李苗，童穎，喬戈，楊園，聶小春

(武漢藥品醫(yī)療器械檢驗所，武漢 430075)

鹽酸萘甲唑啉滴鼻液為耳鼻咽喉科類非處方藥，臨床用于變應(yīng)性鼻炎及炎癥性鼻充血、急慢性鼻炎[1-2]。鹽酸萘甲唑啉為咪唑啉類衍生物的α-受體激動劑，能直接激動腎上腺素受體，也可通過促進腎上腺素能神經(jīng)末梢釋放去甲腎上腺素而間接激動腎上腺素受體，興奮α和β受體，引起鼻黏膜血管收縮，減少血管滲出物，減輕鼻黏膜腫脹充血，從而減輕炎癥所致充血和水腫。但同時也可引起全身小動脈和小靜脈收縮，使外周阻力明顯增加，導致血壓升高，微循環(huán)障礙，并容易透過血腦屏障，影響呼吸中樞和體溫調(diào)節(jié)中樞，產(chǎn)生較嚴重的不良反應(yīng)[3-7]。鹽酸萘甲唑啉滴鼻液由美國Allergan公司于1972年研發(fā)上市，《美國藥典》(USP)28版開始收載；中國國家衛(wèi)生部標準1989年開始收載鹽酸萘甲唑啉原料藥及滴鼻液，《中華人民共和國藥典》2000年版開始收載鹽酸萘甲唑啉原料藥及滴鼻液。筆者檢索國家藥品監(jiān)督管理局網(wǎng)站，發(fā)現(xiàn)國內(nèi)有33家企業(yè)生產(chǎn)鹽酸萘甲唑啉滴鼻液，涉及批準文號50個，規(guī)格2個。

鹽酸萘甲唑啉滴鼻液為2017年國家計劃抽驗品種，我所對來自生產(chǎn)和流通環(huán)節(jié)的262批次樣品進行了法定檢驗和探索性研究，筆者在本文綜合分析目前市售鹽酸萘甲唑啉滴鼻液質(zhì)量狀況。

1 抽樣情況

本次抽取的鹽酸萘甲唑啉滴鼻液樣品共262批，生產(chǎn)批號175個。全部樣品涉及批準文號10個，占全部批準文號的20%；涉及生產(chǎn)企業(yè)10家，占全部企業(yè)的30%；涉及處方規(guī)格2個(0.05%，0.1%)及包裝規(guī)格2種(8 mL，10 mL)。抽樣涉及全國31個省、自治區(qū)、直轄市，其中在經(jīng)營環(huán)節(jié)抽樣254批，占全部樣品的96.9%，生產(chǎn)環(huán)節(jié)抽樣8批，使用環(huán)節(jié)未抽樣。本次抽取的樣品同批號情況較普遍。

2 法定檢驗

262批樣品中，7批執(zhí)行《中華人民共和國藥典》2010年版二部標準，其他均執(zhí)行《中華人民共和國藥典》2015年版二部標準。兩個標準完全相同，包括性狀、鑒別、pH值、裝量、微生物限度、含量測定，均不控制有關(guān)物質(zhì)和滲透壓摩爾濃度。

3 探索性研究

通過對10家企業(yè)進行文件調(diào)研和電話調(diào)研，筆者確定了有關(guān)物質(zhì)、抑菌劑、滲透壓摩爾濃度等幾個重點研究方向：法定標準不控制有關(guān)物質(zhì)，需建立合適的分析方法考察本品的雜質(zhì)水平；本品為多劑量滴鼻液，處方中含有抑菌劑，各企業(yè)使用的種類和含量不一致，也需要建立方法考察抑菌劑含量；《中華人民共和國藥典》2020年版制劑通則要求鼻用液體制劑應(yīng)等滲，但法定標準中未檢查滲透壓摩爾濃度，故需要考察本品的滲透壓整體水平。

4 結(jié)果

4.1法定檢驗結(jié)果 262批樣品法定檢驗合格率為95.4%，12批樣品不合格。不合格樣品包括性狀不合格1批(溶液顯微黃色)，含量不合格11批，全部由A企業(yè)生產(chǎn)。

4.1.1性狀 鹽酸萘甲唑啉滴鼻液應(yīng)為無色澄清液體。不合格樣品顯黃色，檢驗時已接近有效期。該批次樣品采用每盒50支大包裝，無單獨紙盒包裝，且塑料瓶遮光性能不好，不能滿足說明書中“遮光”的貯藏要求。

4.1.2含量測定 11批樣品的含量不合格，結(jié)果在85%～88%，均由A企業(yè)生產(chǎn)，供試品溶液色譜圖中存在明顯未知物峰。雖然其他企業(yè)樣品含量均符合規(guī)定，但部分企業(yè)結(jié)果顯著偏高，B企業(yè)部分樣品含量高達109%。全部262批樣品含量測定結(jié)果分布見圖1。

圖1 含量測定分布頻次圖

4.2探索性研究 重點對有關(guān)物質(zhì)、抑菌劑、滲透壓摩爾濃度等進行探索性研究。

4.2.1有關(guān)物質(zhì) 鹽酸萘甲唑啉分子中存在二氫咪唑基團(圖2)，其中亞胺結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性較差，易水解開環(huán)生成雜質(zhì)A(萘乙酰乙二胺)，并進一步水解生成雜質(zhì)B(萘乙酸)。雜質(zhì)A、雜質(zhì)B、雜質(zhì)C與雜質(zhì)D均收載于《歐洲藥典》(EP)10版鹽酸萘甲唑啉原料藥有關(guān)物質(zhì)項下。鹽酸萘甲唑啉滴鼻液為液體制劑，萘甲唑啉在水溶液中更容易水解開環(huán)，故本品中可能存在有關(guān)物質(zhì)。

圖2 鹽酸萘甲唑啉及雜質(zhì)結(jié)構(gòu)

參考國內(nèi)外藥典方法和文獻[8-12]，建立新的高效液相色譜(HPLC)法，該法可將主成分、各已知雜質(zhì)、處方中各種抑菌劑完全分離(圖3)，適用于同時測定不同處方中鹽酸萘甲唑啉、雜質(zhì)A～D含量，并進行方法學研究。采用Waters Symmetry C8色譜柱(150 mm×3.9 mm，5 μm)，以磷酸鹽緩沖液(pH值5.6)(取無水磷酸氫二鈉14.2 g，加水1 900 mL溶解，加三乙胺20 mL，磷酸調(diào)pH值至5.6，加水至2 000 mL)作為流動相A，以乙腈為流動相B，洗脫梯度：0→24 min 88%A，24→25 min 88%A→70%A，25→48 min 70%A，48→49 min 70%A→88%A，49→59 min 88%A；流速為1.0 mL·min-1；柱溫35 ℃；檢測波長270 nm。采用該方法對全部262批樣品進行測定，100%樣品中檢出萘乙酰乙二胺(雜質(zhì)A)，含量范圍0.7%～13.6%(圖4)。

圖3 HPLC專屬性分離色譜圖

圖4 萘乙酰乙二胺含量分布頻次圖

筆者采用液相色譜-質(zhì)譜(LC-MS)法對樣品中萘乙酰乙二胺進行驗證。采用Ultimate XB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以0.05 moL·L-1醋酸銨緩沖液(pH值5.6)(用冰醋酸調(diào)pH值至5.6)-乙腈(85：15)為流動相，流速1.0 mL·min-1；柱溫35 ℃。采用API 4000三重四級桿液相質(zhì)譜聯(lián)用儀(AB Sciex Instruments公司)，電噴霧離子化(electrospray ionization，ESI)模式，氣簾氣(curtain gas CUR)：0.14 MPa(20 psi)，碰撞氣(collision gas，CAD)：0.06 MPa(8 psi)，離子化電壓(ionspray voltage，IS)：-5500 V，溫度(temperature，TEM)：500 ℃，噴霧氣(ion source gas1，GS1)：0.28 MPa(40 psi)，噴霧氣(ion source gas2，GS2：0.28 MPa(40 psi)；定性離子對為229.3/141.2與229.3/212.2(圖5)。

進口藥品馬來酸非尼拉敏鹽酸萘甲唑啉滴眼液中含鹽酸萘甲唑啉，質(zhì)量標準規(guī)定萘乙酰乙二胺不得過鹽酸萘甲唑啉標示量10%，說明萘乙酰乙二胺確是鹽酸萘甲唑啉主要降解產(chǎn)物。毒理學研究表明，萘乙酰乙二胺為低毒化合物，半數(shù)致死劑量(LD50)=848 mg·kg-1。筆者重點從強制降解實驗、加速穩(wěn)定性實驗等方面入手，研究鹽酸萘甲唑啉降解生成萘乙酰乙二胺的途徑和機制。

圖5 萘乙酰乙二胺質(zhì)譜圖

按照《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則9102藥品雜質(zhì)分析指導原則要求，取鹽酸萘甲唑啉原料藥，分別在酸、堿、加熱、氧化、光照條件下進行強制破壞，同時采用二極管陣列檢測器(diode array detector，DAD)光譜和LC-MS聯(lián)用技術(shù)利用歐洲藥典(European Pharmacopoeia，EP)雜質(zhì)A對照品對主要降解產(chǎn)物進行了結(jié)構(gòu)確證。結(jié)果表明，溫度和堿性環(huán)境是導致鹽酸萘甲唑啉降解最主要的因素(圖6)。

圖6 鹽酸萘甲唑啉強制降解實驗色譜圖

鹽酸萘甲唑啉為咪唑啉類衍生物，結(jié)構(gòu)中存在二氫咪唑基團，其中亞胺結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性較差，鹽酸萘甲唑啉在堿性條件下降解的反應(yīng)機制如下(圖7)，加熱能顯著提高反應(yīng)速度。

《中華人民共和國藥典》2015年版四部通則9001原料藥物與制劑穩(wěn)定性實驗指導原則要求包裝在半透明容器中的液體制劑，應(yīng)在40 ℃下放置不同時間進行穩(wěn)定性考察。筆者將樣品在40 ℃放置28 d，結(jié)果全部企業(yè)的樣品中萘乙酰乙二胺的含量均較原來水平有顯著增加(圖8)。說明流通環(huán)節(jié)環(huán)境溫度如果偏高，也會加速萘甲唑啉降解，導致來自不同地區(qū)相同批號樣品含量測定結(jié)果不一致。

A企業(yè)有11批樣品中雜質(zhì)A含量超過10%，筆者通過對A企業(yè)進行調(diào)研，了解到該企業(yè)從配液到成品打包全過程持續(xù)約8 h，期間沒有降溫步驟，藥液溫度維持50～60 ℃，最后入常溫庫儲存，自然降溫。企業(yè)同時反映生產(chǎn)時按100%投料，但成品檢驗含量結(jié)果往往僅約97%，即剛生產(chǎn)出來含量就會降低3%。說明因生產(chǎn)過程中溫度較高，鹽酸萘甲唑啉降解速度較快，導致該企業(yè)樣品中雜質(zhì)A含量普遍偏高。

4.2.2過量投料 部分企業(yè)在本品的長期穩(wěn)定性實驗中發(fā)現(xiàn)鹽酸萘甲唑啉含量隨著儲存時間延長而降低，但由于法定標準中無有關(guān)物質(zhì)檢查項，因此企業(yè)未對生產(chǎn)工藝和降解產(chǎn)物進行研究來避免降解發(fā)生，而是通過過量投料來保證本品在有效期內(nèi)含量始終符合規(guī)定。因此B企業(yè)多批樣品的含量達到109%。

4.2.3抑菌劑 本次抽樣涉及10家企業(yè)，6家企業(yè)采用硫柳汞為抑菌劑，處方量為0.01%與0.002%；1家企業(yè)使用羥苯乙酯(0.03%)，1家企業(yè)使用羥苯乙酯(濃度未知)，1家企業(yè)使用苯甲酸鈉(0.01%)，1家企業(yè)采用苯扎溴銨(0.01%)。均同時使用依地酸二鈉為穩(wěn)定劑，以發(fā)揮協(xié)同抑菌作用。

筆者采用《中華人民共和國藥典》2015年版標準提高課題“滴眼劑中抑菌劑的含量測定方法研究”中HPLC方法，同時測定鹽酸萘甲唑啉滴鼻液中的多種抑菌劑，并進行方法學研究。課題中建議抑菌劑含量應(yīng)為標示量80%～120%，全部262批樣品有54批樣品不合格，主要是多批樣品中硫柳汞含量高出限度范圍，說明部分企業(yè)在生產(chǎn)中存在過量添加抑菌劑的情況。硫柳汞作為含汞化合物，目前世界衛(wèi)生組織(WHO)、美國食品藥品管理局(FDA)已建議其不再用于藥品及疫苗，且滴鼻液易通過血腦屏障，因此過量添加硫柳汞等抑菌劑存在一定臨床風險。

4.2.4滲透壓摩爾濃度 筆者對全部262批樣品進行滲透壓摩爾濃度測定，絕大部分企業(yè)樣品滲透壓摩爾濃度>330 mOsmol·kg-1(圖9)?！吨腥A人民共和國藥典》2015年版二部鹽酸萘甲唑啉滴眼液項下要求滲透壓摩爾濃度比應(yīng)為0.9～1.1。根據(jù)這個要求來判斷，僅25批樣品符合要求，合格率9.5%，說明多數(shù)企業(yè)在處方設(shè)計時未考慮等滲要求。

5 結(jié)束語

市售鹽酸萘甲唑啉滴鼻液中均檢出萘乙酰乙二胺等有關(guān)物質(zhì)，主要原因有3點：①鹽酸萘甲唑啉的穩(wěn)定性較差，在高溫及偏堿性環(huán)境下即可發(fā)生降解，生成萘乙酰乙二胺；②部分企業(yè)生產(chǎn)工藝不合理，生產(chǎn)過程中沒有控制溫度，導致鹽酸萘甲唑啉快速降解；③流通環(huán)節(jié)未嚴格控制溫度，說明書上貯存條件不合理，導致同批號樣品在不同地區(qū)抽樣含量結(jié)果差異較大。另外還存在硫柳汞等抑菌劑含量偏高、滲透壓摩爾濃度偏高導致不等滲等問題。

圖7 鹽酸萘甲唑啉堿破壞反應(yīng)機制

圖8 加速實驗中雜質(zhì)A含量

圖9 滲透壓摩爾濃度分布頻次圖

鹽酸萘甲唑啉為五官科經(jīng)典老藥，臨床常用作滴鼻液和滴眼液。因其使用歷史悠久且價格低廉，生產(chǎn)企業(yè)大多忽視了鹽酸萘甲唑啉的理化特性對藥品質(zhì)量的影響。本實驗反映了國產(chǎn)鼻用制劑的普遍問題，即質(zhì)量標準簡單，早期設(shè)計處方工藝沒有經(jīng)過深入研究，質(zhì)量控制不全面。考慮到本品多為易過敏人群使用，且鼻用制劑易通過血腦屏障，可能存在用藥安全隱患。建議生產(chǎn)企業(yè)采取改進工藝、重新設(shè)計處方、控制流通環(huán)節(jié)溫度等多種措施降低鹽酸萘甲唑啉滴鼻液有關(guān)物質(zhì)水平，同時提高質(zhì)量標準、修訂藥品說明書來保障藥品質(zhì)量；建議關(guān)注硫柳汞作為抑菌劑的安全性和替代方案，提高國產(chǎn)鼻用制劑處方的合理性和有效性，保證國產(chǎn)鼻用制劑的安全有效。