龍起成

摘要：在實(shí)驗(yàn)室利用高效液相色譜法檢驗(yàn)著色劑的過程中，通過對(duì)試劑、前處理、色譜儀等條件的優(yōu)化，能夠大大提高測(cè)量的精確性。

關(guān)鍵字：高效液相色譜法、食品檢驗(yàn)、著色劑

著色劑所為一類常用的添加劑被廣泛的應(yīng)用于各種食品之中，增加食品感官賣相的同時(shí)也需要嚴(yán)格的控制添加量，保證實(shí)用后不會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生影響。GB5009.35-2016、GB/T 21916-2008、GB/T 9695.6-2008等標(biāo)準(zhǔn)都對(duì)常見的食品中著色劑的檢測(cè)步驟進(jìn)行了標(biāo)準(zhǔn)化的闡述，本人通過多年的食品檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，以GB5009.35-2016為例現(xiàn)總結(jié)出以下幾點(diǎn)對(duì)不同基質(zhì)產(chǎn)品的著色劑檢測(cè)過程中的注意事項(xiàng)：

第一是要注意的標(biāo)準(zhǔn)適用范圍，GB5009.35-2016適用于飲料、配制酒、硬糖、蜜餞、淀粉軟糖、巧克力豆及著色糖衣制品，所以對(duì)于其他基質(zhì)的食品可以參考標(biāo)準(zhǔn)的思路，但不能作為判定依據(jù)，尤其在出具報(bào)告時(shí)一定要告知委托檢驗(yàn)人是檢定報(bào)告還是測(cè)試報(bào)告，避免出現(xiàn)超范圍情況的發(fā)生。

第二是試劑的配制問題。標(biāo)準(zhǔn)中沒有給出試劑配置后的保存期限，可以參考理化檢測(cè)對(duì)試劑的保存時(shí)間，但對(duì)于高效液相色譜檢測(cè)來說，最理想的方法還是現(xiàn)用現(xiàn)配。尤其是流動(dòng)相，必須是現(xiàn)用現(xiàn)配，切不可使用存放了多日之后的流動(dòng)相，高效液相色譜以其精密的檢測(cè)而被廣泛應(yīng)用，其內(nèi)部管路極其細(xì)小，而存放了多日的流動(dòng)相尤其是水相為主的流動(dòng)相大部分會(huì)產(chǎn)生渾濁甚至沉淀，雜菌滋生，這對(duì)精密而細(xì)小的儀器管路是致命的，一旦出現(xiàn)堵塞，疏通起來會(huì)很繁瑣，同時(shí)長(zhǎng)期使用即使不出現(xiàn)堵塞，對(duì)色譜柱的壽命也會(huì)產(chǎn)生影響。而純有機(jī)相的流動(dòng)相相對(duì)保存時(shí)間可以長(zhǎng)一些，但是需要注意的是密封問題，要防止揮發(fā)和粉塵的進(jìn)入。由于是梯度洗脫，我們無法配制特定濃度的混合流動(dòng)相進(jìn)行使用，但是一定要注意的是對(duì)于流動(dòng)相一定要過膜、超聲。這兩部對(duì)儀器的保護(hù)、數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確至關(guān)重要。尤其如果使用特定比例的有機(jī)無機(jī)混合溶液作為流動(dòng)相的時(shí)候一定要進(jìn)行超聲。有機(jī)相和無機(jī)項(xiàng)混合的時(shí)候會(huì)產(chǎn)生大量的氣泡，這些氣泡是肉眼無法看到的，只有超聲才能趕出氣泡，在儀器使用過程中不至于因?yàn)楫a(chǎn)生氣泡而影響基線穩(wěn)定和峰型的準(zhǔn)確。

第三是標(biāo)準(zhǔn)品的配制和保存。標(biāo)準(zhǔn)品的量取要用大肚吸管，切不可圖省事用移液槍，注意大肚吸管最后半滴的取舍問題。對(duì)于保存，一定按照要求貼好標(biāo)簽存放，在有效期內(nèi)使用，需要注意的是如果標(biāo)準(zhǔn)品冷藏保存了，在使用時(shí)一定要和進(jìn)樣樣品恢復(fù)到相同的溫度進(jìn)樣，由于進(jìn)樣一般都是以微升為單位，所以盡量避免溫度差帶來的進(jìn)樣體積差距。高效液相色譜檢測(cè)以外標(biāo)法定量，所以標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)確與否至關(guān)重要，對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)品的配制和保存，一定要加大重視程度，如果起步就錯(cuò)，后邊的也就無意義了。

第四是樣品的前處理。對(duì)于樣品的稱量問題，一些剛剛走進(jìn)檢測(cè)崗位的檢驗(yàn)員往往會(huì)犯的錯(cuò)誤就是比較隨意或者按以往經(jīng)驗(yàn)稱量差不多的樣品量。這里需要提示的是，每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)稱樣量的限定不是隨意的一個(gè)數(shù)值，標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的稱樣量對(duì)整個(gè)試驗(yàn)的限定數(shù)值。換句話說用標(biāo)準(zhǔn)中的前處理就需要準(zhǔn)確按標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的樣品量進(jìn)行提取分析，太多可能超過了本實(shí)驗(yàn)的提取范圍，太少又可能會(huì)帶來較大誤差量。所以對(duì)于樣品的稱樣量我們一定要嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)中的范圍，不同基質(zhì)按不同的稱樣量進(jìn)行試驗(yàn)。樣品的制備在標(biāo)準(zhǔn)中寫的比較詳細(xì)，在此不再贅述，需要注意一點(diǎn)就是要盡可能的提取充分，尤其是巧克力豆及著色糖衣，一定要水洗充分，不要在意水洗后溶液的多少，水相在后邊是會(huì)過濾舍去的，不必在意多少。著色劑的提取按聚酰胺提取法進(jìn)行提取，這里需要注意的是在加聚酰胺粉的時(shí)候一定要按要求把樣品提取液加熱到60℃左右，因?yàn)橛械膶?shí)驗(yàn)室保溫條件不是很好，過低的溫度會(huì)影響聚酰胺粉對(duì)著色劑的吸附，可能會(huì)等很久才會(huì)吸附好，為了提高試驗(yàn)效率，我們加熱到60℃加入聚酰胺粉會(huì)很快完成吸附。之后按標(biāo)準(zhǔn)要求進(jìn)行洗滌、洗脫。在洗脫時(shí)第一次加入乙醇-氨水-水溶液時(shí)可以適當(dāng)多加一些，多攪拌靜止一會(huì)兒，不要著急開泵進(jìn)行抽濾，因?yàn)樵谙疵摃r(shí)第一次往往需要時(shí)間，然后分多次少量的加乙醇-氨水-水溶液，直至G3漏斗中的聚酰胺粉呈現(xiàn)白色即可。水浴加熱濃縮的時(shí)候注意溫度，避免溶液沸騰。定容時(shí)需要注意的是一定要冷卻至室溫再定容，切不可帶溫進(jìn)行定容，熱脹會(huì)帶來數(shù)值的不準(zhǔn)確。

第五是前處理的一些玻璃器皿要及時(shí)清洗。尤其是G3漏斗，因其本身特性，最好是使用完就及時(shí)沖洗干凈，用稀鹽酸浸泡超聲清洗后干燥保存。

第六是上機(jī)分析。在樣品進(jìn)儀器分析前要充分平衡色譜柱，可以觀察以下色譜圖：

對(duì)著色劑這種需要流動(dòng)相梯度洗脫的檢驗(yàn)項(xiàng)目，我們一定要在平衡色譜柱的時(shí)候按其洗脫梯度進(jìn)行平衡，充分的沖掉色譜柱中的雜質(zhì)影響，這樣才能做出干凈漂亮的色譜圖來。最常見的就是如果不能充分平衡色譜柱，那么基線會(huì)忽高忽低極其不穩(wěn)。對(duì)于柱溫箱溫度國(guó)標(biāo)中有明確的數(shù)值35℃，這里需要注意的是實(shí)驗(yàn)室的溫度，多年的經(jīng)驗(yàn)來看，比柱溫箱低5-10℃的恒定溫度更有利于圖譜的穩(wěn)定，也就是說環(huán)境溫度讓儀器柱溫箱持續(xù)做功保持恒溫比較好。

最后提醒一下有的領(lǐng)導(dǎo)可能在定性試驗(yàn)中要求某幾個(gè)樣品混在一起進(jìn)行檢測(cè)，將樣品混合后按標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行稱量、提取等操作，如果未能檢出相應(yīng)參數(shù)，就認(rèn)為這幾個(gè)樣品中沒有此物質(zhì)。這是一個(gè)典型的稀釋和濃縮概念混淆不清的例子，我們的檢驗(yàn)項(xiàng)目都有檢出限，低于檢出限我們認(rèn)為是未檢出。舉個(gè)例子來說有9杯水1杯待測(cè)物，假設(shè)我們的檢出限為50%，也就是說當(dāng)待測(cè)物和水各一半時(shí)是我們檢出的極限濃度，但是如果按照混合樣品9杯水和1杯待測(cè)物來說，待測(cè)物濃度為10%，這就低于50%的檢出限，我們可能會(huì)認(rèn)為是10個(gè)樣品都不含待測(cè)物，然而實(shí)際上是有待測(cè)物的，這就是一個(gè)典型的稀釋后沒有濃縮的實(shí)驗(yàn)過程，因此在檢測(cè)過程中我們一定要注意這種情況的發(fā)生。這種混合稱量樣品如果非要這么取樣，一定要算好稀釋倍數(shù)，在最后一定要濃縮回來，只有這樣才能保證數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確。

高效液相色譜法檢測(cè)著色劑在眾多的檢測(cè)指標(biāo)之中算是比較簡(jiǎn)單易學(xué)又非常典型的試驗(yàn)。其中需要總結(jié)的技巧和經(jīng)驗(yàn)也很多，需要在日常的工作中不斷發(fā)現(xiàn)總結(jié)，對(duì)比不同方法的指導(dǎo)思想來思考每一步驟的具體用意，注意每個(gè)細(xì)節(jié)，必定會(huì)讓檢測(cè)結(jié)果更趨于真實(shí)值。

參考文獻(xiàn)

[1]中華人民共和國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，GB5009.35-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測(cè)定.