張昊 徐新禹 崔秀潔 郭玉華

三維放射是目前臨床治療非小細(xì)胞肺癌（nonsmall cell lung cancer，NSCLC）患者的有效手段。但相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，三維放射治療放療后部分患者癥狀緩解率較低，如有生物標(biāo)記作為標(biāo)準(zhǔn)幫助篩選患者進(jìn)行治療，可提高療效，降低毒副反應(yīng)，故尋求有效腫瘤標(biāo)志物對NSCLC 患者具有重要意義［1］。研究顯示核苷酸還原酶1（ribonucleotide reductase subunitl，RRM1）在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，其分泌與肺癌腫瘤關(guān)系密切［2］。程序化死亡因子5（Programmed death factor 5，PDCD-5）是臨床上重要的凋亡調(diào)控分子，經(jīng)臨床實驗證明其對腫瘤化療具有協(xié)同增敏的作用［3］。而血管內(nèi)皮生長因子（vasclar endothelial growth factor，VEGF）系腫瘤生長、侵襲及轉(zhuǎn)移相關(guān)主要調(diào)控因子之一，證實其表達(dá)水平與腫瘤組織及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)［4］。本研究對RRM1、PDCD-5及VEGF 表達(dá)對NSCLC 患者放療后近期療效評價及預(yù)測價值系進(jìn)行分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2015年5月至2017年5月本院收治的NSCLC 患者126例，其中男85例，女41例；年齡52～78 歲，平均（68.79±3.31）歲。根據(jù)放療后近期療效情況分為：完全緩解組：61例，部分緩解組：36例，未緩解組：29例。納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有患者均予以外科切除手術(shù)明確的病理，符合中華醫(yī)學(xué)會肺癌臨床診療指南（2018 版）［5］標(biāo)準(zhǔn)；②入組前均接受一個月放療；③根據(jù)本院實際情況納入年齡在51～78 歲之間；④臨床資料完整且真實。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并血液疾病者；②嚴(yán)重精神疾患或癡呆等無法配合本研究者；③存在除NSCLC 以外其他原發(fā)性惡性腫瘤者；④合并風(fēng)濕免疫及結(jié)締組織病變者。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)通過，受試者均同意研究并簽署知情同意書。

1.2 放射治療

NSCLC 患者予以三維適形放療，放療部位包括原發(fā)灶、同側(cè)肺門、縱隔可見淋巴結(jié)。三維放射治療計劃系統(tǒng)中根據(jù)放療計劃分別統(tǒng)計V20、V30（接受20 Gy/30 Gy 照射的肺占全肺總體積的百分?jǐn)?shù)）和全肺照射平均劑量。

1.3 標(biāo)本采集及檢測方法

RRMl 多克隆抗體，購自北京博奧森生物技術(shù)有限公司；PDCD-5 單克隆抗體購于北京寶賽生物技術(shù)有限公司；VEGF 單克隆抗體試劑盒購于北京中山生物技術(shù)有限公司。免疫組化采用鏈霉素抗生物素蛋白一過氧化酶連接法（streptavidin-perosidase，SP）法，SP 試劑盒購自北京中山生物科技有限公司。各步驟均嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作［6］。染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)［7］：以細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為RRM1、PDCD-5、VEGF 陽性染色細(xì)胞。每張切片隨機(jī)選取10 個高倍視野，按照陽性細(xì)胞的染色數(shù)量和顯色強(qiáng)度分級評分，取其平均值。細(xì)胞染色數(shù)量的評分按照陽性細(xì)胞計數(shù)占同類細(xì)胞的百分比，計算該病例的細(xì)胞陽性率。

1.4 近期療效研究方法

采用世界衛(wèi)生組織（World Health Organization，WHO）評價標(biāo)準(zhǔn)［8］：分為：完全緩解、部分緩解、無變化、進(jìn)展。

1.5 臨床分期及分化程度判定

根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會系統(tǒng)（American Joint Committeeon Cancer，AJCC）［9］建議進(jìn)行TNM分期，結(jié)合有關(guān)腫瘤、附近淋巴結(jié)和遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移的信息，使用Ⅰ到Ⅳ期進(jìn)行描述。并根據(jù)切除的病理組織切片對患者分化程度進(jìn)行判斷。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，計數(shù)資料以n（%）表示，行χ2檢驗；采用多元Logistic 回歸分析影響NSCLC 患者近期療效的獨立危險因素；采用ROC 曲線分析RRM1、PDCD-5 及VEGF 對NSCLC 患者近期療效的預(yù)測價值；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RRM1、PDCD-5 及VEGF 水平表達(dá)

研究組RRM1、PDCD-5、VEGF 陽性表達(dá)率高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表1、圖1。

表1 RRM1、PDCD-5 及VEGF 水平表達(dá)［n（%）］Table 1 Expression of RRM1，PDCD-5 and VEGF［n（%）］

圖1 RRM1、PDCD-5 及VEGF 在NSCLC 癌組織的表達(dá)（SP，×400）Figure 1 expression of RRM1，PDCD-5 and VEGF in NSCLC carcinoma（SP，×400）

2.2 放療后RRM1、PDCD-5 及VEGF 在NSCLC患者水平表達(dá)

放療后，完全緩解組及部分緩解組RRM1、PDCD-5、VEGF 陽性表達(dá)率及陰性表達(dá)率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；完全緩解組及部分緩解組RRM1、PDCD-5、VEGF 陽性表達(dá)率較未緩解組低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

2.3 影響NSCLC 患者放療后近期療效的因素分析

患者年齡非影響近期療效危險因素；臨床分期（Ⅲ+Ⅳ）期、分化程度（低、中分化）、RRM1、PDCD-5 及VEGF 陽性為影響NSCLC 患者放療后近期療效的獨立危險因素（P＜0.05）。見表3。

表2 比較放療后RRM1、PDCD-5 及VEGF 在NSCLC 患者水平表達(dá)［n（%）］Table 2 The expression of RRM1，PDCD-5 and VEGF in NSCLC patients after radiotherapy［n（%）］

表3 影響NSCLC 患者放療后近期療效的因素分析Table 3 Analysis of factors affecting the short-term efficacy of radiotherapy in patients with NSCLC

2.4 RRM1、PDCD-5 及VEGF 單項及聯(lián)合檢測對NSCLC 患者近期療效的預(yù)測價值

ROC 曲線顯示：RRM1、PDCD-5 及VEGF 單項及聯(lián)合檢測曲線下面積分別為0.817、0.705、0.798、0.938，聯(lián)合檢測最大。見表4、圖2。

表4 RRM1、PDCD-5 及VEGF 單項及聯(lián)合檢測對NSCLC 患者近期療效的預(yù)測價值Table 4 The predictive value of single and combined RRM1，PDCD-5 and VEGF tests on the short-term efficacy of NSCLC patients

圖2 RRM1、PDCD-5 及VEGF 單項及聯(lián)合檢測曲線分析Figure 2 Analysis of single and combined detection curves of RRM1，PDCD-5 and VEGF

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，NSCLC 五年生存率僅為28.13%［10］。近年來，有學(xué)者發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因和宿主因素間相互作用密切相關(guān)，這為進(jìn)一步探討NSCLC 發(fā)病機(jī)制并優(yōu)化診療方案提供了新的思路。

RRM1系腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，其在多種腫瘤組織中高表達(dá)，參與細(xì)胞增殖、凋亡、自噬等多個生物學(xué)過程。眾多研究發(fā)現(xiàn)，DNA 修復(fù)基因的能力與肺癌的發(fā)病及耐藥有關(guān)；DNA 修復(fù)基因修復(fù)力低者肺癌發(fā)生的風(fēng)險較正常人明顯增加，而修復(fù)力高者對放療耐受，使放療失?。?1］。相關(guān)動物實驗研究發(fā)現(xiàn)，RRM1 可在影響DNA 化學(xué)損傷修復(fù)的效率及核苷酸的代謝的同時，減少黏著斑激酶磷酸化，對腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移具有抑制作用［12］。本文發(fā)現(xiàn)，研究組RRM1陽性表達(dá)率明顯高于對照組，且完全緩解組及部分緩解組RRM1陽性表達(dá)率較未緩解組高，考慮其原因與癌組織存在基因損傷使DNA 修復(fù)基因的表達(dá)增加有關(guān)。

PDCD-5是由北京大學(xué)人類疾病基因研究中心馬教授發(fā)現(xiàn)的一種新的凋亡調(diào)控基因，也是目前國際腫瘤研究的熱點之一。研究表明PDCD-5與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［13］。本研究顯示PDCD-5在NSCLC 癌組織中表達(dá)率高，但予以放療后緩解率升高。一方面與PDCD-5經(jīng)真核表達(dá)載體導(dǎo)入或大腸桿菌表達(dá)重組蛋白導(dǎo)入多種細(xì)胞后，不能單獨對細(xì)胞產(chǎn)生明顯的影響，但加入誘導(dǎo)凋亡的因素可明顯促進(jìn)細(xì)胞凋亡，表明PDCD-5是凋亡增強(qiáng)劑，而非誘導(dǎo)劑；另一方面，PDCD-5表達(dá)量減少，可能使其抵抗化療藥物誘導(dǎo)凋亡刺激信號發(fā)生的作用機(jī)制之一。

VEGF 是近年來才被發(fā)現(xiàn)的一種促血管生長因子，可促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞的增殖和遷移，與腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移關(guān)系密切，通過癌組織增殖與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用；并在胃癌、直腸癌、乳腺癌、胰腺癌等多種實體癌中均具有表達(dá)［14］。本研究結(jié)果顯示，VEGF 與NSCLC 患者密切相關(guān)，在癌組織中陽性表達(dá)率高，這與Woodford 等［15］對肺癌患者VEGF 水平研究有一定出入，考慮其原因與樣本量不足，導(dǎo)致部分結(jié)果未顯示明顯差異有關(guān)，后續(xù)將加大樣本量，以完善研究的可靠性。此外，本文為深入了解NSCLC 患者放療情況，對患者近期療效進(jìn)行研究發(fā)現(xiàn)，RRM1、PDCD-5 及VEGF 水平與是患者近期療效危險因素相關(guān)；且ROC 曲線顯示，三者水平對患者近期療效預(yù)測價值最佳，說明檢測三指標(biāo)可作為預(yù)測患者近期療效的有效手段。

綜上所述，NSCLC 患者放療后近期療效與RM1、PDCD-5 及VEGF 水平密切相關(guān)，臨床應(yīng)對其指標(biāo)進(jìn)行監(jiān)測對該疾病患者具有重要意義。