韓貞艷 陳建林 關(guān)紅瓊

妊娠期高血壓疾病是一種常見的妊娠期疾病，嚴(yán)重影響孕婦和胎兒的身體健康，也是孕產(chǎn)婦和圍生兒發(fā)病和死亡的主要原因之一。妊娠期高血壓疾病的發(fā)生有特殊的遺傳學(xué)和免疫遺傳學(xué)因素[1]。研究發(fā)現(xiàn)，人類白細(xì)胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)特異性的基因表達(dá)與妊娠期高血壓的發(fā)生具有密切的關(guān)系[2]。巨大多功能蛋白酶體(large multifunctional protease，LMP) 在物理圖譜上與HLA 基因連鎖，其表達(dá)產(chǎn)物參與HLA 抗原加工遞呈。研究發(fā)現(xiàn)LMP和HLA-DM與孕婦重度子癇前期發(fā)生有關(guān)，且夫妻間的基因共享與疾病發(fā)生具有顯著關(guān)系[3]。也有研究發(fā)現(xiàn)，母胎共享LMP基因與重度子癇前期有關(guān)[4]。但是，母胎LMP和HLA-DM基因共享與妊娠期高血壓疾病發(fā)生是否存在關(guān)聯(lián)尚無定論。不同地區(qū)人群存在基因多態(tài)性，基因表達(dá)存在一定的差異[5]。本研究針對海南地區(qū)妊娠期高血壓疾病患者母胎LMP和HLA-DM基因共享率進(jìn)行了相關(guān)研究，期望為臨床診斷和治療提供幫助。對于基因篩查，早期疾病預(yù)防具有重要的臨床意義。

對象與方法

一、研究對象

選擇2016年8月—2018年8月在海南醫(yī)學(xué)院第二附屬醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩的妊娠期高血壓疾病母胎共60對，所有患者依據(jù)《妊娠期高血壓疾病診治指南(2015)》[6]確診為妊娠期高血壓疾病。年齡(26～42)歲，平均年齡(30.1±3.2)歲，平均分娩孕周(35.4±3.7)周。排除糖尿病、慢性高血壓及嚴(yán)重心腦血管疾病病史，精神障礙類疾病史，存在不良生活習(xí)慣(如吸煙、酗酒、濫用藥物)。另外選擇在同期本院分娩的正常產(chǎn)婦和胎兒200對作為對照組，年齡(23～40)歲，平均年齡(28.6±5.2)歲，平均分娩孕周(36.31±2.88)周。兩組研究對象一般基本資料沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。

二、研究方法

1. DNA提取與保存:所有研究對象進(jìn)行血樣采集，用EDTA抗凝采血管抽取孕婦靜脈血2 mL及胎盤娩出前臍靜脈血2 mL，離心分離血漿，采用酚/氯法提取外周血白細(xì)胞DNA。

2.基因檢測:首先進(jìn)行PCR 擴(kuò)增:引物設(shè)計(jì)、PCR反應(yīng)條件如表1所示。PCR擴(kuò)增后進(jìn)行基因測序。

3.基因分型及母胎共享測定:采用LMP和HLA基因數(shù)據(jù)庫，通過Utype分型軟件對測序峰圖進(jìn)行序列分析確定基本基因型。母胎同時(shí)存在相關(guān)的LMP和HLA基因型即可認(rèn)定為母胎共享。

表1 HLA-DM、LMP各位引物、探針序列及檢測方法Table 1 HLA-DM, LMP primers, probe sequences and detection methods

結(jié) 果

一、妊娠期高血壓疾病患者與對照組母胎共享HLA-DM和LMP各基因型數(shù)量比較

通過比較妊娠期高血壓疾病患者和正常產(chǎn)婦母胎共享HLA-DM和LMP各基因型數(shù)量，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)HLA-DM為2個(gè)共享時(shí)，妊娠期高血壓疾病組比例明顯高于正常組，具有顯著性差異(P<0.01)。當(dāng)LMP為4個(gè)共享時(shí)，妊娠期高血壓疾病比例明顯高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，具體見表2所示。

表2 妊娠期高血壓疾病患者與對照組母胎共享HLA-DM和LMP各基因型數(shù)量比較[例(%)]Table 2 Comparison of the number of HLA-DM and LMP genotypes between women with pregnancy-induced hypertension and controls[n(%)]

二、HLA-DM各位點(diǎn)基因型在兩組母胎間共享率比較

通過比較HLA-DM各位點(diǎn)基因型在兩組母胎間共享率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在HLA-DMB* 0103位點(diǎn)妊娠期高血壓疾病組患者基因共享率最高，與對照組比較具有顯著性差異(P<0.05)。其余位點(diǎn)共享率沒有顯著性差異(P>0.05)，如表3所示。

表3 HLA-DM各位點(diǎn)基因型在兩組母胎間共享率比較[例(%)]Table 3 Comparison of the sharing rate of HLA-DM each genotype between women with pregnancy-induced hypertension and controls[n(%)]

三、LMP各位點(diǎn)基因型在兩組母胎間共享率比較

妊娠期高血壓疾病患者LMP2-R/H基因型共享率明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。其他LMP各位點(diǎn)基因共享率沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，如表4所示。

表4 LMP各位點(diǎn)基因型在兩組母胎間共享率比較[例(%)]

討 論

妊娠期高血壓疾病屬于孕婦常見的高危疾病，是孕產(chǎn)婦死亡的主要原因之一。妊娠期高血壓疾病與基因相關(guān)。眾所周知，胎兒攜帶一半父親基因，妊娠的正常需要依賴于母體的免疫耐受。在妊娠過程中，基因共享率越高，母胎相容性越大，那么, 母體就不能識別胚胎抗原，就不能產(chǎn)生封閉抗體, 胚胎得不到封閉抗體的保護(hù)而遭到了排斥, 即產(chǎn)生病理妊娠, 如:流產(chǎn)、不孕、子癇前期、早產(chǎn)等。因此，研究母胎基因共享率，對于早期預(yù)防和診斷孕婦相關(guān)疾病具有重要的意義。

HLA-DM是早期發(fā)現(xiàn)的一個(gè)基因位點(diǎn)，具有維持未裝載抗原肽的空MHC-II類分子的穩(wěn)定。同時(shí)具有促進(jìn)MHC-II類分子相關(guān)穩(wěn)定和鏈胎的釋放、增強(qiáng)CD4細(xì)胞識別和延長抗原肽暴露時(shí)間[7]。近年研究發(fā)現(xiàn)HLA-DM與子癇前期的發(fā)生具有一定關(guān)系。朱薏[8]等研究發(fā)現(xiàn)，子癇前期夫婦雙方共享2個(gè)HLA-DM等位基因，子癇前期比例明顯升高，說明HLA-DM夫婦基因共享與子癇前期發(fā)病存在一定關(guān)系。但是，HLA-DMA和HLA-DMB的基因共享率與妊娠期高血壓疾病的關(guān)系尚不得知。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，妊娠期高血壓患者存在HLA-DM為2個(gè)共享的比例更高，同時(shí)HLA- DMB* 0103位點(diǎn)的比例也高于正常人，說明如果存在HLA-DM共享且超過2個(gè)以上，孕婦出現(xiàn)妊娠期高血壓發(fā)病的風(fēng)險(xiǎn)較高。同時(shí)，HLA-DMB* 0103共享率高可能與妊娠期高血壓疾病發(fā)病存在密切關(guān)系。

LMP基因是一種能夠加工抗原酶體的亞基，位于人的第6對染色體上的MHC區(qū)域上。編碼兩個(gè)活性蛋白LMP2和LMP7。LMP基因使不同個(gè)體對同一抗原的免疫應(yīng)答表現(xiàn)出個(gè)體差異，或保護(hù)性免疫傾向，或免疫耐受傾向，或自身免疫傾向[9]。張嵩卉[10]等研究發(fā)現(xiàn)，LMP基因多態(tài)性及其在母胎間共享與子癇前期有顯著關(guān)聯(lián)。但沒有文獻(xiàn)報(bào)道LMP基因與妊娠期高血壓疾病的關(guān)系。本研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)LMP為4個(gè)共享時(shí)，妊娠期高血壓疾病比例顯著高于正常組。同時(shí)，妊娠期高血壓疾病患者LMP2-R/H基因型共享率顯著高于對照組。在妊娠期高血壓母胎存在LMP基因共享的比例較高，與妊娠期高血壓疾病發(fā)病存在一定的關(guān)系。

綜上所述，海南地區(qū)妊娠期高血壓疾病發(fā)病與母胎HLA-DM和LMP共享率具有一定的關(guān)系，母胎HLA-DM、LMP基因共享率高對妊娠期高血壓疾病的發(fā)病率有重要影響。