馬旭彤，劉羿廷，張 瀛，張立強(qiáng)，皮佳鑫，劉志東

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 301617；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)藥研究院，天津 301617；3.天津中醫(yī)藥大學(xué)，現(xiàn)代中藥發(fā)現(xiàn)與制劑技術(shù)教育部工程中心，天津 301617，4.牡丹江友搏藥業(yè)有限責(zé)任公司，牡丹江 157000）

穩(wěn)定性是藥品必須具有的基本屬性，是其質(zhì)量可控性的主要內(nèi)容之一。中藥材質(zhì)量問題較為復(fù)雜，除采收期和采收年限影響其質(zhì)量外，在生產(chǎn)、貯存、使用過程中會(huì)導(dǎo)致藥材發(fā)生變質(zhì)，從而降低療效或產(chǎn)生有毒物質(zhì)。故穩(wěn)定性也是直接影響中藥材、中藥飲片和中成藥的臨床療效的重要環(huán)節(jié)之一。

動(dòng)物類中藥材，指來源于動(dòng)物的干燥體、除去內(nèi)臟的動(dòng)物干燥體、部分器官、病理或生理產(chǎn)物等藥用中藥材，是中藥材的重要組成部分，具有強(qiáng)心、鎮(zhèn)靜、抗血栓、抗驚厥等作用[1]，體現(xiàn)獨(dú)特的藥用價(jià)值。目前，中藥材穩(wěn)定性多聚焦在植物藥，通常以植物藥中主要有效成分、特殊成分為依據(jù)，檢測(cè)不同儲(chǔ)存條件下有效成分的含量，通過比較含量變化得到藥材穩(wěn)定性結(jié)論。然而，動(dòng)物類中藥材穩(wěn)定性研究基礎(chǔ)薄弱，缺乏針對(duì)動(dòng)物藥易腐敗變質(zhì)特點(diǎn)的穩(wěn)定性評(píng)價(jià)手段。因此，如何能結(jié)合動(dòng)物類中藥材溫度敏感及濕度關(guān)聯(lián)性大的特點(diǎn)，制定符合目前動(dòng)物類中藥材應(yīng)用實(shí)際的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)方法與指標(biāo)，是解決動(dòng)物類中藥材質(zhì)量控制問題的關(guān)鍵。

水蛭和地龍是疏血通注射液的主要成分，也是臨床常用的動(dòng)物類中藥材。課題組前期依據(jù)穩(wěn)定性研究指導(dǎo)原則，進(jìn)行了穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)常規(guī)條件下，水蛭和地龍藥材在短時(shí)間內(nèi)即出現(xiàn)發(fā)霉變質(zhì)現(xiàn)象，導(dǎo)致穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)無法進(jìn)行。因此，文章對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行了優(yōu)化，設(shè)定了更為溫和的實(shí)驗(yàn)條件，進(jìn)一步開展了水蛭、地龍藥材穩(wěn)定性補(bǔ)充研究，為動(dòng)物類中藥材選擇適宜條件開展穩(wěn)定性研究提供重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 儀器與藥品

1.1 儀器 十萬分之一天平（梅特勒托利多國際貿(mào)易有限公司，型號(hào)XP205）；pH計(jì)（德國Sartorius公司，型號(hào)PB-10）；離心機(jī)（賽默飛世爾科技公司，型號(hào)SORVALLST16RCentrifuge）；電熱恒溫水浴鍋（天津泰斯特儀器有限公司，型號(hào)DK-98-ⅡA）；馬弗爐（天津中環(huán)電爐股份有限公司，型號(hào)SX-G07123）；電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海博訊實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠，型號(hào)BG2-140）；安捷倫高效液相色譜儀（美國安捷倫公司，Agient1260型高效液相色譜儀）。

1.2 試藥和試劑 水蛭（批號(hào)171207，181101，181202）、地龍（批號(hào)171015，171016，171017）藥材由牡丹江友搏藥業(yè)有限責(zé)任公司提供；乙酸乙酯（純度：99.5%天津市康科德科技有限公司）；硫酸（純度：96% 天津市大茂化學(xué)試劑廠）；鹽酸（純度：38%天津市大茂化學(xué)試劑廠）均為分析純；纖維蛋白原（北京索萊寶科技有限公司）；凝血酶（北京索萊寶科技有限公司）為生物試劑。

2 方法與結(jié)果

2.1 實(shí)驗(yàn)條件的選擇 前期參考藥典穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則，進(jìn)行了穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)。但由于實(shí)驗(yàn)過程中水蛭地龍大量霉變，因此，依據(jù)藥典穩(wěn)定性指導(dǎo)原則中對(duì)溫度特別敏感原料藥物的（低溫）實(shí)驗(yàn)條件以及包裝在半透性容器中的藥物制劑的（低濕）實(shí)驗(yàn)條件，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化和改變，在更溫和的條件下，繼續(xù)實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)條件見表1。

2.2 考察項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn) 水蛭、地龍為《中華人民共和國藥典》一部收載品種，水蛭檢測(cè)項(xiàng)目包括鑒別、水分、含量測(cè)定等，地龍的檢測(cè)項(xiàng)目包括鑒別、酸堿度、浸出物等，考察項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)見表2。

2.3 影響因素實(shí)驗(yàn) 在高溫實(shí)驗(yàn)（溫度60℃），高濕實(shí)驗(yàn)（相對(duì)濕度（75±5）%）和強(qiáng)光照（4 500±500）lx）[2]條件下進(jìn)行影響因素實(shí)驗(yàn)，水蛭結(jié)果見下表3；地龍結(jié)果見下表4。

2.4 水蛭加速及長期實(shí)驗(yàn)結(jié)果 水蛭藥材在（30±2）℃、相對(duì)濕度（65±5）%條件下進(jìn)行加速實(shí)驗(yàn)，在低溫條件（6±2）℃、低濕條件[（25±2）℃，相對(duì)濕度（40±5）%]下進(jìn)行長期實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表5。

結(jié)果顯示，由于批間差異及質(zhì)量變化，水蛭藥材水分、總灰分、指紋圖譜等穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)存在波動(dòng)情況。加速實(shí)驗(yàn)中，水蛭藥材3批樣品在溫度（30±2）℃、（相對(duì)濕度 65±5）%的條件下放置6個(gè)月，藥材性狀、薄層鑒別、水分、總灰分、酸不溶性灰分、指紋圖譜以及含量均符合藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定；長期實(shí)驗(yàn)中，在低溫條件（6±2）℃和低濕條件（溫度（25±2）℃，相對(duì)濕度（40±5）%）下進(jìn)行長期實(shí)驗(yàn)，放置9個(gè)月，各項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果均符合水蛭藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

2.5 地龍加速及長期實(shí)驗(yàn)結(jié)果 地龍藥材在（30±2）℃、相對(duì)濕度（65±5）%條件下進(jìn)行加速實(shí)驗(yàn)，在低溫條件（6±2）℃、低濕條件[（25±2）℃，相對(duì)濕度（40±5）%]下進(jìn)行長期實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表6。

結(jié)果顯示，由于批間差異及質(zhì)量變化，地龍藥材水分、總灰分、指紋圖譜等穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)存在波動(dòng)情況。加速實(shí)驗(yàn)中，地龍藥材在加速條件[溫度（30±2）℃、相對(duì)濕度（65±5）%]下放置 6 個(gè)月，藥材各項(xiàng)指標(biāo)均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定；長期實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在低溫條件（溫度（6±2）℃和低濕條件[溫度（25±2）℃，相對(duì)濕度（40±5）%]下進(jìn)行長期實(shí)驗(yàn)，放置9個(gè)月，各項(xiàng)檢驗(yàn)結(jié)果均符合地龍藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定。

表1 實(shí)驗(yàn)條件的選擇

表2 考察項(xiàng)目及標(biāo)準(zhǔn)

表3 水蛭影響因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表4 地龍影響因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

動(dòng)物類中藥材是中藥材的重要組成部分?！吨腥A人民共和國藥典（2015版）》共收載102味動(dòng)物類中藥材，其中一部收載動(dòng)物類中藥材55味、提取物1種及含動(dòng)物的藥制劑458種，占全部品種的18%[3]。此外，《現(xiàn)代中藥大辭典》收載740種動(dòng)物類中藥材，《中華本草》收載1051種動(dòng)物類中藥材[4]。

水蛭和地龍為《中國藥典（2015版）》一部收載的品種。水蛭俗稱螞蟥，主要成分為水蛭素、組織胺等[5]，有抗凝、抗血栓等作用[6]；地龍是蚯蚓的干燥體，主要成分有蚯蚓素、地龍毒素，有抗凝血、降壓等作用[7]。由于受到人工粗放式養(yǎng)殖，加工工藝落后及技術(shù)缺陷的限制，水蛭、地龍等動(dòng)物類中藥材質(zhì)量存在諸多問題，因其對(duì)溫濕度敏感，儲(chǔ)存條件不佳會(huì)影響其臨床療效，故以之為例進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)研究，可為動(dòng)物類中藥材選擇適宜條件開展穩(wěn)定性研究提供重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

中國現(xiàn)行的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則為《中國藥典（2015版）》第四部中《9001原料藥物與制劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)原則》，但是，現(xiàn)有穩(wěn)定性研究實(shí)驗(yàn)條件與動(dòng)物類中藥材實(shí)際儲(chǔ)存條件相差較大，同時(shí)，由于缺乏關(guān)于溫濕度敏感的動(dòng)物類中藥材穩(wěn)定性研究的指導(dǎo)原則、法規(guī)標(biāo)準(zhǔn)和相關(guān)數(shù)據(jù)，導(dǎo)致一些動(dòng)物類中藥材全生命周期的質(zhì)量可控性差，嚴(yán)重影響其臨床療效及應(yīng)用。因此，如何結(jié)合動(dòng)物類中藥材自身特點(diǎn)，選擇適宜動(dòng)物類中藥材穩(wěn)定性研究的條件，為該類藥材的生產(chǎn)、包裝、貯存、運(yùn)輸以及制定有效期提供科學(xué)依據(jù)，是深入研究動(dòng)物類中藥材的關(guān)鍵。

表5 水蛭加速及長期實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表6 地龍加速及長期實(shí)驗(yàn)結(jié)果

課題組前期進(jìn)行了穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，考察了水蛭、地龍?jiān)谒幍湟?guī)定的常規(guī)條件所下出現(xiàn)的質(zhì)量波動(dòng)和變化情況。影響因素實(shí)驗(yàn)中，在相對(duì)濕度90%的高濕條件下，水蛭、地龍霉變率達(dá)100%；加速實(shí)驗(yàn)條件，即在溫度 40℃±2℃、相對(duì)濕度（75±5）%的條件下放置6個(gè)月，水蛭、地龍藥材從1個(gè)月開始出現(xiàn)霉變；此外，在溫度 30℃±2℃、相對(duì)濕度（65±5）%的條件下放置12個(gè)月，水蛭藥材個(gè)別批次在3個(gè)月到9個(gè)月也會(huì)出現(xiàn)大量霉變。前期結(jié)果表明，高濕條件對(duì)水蛭地龍藥材保存影響較大，常規(guī)實(shí)驗(yàn)條件不適宜開展水蛭、地龍的穩(wěn)定性研究，應(yīng)更改實(shí)驗(yàn)條件以保證藥材質(zhì)量。

根據(jù)前期結(jié)果，并參考指導(dǎo)原則中對(duì)溫度特別敏感原料藥物的（低溫）實(shí)驗(yàn)條件以及包裝在半透性容器中的藥物制劑的（低濕）實(shí)驗(yàn)條件，對(duì)實(shí)驗(yàn)條件進(jìn)行優(yōu)化和改變，以期在更為溫和的實(shí)驗(yàn)條件下，考察藥材質(zhì)量的穩(wěn)定性。結(jié)果表明，在優(yōu)化的實(shí)驗(yàn)條件下，水蛭、地龍未出現(xiàn)霉變及變質(zhì)情況，且穩(wěn)定性良好，質(zhì)量可控，故可以此為基礎(chǔ)，為動(dòng)物類中藥材選擇適宜條件開展穩(wěn)定性研究提供重要實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

4 結(jié)論

本文對(duì)水蛭、地龍藥材開展穩(wěn)定性研究。在實(shí)驗(yàn)條件下，水蛭地龍質(zhì)量穩(wěn)定可控。故可以采用在（30±2）℃，相對(duì)濕度（65±5）%的加速條件以及低溫條件[（6±2）℃]、低濕條件[（25±2）℃，相對(duì)濕度（40±5）%]作為動(dòng)物類中藥材的穩(wěn)定性研究條件。也可作為其他動(dòng)物類中藥材相關(guān)質(zhì)量研究和穩(wěn)定性研究的重要參考。