歐陽若水 鐘蘭英 文桂卿 鐘倪俊 卓進(jìn)盛 邢益濤 王利勝

1.廣州中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，廣東廣州 510403；2.廣東江門中醫(yī)藥職業(yè)學(xué)院南藥學(xué)院，廣東江門 529000；3.海南省中醫(yī)院肺病科，海南海口 570203；4.海南省中醫(yī)院泌尿外科，海南?？?570203

加味五子衍宗方是來源于海南省中醫(yī)院的臨床經(jīng)驗方，由枸杞子、菟絲子、五味子、車前子、覆盆子、烏藥、沉香、細(xì)辛八味藥材組成，有補腎益精、溫中止痛的功效，被廣泛用于治療腎虛腰痛、陽痿、不育等疾病。該方在臨床上以湯劑的形式服用，具有服用量大、煎煮時間長、不便攜帶等缺點，本研究旨在不改變原方的基礎(chǔ)上，將原方湯劑改制為濃縮丸。在濃縮丸的制備過程中，清膏的相對密度、藥蜜用量比、藥粉的細(xì)度、干燥時間、干燥溫度等，都會對濃縮丸的品質(zhì)產(chǎn)生直接的影響[1-3]。因此，本研究以軟材性狀、成型性、水分和溶散時限為工藝評價指標(biāo)[4-5]，采用單因素試驗[6]對本濃縮丸進(jìn)行優(yōu)化，旨在探索出合適的制備工藝，同時，在優(yōu)化的工藝基礎(chǔ)上，對所制的濃縮丸進(jìn)行質(zhì)量檢測。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

電子分析天平（生產(chǎn)廠家：上海民橋精密科學(xué)儀器有限公司；型號：FA2014；精密度：0.0001）；四兩裝高速中藥粉碎機（生產(chǎn)廠家：瑞安市永歷制藥機有限公司；型號：103）；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱（生產(chǎn)廠家：上海精宏實驗設(shè)備有限公司；型號：DHG-9240A）；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（生產(chǎn)廠家：上海亞榮生化儀器廠；型號：RE-52 系列）；恒溫水浴鍋（生產(chǎn)廠家：上海亞榮生化儀器廠；型號：B-220）；小型多功能中藥制丸機（生產(chǎn)廠家：長沙市岳麓區(qū)中南制藥機械廠；型號：DZ-20）；智能崩解儀（生產(chǎn)廠家：天津市天大天發(fā)科技有限公司；型號：ZB-1E）；高效液相色譜儀（生產(chǎn)廠家：日本島津公司；型號：LC-20A）；色譜柱（生產(chǎn)廠家：Agilent；型號：ZORBAXSB-Aq）。

1.2 試藥

枸杞子、菟絲子、五味子、車前子、覆盆子、烏藥、沉香、細(xì)辛藥材均購自康美藥業(yè)股份有限公司，經(jīng)檢驗均符合2015 年版《中華人民共和國藥典》[7]標(biāo)準(zhǔn)；金絲桃苷對照品（成都格利普生物科技有限公司，批號：19071603）；乙腈為色譜純，磷酸為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 成型工藝研究

2.1.1 制法

按處方稱取菟絲子20 g、覆盆子10 g、車前子10 g、烏藥10 g、沉香10 g，粉碎，過篩，混合均勻。按處方取枸杞子30 g、五味子15 g、細(xì)辛3 g，水提，濃縮，與上述細(xì)粉混合，加入適量中蜜作為黏合劑，采用塑制法[8]制丸，干燥，即得。

2.1.2 工藝流程

工藝流程見圖1。

圖1 工藝流程

2.2 評價指標(biāo)測定

2.2.1 水分的測定

按照2015 年版《中華人民共和國藥典（四部）》[9]水分測定法（通則0832）項下的烘干法進(jìn)行測定，含水量不得超過12.0%。

2.2.2 溶散時限檢查

按照2015 年版《中華人民共和國藥典（四部）》[9]崩解時限檢查法（通則0921）進(jìn)行檢查，應(yīng)在2 h 內(nèi)全部溶解。

2.3 試驗因素考察

2.3.1 清膏相對密度考察

按處方量稱取水提組3 味藥材，水提后分別濃縮至相對密度為1.20、1.30、1.40、1.50（20℃），分別與粉碎組藥材細(xì)粉混勻制丸，固定藥蜜用量比為1∶0.5，藥粉細(xì)度為100 目。以軟材性狀和成丸情況為評價指標(biāo)。優(yōu)選出清膏相對密度為1.40。見表1。

表1 清膏相對密度考察

2.3.2 藥蜜用量比考察

按處方量稱取藥材細(xì)粉，分別加入藥蜜比為1∶0.3、1∶0.4、1∶0.5、1∶0.6 的中蜜做黏合劑，固定清膏相對密度為1.40，藥粉細(xì)度為100 目，干燥溫度為65℃，干燥時間為10 h，制丸。以成型性、水分和溶散時限為評價指標(biāo)，綜合考察指標(biāo)的結(jié)果，優(yōu)選出藥蜜用量比為1∶0.4。見表2。

表2 藥蜜用量比考察

2.3.3 藥粉細(xì)度考察

將粉碎組5 味藥材粉碎，分別過60、80、100、120目篩，固定清膏相對密度為1.40，藥蜜用量比為1∶0.4，干燥溫度為65℃，干燥時間為10 h，制丸。以成型性、水分、溶散時限為評價指標(biāo)，確定藥粉細(xì)度為100 目。見表3。

表3 藥粉細(xì)度考察

2.3.4 干燥溫度考察

將清膏相對密度固定為1.40，藥蜜用量比為1∶0.4，藥粉細(xì)度為100 目，制丸，分別于50、60、70、80℃不同溫度下進(jìn)行干燥，干燥時間固定為10 h，以水分、溶散時限為評價指標(biāo)，最終確定干燥溫度為60℃。見表4。

表4 干燥溫度考察

2.3.5 干燥時間考察

固定清膏相對密度為1.40，藥蜜用量比為1∶0.4，藥粉細(xì)度為100 目，干燥溫度為60℃，制丸，分別干燥7、10、13、16 h，以水分和溶散時限為考察指標(biāo)，優(yōu)選出干燥時間為10 h。見表5。

表5 干燥時間考察

2.3.6 驗證實驗

為了進(jìn)一步驗證優(yōu)選工藝的可靠性，分別取3 份處方量的藥材，按照優(yōu)選出的條件進(jìn)行試驗，測定成品的水分和溶散時限。最終確定了加味五子衍宗濃縮丸的制備工藝，清膏的相對密度為1.40，藥蜜用量比為1∶0.4，藥粉細(xì)度100 目，干燥溫度60℃，干燥時間10 h。見表6。

表6 工藝驗證考察表

2.4 質(zhì)量檢查

根據(jù)上述試驗篩選出的條件，制備3 批（批號：20070101、20070102、20070103）加味五子衍宗濃縮丸，隨后依據(jù)2015 年版《中華人民共和國藥典》[9]四部通則丸劑項的相關(guān)規(guī)定對丸粒進(jìn)行質(zhì)量檢查。

2.4.1 溶散時限

按照2015 年版《中華人民共和國藥典（四部）》[9]崩解時限檢查法（通則0921）將樣品置于智能崩解儀中測定。批號為20070101、20070102、20070103 加味五子衍宗濃縮丸樣品溶散時限分別為23、27、26 min。3 批樣品的溶散時限均在120 min 內(nèi)，符合《中華人民共和國藥典》的溶散時限規(guī)定。

2.4.2 水分檢查

按照2015 年版《中華人民共和國藥典》四部[9]水分測定法（通則0832）項下的烘干法進(jìn)行測定，批號為20070101、20070102、20070103 加味五子衍宗濃縮丸樣品水分檢查結(jié)果分別為7.01%、6.89%、6.82%。3 批樣品的水分都小于9%，符合《中華人民共和國藥典》的水分規(guī)定。

2.4.3 重量差異

按照2015 年版《中華人民共和國藥典（四部）》[9]丸劑重量差異檢查法進(jìn)行測定，以10 丸為1 份，取供試品10 份，分別稱定重量。3 批樣品的重量差異均在±9%以內(nèi)，符合《中華人民共和國藥典》對該劑型重量差異的規(guī)定。見表7。

表7 3 批樣品重量差異檢查表（g）

2.4.4 金絲桃苷含量測定

2.4.4.1 色譜條件 色譜柱：Agilent ZORBAX SB-Aq色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸溶液（17∶83）；檢測波長：360 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：10 μL，理論塔板數(shù)按金絲桃苷峰計算應(yīng)不低于5000[7]。

2.4.4.2 對照品溶液的制備 取金絲桃苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成97 μg/mL 的溶液，即得金絲桃苷對照品儲備液。

2.4.4.3 供試品溶液的制備 取加味五子衍宗濃縮丸5 g，粉碎后精密稱定，置于50 mL 具塞量瓶中，加入80%甲醇40 mL，超聲處理（功率500 W，頻率40 kHz）1 h，放冷，加80%甲醇至刻度，搖勻，過濾，取續(xù)濾液，取1 mL 定容至10 mL 容量瓶，吸取上清液，過0.22 μm的微孔濾膜，取續(xù)濾液，即得。色譜圖見圖2。

圖2 金絲桃苷對照品及供試品高效液相色譜圖

2.4.4.4 線性實驗 精密吸取對照品儲備液1 mL，分別置于5、10、20、25、50 mL 容量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，按上述色譜條件進(jìn)樣，以峰面積和濃度進(jìn)行線性回歸。回歸方程為Y=155 59X-1397.3（r=0.9999）。

2.4.4.5 精密度實驗 精密吸取質(zhì)量濃度為3.88 μg/mL的對照品溶液適量，按上述色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣6 次，測定峰面積，RSD 值為1.70%，結(jié)果表明，儀器的精密度良好。

2.4.4.6 穩(wěn)定性實驗 精密吸取同一份供試品溶液，分別在制備后0、2、4、6、8、10 h 按上述色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積，RSD 值為1.57%，結(jié)果表明，供試品溶液在10 h 內(nèi)保持穩(wěn)定。

2.4.4.7 重復(fù)性實驗 取同一批加味五子衍宗濃縮丸5 g，粉碎，按“2.4.4.3”項下制成供試品溶液，重復(fù)進(jìn)樣6 次，測定金絲桃苷含量，RSD 值為1.80%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.4.4.8 加樣回收率實驗 精密量取已知濃度的供試品溶液（2.4956 μg/mL）1 mL，平行6 份，分別精密加入質(zhì)量濃度為2.4250 μg/mL 的金絲桃苷對照品溶液1 mL，按“2.4.4.3”項下制成供試品溶液，測定金絲桃苷的含量及加樣回收率。見表8。

表8 加樣回收率實驗結(jié)果

2.4.4.9 樣品含量測定 取3 批加味五子衍宗濃縮丸，每份5 g，按“2.4.4.3”項下方法制成供試品溶液，按“2.4.4.1”項下色譜條件進(jìn)樣，計算3 批加味五子衍宗濃縮丸中的金絲桃苷含量。批號為20070101、20070102、20070103 加味五子衍宗濃縮丸含量分別為0.20、0.19、0.20 mg/g。符合2015 年版《中華人民共和國藥典》[7]的規(guī)定（金絲桃苷的含量不得少于0.10%）。

3 討論

濃縮丸是指將處方中的部分藥材提取濃縮成稠膏后與剩余的藥材細(xì)粉混合制成的丸劑[10]，服用量小，易吸收、存儲和攜帶，同時其制備過程中所使用的輔料較其他劑型少，在工業(yè)大生產(chǎn)時能節(jié)省輔料以減少成本，符合中醫(yī)用藥特點并適用于現(xiàn)代機械化生產(chǎn)[11]。有研究表明，在治療男性不育癥疾病時濃縮丸的藥效略優(yōu)于水蜜丸[12]。因此，本研究旨在不改變處方的基礎(chǔ)上，將原方湯劑改制成濃縮丸，以克服湯劑煎煮時間長、易變質(zhì)、不易攜帶、服用體積大等缺點。

傳統(tǒng)的泛制法制備工藝較為繁瑣，周期長，且因生粉直接入藥，易導(dǎo)致微生物數(shù)量超標(biāo)，而塑制法的生產(chǎn)效率高，成品均勻度好，不易染菌[13]，還能避免人工操作帶來的操作結(jié)果的差異性[14]。故本方采用塑制法制丸。清膏相對密度、藥蜜比例、藥粉細(xì)度、干燥時間、干燥溫度都是影響制丸的重要因素。清膏相對密度過小時，藥粉干燥而難以成團(tuán)，導(dǎo)致無法制丸；相對密度過大時，制成的軟材太軟，易產(chǎn)生粘連。藥粉的細(xì)度主要影響軟材的細(xì)膩程度，從而影響丸粒的外觀性狀，藥粉過粗，制成的軟材粗糙，丸粒不圓整；藥粉過細(xì)，打粉的難度增加，損失較大[15]。

蜂蜜是良好的藥物黏合劑，可以根據(jù)調(diào)節(jié)蜂蜜的含水量來調(diào)整蜂蜜的黏性，來適應(yīng)不同藥材的處理需求[16]。此外，在某些方中，蜂蜜還可起到佐、使藥的作用[17]。用于制備丸劑的蜂蜜必須經(jīng)過煉制，通過煉蜜能除去雜質(zhì)，殺滅細(xì)菌，除去水分以增加黏性等[18]。根據(jù)煉制的程度，蜂蜜共可以分為嫩蜜、中蜜、老蜜三種，需根據(jù)處方的藥材性質(zhì)來選擇合適的煉蜜。本研究于初步試驗中發(fā)現(xiàn)，本處方采用中蜜制丸，所得軟材軟硬度適中，黏性較好，丸粒表面光滑圓整，故將蜂蜜煉制至中蜜作為黏合劑。

菟絲子是本方的君藥，是本方中最重要的藥材，具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗衰老、保肝明目等多種藥理作用[19-21]，尤其對腎虛不孕、胎動不安等生殖系統(tǒng)疾病有顯著的治療作用[22]。金絲桃苷既是菟絲子的主要成分也是有效成分，具有抗急性肝損傷、抗抑郁、抗炎癥、抗血栓、抗癌等藥理作用[23-24]，還能通過抗氧化應(yīng)激及抗炎作用減輕嚴(yán)重?zé)齻笫笤缙谛募p傷[25]。金絲桃苷的理化性質(zhì)較為穩(wěn)定，在2015 年版《中華人民共和國藥典（一部）》[7]中，菟絲子含量測定指定以金絲桃苷為主要測定指標(biāo)。因此，綜合考慮，本濃縮丸選擇金絲桃苷作為質(zhì)量控制的指標(biāo)。