沈 雷 張保朝 付國惠

南陽市中心醫(yī)院，河南 南陽 473000

腦梗死是由多種因素共同作用誘發(fā)的神經(jīng)系統(tǒng)性疾病，神經(jīng)功能缺損是患者常見且嚴重的并發(fā)癥，減少神經(jīng)功能缺損程度是急性腦梗死治療的重要目標，故深入剖析可反映急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度的生物學指標十分關(guān)鍵[1]。微小RNA(miRNA)屬于單鏈RNA，在諸多疾病診斷及甄別中均有應(yīng)用，其中miR-210可充分反映腦組織損傷情況[2]。研究過程中還發(fā)現(xiàn)，細胞外基質(zhì)在胚胎發(fā)育與微環(huán)境的平衡維持中作用顯著，尤以fibulin家族最為突出，fibulin可促進細胞外基質(zhì)復(fù)合物合成，并在彈性纖維與基膜形成過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[3]。由此考慮，fibulin-5與miR-210是否在腦梗死患者神經(jīng)缺損病理過程中也扮演重要角色。搜索相關(guān)文獻發(fā)現(xiàn)，miRNA與急性腦梗死相關(guān)研究仍處于動物實驗或細胞學研究階段，而關(guān)于急性腦梗死患者miRNA表達的相關(guān)研究并不多見，加之miRNA種類較多，以miRNA為切入點探尋miR-210在急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損過程中的表達意義重大。鑒于此，本研究通過觀察急性腦梗死患者Fibulin-5、miR-210表達及神經(jīng)功能缺損情況，并分析Fibulin-5、miR-210表達與神經(jīng)功能缺損之間的關(guān)系，旨在指導(dǎo)未來對老年急性腦梗死患者早期神經(jīng)功能缺損的評估，可能對指導(dǎo)臨床診治有一定積極意義。

1 資料與方法

1．1一般資料在獲取醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會審核通過后，選取2016-01―2019-06南陽市中心醫(yī)院收治的急性腦梗死的老年患者64例為研究對象(觀察組)，男36例，女28例；年齡60～78(69.25±2.15)歲；合并高血脂癥25例，高血壓30例，冠心病23例，糖尿病31例(每位患者可不合并或合并單種或多種基礎(chǔ)性疾病)。另選取同期在南陽市中心醫(yī)院門診體檢的30例健康老年志愿者為對照組，男17例，女13例；年齡60～80(69.34±2.17)歲。2組受試者性別、年齡等對比無顯著性差異(P>0.05)，具有可比性。

1．2納入、排除標準納入標準：(1)腦梗死符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》中相關(guān)診斷標準；(2)年齡≥60周歲；頭顱CT影像學征象及數(shù)據(jù)確診為腦梗死；(3)患者及其家屬均知悉本次研究目的并自愿簽署知情同意書。排除標準：(1)合并免疫缺陷型疾病、感染、惡病質(zhì)等疾?。?2)合并其他心腦血管性疾?。?3)既往有腦卒中發(fā)病史，且遺留不同程度的神經(jīng)功能缺損癥狀；(4)合并重要臟器功能障礙患者；合并精神認知功能障礙患者。對照組實驗室檢查資料均有存檔。

1．3方法

1．3．1 神經(jīng)缺損判定標準：根據(jù)美國國立衛(wèi)生院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale，NIHSS)[4]評分評估64例老年急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損情況，量表評估內(nèi)容包括11個條目：構(gòu)音障礙、意識、感覺、視野、上、下肢運動、凝視、忽視癥、共濟失調(diào)、語言、面癱，共42分，分值越高表明神經(jīng)受損越嚴重。根據(jù)NIHSS評分判定急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損情況，NIHSS評分≥15分為神經(jīng)功能重度缺損，8～14分為神經(jīng)功能中度缺損，4～7分為神經(jīng)功能輕度缺損。

1．3．2 實驗室檢查

1．3．2．1 miR-210表達：急性腦梗死患者于入院次日，對照組體檢當天，采集空腹肘靜脈血5 mL，利用TRIzol Reagent RNA試劑盒(美國Invitrogen公司)提取血清總RNA，利用美國THERMO公司生產(chǎn)的ND-1000N紫外光光分度計檢測miR-210表達情況，通過獲取的PCR熒光強度，利用2-△△Ct方法得出miR-210相對表達量。

1．3．2．2 Fibulin-5：急性腦梗死患者于入院次日，對照組體檢當天，采集空腹肘靜脈血5 mL，室溫靜置30 min，以1 500 r/min速度離心20 min，分離上層血清，采用酶聯(lián)免疫吸附法及衰老關(guān)鍵蛋白5試劑盒(武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司)根據(jù)特殊軟件系統(tǒng)檢測 Fibulin-5濃度。上述所有涉及專業(yè)的操作均由專業(yè)人員按照儀器及試劑盒說明書并在嚴格質(zhì)控下完成。

2 結(jié)果

2．1老年急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損情況64例急性腦梗死患者經(jīng)NIHSS量表評估后顯示，NIHSS評分≥15(28.52±3.35)分20例，納入重度組；NIHSS評分8～14(11.25±1.13)分30例；NIHSS分值4～7(5.12±0.72)分14例，納入輕度組。

2.2觀察組與對照組整體Fibulin-5及miR-210表達比較觀察組Fibulin-5表達高于對照組，miR-210表達低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

2．3不同神經(jīng)缺損程度的急性腦梗死老年患者Fibulin-5及miR-210表達比較3組急性腦梗死老年患者Fibulin-5相比，重度組表達最高，后由高至低依次為中度組、輕度組；3組miR-210相比，重度組最低，后由低至高依次為中度組、輕度組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表2。

2．4急性腦梗死患者Fibulin-5及miR-210表達與神經(jīng)功能缺損(NIHSS評分)相關(guān)性分析經(jīng)相關(guān)性分析顯示，急性腦梗死患者Fibulin-5與NIHSS呈正相關(guān)(r>0，P<0.05)，miR-210表達與NIHSS呈負相關(guān)(r<0，P<0.05)。見表3。相關(guān)性散點圖見圖1。

表1 觀察組與對照組整體Fibulin-5及miR-210表達比較

圖1 A：Fibulin-5與NIHSS評分相關(guān)性散點圖；B：miR-210與NIHSS評分相關(guān)性散點圖Figure 1 A：Scatterplot of correlation between Fibulin-5 and NIHSS score；2：Scatterplot of correlation between miR-210 and NIHSS score

表2 不同神經(jīng)缺損程度的急性腦梗死老年患者Fibulin-5

表3 急性腦梗死患者Fibulin-5及miR-210表達與NIHSS評分之間的相關(guān)性 (r)Table 3 Correlation between the expression of Fibulin-5 andmiR-210 and NIHSS score in patients with acutecerebral infarction (r)

2．5Fibulin-5及miR-210表達預(yù)測急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損進展的價值將急性腦梗死老年患者神經(jīng)功能缺損狀態(tài)作為狀態(tài)變量(1=中重度神經(jīng)功能缺損，0=輕度神經(jīng)功能缺損)，將Fibulin-5、miR-210表達單獨與聯(lián)合檢測結(jié)果作為檢驗變量，繪制ROC曲線(圖2)得到Fibulin-5、miR-210單獨與聯(lián)合預(yù)測的AUC分別為0.980、0.905、0.983，均>0.9，預(yù)測價值較高。見表4。

表4 Fibulin-5及miR-210表達預(yù)測急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損進展的價值Table 4 Value of Fibulin-5 and miR-210 expression in predicting the progression of neurological deficitin patients with acute cerebral infarction

圖2 miR-210與NIHSS評分相關(guān)性散點圖；A：miR-210對急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損預(yù)測價值的ROC曲線圖；B：Fibulin-5及聯(lián)合診斷對急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損預(yù)測價值的ROC曲線圖Figure 2 Scatterplot of correlation between miR-210 and NIHSS score；A：ROC curve of the predictive value of miR-210 for neurological impairment in patients with acute cerebral infarction；B：ROC curve of the predictive value of Fibulin-5 and combined diagnosis on neurological deficit in patients with acute cerebral infarction

3 討論

急性腦梗死患者普遍伴有不同程度的神經(jīng)功能缺損，致殘率較高[5-6]，針對此類患病群體，若未及時采取有效干預(yù)，任由病情發(fā)展，即使患病個體生命得以挽回，但患者想要重歸日常生活或工作難度系數(shù)較大，由此可見，早期評估急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度，并及時干預(yù)，對促進患者良性預(yù)后的重要性[7-10]。

Fibulin-5是由成纖維細胞、血管平滑肌等多種細胞分泌的細胞外基質(zhì)糖蛋白，富含諸多氨基酸，在體內(nèi)發(fā)揮諸多生物學作用，主要體現(xiàn)在如下幾點：(1)遍布在蛋白豐富的組織中，通過與原纖維蛋白-1、彈性蛋白原等結(jié)合輔助并加速彈性纖維合成，發(fā)揮促纖維合成作用；(2)Fibulin-5會隨彈性纖維形成終結(jié)后下調(diào)，但當機體彈性纖維組織損傷后而被激活，并參與彈性組織的合成過程；(3)參與內(nèi)皮細胞增殖與遷徙，促進肉芽組織增生與Ⅰ型膠原合成來達到加速切口愈合的目的[11-14]。(4)在維持血管穩(wěn)定方面價值顯著：a、整合素與RGD序列結(jié)合使得內(nèi)皮細胞彼此之間及其與細胞外基質(zhì)之間的黏附力增強，纖連蛋白的重要受體--α5β1整合素可刺激活性氧簇的表達，因此腦缺血性疾病患者體內(nèi)纖連蛋白表達升高也會連帶ROS出現(xiàn)高表達狀態(tài)；b、Fibulin-5可與α5β1整合素競爭性結(jié)合，并抑制ROS低表達，繼而降低缺血缺氧條件下神經(jīng)元與內(nèi)皮細胞凋亡[15-18]。一般情況下，F(xiàn)ibulin-5呈低表達，但當機體出現(xiàn)血管損傷、動脈硬化斑塊激活，則內(nèi)皮細胞中Fibulin-5表達將顯著升高[19-21]。本研究顯示急性腦梗死患者Fibulin-5表達較高，表明Fibulin-5表達極有可能參與了急性腦梗死病程進展。

miRNA擁有17～25個核苷酸單鏈RNA分子，保守性、組織特異性、時序性均較高，可通過誘發(fā)靶mRNA翻譯與降解抑制，繼而調(diào)控轉(zhuǎn)錄后基因沉默，介導(dǎo)蛋白質(zhì)表達，在神經(jīng)系統(tǒng)增殖、分化、發(fā)育及疾病進展中均具有舉足輕重的地位[22-25]。miR-210屬于一種缺氧激活因子，是體外實驗中缺氧條件下唯一一個可被上調(diào)的miRNA，并在低氧環(huán)境下介導(dǎo)細胞調(diào)控過程，在缺血性腦部疾病中具有重要意義[26-28]。本研究顯示觀察組miR-210表達較對照組低，表明急性腦梗死發(fā)病可造成miR-210表達降低。分析可能原因，miR-210可被低氧因子誘導(dǎo)，當個體罹患急性腦梗死時，腦組織缺血缺氧，只有miR-210表達降低才能在低氧狀態(tài)下得以暴露，被低氧誘導(dǎo)因子辨識成功后誘導(dǎo)、轉(zhuǎn)錄[29-31]。

綜合Fibulin-5及miR-210生物學特性推測，在急性腦梗死患者病情進展中，F(xiàn)ibulin-5、miR-210的表達可能與神經(jīng)功能缺損之間也存在某種密不可分的關(guān)系。本研究進一步經(jīng)相關(guān)性檢驗發(fā)現(xiàn)，急性腦梗死患者Fibulin-5與NIHSS評分呈正相關(guān)，miR-210表達與NIHSS評分呈負相關(guān)，初步證實上述猜測。為進一步驗證Fibulin-5及miR-210表達與急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損的關(guān)系，本研究ROC曲線顯示，F(xiàn)ibulin-5及miR-210單獨及聯(lián)合預(yù)測急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損程度的AUC分別為：0.985、0.905、0.983，均>0.9，預(yù)測價值均較高，最終驗證了上述猜測。由此考慮，在未來臨床可通過適時檢測急性腦梗死患者Fibulin-5及miR-210表達，并以此評估急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損情況，并對異常表達患者及時給予針對性干預(yù)，旨在通過調(diào)控急性腦梗死患者Fibulin-5及miR-210表達，以達到延緩急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損進展的目的[32-33]。本研究在分析急性腦梗死老年患者Fibulin-5、miR-210表達情況與神經(jīng)功能缺損程度上取得初步進展，但因樣本數(shù)量有限，加之未對兩個主要指標之間的關(guān)系進行深入分析，還需在未來展開大樣本、前瞻性、長時間的深入性研究加以驗證，旨在為改善急性腦梗死患者神經(jīng)功能缺損提供新的切入點。

Fibulin-5、miR-210在急性腦梗死患者中普遍呈異常表達，其中Fibulin-5過表達、miR-210低表達可能參與了急性腦梗死患者的神經(jīng)功能缺損進程，且對預(yù)測評估患者神經(jīng)功能缺損進展有一定價值。