1單克隆抗體購于北京博奧森生物有限公司。

1.3 結(jié)果判定

Matriptase及HAI-1定位于細(xì)胞漿，呈淺黃色至棕黃色染色，采用IP評分方法，綜合考慮染色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞數(shù)：①染色強(qiáng)度計(jì)分，細(xì)胞漿無染色計(jì)0分，淡黃色計(jì)1分，棕黃色計(jì)2分，棕褐色計(jì)3分；②陽性細(xì)胞數(shù)計(jì)分，細(xì)胞漿無染色細(xì)胞計(jì)0分，細(xì)胞數(shù)<1%計(jì)1分，細(xì)胞數(shù)1%～10%計(jì)2分，細(xì)胞數(shù)11%～33% 計(jì)3分，細(xì)胞數(shù)34%～66%計(jì)4分，細(xì)胞數(shù)>66%計(jì)5分。染色強(qiáng)度計(jì)分及陽性細(xì)胞數(shù)計(jì)分之和即為總分，總分<2分為陰性，2～4分為低表達(dá)(+)，5～6分為中等表達(dá)(++)，7～8分為高表達(dá)(+ + +)。判定結(jié)果由兩位病理學(xué)專家獨(dú)立閱片確定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)，樣本率的比較用χ2檢驗(yàn)及Fisher確切概率檢驗(yàn)，等級資料采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)，相關(guān)分析采用Spearman秩相關(guān)分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Matriptase及HAI-1在不同性質(zhì)子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)

Matriptase表達(dá)陽性率子宮內(nèi)膜癌>不典型增生>正常子宮內(nèi)膜，HAI-1表達(dá)陽性率子宮內(nèi)膜癌<不典型增生<正常子宮內(nèi)膜(P均<0.05)；3組間Matriptase及HAI-1的陽性表達(dá)情況構(gòu)成比也不完全相同，子宮內(nèi)膜癌組Matriptase表達(dá)(+++)所占比例(70%)高于正常子宮內(nèi)膜組(40%)和不典型增生組(0)(P<0.001)，而正常子宮內(nèi)膜組和不典型增生組無差異(P>0.05)；子宮內(nèi)膜癌組HAI-1表達(dá)(+++)所占比例(2.9%)低于正常子宮內(nèi)膜組(46.0%)和不典型增生組(92.5%)(P<0.001)，不典型增生組低于正常子宮內(nèi)膜組(P<0.05)。見表1、圖1、圖2。

表1 Matriptase及HAI-1在不同性質(zhì)子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)(例)

圖1 Matriptase在不同性質(zhì)子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)(×400)

圖2 HAI-1在不同性質(zhì)子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)(×400)

2.2 Matriptase及HAI-1與子宮內(nèi)膜癌臨床病理特征關(guān)系

子宮內(nèi)膜癌組織中，與組織高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期I-II期組織比較，組織低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及臨床分期Ⅲ-Ⅳ期的組織中Matriptase陽性率明顯較高，HAI-1陽性率明顯較低(P<0.05)，其中臨床分期I期與II期之間、Ⅲ期與Ⅳ期之間Matriptase及HAI-1陽性率無差異(P>0.05)；Matriptase及HAI-1的陽性率在患者年齡<50歲與≥50歲之間，以及腺癌與其他病理類型之間無差異(P>0.05)，見表2。

表2 Matriptase及HAI-1與子宮內(nèi)膜癌臨床及病理特征關(guān)系

2.3 子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase與HAI-1表達(dá)相關(guān)性

所有病例中，子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase及HAI-1表達(dá)均陽性者占所有病例的47.1%(33/70)，Matriptase陽性但HAI-1表達(dá)陰性占41.4%(29/70)；Spearman等級相關(guān)分析顯示在子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase與HAI-1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.485，P=0.008)。見表3。

表3 子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase與HAI-1表達(dá)相關(guān)性(例)

3 討論

子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展及侵襲是一個(gè)復(fù)雜的病理過程，涉及多種蛋白酶，包括基質(zhì)金屬蛋白酶和絲氨酸蛋白酶等，新發(fā)現(xiàn)的Ⅱ型絲氨酸蛋白酶Matriptase具有很強(qiáng)的癌基因潛能，可以降解細(xì)胞外基質(zhì)，參與細(xì)胞內(nèi)外的信號傳導(dǎo)，促進(jìn)細(xì)胞生長分化，與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)[2]。HAI-1是絲氨酸蛋白抑制劑，與Matriptase共表達(dá)和定位在細(xì)胞膜上，通過阻礙Matriptase信號傳遞相關(guān)因子的激活而起到抑制Matriptase活性的作用，進(jìn)而阻斷腫瘤細(xì)胞生長、分化、浸潤、血管形成和組織再生[3]。

有研究[4-5]表明與正常子宮內(nèi)膜組織比較，子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase顯著高表達(dá)，而HAI-1顯著低表達(dá)。這一結(jié)論也在細(xì)胞學(xué)研究中得到證實(shí)，有學(xué)者[6]應(yīng)用PCR技術(shù)檢測人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株中Matriptase及HAI-1的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)Matriptase的高表達(dá)以及HAI-1的低表達(dá)或無表達(dá)，而經(jīng)過轉(zhuǎn)染HAI-1后發(fā)現(xiàn)HAI-1明顯抑制matriptase。由于蛋白質(zhì)表達(dá)的多態(tài)性以及實(shí)驗(yàn)方法差異，部分結(jié)論存在爭議，主要表現(xiàn)在Matriptase及HAI-1在子宮內(nèi)膜癌中異常表達(dá)是否與臨床病理學(xué)特點(diǎn)存在相關(guān)性，有學(xué)者[7-8]認(rèn)為子宮內(nèi)膜癌臨床分期與Matriptase表達(dá)呈正相關(guān)，與HAI-1的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、組織低分化的子宮內(nèi)膜癌中Matriptase陽性率明顯升高，HAI-1的陽性率明顯降低，故推測Matriptase高表達(dá)及HAI-1的低表達(dá)參與了子宮內(nèi)膜癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。但也有研究[9-10]表明Matriptase及HAI-1表達(dá)異常程度與子宮內(nèi)膜癌是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，而與病理學(xué)類型相關(guān)。故關(guān)于Matriptase及HAI-1在子宮內(nèi)膜癌組織的表達(dá)情況尚需進(jìn)一步研究。

本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測了Matriptase及HAI-1在不同組織中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示：Matriptase表達(dá)陽性率在子宮內(nèi)膜癌中最高，HAI-1表達(dá)陽性率子宮內(nèi)膜癌中表達(dá)最低，子宮內(nèi)膜癌組Matriptase高表達(dá)所占比最高，HAI-1高表達(dá)所占比最低。值得一提的是，不典型增生組HAI-1高表達(dá)比例低于正常子宮內(nèi)膜組，推測Matriptase高表達(dá)及HAI-1低表達(dá)在子宮內(nèi)膜正常到癌變過程中發(fā)揮了重要作用。由于本研究中子宮內(nèi)膜正常組Matriptase陽性僅有1例，故正常子宮內(nèi)膜組和不典型增生組Matriptase陽性表達(dá)構(gòu)成比無差異。Matriptase及HAI-1在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)異常與組織學(xué)分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移以及臨床分期有關(guān)，但與患者年齡以及病理類型無關(guān)，說明Matriptase的活性增強(qiáng)且HAI-1的抑制作用減弱還可能促進(jìn)了子宮內(nèi)膜癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。此外，本文還分析了子宮內(nèi)膜癌組織中Matriptase與HAI-1表達(dá)的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)兩者存在負(fù)相關(guān)，進(jìn)一步證明了HAI-1是通過抑制Matriptase來發(fā)揮生物學(xué)作用的。

總之，子宮內(nèi)膜癌組織中存在Matriptase的高表達(dá)及HAI-1的低表達(dá)，這種異常表達(dá)可能參與了子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生，有望作為判斷子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后標(biāo)志物及治療靶點(diǎn)。但本研究病例數(shù)較少，且未對患者隨訪，這將是下一步研究方向。