孫志濤

【摘 要】：目的：研究Sonic hedgehog信號(hào)通路在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展的進(jìn)程中作用機(jī)制。方法：隨機(jī)選擇2019年1月-2019年12月至我院行結(jié)直腸癌手術(shù)的患者40例。取所有患者術(shù)中病灶部位組織和距離腫瘤10cm以上的正常粘膜組織行免疫組化檢查，比較患者正常結(jié)直腸組織和結(jié)直腸癌組織中SHh的表達(dá)情況以及陽(yáng)性表達(dá)率。結(jié)果：正常組織中SHh表達(dá)以（-）、+為主，癌組織中表達(dá)以+++、++++表達(dá)為主。正常組織中SHh表達(dá)陽(yáng)性率為2.5%，明顯低于癌組織中82.50%，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.05）。結(jié)論：Sonic hedgehog信號(hào)通路在結(jié)直腸癌病灶中呈現(xiàn)高表達(dá)，提示與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】：SHh、結(jié)直腸癌;傳導(dǎo)通路

結(jié)直腸癌是臨床常見(jiàn)的惡性腫瘤，但是其病因病機(jī)尚未完全明確。配體音刺猬因子（Sonic hedgehog，SHh）是哺乳動(dòng)物Hedgehog（Hh）信號(hào)通路的主要成員之一，其介導(dǎo)的做種靶基因在脊椎動(dòng)物的胚胎發(fā)育過(guò)程中起到重要的作用[1]。而研究發(fā)現(xiàn)，Hh信號(hào)通路發(fā)生異?；罨吓c腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。為了觀察SHh信號(hào)通路在結(jié)直腸癌發(fā)生發(fā)展進(jìn)程中的作用機(jī)制，我院進(jìn)行了本次研究，以便為結(jié)直腸癌的治療尋找新的靶點(diǎn)。

1 資料與方法

1.1 患者選擇

隨機(jī)選擇2019年1月-2019年12月至我院行結(jié)直腸癌手術(shù)的患者40例進(jìn)行臨床研究。所有患者均由術(shù)后病理檢查確定診斷。其中男性患者27例，女性患者13例，年齡41-76歲，平均年齡（57.33±6.33）歲，病變部位升結(jié)腸7例，橫結(jié)腸6例，降結(jié)腸8例，乙狀結(jié)腸11例，直腸8例。所有患者術(shù)前均未給予放化療以及免疫治療。

1.2 方法

1.2.1 研究方法

取所有患者術(shù)中病灶部位組織和距離腫瘤10cm以上的正常粘膜組織。將取得組織修剪成 1.5 cm×2.0cm ×0.3cm大小的組織塊置于10% 中性甲醛溶液中固定8-24 h ，常規(guī)制備蠟塊，放置于- 20℃，冰箱干燥保存，行免疫組化方法檢測(cè)。免疫免疫組化實(shí)驗(yàn)中所需試劑兔抗人SHh單克隆抗體、SP試劑盒、DAB顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋公司。SABC免疫組化試劑盒購(gòu)自北京中山生物技術(shù)有限公司。

采集到的患者病理組織常規(guī)制成蠟塊，組織切片，在68℃下烤片12h，常規(guī)行二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水，放置于98℃的EDTA緩沖液中煮沸3min，自然冷卻20min，冷水沖洗高壓鍋至室溫，PBS沖洗3次，每次2min，以修復(fù)抗原。阻斷滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，滴加一抗，室溫放置3h，使用PBS沖洗3次，每次2min，滴加二抗，37℃孵育30min，PBS沖洗3次，每次2min，給予DAB反應(yīng)染色，常規(guī)脫水，透明、干燥、封片。（實(shí)驗(yàn)過(guò)程太陳舊）

1.2.2 分析指標(biāo)

比較患者正常結(jié)直腸組織和結(jié)直腸癌組織中SHh的表達(dá)情況以及陽(yáng)性表達(dá)率。

SHh在細(xì)胞質(zhì)上出現(xiàn)棕黃色染色為陽(yáng)性細(xì)胞，使用半定量積分法進(jìn)行評(píng)估[2]，細(xì)胞無(wú)染色為（-），淡黃色為+，淺棕黃色為++，棕黃色為+++，深棕黃色或者棕褐色為++++，其中（-）、+為陰性，++、+++、+++為陽(yáng)性。

1.3 數(shù)據(jù)處理

用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)處理軟件處理研究中所有相關(guān)數(shù)據(jù)，計(jì)數(shù)資料采用（n，%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，以 p <0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

正常組織中SHh表達(dá)以（-）、+為主，癌組織中表達(dá)以+++、++++表達(dá)為主。正常組織中SHh表達(dá)陽(yáng)性率為2.5%，明顯低于癌組織中82.50%，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（p<0.05），詳見(jiàn)表1、表2。

3 討論

Hh信號(hào)通路與結(jié)直腸癌的發(fā)生和發(fā)展之間的關(guān)系仍然處于研究中。Monzo[3]等研究發(fā)現(xiàn)SHh在57例結(jié)直腸癌患者中腫瘤組織的表達(dá)水平明顯高于正常組織。但是Chatel]等在7中結(jié)直腸癌細(xì)胞系中沒(méi)有1個(gè)細(xì)胞系表達(dá)出完整的Hh信號(hào)通路成員，因此對(duì)于SHh在結(jié)直腸癌中的作用和作用機(jī)制仍然有所爭(zhēng)議。

Hedgehog（Hh）信號(hào)分子是由信號(hào)細(xì)胞所分泌，通常作用范圍在20個(gè)細(xì)胞之內(nèi)，其生產(chǎn)在時(shí)間和空間上均被嚴(yán)格限制，能夠在N端不同的氨基酸殘基微單發(fā)生膽固醇化和軟脂?；揎?，進(jìn)而達(dá)到制約其擴(kuò)散的目的，同時(shí)能夠增強(qiáng)與質(zhì)膜的親和性[4]。當(dāng)Hh結(jié)合靶細(xì)胞膜上受體Ptc之后，能夠釋放Smo受體以阻斷Pthc蛋白的功能，進(jìn)而在腫瘤細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)展的過(guò)程中起到作用。從本次研究來(lái)看，正常組織中SHh表達(dá)以（-）、+為主，癌組織中表達(dá)以+++、++++表達(dá)為主。正常組織中SHh表達(dá)陽(yáng)性率為2.5%，明顯低于癌組織中82.50%，說(shuō)明Sonichedgehog信號(hào)通路在結(jié)直腸癌病灶中呈現(xiàn)高表達(dá)，提示與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

參考文獻(xiàn)

付祥勝.結(jié)直腸癌中Hedgehog信號(hào)通路的配體依賴性活性改變及其表觀修飾機(jī)制研究[D].南方醫(yī)科大學(xué)，2009.

翁子毅，子樹(shù)明，楊明，等.Hedgehog信號(hào)通路活化在結(jié)直腸病變的意義[J].上海醫(yī)學(xué)，2011（05）：3+55-57.

王華，李奇奇，朱子清，等.結(jié)直腸癌中Hedgehog信號(hào)通路的研究進(jìn)展[J].生命的化學(xué)，2018，38（05）：69-74.

郭麗梅，杜娟，廖鷹，等.Hedgehog信號(hào)通路轉(zhuǎn)錄因子Gli1蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)[J].腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2016（1）：1-6.