邊 燕，黃娟娟，楊寶龍

(1.延安大學(xué)附屬醫(yī)院產(chǎn)科；2.延安市人民醫(yī)院腫瘤科，陜西延安716000)

卵巢癌(Ovarian Cancer)目前是繼宮頸鱗癌和子宮內(nèi)膜癌之后名列第3的婦科惡性腫瘤，卵巢癌發(fā)病較為隱匿，目前發(fā)病率全世界均呈現(xiàn)出逐年上升態(tài)勢(shì)，預(yù)后較差，死亡率高，2/3卵巢癌確診時(shí)已是Ⅲ期或Ⅳ期。根據(jù)美國(guó)癌癥協(xié)會(huì)研究，美國(guó)2018年將有超過(guò)24萬(wàn)例新增卵巢癌患者，另有超過(guò)14萬(wàn)例卵巢癌死亡病例[1-2]。依據(jù)國(guó)家癌癥中心陳萬(wàn)青教授報(bào)道[3]，我國(guó)晚期卵巢癌患者5年生存率僅為38.9%。隨著卵巢癌靶向治療研究藥物的出現(xiàn)，目前對(duì)于晚期卵巢癌三、四線治療方面有較多藥物可以選擇，但是上皮性卵巢癌的5年生存率卻沒(méi)有能夠得到顯著提高[4-5]。尋找卵巢癌新的預(yù)測(cè)指標(biāo)具有非常重要的意義。目前前沿研究結(jié)果表明，RAB1A是存在于細(xì)胞膜上的一種小分子跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，它參與從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)到高爾基體的轉(zhuǎn)運(yùn)過(guò)程，既往一系列基礎(chǔ)研究已經(jīng)證實(shí)其參與信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞遷徙等[6]；臨床研究報(bào)道RAB1A能夠在結(jié)直腸癌中發(fā)揮促癌作用，但是我們尚未見(jiàn)到其在卵巢癌中的研究報(bào)道。本研究將對(duì)其在卵巢癌中所起作用進(jìn)行如下報(bào)道。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象

選取2010年6月至2018年6月來(lái)自延安市人民醫(yī)院及延安大學(xué)附屬醫(yī)院的181例卵巢癌術(shù)后患者癌組織及癌旁正常組織標(biāo)本作為研究對(duì)象，樣本平均年齡60.2±10.9歲。全部卵巢癌樣本均經(jīng)術(shù)后病理確診，患者年齡、病理診斷、分期、生存時(shí)間資料收集完整；隨訪時(shí)間最短8個(gè)月，最長(zhǎng)88個(gè)月，中位隨訪時(shí)間47.5個(gè)月，追蹤隨訪資料完整。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR

1.2.1 試劑 中國(guó)達(dá)安基因TRIzol試劑盒、中國(guó)凱杰生物TAKARA反轉(zhuǎn)錄試劑盒、深圳欣博生物RAB1A兔多克隆抗體、北京索萊寶科技超敏發(fā)光液；

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 TRIzol試劑來(lái)提取totalRNA，并使用TAKARA反轉(zhuǎn)錄試劑盒(PrimeScript RT reagent Kit with gDNA Eraser)反轉(zhuǎn)錄制備cDNA文庫(kù)；試驗(yàn)儀器選用我院7900HT PCR儀，qPCR mix選用SYBR Green PCR Master Mix，反應(yīng)體系根據(jù)說(shuō)明書(shū)配置，試驗(yàn)過(guò)程嚴(yán)格按照PCR實(shí)驗(yàn)流程進(jìn)行，結(jié)果采用卡方檢驗(yàn)法進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)處理使用SPSS 22.0(IBM公司)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有數(shù)據(jù)處理均進(jìn)行雙側(cè)檢驗(yàn)，α=0.05，P<0.05認(rèn)為存在統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。數(shù)據(jù)處理使用配對(duì)t檢驗(yàn)分析RAB1A表達(dá)水平的差異，采用卡方檢驗(yàn)分析RAB1A表達(dá)水平和卵巢癌患者臨床特征之間的關(guān)系，采用K-M法進(jìn)一步繪制出卵巢癌患者生存曲線圖，用log-rank檢驗(yàn)患者不同RAB1A表達(dá)水平存在的總生存時(shí)間差異。

2 結(jié)果

2.1 RAB1A在卵巢癌組織中高表達(dá)

本次研究采用qPCR檢測(cè)了所有181對(duì)卵巢癌組織-癌旁正常組織，發(fā)現(xiàn)RAB1A在癌組織中出現(xiàn)高表達(dá)，癌旁組織中表現(xiàn)為低表達(dá)；卵巢癌組織中的表達(dá)量是癌旁正常組織表達(dá)量的1.98倍(Mean±SD，0.0081±0.0264vs.0.0041±0.0097，P=0.024，見(jiàn)圖1)。

2.2 RAB1A表達(dá)水平與卵巢癌患者多因素分析

分析RAB1A表達(dá)水平與卵巢癌患者年齡、吸煙史、飲酒史、TNM分期之間的關(guān)系；RAB1A高表達(dá)與卵巢癌患者年齡(P=0.009)、吸煙(P=0.010)、腫瘤臨床分期(P=0.011)、是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(P<0.001)、是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(P=0.013)均有關(guān)(見(jiàn)表1)。

表1 RAB1A表達(dá)水平與卵巢癌患者臨床特征之間的關(guān)系

2.3 RAB1A高表達(dá)與卵巢癌患者生存期縮短相關(guān)

通過(guò)進(jìn)一步分析RAB1A表達(dá)量與卵巢癌患者總生存時(shí)間的關(guān)系，我們將本研究樣本分為RAB1A高表達(dá)組和低表達(dá)組，使用Kaplan-Meier法進(jìn)行總生存分析，使用Log-rank進(jìn)一步檢驗(yàn)高表達(dá)組和低表達(dá)組生存率之間的差異，顯示低表達(dá)組中位生存時(shí)間為78.6個(gè)月，高表達(dá)組中位生存時(shí)間為27.0個(gè)月，總生存(Overall Survival，OS)差異具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，RAB1A高表達(dá)組OS明顯低于RAB1A低表達(dá)組(χ2=14.8，P<0.01；見(jiàn)圖2)。

3 討論

卵巢癌是女性常見(jiàn)惡性腫瘤，在各種腫瘤的死亡率中卻居首位[7-9]，對(duì)女性健康造成了嚴(yán)重威脅。因卵巢癌早期無(wú)癥狀或癥狀較輕，待有癥狀到最終確診大多數(shù)已是腫瘤中晚期[10-11]，晚期卵巢癌目前預(yù)后仍然不理想，故對(duì)卵巢癌的診斷和治療提出了挑戰(zhàn)。

目前消化道腫瘤方面文獻(xiàn)已經(jīng)報(bào)道顯示出RAB1A與腫瘤的發(fā)生、侵襲、轉(zhuǎn)移相關(guān)[12-15]，李平，等[16]研究發(fā)現(xiàn)MiR-150-5p通過(guò)靶向調(diào)控RAB1A抑制乳腺癌細(xì)胞MDA-231的上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化。韓起，等[17]研究發(fā)現(xiàn)MiR-139-3p靶向調(diào)控RAb1A表達(dá)促進(jìn)結(jié)直腸癌細(xì)胞的增殖、侵襲和遷移。余勁松，等[18]研究發(fā)現(xiàn)RAB1A蛋白高表達(dá)對(duì)胃腺癌的發(fā)生發(fā)展具有促進(jìn)作用。程正武，等[19]研究發(fā)現(xiàn)RAb1A的表達(dá)和結(jié)腸癌細(xì)胞增殖和遷移侵襲能力相關(guān)。黃廷磊，等[20]研究發(fā)現(xiàn)RAB1A通過(guò)調(diào)節(jié)JAK1磷酸化水平影響非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞遷移。檢索國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)尚未發(fā)現(xiàn)RAB1A在卵巢癌中預(yù)后判斷的報(bào)道。該研究對(duì)RAB1A在卵巢癌中所起作用和臨床意義的探索性研究，通過(guò)病理標(biāo)本檢測(cè)RAB1A的表達(dá)量，我們從中發(fā)現(xiàn)RAB1A在卵巢癌組織中的表達(dá)量顯著高于癌旁正常組織表達(dá)，高表達(dá)組生存期明顯低于低表達(dá)組，依據(jù)本研究最后可以確定測(cè)量RAB1A表達(dá)水平可以作為卵巢癌患者預(yù)后的判斷指標(biāo)。

更多的證據(jù)表明RAB1A與卵巢癌發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，但是我科目前研究存在一定的局限性，僅僅發(fā)現(xiàn)有限的關(guān)聯(lián)和簡(jiǎn)單的預(yù)測(cè)驗(yàn)證，到目前為止RAB1A在癌癥發(fā)生和發(fā)展中所起的具體機(jī)制尚不明確，有待我們進(jìn)一步研究證實(shí)。