梁香 鐘娜娜 藍(lán)梓鈺 吳凌鳳

絞股藍(lán)[Gynostemma pentaphyllum （Thunb.） Makino]屬于葫蘆科翅子瓜亞科翅子瓜族錐形果亞族絞股藍(lán)屬，多年生攀援草本植物[1]，具調(diào)血脂、降血壓、降血糖、抗衰老、抗氧化和抗癌等主要功效[2-5]，有廣泛藥用價值和開發(fā)利用前景。絞股藍(lán)含有皂苷、黃酮類、多糖化合物等多種化學(xué)成分[6-7]，絞股藍(lán)中的皂苷有類似于人參皂苷的免疫功效?！吨腥A人民共和國中醫(yī)藥法》的頒布實施，明確指出鼓勵醫(yī)院臨床應(yīng)用中藥制劑[8]，其也成為大眾關(guān)注焦點?？诤乾F(xiàn)代中藥制劑和保健食品比較常用的一種劑型[9]。絞股藍(lán)維E口含片是嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院開發(fā)的一種以絞股藍(lán)提取物和維生素E為活性成分，然后添加輔料制備而成的全新抗氧化口含片[10]。為確保中藥制劑在制備過程中保留有效成分，本文采用紫外—可見分光光度法測定絞股藍(lán)維E口含片中絞股藍(lán)皂苷A的含量，以建立合理有效的質(zhì)量控制方法，具體如下。

1 材料與方法

1.1 實驗藥材

本實驗所用的絞股藍(lán)干燥全草采自廣東省梅州市，經(jīng)嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系李蘭芳講師鑒定為葫蘆科絞股藍(lán)屬植物絞股藍(lán)[Gynostemma pentaphyllum （Thunb.）Makino]干燥全草。

1.2 實驗試劑

絞股藍(lán)皂苷A對照品（成都曼斯特生物科技有限公司，MUST-16080105，純度：≥98%），乙醇（分析純，西隴化工股份有限公司）。

1.3 實驗儀器

AL204型電子分析天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司 ]，MING-CHE 24UV 超純水機(jī)（法國 Merck Millipore公司），SB-3200DT超聲波清潔機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司），101-3型電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海錦屏儀器儀表有限公司通州分公司），UV-2450紫外可見分光光度計（日本島津公司）。

1.4 方法

1.4.1 絞股藍(lán)皂苷A對照品溶液的制備 精密稱量絞股藍(lán)皂苷A對照品10.50 mg，置入25 ml的容量瓶，加入75%乙醇溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為0.420 mg/ml絞股藍(lán)皂苷A對照品溶液。

1.4.2 絞股藍(lán)維E口含片供試品溶液的制備 取口含片10片，平均片重0.435 9 g，研細(xì)，混合均勻，取1 g，精密稱定至錐形瓶，加入75%乙醇溶液適量，水浴鍋上加熱溶解，過濾至100 ml的容量瓶中，放冷，用75%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻，即得。

1.4.3 最大吸收波長的確定 分別吸取絞股藍(lán)皂苷A對照品溶液0.50 ml和供試品溶液1.00 ml，各加入75%乙醇溶液定容至10 ml容量瓶，以75%乙醇溶液為空白溶液。在200～800 nm范圍內(nèi)掃描，依據(jù)絞股藍(lán)皂苷A對照品溶液與絞股藍(lán)維E口含片供試品溶液的最大吸收波峰，確定測定絞股藍(lán)維E口含片的最大吸收波長。實驗結(jié)果表明，絞股藍(lán)皂苷A對照品溶液和供試品溶液的最大吸收峰位一致，均在205 nm波長處有最大吸收。故本實驗選用測定絞股藍(lán)維E口含片的絞股藍(lán)皂苷A的吸收波長為 205 nm。

1.4.4 線性關(guān)系考察 依次吸取0、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00和6.00 ml絞股藍(lán)皂苷A對照品溶液于10 ml容量瓶中，加入75%乙醇溶液溶解并稀釋至刻度，以75%乙醇溶液為調(diào)零溶液，在205 nm測定吸光度（A）。

1.4.5 精密度試驗 精密吸取1.4.1項下對照品溶液適量，至10 ml容量瓶，加75%乙醇溶液稀釋至刻度，搖勻。以75%乙醇溶液作為空白調(diào)零溶液，在205 nm處重復(fù)測定吸光度6次，評價精密度。

1.4.6 重復(fù)性試驗 取同一批絞股藍(lán)維E口含片樣品按照1.4.2項下辦法，平行制備6份供試品溶液，按照1.4.3項下方法測定吸光度。

1.4.7 穩(wěn)定性試驗精密 吸取同一批絞股藍(lán)維E口含片樣品制成的供試品溶液，室溫放置0、1、2、3、4、5 h后進(jìn)行紫外分光光度計測定，考察供試品溶液的穩(wěn)定性。

1.4.8 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量（1.430 7 mg/g）的同一批絞股藍(lán)維E口含片樣品9份，每份各取0.5 g，分成3組，每組3份，分別按照實際樣品中絞股藍(lán)皂苷A含量的80%、100%、120%加入絞股藍(lán)皂苷A對照品，配置成3種不同濃度的溶液于205 nm下按照1.4.4項下方法測定吸光度，利用回歸曲線計算加樣回收率、平均加樣回收率與相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）?；厥章剩?）=（測得量-樣品量）/加入量×100%。

1.4.9 樣品含量測定 精密稱取絞股藍(lán)維E口含片粉末，平行稱取3份，按照1.4.2項下制備供試品溶液，按照1.4.4項下測定吸光度，記錄吸光度并且計算含量，采用紫外分光光度法在205 nm處測得絞股藍(lán)維E口含片供試品溶液中絞股藍(lán)皂苷A含量。

2 結(jié)果

2.1 線性關(guān)系考察

以絞股藍(lán)皂苷A對照品溶液中的絞股藍(lán)皂苷A濃度C（mg/ml）為橫坐標(biāo)，吸光度A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，擬定線性回歸方程。絞股藍(lán)皂苷 A 的回歸方程為 Y=5.817 5X+0.023 5（R2=0.999 1），線性范圍：0.042 0～0.252 0 mg/ml時線性關(guān)系良好。

圖1 絞股藍(lán)皂苷A標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 精密度試驗

試驗結(jié)果RSD為0.24%，符合精密度試驗要求。

2.3 重復(fù)性試驗

6份供試品溶液測定吸光度，結(jié)果RSD為0.64%。

2.4 穩(wěn)定性試驗

試驗結(jié)果RSD為0.34%，表明樣品測定在5 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.5 加樣回收率試驗

加樣回收率試驗結(jié)果平均回收率99.47%，RSD為0.88%（n=9），見表2。

表2 加樣回收率試驗結(jié)果

2.6 樣品含量測定

采用紫外分光光度法在205 nm處測得絞股藍(lán)維E口含片供試品溶液中絞股藍(lán)皂苷A含量為0.617 mg/片，見表3。

表3 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

為確保絞股藍(lán)維E口含片中絞股藍(lán)在制備過程中絞股藍(lán)皂苷A有效成分保留，本文采用的提取方法參考文獻(xiàn)[11-14]中使用的溶劑、提取方法及結(jié)合預(yù)實驗結(jié)果，選擇75%乙醇直接加熱溶解，可提高絞股藍(lán)皂苷A提取率、減少損失。該研究采用紫外分光光度法對絞股藍(lán)維E口含片中絞股藍(lán)皂苷A進(jìn)行含量測定，對測定中波長的選擇進(jìn)行了考察，比較絞股藍(lán)維E口含片及絞股藍(lán)皂苷A對照品紫外-可見吸收光譜，以保證測定成分為絞股藍(lán)皂苷A，選取最大吸收波長進(jìn)行測定，減小測定誤差。目前中藥含量測定方法主要為高效液相色譜法，高效液相色譜法具有靈敏度高，檢測限低等優(yōu)點，但是使用該方法檢測時間長，設(shè)備成本高，操作步驟煩瑣等，而紫外分光光度法儀器價格低，適用性廣，操作簡單等特點，因此選擇紫外分光光度法對絞股藍(lán)皂苷A進(jìn)行含量測定。

本研究建立了紫外分光光度法測定絞股藍(lán)維E口含片中的絞股藍(lán)皂苷A的含量，結(jié)果顯示，絞股藍(lán)皂苷A在0.042 0～0.252 0 mg/ml內(nèi)線性關(guān)系良好，平均加樣回收率為99.47%（RSD為0.88%），每片口含片中絞股藍(lán)皂苷A含量約0.617 mg，該方法簡便快速，準(zhǔn)確度高，為絞股藍(lán)維E口含片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科學(xué)依據(jù)。