朱狄峰, 童振軒, 洪雅雯, 陳 超, 趙劍嵐, 平 麗

(浙江大學(xué) 藥學(xué)院 藥物安全評價(jià)研究中心，杭州 310058)

通過構(gòu)效關(guān)系分析合成相同母核、不同取代基團(tuán)的化合物是目前研究開發(fā)新型農(nóng)藥的主要方式之一[1-2]。N-苯基酰胺類化合物作為重要的內(nèi)吸性殺菌劑，被廣泛用于農(nóng)藥、醫(yī)藥和化工等領(lǐng)域，常見的有甲霜靈 (metalaxyl)、苯霜靈 (benalaxyl)及噁霜靈 (oxadixyl) 等，這類化合物長期使用易產(chǎn)生抗性或出現(xiàn)藥物敏感性下降的問題[3-4]。2-溴-4-氟乙酰苯胺 (2-bromo-4-fluoroacetanilide，BFAA，結(jié)構(gòu)式見圖式1) 屬于新型N-苯基酰胺類含氟化合物，引入的氟原子可增強(qiáng)藥物分子對生物膜的通透性，具有更優(yōu)良的親脂性和吸收速率，可以之為骨架合成N-苯基酰胺類化合物，用于殺菌、除草[5]，同時(shí)其也是合成殺菌劑聯(lián)苯吡菌胺 (bixafen) 的關(guān)鍵中間體和主要雜質(zhì)[6]。此外，2-溴-4-氟乙酰苯胺還被作為磺胺類藥物的原料和中間體，用于生產(chǎn)止痛劑和退熱劑[7]。目前對2-溴-4-氟乙酰苯胺的研究主要集中在其化學(xué)合成方面。根據(jù)經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織 (OECD) 全球化學(xué)品信息平臺信息，2-溴-4-氟乙酰苯胺無刺激性、無腐蝕性、無遺傳毒性，屬于低毒物質(zhì)[8]，但尚未見有關(guān)其在動(dòng)物體內(nèi)代謝及組織分布情況等的研究報(bào)道。毒物動(dòng)力學(xué)研究對農(nóng)藥作用機(jī)制評價(jià)和毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)評估具有非常重要的作用[9-10]。為探明2-溴-4-氟乙酰苯胺在生物體內(nèi)分布及代謝情況，本研究利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜 (UPLC-MS/MS) 方法，對大鼠給予2-溴-4-氟乙酰苯胺后的毒代動(dòng)力學(xué)、組織分布及排泄過程進(jìn)行研究，旨在為深入研究2-溴-4-氟乙酰苯胺的毒理學(xué)作用機(jī)制及其用藥安全性評估提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器、藥物和試劑

液相色譜系統(tǒng)為ACQUITY UPLC I-Class 超高效液相色譜儀，質(zhì)譜系統(tǒng)為配備ESI 離子源的Xevo TQ 三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀，數(shù)據(jù)采集由MassLynx V4.1 軟件控制并處理 (美國Waters 公司)；Minispin離心機(jī)及5810R 離心機(jī) (德國Eppendorf 公司)；XS205 電子分析天平 (精度0.01 mg) 及PB1501-L電子天平 (精度0.1 g) (瑞士METTLER TOLEDO公司)；Purelab OptionS7 超純水系統(tǒng) (英國ELGA LabWater 公司)；JAC 4 020 超聲波清洗器 (韓國KODO 技術(shù)研究有限公司)；MTV-100 多管漩渦混合儀 (杭州奧盛儀器有限公司)；Voetex 2 混勻器(德國IKA 公司)。

2-溴-4-氟乙酰苯胺 (2-bromo-4-fluoroacetanilide，BFAA) 及標(biāo)準(zhǔn)對照品 (純度均為99.92%，北京新岸諾亞催化科技有限公司)；內(nèi)標(biāo) (IS) 為氯雷他定(loratadine，純度100.0%，中國食品藥品檢定研究院)。試劑甲醇、乙腈和甲酸均為色譜純；羧甲基纖維素鈉和蓖麻油聚氧乙烯醚為化學(xué)純；超純水(自制)。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案由浙江大學(xué)藥物安全評價(jià)中心動(dòng)物實(shí)驗(yàn)委員會(huì)審定。SPF 級、約6～8 周齡的雄性SD 大鼠50 只，購于北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，許可證號：SCXK (京) 2016-0006。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)和使用遵守《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》(1988 年) 和《浙江省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理辦法》(2009 年)，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號為SYXK (浙)2018-0001。動(dòng)物房溫度22.3～25.2 ℃，相對濕度45.2%～65.7%，每1 h 換氣次數(shù) ≥ 15 次，每12 h明/暗交替。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的使用遵循3 R (reduction、replacement 和refinement) 原則，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)場地已通過國際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物評估和認(rèn)可委員會(huì) (AAALAC)的認(rèn)證。

1.3 動(dòng)物分組及處理劑量設(shè)計(jì)

根據(jù)體重 (不超過平均體重的20%) 隨機(jī)篩選出45 只大鼠，分成3 個(gè)試驗(yàn)組群，分別進(jìn)行吸收試驗(yàn)、組織分布試驗(yàn)和排泄試驗(yàn)。前期預(yù)試驗(yàn)結(jié)果顯示，給予1 000 mg/kg 劑量2-溴-4-氟乙酰苯胺處理未見嚴(yán)重毒性反應(yīng)，驗(yàn)證了其屬于低毒性物質(zhì)。按照OECD “化學(xué)品測試指南 (guidelines for the testing of chemicals)”[11]和環(huán)境保護(hù)部《化學(xué)品測試方法》[12]要求，以1 000 mg/kg 作為經(jīng)口染毒的高劑量。吸收試驗(yàn)共用大鼠20 只，分為灌胃染毒低、中、高劑量組和靜脈注射組，染毒劑量分別為200、500、1 000 和20 mg/kg，每組5 只；組織分布試驗(yàn)共用大鼠20 只，灌胃染毒劑量為1 000 mg/kg，分別設(shè)4 個(gè)采樣時(shí)間點(diǎn) (0.5、2、8 和24 h)，每時(shí)間點(diǎn)5 只；排泄試驗(yàn)共用大鼠5 只，為1 個(gè)灌胃染毒組，劑量為1 000 mg/kg。

1.4 生物樣本采集及處理

大鼠染毒前禁食12 h。灌胃染毒藥物采用0.5%的羧甲基纖維素鈉溶解，靜脈注射染毒藥物采用4%的蓖麻油聚氧乙烯醚溶解。

毒物動(dòng)力學(xué)研究中，灌胃染毒組于0、5、10、20、30、40 min 及1、1.5、2、3、4、6、10、24、48 h 分別取血，靜脈注射染毒組于0、5、10、20、40 min 及1、1.5、2、4、6、10、24、48 h 分別取血。血液樣品經(jīng)肝素鈉抗凝后于3 000 r/min 下離心10 min 分離血漿。

組織分布研究中，動(dòng)物染毒后分別于0.5、2、8 和24 h 收集心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟、脂肪、肌肉、腦、睪丸、胃和小腸，采用預(yù)冷的生理鹽水沖洗凈血液和其他干擾物質(zhì)，用濾紙吸干并稱重后，加入3 倍質(zhì)量的生理鹽水，勻漿。

排泄研究中，將染毒后大鼠獨(dú)立放入代謝籠中進(jìn)行采樣，尿液和糞便采樣時(shí)間均為0～12、12～24、24～48、48～72、72～96 和96～120 h。糞便用2 倍質(zhì)量的50%甲醇處理后，離心分離上清液。

采用Michopoulos 等[13]報(bào)道的蛋白質(zhì)沉淀法去除樣品中的雜質(zhì)。分別取生物樣品 (血漿、組織勻漿、尿液和糞便上清液) 50 μL，加入150 μL 含內(nèi)標(biāo)氯雷他定 (5 ng/mL) 的甲醇沉淀蛋白，渦漩1 min，于10 000 r/min 下離心10 min，取上清液過0.22 μm 濾膜后，采用UPLC-MS/MS 進(jìn)行分析。

1.5 標(biāo)準(zhǔn)生物樣品和質(zhì)控樣品溶液配制

分別稱取一定量2-溴-4-氟乙酰苯胺和內(nèi)標(biāo)氯雷他定對照品，用甲醇稀釋配制成1 mg/mL 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，試驗(yàn)時(shí)進(jìn)一步用甲醇稀釋獲得2-溴-4-氟乙酰苯胺系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。分別取空白血漿，心臟、肝臟、脾臟、腎臟及肌肉組織混合勻漿，肺、脂肪、胃、小腸、腦和睪丸組織混合勻漿，以及尿液和糞便上清液，加入含內(nèi)標(biāo)氯雷他定的2-溴-4-氟乙酰苯胺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，分別配制成0.2、0.5、2、8、20、50 和100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)生物樣品溶液；同時(shí)用含內(nèi)標(biāo)氯雷他定的甲醇配制0.4、5、40 和80 μg/mL 的生物質(zhì)控樣品溶液。

1.6 檢測條件

色譜條件：樣品通過ACQUITY UPLC BEH C18色譜柱 (2.1 mm × 100 mm，1.7 μm) 進(jìn)行分離后，以含體積分?jǐn)?shù)0.1%甲酸的水 (A) 和乙腈 (B)作為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫。梯度洗脫程序：0 min，V (A) : V (B) = 90 : 10；2～3.5 min，V (A) : V (B) =5 : 95；4～5 min，V (A) : V (B) = 90 : 10。流速為0.3 mL/min，進(jìn)樣量7 μL。自動(dòng)進(jìn)樣器保持在6 ℃，柱溫35 ℃。

質(zhì)譜條件：采用正離子MRM 方式檢測，通過分別注入200 ng/mL 的2-溴-4-氟乙酰苯胺和氯雷他定溶液至質(zhì)譜儀，獲得儀器優(yōu)化參數(shù)為：毛細(xì)管電壓3.0 kV；離子源溫度150 ℃；脫溶劑氣溫度400 ℃；脫溶劑氣流速700 L/h；碰撞氣流速0.15 mL/min，氣簾氣流速50 L/h。MRM 檢測離子 (m/z) 分別為232.00→111.07 (2-溴-4-氟乙酰苯胺) 和383.08→267.02 (氯雷他定)，錐孔電壓分別為32 和5 V，碰撞能量22 和32 eV。

方法學(xué)驗(yàn)證主要參考Commission Decision 2002/657/EC[14]和Commission Regulation (EU) 2006/401[15]，考察了專屬性、線性、精密度、準(zhǔn)確度、重復(fù)性、定量限、檢測限、回收率、基質(zhì)效應(yīng)和穩(wěn)定性等。針對所建立方法進(jìn)行了完整的方法學(xué)驗(yàn)證，均滿足驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)[14-16]要求。

1.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

通過MassLynx V4.1 軟件對血漿、組織、尿液和糞便樣本的UPLC-MS/MS 檢測數(shù)據(jù)進(jìn)行采集和分析。血漿樣本濃度采用Data Analysis System 3.1 software (DAS, version 3.1) 軟件分析。采用非房室模型計(jì)算主要的動(dòng)力學(xué)參數(shù)：藥-時(shí)曲線下面積 (area under curve，AUC)、血藥峰濃度 (Cmax)、血藥濃度達(dá)峰時(shí)間 (tmax)、半衰期 (t1/2) 以及平均駐留時(shí)間 (tmr) 等，并對藥物在組織中的分布及經(jīng)尿液和糞便排泄情況進(jìn)行分析。根據(jù)公式 1 計(jì)算各染毒劑量下SD 大鼠血漿中2-溴-4-氟乙酰苯胺的絕對生物利用度 (F)[16]。

式中，AUC(0-t)ig為灌胃染毒后給藥時(shí)間內(nèi)藥-時(shí)曲線下面積，(mg/L)·h；AUC(0-t)iv為靜脈注射染毒后給藥時(shí)間內(nèi)藥-時(shí)曲線下面積，(mg/L)·h；miv為靜脈注射染毒劑量，mg/kg；mig為灌胃染毒劑量，mg/kg。

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測條件的優(yōu)化

前期分別考察了不同粒徑、孔徑和柱長的多種UPLC 色譜柱的分離效果，最終發(fā)現(xiàn)采用ACQUITY UPLC BEH C18三鍵鍵合烷基色譜柱能獲得較好的峰形。對多種洗脫方法 [有機(jī)相包括甲醇、乙腈、二甲基亞砜 (DMSO) 及異丙醇等，水相包括不同濃度的甲酸-水、甲酸銨-水、三乙胺-水、三氟乙酸-水及乙酸銨-水等] 進(jìn)行了篩選，發(fā)現(xiàn)采用乙腈作為有機(jī)相和在水相中加入體積分?jǐn)?shù)0.1%的甲酸能明顯改善分析物峰形。在正離子模式下對錐孔電壓、碰撞能量、子離子對和母離子對等質(zhì)譜條件進(jìn)行了優(yōu)化，最終得到1.6 節(jié)中各項(xiàng)優(yōu)化后的質(zhì)譜參數(shù)。在選定的UPLC-MS/MS條件下，2-溴-4-氟乙酰苯胺和內(nèi)標(biāo)氯雷他定的洗脫效果均良好，保留時(shí)間分別約為1.56 和1.42 min，典型色譜圖見圖1。標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍為0.2～100 μg/mL。

2.2 血漿毒物動(dòng)力學(xué)結(jié)果

采用200、500、1 000 mg/kg 劑量的2-溴-4-氟乙酰苯胺灌胃和20 mg/kg 劑量靜脈注射染毒處理大鼠，通過所建立的UPLC-MS/MS 方法研究了2-溴-4-氟乙酰苯胺在大鼠血漿中的毒代動(dòng)力學(xué)，測定了不同時(shí)間點(diǎn)的血藥濃度。其藥-時(shí)曲線見圖2，不同劑量染毒后大鼠血漿中2-溴-4-氟乙酰苯胺的毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù)與劑量的關(guān)系見圖3，其毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù)見表1。結(jié)果表明：大鼠灌胃染毒后藥物可被迅速吸收。500 mg/kg 劑量灌胃染毒組藥物吸收達(dá)到飽和，其Cmax值和 AUC(0-t)值分別為 (45.2 ±1.8) mg/L和 (393.3 ± 51.1) (mg/L)·h；1 000 mg/kg劑量灌胃染毒組 Cmax和AUC(0-t)值反而均出現(xiàn)下降趨勢；表明該毒代動(dòng)力學(xué)變化無劑量依賴性，表現(xiàn)為非線性動(dòng)力學(xué)特征。其曲線下面積比[R_AUC(t-∞)]均大于98.5%，且1 000 mg/kg 劑量組清除率 (CL) 僅為 (0.6 ± 0.1) (L/h)/kg，提示給藥時(shí)間內(nèi)2-溴-4-氟乙酰苯胺即可大部分從動(dòng)物體內(nèi)消除。從圖2 可知，不同染毒劑量下，2-溴-4-氟乙酰苯胺的Cmax值均在給藥后4 h 開始下降，在6 h 后又出現(xiàn)上升趨勢，隨后再緩慢下降，該雙峰現(xiàn)象 (double-peak phenomenon) 表明，2-溴-4-氟乙酰苯胺在動(dòng)物體內(nèi)可能存在重吸收或腸-肝循環(huán)(EHC)。200、500 和1 000 mg/kg 3 個(gè)劑量組大鼠血漿中2-溴-4-氟乙酰苯胺的F 值分別為64.2%、83.3% 和34.1%，表明隨著劑量的大幅增加，1 000 mg/kg 處理下2-溴-4-氟乙酰苯胺在大鼠體內(nèi)的絕對生物利用度較低劑量時(shí)下降較為明顯。

2.3 藥物在大鼠組織中的分布情況

結(jié)果見表2。其中，單次灌胃染毒后，2-溴-4-氟乙酰苯胺在大鼠組織中分布較廣，且除腎臟和胃外均具有相似的組織分布趨勢。給藥0.5 h 后，2-溴-4-氟乙酰苯胺在各組織中的含量從大到小依次為：小腸＞胃＞脂肪＞心臟＞脾臟＞肌肉＞腎臟＞腦＞肝臟＞睪丸＞肺，各組織中總的藥-時(shí)曲線下面積 (AUC(0-∞)) 從大到小依次為：小腸＞脂肪＞胃＞心臟＞腎臟＞脾臟＞肌肉＞腦＞肺＞肝臟＞睪丸，表明2-溴-4-氟乙酰苯胺主要分布在大鼠的小腸、胃和脂肪中，且小腸中含量最高，可達(dá) (309.8 ± 39.5)mg/kg。同時(shí)，在大鼠腦組織中也發(fā)現(xiàn)了2-溴-4-氟乙酰苯胺，但含量較低，最高僅 (7.3 ± 1.3) mg/kg；另有極少量的2-溴-4-氟乙酰苯胺可到達(dá)睪丸；表明該化合物由于具有較高的脂溶性和較低的相對分子質(zhì)量，因而可穿越血腦屏障和睪丸屏障。2-溴-4-氟乙酰苯胺在各組織樣品中的 tmax值均為0.5 h，表明其在組織中擴(kuò)散分布非常迅速；24 h后在大部分組織中均已檢測不到該化合物，表明2-溴-4-氟乙酰苯胺總體上不蓄積。將血漿設(shè)為非靶向組織，計(jì)算各組織的靶向分配系數(shù) (TDC)[17]，發(fā)現(xiàn)所有待測組織的TDC 值均小于1.0，提示2-溴-4-氟乙酰苯胺對組織無明顯的選擇性。

表1 2-溴-4-氟乙酰苯胺在大鼠血漿中的毒代動(dòng)力學(xué)參數(shù) (mean ± SD, n = 5)Table1 Toxicokinetics parameters of BFAA in rat plasma (mean ± SD, n = 5)

表2 不同染毒時(shí)間下大鼠各組織中2-溴-4-氟乙酰苯胺的含量 (mean ± SD, n = 5)Table2 Distribution of BFAA in rat tissues after administration (mean ± SD, n = 5)

2.4 大鼠對2-溴-4-氟乙酰苯胺的排泄?fàn)顩r

表3 不同時(shí)間段大鼠尿液和糞便中2-溴-4-氟乙酰苯胺的排泄量 (mean ± SD，n = 5)Table3 Excretion of BFAA in rat urine and feces after administration during different time periods (mean ± SD，n = 5)

表4 大鼠尿液和糞便中2-溴-4-氟乙酰苯胺的累積排泄量及排泄率 (mean ± SD，n = 5)Table4 Amount and rate of cumulative excretion of BFAA in rat urine and feces (mean ± SD, n = 5)

SD 大鼠灌胃給予1 000 mg/kg 劑量的2-溴-4-氟乙酰苯胺，5 d 內(nèi)其在各時(shí)間段尿液和糞便中的排泄情況見表3。結(jié)果顯示，該化合物在尿液和糞便內(nèi)較在血液和組織中消除速度明顯減慢。24～48 h 時(shí)間段內(nèi)其在尿液中的排泄量達(dá)到峰值(8.5 μg)，至120 h 尚有少量殘留；其在糞便中的排泄量同樣在24～48 h 時(shí)間段內(nèi)達(dá)到峰值 (30.6 μg)，隨后下降，至72 h 后即無殘留。2-溴-4-氟乙酰苯胺經(jīng)尿液和糞便的排泄主要發(fā)生在0～48 h 內(nèi)，分別占總排泄量的93%和92%。表4 顯示了大鼠尿液和糞便中2-溴-4-氟乙酰苯胺的累積排泄量及排泄率情況，染毒后5 d，累積排泄量達(dá)到穩(wěn)定，其中，經(jīng)尿液排泄的2-溴-4-氟乙酰苯胺量為12.8 μg，經(jīng)糞便排泄的量為67.9 μg，總計(jì)排泄量為80.6 μg，占總?cè)径玖?(大鼠體重為271.4 ± 6.2 g) 的0.03%。2-溴-4-氟乙酰苯胺經(jīng)尿液和糞便排泄率較低的原因可能與該藥物在大鼠體內(nèi)存在廣泛的分解代謝有關(guān)，提示經(jīng)尿液和糞便的排泄并非2-溴-4-氟乙酰苯胺母體化合物主要的體內(nèi)消除途徑。

3 結(jié)論與討論

2-溴-4-氟乙酰苯胺是多種N-苯基酰胺類化合物合成的中間體，同時(shí)也是合成農(nóng)藥時(shí)的重要雜質(zhì)。2-溴-4-氟乙酰苯胺可在鈀催化劑作用下與多個(gè)化合物經(jīng)多步反應(yīng)獲得中間體3, 4-二氯-5-氟-2-聯(lián)苯乙酰胺，最后再經(jīng)過酰化反應(yīng)制得內(nèi)吸性殺菌劑聯(lián)苯吡菌胺[18]。由于該合成方式產(chǎn)率較低，因此存在較多雜質(zhì)，其可能的雜質(zhì)包括2-溴-4-氟乙酰苯胺、N-(2-乙烯基-4-氟苯基) 乙酰胺、3, 4-二氯-5-氟-2-聯(lián)苯氨及3, 4-二氯-5-氟-2-聯(lián)苯乙酰胺等。也有文獻(xiàn)報(bào)道采用其他途徑合成聯(lián)苯吡菌胺，但產(chǎn)率均低于70%[6,19-20]。因此在采用聯(lián)苯吡菌胺防治谷類作物病害時(shí)，應(yīng)對其雜質(zhì)給予重點(diǎn)關(guān)注。

2-溴-4-氟乙酰苯胺作為關(guān)鍵的農(nóng)藥中間體及最終產(chǎn)物的雜質(zhì)，有必要就其對環(huán)境、動(dòng)物和人類的毒性進(jìn)行有效的安全性評估，但目前尚未見相關(guān)的毒理學(xué)和代謝過程研究報(bào)道。毒物動(dòng)力學(xué)是整個(gè)毒理學(xué)評價(jià)的重要環(huán)節(jié)，在農(nóng)藥的風(fēng)險(xiǎn)評估中起著非常重要的作用。毒物動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)主要通過定量的方法來闡述化合物暴露和染毒劑量與時(shí)間之間的關(guān)系，可為化合物的各類毒性研究和評估提供劑量選擇依據(jù)[21-22]。

因此，為了闡明2-溴-4-氟乙酰苯胺在動(dòng)物體內(nèi)的代謝動(dòng)力學(xué)，本研究對其在大鼠體內(nèi)的血漿毒物動(dòng)力學(xué)、組織分布以及經(jīng)尿液和糞便的排泄情況進(jìn)行了考察。結(jié)果表明：大鼠灌胃染毒后藥物可被迅速吸收，不同劑量下其血藥濃度達(dá)峰時(shí)間均不超過30 min，500 mg/kg 劑量以上則藥物吸收達(dá)到飽和，且血漿毒物動(dòng)力學(xué)變化呈非線性動(dòng)力學(xué)特征。2-溴-4-氟乙酰苯胺的生物利用度達(dá)到34.1%～83.3%，可能與引入的氟原子增強(qiáng)了藥物分子對生物膜的通透性有關(guān)。其血漿的藥-時(shí)曲線具有雙峰現(xiàn)象，推測其在動(dòng)物體內(nèi)可能存在重吸收或腸-肝循環(huán)[23]。同時(shí)該現(xiàn)象進(jìn)一步解釋了2-溴-4-氟乙酰苯胺生物利用度相對較高的原因。2-溴-4-氟乙酰苯胺在大鼠組織中分布較廣且非?？焖?，給藥0.5 h 后即可達(dá)到濃度峰值，主要分布于小腸、胃和脂肪組織中。組織靶向分配系數(shù)結(jié)果顯示，2-溴-4-氟乙酰苯胺對動(dòng)物組織無明顯的選擇性，與血漿中的情形類似，組織中也未出現(xiàn)化合物蓄積。此外，2-溴-4-氟乙酰苯胺可透過睪丸屏障和血腦屏障，這可能與其較高的脂溶性和較低的相對分子質(zhì)量有關(guān)，該結(jié)果對進(jìn)一步研究評估藥物的神經(jīng)毒性和生殖毒性具有參考意義。研究還發(fā)現(xiàn)，2-溴-4-氟乙酰苯胺在尿液和糞便內(nèi)較在血液和組織中消除明顯減慢，排泄主要集中在染毒后48 h 內(nèi)，且其母體化合物經(jīng)尿液和糞便的排泄率非常低。參考同類化合物N-(4-羥基苯基) 乙酰胺[24]、苯肽胺酸[17]及4-溴乙酰苯胺[25]，推測2-溴-4-氟乙酰苯胺在動(dòng)物體內(nèi)存在廣泛的代謝途徑，有可能主要通過去乙?；?、環(huán)羥基化、葡萄糖醛酸化或硫酸化等代謝方式排泄到體外。

有關(guān)2-溴-4-氟乙酰苯胺代謝產(chǎn)物的研究可通過動(dòng)物體內(nèi)提取的生物樣本進(jìn)行酶水解，高效液相色譜-紫外 (HPLC-UV)、核磁共振 (NMR) 及質(zhì)譜 (MS) 檢測結(jié)合同位素標(biāo)記等多種手段進(jìn)行分離和鑒定，同時(shí)還可通過體外肝代謝方法研究其代謝途徑和機(jī)制，如采用亞細(xì)胞片段、基因重組酶、肝細(xì)胞培養(yǎng)、肝組織切片及離體肝灌流等方法[26]進(jìn)行研究。為全面闡明2-溴-4-氟乙酰苯胺的代謝動(dòng)力學(xué)，后續(xù)在其代謝產(chǎn)物定性定量、代謝途徑及代謝機(jī)制等方面可進(jìn)一步開展相關(guān)研究。