彭婧，張敏，甘維梅

(南昌市洪都中醫(yī)院，江西 南昌330000)

孕婦妊娠期間自然流產(chǎn)(SA)的發(fā)生率約為15%，其中絕大多數(shù)為早期流產(chǎn)，即妊娠時間低于12 周，其常見原因為胚胎染色體異常、免疫功能異常、黃體功能不足、甲狀腺功能減退癥以及感染等[1]。盡管經(jīng)過一系列檢查，還是有60%～70%的早期流產(chǎn)無法找到明確原因[2]。由于在孕早期蛻膜組織淋巴細胞中殺傷細胞(NK)占主要地位，推測蛻膜組織中NK細胞異常可能是孕早期自然流產(chǎn)的重要病因[3]。本研究通過流式細胞術(shù)分析早期自然流產(chǎn)孕婦與早期正常妊娠孕婦蛻膜組織中NK細胞亞群比例的差異，進一步探討其與早期流產(chǎn)的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2018年1月—2018年12月收治的早期自然流產(chǎn)孕婦20 例作為觀察組，年齡(28.43±2.12) 歲，體質(zhì)量指數(shù)(BMI)(20.43±1.38) kg/m2，孕周(8.75±1.89) 周，流產(chǎn)次數(shù)(2.52±0.42) 次；經(jīng)相關(guān)檢查排除染色體、自身免疫、感染、遺傳等因素引起的流產(chǎn)。選擇同期正常妊娠行早期人工流產(chǎn)的孕婦20 例作為對照組，年齡(27.23±2.08) 歲，BMI(20.78±1.48) kg/m2，孕周(8.01±1.22) 周，流產(chǎn)次數(shù)(2.01±0.23) 次；既往無不良妊娠史，自愿終止早期妊娠且B超顯示胎兒發(fā)育正常。兩組孕婦的年齡、孕周、BMI、流產(chǎn)次數(shù)等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準，且所有孕婦均已簽署知情同意書。

1.2 方法

所有孕婦在行無痛清宮術(shù)前均接無菌負壓吸引瓶，吸取其蛻膜組織置于預冷的磷酸鹽緩沖液(PBS)離心管中，迅速送至醫(yī)院中心實驗室進行蛻膜組織單細胞懸液的制備。然后用流式細胞儀(美國BeckmanCoulte公司)以CD45-FITC/CD(56+16)-RD1/CD3-PC5對蛻膜組織單細胞懸液進行染色，并以CD45設(shè)門篩選出總淋巴細胞，用CD3和CD(56+16)雙抗標記蛻膜NK細胞。同時所有孕婦在行清宮術(shù)當天早晨空腹抽取靜脈血3 mL，用于檢測外周血雌二醇(E2)、孕酮(P)水平，所有操作均嚴格按試劑盒說明書進行。

1.3 統(tǒng)計學方法

2 結(jié) 果

2.1 兩組孕婦蛻膜組織NK細胞亞群表型特征比較

所有孕婦蛻膜組織淋巴細胞中NK細胞總量(即CD3-CD56+細胞)占70%左右，兩組孕婦蛻膜組織內(nèi)NK細胞總量比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。觀察組孕婦蛻膜組織內(nèi)CD3-CD56+CD16-NK細胞比例明顯低于對照組，CD3-CD56+CD16+NK細胞比例明顯高于對照組，差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(見表1)。

表1 兩組孕婦蛻膜組織NK細胞亞群表型特征比較

2.2 兩組孕婦外周血E2和P水平比較

觀察組孕婦外周血E2和P水平均明顯低于對照組，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)(見表2)。

表2 兩組孕婦外周血E2和P水平比較

2.3 蛻膜組織NK細胞亞群比例與E2和P的關(guān)系

Pearson相關(guān)分析結(jié)果顯示，所有孕婦外周血E2和P水平與蛻膜組織內(nèi)CD3+CD56+CD16+NK細胞比例均呈負相關(guān)(r值分別為-0.463和-0.502)，與CD3-CD56+CD16-NK細胞比例均呈正相關(guān)(r值分別為0.455和0.476)。

3 討 論

早期流產(chǎn)主要是孕婦在妊娠12 周以前發(fā)生腹痛、陰道流血的現(xiàn)象。早期流產(chǎn)時，絨毛與子宮底蛻膜的聯(lián)系尚不牢固，常先有陰道流血，然后伴有陣發(fā)性下腹疼痛。NK細胞是不同于T和B淋巴細胞的第三類淋巴細胞，不表達特異性抗原識別受體，妊娠時蛻膜組織內(nèi)NK細胞含量非常豐富，約占蛻膜組織內(nèi)淋巴細胞的70%～80%，由于其直接識別胎兒抗原，推測蛻膜組織NK細胞在母胎界面免疫耐受中發(fā)揮著重要作用[4-5]。

根據(jù)NK細胞表面抗原標志，NK細胞亞群主要可以分為CD3-CD56+CD16+NK細胞和CD3-CD56+CD16-NK細胞，蛻膜組織內(nèi)NK細胞則以CD3-CD56+CD16-亞群為主(約占90%)，而外周血以CD3-CD56+CD16+亞群為主(約占95%)[6]。與外周血NK細胞相比，蛻膜組織NK細胞有著不同的作用，由于CD16的低水平表達，蛻膜組織NK細胞表現(xiàn)出對表達主要組織相容性復合物Ⅰ類(MHC-Ⅰ)分子的滋養(yǎng)層細胞殺傷能力的下降，說明蛻膜組織中CD16的低表達水平可能有利于維持妊娠過程中滋養(yǎng)細胞功能[7-8]。

本研究結(jié)果顯示，所有孕婦蛻膜組織淋巴細胞中NK細胞總量(即CD3-CD56+細胞)占70%左右，其中正常早期妊娠孕婦蛻膜組織NK細胞亞群主要為CD3-CD56+CD16-NK細胞，約占(82.13±9.74)%，而早期自然流產(chǎn)孕婦CD3-CD56+CD16-NK細胞比例均值為(73.86±9.95)%，明顯低于正常早孕組，而CD3-CD56+CD16+NK細胞比例為(16.32±3.35)%，明顯高于正常早孕孕婦。CD16又稱為Leu11抗原，是NK細胞表面一種低親和力IgG Fc受體(FcγRⅢ)，主要介導NK細胞的自然殺傷和抗體依賴的細胞介導的細胞毒效應(ADCC)作用，當蛻膜組織內(nèi)CD3-CD56+CD16+NK細胞比例升高、而CD3-CD56+CD16-NK細胞比例降低時不利于胚胎發(fā)育及妊娠的維持，導致孕婦妊娠早期發(fā)生流產(chǎn)[9-10]。E2主要由孕婦的黃體以及胎盤分泌，可以反映孕婦胎盤的生理狀態(tài)與發(fā)育狀態(tài)。正常早期妊娠孕婦黃體以及胎盤分泌良好，E2水平較高，若黃體和胎盤受到外界影響，E2水平降低可影響胚胎發(fā)育，最終導致流產(chǎn)[11]。而P是妊娠早期重要的監(jiān)測指標，可用于反映早孕期胚胎的發(fā)育情況，其血中P水平降低可能導致子宮平滑肌纖維收縮，血供不足，影響胚胎發(fā)育而出現(xiàn)流產(chǎn)[12]。本研究結(jié)果顯示，早期自然流產(chǎn)的孕婦外周血E2和P水平均明顯低于正常早期妊娠的孕婦，且與蛻膜組織內(nèi)CD3-CD56+CD16+NK細胞比例均呈負相關(guān)，與CD3-CD56+CD16-NK細胞比例均呈正相關(guān)，說明蛻膜組織內(nèi)NK細胞比例失調(diào)可通過損傷胎盤等組織影響孕婦E2和P的表達。

綜上所述，早期自然流產(chǎn)孕婦較正常早期妊娠孕婦蛻膜組織中CD3-CD56+CD16-NK細胞比例降低，而CD3-CD56+CD16+NK細胞比例升高，早孕期蛻膜組織NK細胞亞群比例失衡可影響E2和P的分泌，可能是導致早期流產(chǎn)的重要原因。