陳嬌嬌，魯成銀，王國(guó)慶，陳利燕，梁慧玲*，張穎彬*

（1.浙江農(nóng)林大學(xué)農(nóng)業(yè)與食品科學(xué)學(xué)院/浙江省農(nóng)產(chǎn)品品質(zhì)改良技術(shù)研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，杭州311300；2.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院茶葉研究所/農(nóng)業(yè)農(nóng)村部茶葉質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)測(cè)試中心，杭州310008）

茶葉香氣成分復(fù)雜多樣，目前已知的茶葉香氣成分超700種[1]。因此，找到能快速、全面、真實(shí)反映茶葉香氣成分的提取方法尤為重要。傳統(tǒng)的茶葉香氣提取方法主要有同時(shí)蒸餾萃?。╯imultaneous distillation extraction, SDE）和固相微萃?。╯olidphase micro-extraction,SPME）；目前，較新的提取方法包括攪拌子吸附萃?。╯tir bar sorptive extraction,SBSE）和Tenax TA 吸附。其中：SDE 法能蒸餾萃取香精油以進(jìn)行定量分析，但長(zhǎng)時(shí)間高溫蒸煮會(huì)導(dǎo)致香氣成分發(fā)生改變，同時(shí)，大量有機(jī)試劑的使用也會(huì)對(duì)環(huán)境產(chǎn)生危害[2]。SPME 法具有綠色環(huán)保、操作簡(jiǎn)單等[3-4]優(yōu)點(diǎn)，已被廣泛應(yīng)用于茶葉香氣成分分析中。而SBSE 法是將SPME 的吸附頭改進(jìn)為攪拌子，進(jìn)一步增加了涂層的厚度，但兩者的原理均為“相似相溶”[5]；與SPME 法相比，SBSE 法檢測(cè)限低[6]，能提高吸附水溶液中半揮發(fā)性物質(zhì)的準(zhǔn)確度[7]，具有較好的應(yīng)用前景。Tenax TA 吸附法是將Tenax TA材料填充至吸附管中，通過(guò)氮?dú)獯祾咴嚇邮鬼斂諑С龅膿]發(fā)性物質(zhì)進(jìn)入吸附管，屬于動(dòng)態(tài)吸附；該方法具有綠色環(huán)保、檢測(cè)限低、真實(shí)反映樣品香氣組成[8]等優(yōu)點(diǎn)，已廣泛應(yīng)用于大氣污染物的檢測(cè)中。

過(guò)去對(duì)茶葉香氣的研究主要采用頂空固相微萃取（headspace solid-phase micro-extraction,HS-SPME）法，近年來(lái)，頂空攪拌子吸附萃?。╤eadspace stir bar sorptive extraction, HS-SBSE）法、SBSE 法和Tenax TA吸附技術(shù)逐漸被引入到茶葉香氣分析中[9-11]。為了系統(tǒng)比較HS-SPME 法、HS-SBSE 法和Tenax TA法在茶葉香氣分析中的特點(diǎn)與規(guī)律，本實(shí)驗(yàn)針對(duì)綠茶、黃茶、白茶3 類(lèi)主要以清香為基礎(chǔ)香型的茶類(lèi)，以固相微萃取前處理?xiàng)l件為共同參數(shù)，結(jié)合氣相色譜-質(zhì)譜法對(duì)9個(gè)茶葉樣品香氣成分進(jìn)行分析，進(jìn)一步比較了3 種方法對(duì)茶葉香氣總富集量、富集個(gè)數(shù)及富集結(jié)果中各類(lèi)化合物相對(duì)含量的影響，旨在為篩選出更簡(jiǎn)單、快速，且能真實(shí)反映化合物組成的清香型茶葉香氣富集方法提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

綠茶（龍井茶、徑山茶、碧螺春、開(kāi)化龍頂、安吉白茶）、白茶（白毫銀針、白牡丹）、黃茶（莫干黃芽、蒙頂黃芽），通過(guò)感官審評(píng)確保樣品具有該類(lèi)茶葉典型的香氣特征，實(shí)驗(yàn)樣品均來(lái)自市售。

1.2 儀器與設(shè)備

PDMS TISTER攪拌磁子（德國(guó)Gerstel公司）；手動(dòng)固相微萃取進(jìn)樣器、50/30 μm DVB/CAR/PDMS 57348-U萃取頭（美國(guó)Anapo有限公司）；JJ300型電子天平（江蘇省常熟市雙杰測(cè)試儀器廠）；HH-1 恒溫水浴鍋（江蘇省杰瑞爾電器有限公司）；微池裝置（英國(guó)Markes 公司）；包含Tenax TA 采樣管、空玻璃管的熱脫附系統(tǒng)TD100（英國(guó)Markes 公司）；7890B氣相色譜儀和5977B質(zhì)譜儀（美國(guó)Agilent公司）。

1.3 方法

在參照文獻(xiàn)[12-13]的基礎(chǔ)上，對(duì)固相微萃取的前處理?xiàng)l件（茶水比、平衡時(shí)間、萃取溫度和吸附時(shí)間）加以改進(jìn)；SBSE和Tenax TA方法的前處理?xiàng)l件與改進(jìn)后的固相微萃取條件一致。

1.3.1 HS-SPME 方法

準(zhǔn)確稱取2.00 g 茶樣，置于50 mL 萃取瓶中，并倒入6 mL 沸水，于60 ℃水浴鍋中平衡10 min后，將提前老化1 h的萃取頭插入萃取瓶中，頂空吸附60 min 后取出，再直接插入色譜進(jìn)樣器中解吸附5 min。每個(gè)樣品重復(fù)3次。

1.3.2 HS-SBSE 方法

準(zhǔn)確稱取2.00 g茶樣，置于50 mL萃取瓶中，并倒入6 mL沸水，于60 ℃水浴鍋中平衡10 min后，插入提前老化1 h的攪拌子，頂空吸附60 min后取出，立即放入空玻璃管中，于TD100 系統(tǒng)中進(jìn)行熱脫附。每個(gè)樣品重復(fù)3次。

1.3.3 Tenax TA 方法

準(zhǔn)確稱取2.00 g 茶樣，置于特制的40 mL 玻璃皿中，并倒入6 mL沸水，于60 ℃微池中平衡10 min后，插入Tenax TA 吸附管并以30 mL/min 流速通入氮?dú)?，吸?0 min 后取出，放入TD100 系統(tǒng)中進(jìn)行熱脫附。每個(gè)樣品重復(fù)3次。

1.3.4 熱脫附條件

HS-SBSE熱脫附條件：分流模式預(yù)吹掃1 min；280 ℃解析10 min；冷阱起始溫度為－30 ℃，升溫到300 ℃并解析5 min。

Tenax TA 熱脫附條件：分流模式預(yù)吹掃5 min；一級(jí)熱脫附為40 ℃解析5 min；二級(jí)熱脫附為300 ℃解析10 min；冷阱起始溫度為40 ℃，升溫到300 ℃并解析5 min。

1.3.5 氣相色譜條件

采用DB-Wax 毛細(xì)管色譜柱（60 m×0.25 mm，0.25 μm），進(jìn)樣口溫度240 ℃，載氣為氦氣（純度99.999%），柱流量1.5 mL/min，HS-SPME 為手動(dòng)無(wú)分流進(jìn)樣，HS-SBSE 與Tenax TA 為自動(dòng)無(wú)分流進(jìn)樣。升溫程序：柱溫起始溫度50 ℃并保持5 min，然后以1.5 ℃/min 上升至170 ℃，再以10 ℃/min 上升至210 ℃并保持20 min，總時(shí)間為109 min。

1.3.6 質(zhì)譜條件

電離方式為電子電離源（electron ionization,EI），離子源溫度為230 ℃，電子能量為70 eV，掃描范圍為質(zhì)荷比（m/z）50～650。

1.3.7 定性與定量分析

根據(jù)氣相色譜-質(zhì)譜（gas chromatography-mass spectrometer, GC-MS）聯(lián)用分析得到的各色譜峰，通過(guò)計(jì)算機(jī)譜庫(kù)NIST17 檢索，同時(shí)結(jié)合化合物相對(duì)保留時(shí)間、NIST譜庫(kù)及文獻(xiàn)[14]中的保留指數(shù)和香氣成分標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定性；根據(jù)香氣成分的峰面積采用面積歸一化法得到各個(gè)香氣成分的相對(duì)含量。

1.3.8 數(shù)據(jù)分析

采用SPSS 19.0軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)樣品香氣成分的相對(duì)含量進(jìn)行單因素方差分析；采用Origin 9.0軟件作圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 3 種方法對(duì)不同類(lèi)型香氣化合物吸附數(shù)量的影響

表1比較了3種方法對(duì)醇類(lèi)、醛類(lèi)、酮類(lèi)、酸類(lèi)、酯類(lèi)、烯類(lèi)、雜環(huán)類(lèi)和含硫化合物8類(lèi)香氣化合物吸附種類(lèi)及數(shù)量的影響?？傮w上，3種方法吸附9個(gè)茶樣香氣化合物總個(gè)數(shù)為HS-SBSE＞Tenax TA＞HS-SPME。

在同一個(gè)樣品中，3種方法吸附同種類(lèi)型香氣化合物個(gè)數(shù)的結(jié)果（表1）顯示：1）對(duì)于醇類(lèi)，除龍井茶和蒙頂黃芽外，HS-SPME吸附的醇類(lèi)化合物個(gè)數(shù)均低于或等于HS-SBSE 和Tenax TA，而用HS-SBSE方法萃取龍井茶、安吉白茶、徑山茶和黃茶的醇類(lèi)個(gè)數(shù)多于或等于Tenax TA，在其他茶樣中均低于Tenax TA。2）所有樣品中，Tenax TA吸附的醛類(lèi)化合物個(gè)數(shù)最多，HS-SBSE吸附的多于或與HS-SPME相等。3）除龍井茶外，HS-SBSE吸附的酮類(lèi)化合物數(shù)量多于或等于HS-SPME；除龍井茶和蒙頂黃芽外，HSSBSE吸附的酮類(lèi)化合物數(shù)量多于或等于Tenax TA。4）酸類(lèi)化合物僅在2 個(gè)白茶香氣成分中出現(xiàn)，以HS-SBSE吸附的個(gè)數(shù)最多。5）白茶中HS-SPME吸附的酯類(lèi)化合物最多，其他茶樣中除碧螺春外，HSSBSE吸附個(gè)數(shù)最多。6）除徑山茶和碧螺春外，HSSPME 萃取到的烯類(lèi)化合物個(gè)數(shù)最多，所有茶樣中Tenax TA吸附到的個(gè)數(shù)最少。7）除莫干黃芽和碧螺春外，HS-SPME 吸附的雜環(huán)類(lèi)化合物最少，HSSBSE萃取安吉白茶、白毫銀針、黃茶的雜環(huán)類(lèi)化合物數(shù)量多于Tenax TA，而在徑山茶、碧螺春、白牡丹中Tenax TA吸附的個(gè)數(shù)最多。

總之，不同方法對(duì)不同類(lèi)型化合物的吸附能力不同，其中：HS-SPME對(duì)烯類(lèi)化合物的吸附個(gè)數(shù)最多，對(duì)醛類(lèi)化合物的吸附個(gè)數(shù)最少；Tenax TA 對(duì)含硫類(lèi)和醛類(lèi)化合物的吸附個(gè)數(shù)最多，對(duì)烯類(lèi)化合物的吸附個(gè)數(shù)最少；HS-SBSE對(duì)醇類(lèi)、酸類(lèi)、酯類(lèi)和雜環(huán)類(lèi)化合物的吸附個(gè)數(shù)最多，對(duì)醛類(lèi)化合物的吸附個(gè)數(shù)較少。

2.2 3 種方法對(duì)不同C 鏈長(zhǎng)度香氣化合物吸附數(shù)量的影響

3 種方法吸附的9 個(gè)茶葉香氣成分在C1～C5、C6～C10、C11～C153個(gè)C鏈范圍內(nèi)的化合物數(shù)量如表2所示。總體上，對(duì)于C1～C5化合物，HS-SPME＜HSSBSE＜Tenax TA；對(duì)于C6～C10化合物，HS-SPME＜Tenax TA＜HS-SBSE；對(duì)于C11～C15化合物，Tenax TA 吸附到的化合物最少。此外，在3 個(gè)C 鏈范圍內(nèi)，C6～C10范圍內(nèi)的化合物個(gè)數(shù)最多。

表1 3種方法吸附9個(gè)茶樣香氣成分的個(gè)數(shù)Table 1 Number of aroma compounds for nine tea samples adsorbed by three methods

2.3 3種方法對(duì)不同茶樣香氣成分總吸附量的影響

由圖1 可知：通過(guò)HS-SBSE 萃取的9 個(gè)茶樣香氣成分的總峰面積顯著高于HS-SPME（P＜0.05）；除龍井茶外，Tenax TA吸附的其他茶樣香氣成分的總峰面積都顯著高于HS-SBSE（P＜0.05）。

2.4 3 種方法對(duì)不同類(lèi)型香氣化合物相對(duì)吸附量的影響

3種方法吸附的9個(gè)茶樣香氣化合物的相對(duì)含量見(jiàn)圖2，5個(gè)綠茶、2個(gè)白茶和2個(gè)黃茶的主要香氣成分及其相對(duì)含量見(jiàn)附表1～3（http://www.zjujournals.com/agr/CN/10.3785/j.issn.1008-9209.2019.09.191）。

對(duì)于含硫化合物，綠茶類(lèi)的相對(duì)含量總體上高于黃茶和白茶類(lèi)。含硫化合物主要是二甲基硫醚，屬極易揮發(fā)且具有清香的物質(zhì)。進(jìn)一步分析每個(gè)茶樣發(fā)現(xiàn)，Tenax TA吸附的龍井茶、徑山茶香氣成分中二甲基硫醚含量顯著高于HS-SPME（P＜0.05）。

對(duì)于醇類(lèi)化合物，1）5個(gè)綠茶中，除徑山茶外，3種方法吸附的醇類(lèi)相對(duì)含量有顯著性差異。其中：HS-SPME、HS-SBSE 吸附的龍井茶香氣成分中脫氫芳樟醇及香葉醇含量顯著高于Tenax TA（P＜0.05）；Tenax TA 吸附的開(kāi)化龍頂、安吉白茶中醇類(lèi)香氣成分3-己烯-1-醇相對(duì)含量顯著高于HSSPME（P＜0.05）；HS-SBSE吸附的碧螺春香氣成分中4，8-二甲基-3，7-壬二烯-2-醇相對(duì)含量顯著低于HS-SPME 和Tenax TA（P＜0.05）。2）在白茶中，3種方法吸附的白毫銀針和白牡丹醇類(lèi)化合物相對(duì)含量的變化規(guī)律相同：HS-SPME吸附的這2個(gè)茶樣中醇類(lèi)相對(duì)含量（尤其是芳樟醇、香葉醇的相對(duì)含量）顯著高于HS-SBSE 和Tenax TA（P＜0.05）；而HS-SBSE 吸附的白茶樣醇類(lèi)（如苯乙醇）的相對(duì)含量都顯著高于Tenax TA（P＜0.05）。3）在黃茶中，HS-SPME吸附的醇類(lèi)香氣成分中芳樟醇及其氧化物的相對(duì)含量顯著高于Tenax TA（P＜0.05），而HSSPME 與HS-SBSE 吸附的這些成分的相對(duì)含量無(wú)顯著性差異（P＞0.05）。

表2 3 種方法吸附9 個(gè)茶樣香氣成分在3 個(gè)C 鏈范圍內(nèi)的個(gè)數(shù)Table 2 Number of aroma compounds in three carbon chain ranges for nine tea samples adsorbed by three methods

對(duì)于醛類(lèi)化合物，Tenax TA吸附的醛類(lèi)化合物的相對(duì)含量顯著高于HS-SPME 和HS-SBSE（P＜0.05）。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，Tenax TA吸附的綠茶和黃茶中醛類(lèi)含量較高的成分主要是2-甲基丁醛和3-甲基丁醛，白茶中是正己醛（P＜0.05）。

對(duì)于酮類(lèi)化合物，除龍井茶、開(kāi)化龍頂和蒙頂黃芽以外，HS-SPME、HS-SBSE吸附的其他茶樣酮類(lèi)化合物（尤其是紫羅酮和茉莉酮）的相對(duì)含量顯著高于Tenax TA（P＜0.05）；HS-SBSE 吸附的碧螺春中酮類(lèi)化合物（尤其是苯乙酮和紫羅酮）的相對(duì)含量顯著高于另2種方法（P＜0.05）；Tenax TA吸附的龍井茶中2-丁酮和蒙頂黃芽中4-甲基-3-戊烯-2-酮的相對(duì)含量顯著高于HS-SPME 和HS-SBSE（P＜0.05）。

對(duì)于酯類(lèi)化合物，除碧螺春外，HS-SPME吸附的4 個(gè)綠茶中順-己酸-3-己烯酯和反-丁酸-3-己烯酯相對(duì)含量顯著高于另2種方法（P＜0.05）；水楊酸甲酯是白茶中重要的化合物之一，HS-SPME 吸附的白牡丹中水楊酸甲酯的相對(duì)含量顯著高于Tenax TA（P＜0.05），但對(duì)于白毫銀針，3種方法的差異不顯著，推測(cè)由于水楊酸甲酯在白牡丹中的相對(duì)含量接近10%，HS-SPME 吸附時(shí)產(chǎn)生了較高的競(jìng)爭(zhēng)效應(yīng)，使得其含量比實(shí)際值更高；此外，HS-SBSE吸附的莫干黃芽中二甲基戊酸甲酯的相對(duì)含量較高，用其他2種方法均未分析到該物質(zhì)。

對(duì)于烯類(lèi)化合物，除碧螺春外，HS-SPME 吸附的龍井茶、徑山茶、安吉白茶和莫干黃芽中烯類(lèi)化合物相對(duì)含量和構(gòu)成烯類(lèi)的成分月桂烯和檸檬烯，開(kāi)化龍頂中法尼烯以及蒙頂黃芽中杜松烯相對(duì)含量顯著高于另2 種方法（P＜0.05）；HS-SBSE吸附的碧螺春中烯類(lèi)化合物（如β-蓽澄茄油烯、丁香烯）的相對(duì)含量顯著高于HS-SPME 和Tenax TA（P＜0.05）。

對(duì)于雜環(huán)類(lèi)化合物，除碧螺春和莫干黃芽外，HS-SBSE、Tenax TA 吸附的另7 個(gè)茶樣中呋喃類(lèi)和1-乙基-2-甲酰吡咯的相對(duì)含量顯著高于HS-SPME（P＜0.05）。

圖1 3種方法吸附9個(gè)茶樣香氣成分的總峰面積Fig.1 Total peak area of aroma compounds for nine tea samples adsorbed by three methods

2.5 3 種方法對(duì)不同C 鏈長(zhǎng)度香氣化合物相對(duì)吸附量的影響

3種方法吸附的9個(gè)茶樣中不同C鏈長(zhǎng)度化合物的相對(duì)含量見(jiàn)圖3，5個(gè)綠茶、2個(gè)白茶和2個(gè)黃茶在不同C鏈長(zhǎng)度范圍內(nèi)主要香氣成分及其相對(duì)含量見(jiàn)附表1～3（http://www.zjujournals.com/agr/CN/10.3785/j.issn.1008-9209.2019.09.191）。

圖2 3種方法吸附9個(gè)茶樣香氣成分的相對(duì)含量Fig.2 Relative content of aroma compounds for nine tea samples adsorbed by three methods

除HS-SPME吸附的龍井茶外，所有樣品在3種吸附條件下均為C6～C10化合物的相對(duì)含量最高。除白茶外，3種方法吸附C6～C10化合物的相對(duì)含量均具有顯著性差異（P＜0.05）：Tenax TA吸附開(kāi)化龍頂、徑山茶香氣成分C6～C10的相對(duì)含量顯著高于另2種方法（P＜0.05），而其吸附安吉白茶、莫干黃芽和蒙頂黃芽香氣成分C6～C10的相對(duì)含量則顯著低于另2種方法（P＜0.05）；HS-SBSE吸附龍井茶、開(kāi)化龍頂、碧螺春香氣成分C6～C10的相對(duì)含量顯著高于HS-SPME（P＜0.05）。但3種方法分別吸附9個(gè)茶樣香氣成分C6～C10的總相對(duì)含量無(wú)顯著性差異（P＜0.05）。

圖3 3種方法吸附9個(gè)茶樣中C鏈香氣成分的相對(duì)含量Fig.3 Relative content of aroma compounds in three carbon chain ranges for nine tea samples adsorbed by three methods

3 種方法吸附9 個(gè)茶樣香氣成分C1～C5、C11～C15的相對(duì)含量均有差異：Tenax TA吸附的每個(gè)茶樣香氣成分C1～C5相對(duì)含量顯著高于另2種方法（P＜0.05），HS-SPME和HS-SBSE吸附每個(gè)茶樣香氣成分C11～C15相對(duì)含量顯著高于Tenax TA（P＜0.05），且HS-SPME 和HS-SBSE 吸附C1～C5的總相對(duì)含量顯著低于Tenax TA（P＜0.05），但二者吸附C11～C15的總相對(duì)含量顯著高于Tenax TA（P＜0.05）。因此，以下著重分析3 種方法吸附的茶樣中C1～C5和C11～C15香氣化合物中具有差異的成分。

進(jìn)一步分析不同樣品在C1～C5范圍內(nèi)產(chǎn)生顯著差異的成分發(fā)現(xiàn)，龍井茶、開(kāi)化龍頂、徑山茶、碧螺春和白茶中二甲基硫醚（C2）、2-甲基丁醛（C5）、3-甲基丁醛（C5），安吉白茶和黃茶中1-戊烯-3-醇（C5）、順-2-戊烯醇（C5）通過(guò)Tenax TA 吸附的相對(duì)含量顯著高于HS-SPME和HS-SBSE（P＜0.05）。

對(duì)C11～C15化合物的分析結(jié)果表明：用HSSPME方法萃取龍井茶和開(kāi)化龍頂香氣成分時(shí)，順-己酸-3-己烯酯（C12）相對(duì)含量顯著高于另2種方法（P＜0.05）；HS-SPME和HS-SBSE吸附徑山茶和安吉白茶的香氣成分茉莉酮（C11）與異戊酸葉醇酯（C11），碧螺春、莫干黃芽和白茶的香氣成分紫羅酮（C13）與茉莉酮，蒙頂黃芽香氣成分杜松烯（C15）的含量顯著高于Tenax TA（P＜0.05）。

3 討論

3.1 3 種吸附方法對(duì)香氣成分總吸附量的影響

本研究在相同的茶水比、萃取溫度、平衡時(shí)間和吸附時(shí)間條件下，比較了3 種吸附方法對(duì)9 個(gè)茶樣香氣成分的影響。結(jié)果表明：3 種方法的總吸附量排序?yàn)門(mén)enax TA＞HS-SBSE＞HS-SPME，其中，Tenax TA通過(guò)填料進(jìn)行動(dòng)態(tài)全吸附，吸附體積遠(yuǎn)大于另2種方法，因此，該方法的總富集量在3種方法中最高。

SBSE 攪拌棒的發(fā)明主要改善了SPME 萃取頭吸附量低、檢測(cè)限高[15]等問(wèn)題，本研究結(jié)果驗(yàn)證了SBSE 法的總吸附量高于SPME 的結(jié)論。通過(guò)計(jì)算本實(shí)驗(yàn)采用的SBSE 攪拌棒與SPME 萃取頭涂層體積和總萃取量的倍數(shù)差，發(fā)現(xiàn)SBSE 的涂層體積約為SPME 的34 倍，但總萃取量?jī)H為SPME 的1.46～2.69倍。可見(jiàn)，在相同的前處理?xiàng)l件下，僅有1 種聚二甲基硅氧烷（polydimethylsiloxane,PDMS）涂層的SBSE 吸附體積雖大于由二乙烯基苯/碳分子篩/聚二甲基硅氧烷（divinylbenzene/carboxen/polydimethylsiloxane,DVB/CAR/PDMS）3種涂層組成的SPME，但實(shí)際吸附茶葉香氣總量的倍數(shù)遠(yuǎn)低于理論體積比。無(wú)獨(dú)有偶，BICCHI等[16]在比較HSSPME與HS-SBSE萃取咖啡香氣成分的實(shí)驗(yàn)中，所使用的SBSE涂層體積是SPME的110倍，富集量卻僅為其5.24 倍。這種結(jié)果是由香氣化合物在頂空瓶中被涂層反復(fù)吸附和脫附的競(jìng)爭(zhēng)平衡效應(yīng)導(dǎo)致的。

3.2 3 種吸附方法對(duì)香氣成分相對(duì)含量的影響

茶葉的香氣物質(zhì)組成多樣，香氣化合物比例關(guān)系對(duì)香型的形成具有關(guān)鍵作用。因此，基于有效的吸附方法才能進(jìn)一步分析并真實(shí)反映茶葉香氣化合物構(gòu)成。本研究中，3 種方法吸附的各個(gè)茶樣中不同類(lèi)型化合物的相對(duì)含量存在差別：用HSSPME 和HS-SBSE 吸附時(shí)醇類(lèi)化合物中芳樟醇及其氧化物、脫氫芳樟醇、香葉醇，酯類(lèi)化合物中順-己酸-3-己烯酯和反-丁酸-3-己烯酯的相對(duì)含量高于Tenax TA 吸附。由于上述化合物均屬于目前茶葉香氣研究報(bào)道中含量較高的化合物，推測(cè)競(jìng)爭(zhēng)效應(yīng)的存在，增加了上述化合物在HS-SPME 和HSSBSE涂層上的相對(duì)吸附量。Tenax TA吸附的醛類(lèi)化合物的相對(duì)含量顯著多于HS-SPME 和HSSBSE，主要以短C 鏈的醛類(lèi)化合物為主。理論上，Tenax TA對(duì)C6～C20化合物具有較好的保留能力，對(duì)C5及以下化合物的保留能力較差；而SPME與SBSE吸附的化合物范圍是C3～C20，對(duì)短C鏈成分保留較好。但實(shí)際分析結(jié)果表明：Tenax TA 對(duì)短C 鏈化合物的富集能力高于HS-SPME 和HS-SBSE；HSSPME吸附的醇類(lèi)、酮類(lèi)、酯類(lèi)、烯類(lèi)物質(zhì)中C10以上化合物的相對(duì)含量顯著高于Tenax TA 吸附。這與SPME 和SBSE 涂層吸附時(shí)存在競(jìng)爭(zhēng)效應(yīng)而導(dǎo)致小分子化合物不易被吸附有關(guān)。LIEW 等[17]的實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，HS-SPME 吸附化合物存在的競(jìng)爭(zhēng)效應(yīng)導(dǎo)致丁酸甲酯（C5）和己酸甲酯（C7）等較小分子的含量降低?？紤]到短C 鏈化合物在Tenax TA 上仍然表現(xiàn)為不完全保留，因此，人實(shí)際聞到的香氣成分中，短C 鏈化合物的含量可能更高。由于此類(lèi)化合物具有極強(qiáng)的揮發(fā)性，在過(guò)去的研究中往往被忽視了。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)對(duì)9個(gè)茶樣（包括綠茶、黃茶與白茶，其總體熟化程度較低，具有清香、嫩香、花香等香氣特征，其香氣物質(zhì)的構(gòu)成具有一定的相似性）采用3種不同的吸附方法，比較其香氣成分?jǐn)?shù)量和相對(duì)含量間的差異，結(jié)果證實(shí)不同吸附方法會(huì)對(duì)茶葉香氣分析結(jié)果產(chǎn)生影響：HS-SPME 和HS-SBSE 相對(duì)于傳統(tǒng)的SDE 法具有便捷、無(wú)污染等優(yōu)勢(shì)，且HS-SBSE 由于增加了涂層厚度，相對(duì)于HS-SPME 具有更低的檢出限，但由于競(jìng)爭(zhēng)效應(yīng)的存在，導(dǎo)致分析所得的化合物的相對(duì)含量和實(shí)際間存在一定差異，主要表現(xiàn)在短C鏈化合物相對(duì)含量的降低和部分長(zhǎng)C鏈醇類(lèi)及酯類(lèi)化合物相對(duì)含量的增加。而Tenax TA吸附茶葉香氣成分具有富集量更高且更能準(zhǔn)確反映茶葉香氣化合物組成等優(yōu)點(diǎn)，通過(guò)Tenax TA吸附的短C鏈化合物的相對(duì)含量高于HS-SPME和HS-SBSE。