王麗屏, 金顯棟， 畢峻龍， 蘇云順， 楊 聰， 李蛟龍， 亐開(kāi)興*， 尹革芬*

(1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，昆明 650201；2.云南省草地動(dòng)物科學(xué)研究院，昆明 650212；3.楚雄州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 楚雄 675000；4.姚安縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，云南 姚安 675300；5.玉溪市江川區(qū)雄關(guān)鄉(xiāng)獸醫(yī)站，云南 玉溪 652603)

牛病毒性腹瀉—黏膜病(bovine viral diarrhea，BVD)是由黃病毒科、瘟病毒屬的牛病毒性腹瀉—黏膜病毒(bovine viral diarrhea-mucosal disease virus，BVDV)感染牛后引起的一種傳染性疾病，牛、羊、鹿、豬等多種動(dòng)物易感，其中犢牛最易感[1-2]。牛感染后導(dǎo)致發(fā)燒、腹瀉、呼吸系統(tǒng)疾病、生殖功能障礙、生長(zhǎng)遲緩、免疫抑制、母畜流產(chǎn)、死胎等臨床表現(xiàn)，可引起急性、亞急性和持續(xù)性感染而終身帶毒，通過(guò)分泌物和排泄物不斷向外界排毒，是病毒傳播的主要途徑，也會(huì)成為更多動(dòng)物的持續(xù)感染源[1,3]。目前我國(guó)已發(fā)現(xiàn)有20多個(gè)省份感染此病，感染范圍還在不斷擴(kuò)大，養(yǎng)牛業(yè)的經(jīng)濟(jì)損失也不斷擴(kuò)大，呈現(xiàn)出明顯的增長(zhǎng)趨勢(shì)[4]，青海省2個(gè)不同地區(qū)牦牛BVDV感染率分別為19.6%和23.42%[5]，北京地區(qū)規(guī)?；膛?chǎng)BVDV血清抗體平均陽(yáng)性率為48.2%[6]，2014—2015年西部四省區(qū)散養(yǎng)牛的血清抗體陽(yáng)性率為33.93%[7]，新疆14家規(guī)?；膛?chǎng)血清檢測(cè)BVDV血清抗原和抗體，其抗體陽(yáng)性率91.38%[8]。因此，可以看出散養(yǎng)和規(guī)?；B(yǎng)殖的牛群中存在著B(niǎo)VDV不同程度感染的情況，并且飼養(yǎng)條件差、飼養(yǎng)密度較大的牛群中陽(yáng)性率也較高。

隨著肉牛產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展，養(yǎng)殖業(yè)發(fā)生了巨大變化，然而動(dòng)物疾病突發(fā)變得越來(lái)越嚴(yán)重，疾病暴發(fā)和流行病暴發(fā)日益增加，伴隨國(guó)際貿(mào)易交易頻繁，?；紓魅拘约膊〉臋C(jī)率也隨之增加，這嚴(yán)重危害了養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展，給畜牧業(yè)特別是肉牛養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響了肉牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展。于此，本調(diào)查研究對(duì)云南省部分地區(qū)BVDV的流行狀況進(jìn)行調(diào)查，以期為云南省防治BVD提供理論依據(jù)，助力云南省高原特色牧業(yè)發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

2019—2020年，采集到云南省4個(gè)州10個(gè)縣(市)的牛血液樣本總計(jì)456份，并進(jìn)行了血清分離，其中規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)牛血清樣品份數(shù)165份，散養(yǎng)戶的牛血清樣品數(shù)291份(表1)。在麗江市5個(gè)縣共計(jì)采集了257份牛血清樣品，其中玉龍縣散養(yǎng)戶牛血清樣品10份、華坪縣散養(yǎng)戶牛血清樣品16份，寧蒗縣散養(yǎng)戶牛血清樣品16份，古城區(qū)散養(yǎng)戶牛血清樣品14份，永勝縣規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)牛血清樣品70份和散養(yǎng)戶牛血清樣品116份；在大理州共計(jì)采集69份牛血清樣品，其中賓川縣規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)牛血清20份，洱源縣規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)牛血清15份，漾濞縣散養(yǎng)戶牛血清樣品34份；在玉溪市江川區(qū)共計(jì)采集120份牛血清樣品，其中規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)牛血清樣品60份，散養(yǎng)戶牛血清樣品60份；在文山州丘北縣共采集10份牛血清樣品，均為散養(yǎng)戶牛血清樣品。

表1 采集牛血清樣品情況

采集牛靜脈血，每頭牛采集血液總量不少于1 mL。采血管逐一編號(hào)，并認(rèn)真記錄樣品來(lái)源信息。采血后，用離心機(jī)4 000 r/min離心10 min，收集血清，置于4 ℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 方 法

牛病毒性腹瀉病毒抗體檢測(cè)試劑盒由北京愛(ài)德士元享生物科技有限公司研制生產(chǎn)，批號(hào)為M871；牛病毒性腹瀉病毒抗原/血清診斷檢測(cè)試劑盒，由北京愛(ài)德士元享生物科技有限公司研制生產(chǎn)，批號(hào)為P741；操作和結(jié)果判定按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同地區(qū)BVDV抗體檢測(cè)

由表2可見(jiàn)，對(duì)云南省4個(gè)州的10個(gè)縣(市)送檢或采集的456份血清樣品，使用IDEXX牛病毒性腹瀉抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行了BVD抗體檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)75份血清樣品檢測(cè)為陽(yáng)性，平均抗體陽(yáng)性率為16.45%，其中大理州洱源縣血清樣品BVDV抗體陽(yáng)性率為60%，玉溪市江川區(qū)的血清樣品中檢測(cè)到的BVDV抗體陽(yáng)性率為5%，麗江市華坪縣的血清樣品中未檢測(cè)到抗體陽(yáng)性。

表2 不同地區(qū)BVDV抗體陽(yáng)性率

2.2 不同地區(qū)的BVDV抗原檢測(cè)

由表3可見(jiàn)，對(duì)云南省4個(gè)州的10個(gè)縣(市)送檢或采集的456份血清樣品其中的380份血清樣品使用IDEXX牛病毒性腹瀉抗原檢測(cè)試劑盒進(jìn)行了BVD抗原檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)2份血清樣品檢測(cè)為陽(yáng)性，平均抗原陽(yáng)性率為0.53%，其中大理州賓川縣血清樣品中檢測(cè)到的BVDV抗原陽(yáng)性率為7.69%，麗江市寧蒗縣的血清樣品中檢測(cè)到的BVDV抗體原性率為4%，其余8個(gè)縣(市)的血清樣品中未檢測(cè)到抗原陽(yáng)性。

表3 不同地區(qū)BVDV抗原陽(yáng)性率

2.3 不同養(yǎng)殖方式的BVDV血清抗體檢測(cè)

由表4可見(jiàn)，將456份血清樣品的抗體檢測(cè)結(jié)果按不同的養(yǎng)殖方式進(jìn)行分組，在規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)飼養(yǎng)的牛血清樣品(165份)中檢測(cè)到抗體陽(yáng)性數(shù)45份，規(guī)模場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率較高為27.27%，而在散養(yǎng)戶飼養(yǎng)的牛血清樣品(291份)中散養(yǎng)戶的抗體陽(yáng)性數(shù)為30份，散養(yǎng)戶的抗體陽(yáng)性率較低為16.35%。

表4 不同養(yǎng)殖方式的BVDV抗體陽(yáng)性率

2.4 不同養(yǎng)殖方式的BVDV血清抗原檢測(cè)

由表5可見(jiàn)，按不同的養(yǎng)殖方式進(jìn)行分析統(tǒng)計(jì)，在規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)飼養(yǎng)的牛血清樣品(87份)中檢測(cè)到抗原陽(yáng)性數(shù)1份，規(guī)模場(chǎng)的抗原陽(yáng)性率較高為1.15%，而在散養(yǎng)戶飼養(yǎng)的牛血清樣品(291份)中散養(yǎng)戶的抗原陽(yáng)性數(shù)為1份，散養(yǎng)戶的抗體陽(yáng)性率較低為0.34%。

表5 不同養(yǎng)殖方式的BVDV抗原陽(yáng)性率

3 討 論

BVDV感染在國(guó)內(nèi)廣泛傳播，并且具有較高的患病率和遺傳多樣性，在我國(guó)奶牛、牦牛、水牛、駱駝、梅花鹿、豬等動(dòng)物上都有發(fā)現(xiàn)，BVDV通過(guò)分泌物和排泄物不斷向外界排毒，成為其他動(dòng)物的持續(xù)感染源[1,4]，很容易就感染周邊動(dòng)物，從而在國(guó)內(nèi)呈逐步擴(kuò)大的趨勢(shì)，每年對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成非常嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。我國(guó)BVDV調(diào)查情況表明，其感染情況較為普遍，西北四省和四川省的黃牛和牦牛中發(fā)現(xiàn)黃牛的陽(yáng)性率為46.15%，牦牛陽(yáng)性率為30.08%[9]，西藏林芝不容樂(lè)觀，抗體陽(yáng)性率為78.60%[10]，重慶市牛群的抗體陽(yáng)性率為22.49%[11]，青海省2個(gè)不同的地區(qū)牦牛的感染率分別為19.6%和23.42%[5]，北京市3個(gè)區(qū)(縣)31個(gè)規(guī)?；膛?chǎng)的平均陽(yáng)性率為48.2%[6]，新疆13個(gè)地區(qū)規(guī)模化養(yǎng)殖場(chǎng)BVDV陽(yáng)性檢出率為22.5%～62.5%，平均總陽(yáng)性率為40.0%[12]，廣西省部分牛養(yǎng)殖場(chǎng)的抗體陽(yáng)性率為36.52%[13]。本調(diào)查對(duì)云南省4個(gè)州的10個(gè)縣(市)的抗體陽(yáng)性率在0～60%之間，整體抗體陽(yáng)性率為16.45%，以大理州洱源縣的最高，達(dá)60%，而麗江市玉龍縣的最低為0，可能原因是麗江市玉龍縣的周圍地區(qū)牛群中有不同程度的感染情況，可能由于筆者在采集樣本數(shù)量偏少。

陳銳等對(duì)2014—2015年云南省保山市和大理州云龍縣的散養(yǎng)牛調(diào)查BVDV的抗體陽(yáng)性率為10.0%，西部四省區(qū)的散養(yǎng)牛為33.93%[7]，而本調(diào)查的抗體陽(yáng)性率為16.45%，處于其中間水平，這可能與樣本采集的時(shí)間以及采集地不固定有關(guān)。此外，不同養(yǎng)殖方式下的陽(yáng)性率差異明顯，規(guī)模場(chǎng)BVDV的整體抗體陽(yáng)性率27.27%，比散養(yǎng)的10.31%高出17個(gè)百分點(diǎn)，這可能是因?yàn)橐?guī)模化養(yǎng)殖的過(guò)程中養(yǎng)殖高度集中、密度較高，增加了接觸和病毒傳播的幾率，同時(shí)由于該病沒(méi)有明顯的臨床癥狀，往往會(huì)容易造成防控上的疏忽[6,9,14-15]，注重規(guī)模場(chǎng)的BVDV防控至關(guān)重要。

BVDV能夠引起宿主產(chǎn)生免疫抑制，降低機(jī)體抵抗力，出現(xiàn)持續(xù)性感染[16]，增加了罹患其他動(dòng)物疫病的幾率。但由于出現(xiàn)明顯的臨床癥狀較少，導(dǎo)致部分牛場(chǎng)對(duì)該病防治不夠重視，可能會(huì)導(dǎo)致感染率持續(xù)上升。本研究檢測(cè)的378份血清樣品中有2份BVDV抗原呈陽(yáng)性，陽(yáng)性率為0.53%。對(duì)抗原陽(yáng)性的牛經(jīng)過(guò)1個(gè)月后重新采樣進(jìn)行抗原和抗體檢測(cè)排查持續(xù)感染牛，結(jié)果顯示2頭牛為持續(xù)感染牛，占牛群的0.53%。持續(xù)感染牛是BVDV的主要傳染源，因此檢測(cè)和淘汰持續(xù)感染牛是控制該病的主要途徑。

作為高原特色農(nóng)業(yè)，云南省提出了打造世界一流“綠色食品牌”，其中肉牛產(chǎn)業(yè)正是我們著力打造世界一流“綠色食品牌”的重要組成部分和云南省重點(diǎn)發(fā)展的八大高原特色農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)。2019年云南省肉牛存欄867.31萬(wàn)頭，出欄達(dá)到356.90萬(wàn)頭，可是隨著云南省肉牛產(chǎn)業(yè)迅速發(fā)展，養(yǎng)殖業(yè)結(jié)構(gòu)發(fā)生了重大變化，伴隨國(guó)際貿(mào)易的頻繁，牛患傳染性疾病的機(jī)率也隨之增加，給肉牛產(chǎn)業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，制約了肉牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。下一步筆者將擴(kuò)大樣本采集的地理涵蓋區(qū)域，并加強(qiáng)對(duì)犢牛的監(jiān)測(cè)，控制犢牛流行性腹瀉，不斷提高犢牛成活率，提高牛群生產(chǎn)力[17-18]，為進(jìn)一步摸清云南省BVDV及其混合感染情況，分離地方毒株以揭示其遺傳變異，界定其遺傳分化地位和綜合防制提供理論參考[19-21]。