殷 娜，李小絲，劉維超，祁 燕，李兆福，段為鋼，彭江云，萬春平

（云南中醫(yī)藥大學(xué)，云南 昆明 650500）

痛風(fēng)（Gout）是一種嘌呤代謝紊亂所致的疾病。臨床流行病學(xué)提示，我國(guó)高尿酸血癥的患病率急劇攀升，成為僅次于糖尿病的第2大代謝性疾病[1]。痛風(fēng)危害最大的是腎臟損害和骨質(zhì)破壞。慢性尿酸性腎病，即痛風(fēng)性腎病，是指在長(zhǎng)期高尿酸血癥狀態(tài)下，尿酸鹽晶體沉積于腎組織導(dǎo)致腎臟病變[2]。痛風(fēng)患者大多都有不同程度的腎功能受損。痛風(fēng)性腎病，多隱匿發(fā)病，早期癥狀不典型，進(jìn)展緩慢，不易引起重視，一旦出現(xiàn)明顯癥狀已到腎損害期，甚至發(fā)展到腎衰竭期導(dǎo)致死亡[3]。因此，治療和控制高尿酸血癥及痛風(fēng)性腎病已經(jīng)成為一個(gè)亟待解決的公共衛(wèi)生問題。

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為“先天不足，正氣虧虛，經(jīng)脈失養(yǎng)；濕濁排泄減少，留滯經(jīng)脈；脾胃失司，痰濁凝滯關(guān)節(jié)；感受外邪，邪痹經(jīng)脈，氣血運(yùn)行不暢”是痛風(fēng)發(fā)病的基本病機(jī)。云南吳氏學(xué)派吳生元教授提出“三期六型辨證論治”理論，針對(duì)間歇期（脾虛濕阻證）痛風(fēng)患者，運(yùn)用“健脾化痰，滲濕通絡(luò)”治法[4]，提出健脾滲濕方，該方由黨參、白術(shù)、茯苓、貓須草等十余味藥組成，具有脾滲濕、化痰逐瘀、通絡(luò)除痹之功，臨床主要用于高尿酸血癥的治療，適用于痛風(fēng)的間歇期、慢性痛風(fēng)石病變期及腎臟病變。前期臨床及基礎(chǔ)研究顯示，健脾滲濕方降尿酸療效顯著，明顯改善痛風(fēng)及高尿酸血癥的臨床癥狀，顯著降低高尿酸血癥大鼠模型血尿酸水平，其作用機(jī)制可能主要與調(diào)節(jié)尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白有關(guān)。前期課題組團(tuán)隊(duì)采用 CRISPR/Cas9技術(shù)敲除Uox基因，獲得遺傳性狀穩(wěn)定的尿酸酶基因缺失大鼠，該模式動(dòng)物表型明顯，體內(nèi)尿酸水平明顯高于野生型，腎功能異常且腎臟存在損傷，為高尿酸血癥和痛風(fēng)的研究提供與人類尿酸代謝規(guī)律最接近的模型大鼠。研究已證實(shí)，人體內(nèi)超過一半的血尿酸經(jīng)腎臟排出體外，1/3的血尿酸從消化道排出[5]。目前有關(guān)健脾滲濕方治療痛風(fēng)的研究主要聚焦酵母喂養(yǎng)型高尿酸血癥模型腎臟尿酸代謝，而對(duì)尿酸酶缺失高尿酸血癥模式動(dòng)物消化道尿酸代謝及腸道菌群尚未明確，有必要進(jìn)一步深入研究。

本研究在尿酸酶基因缺失高尿酸血癥大鼠模式動(dòng)物上，從腎臟和腸道尿酸代謝、腸道菌群變化3個(gè)維度，明確健脾滲濕方干預(yù)尿酸代謝的效應(yīng)途徑，解析中醫(yī)濁毒“脾腎虧虛，痰濕瘀阻”基本病機(jī)現(xiàn)代生物學(xué)內(nèi)涵，為健脾滲濕方臨床應(yīng)用治療痛風(fēng)及相關(guān)并發(fā)癥提供科學(xué)基礎(chǔ)，傳承創(chuàng)新云南吳氏學(xué)術(shù)思想。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 尿酸酶基因缺失高尿酸血癥大鼠（Uox-/-）16只，野生型SD大鼠（WT）8只，體質(zhì)量180～200 g，雄性。由云南中醫(yī)藥大學(xué)段為鋼教授課題組提供。動(dòng)物飼養(yǎng)在云南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室屏障系統(tǒng)，飼料和水消毒后，給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物自由攝取。實(shí)驗(yàn)方案通過云南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查。

1.2 主要藥物與試劑 健脾滲濕方主要由黨參、白術(shù)、法半夏、三七粉、土茯苓等十余味中藥組成，煎煮2次，濃縮成浸膏，4℃?zhèn)溆?；尿酸檢測(cè)試劑盒、尿素氮檢測(cè)試劑盒、肌酐檢測(cè)試劑盒（羅氏診斷公司，貨號(hào)：03183807190；04460715190；03263991190）；尿酸測(cè)試盒（南京建成生物工程公司，貨號(hào)：C012-1-1）；蛋白染色試劑（伯樂生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品（上海）有限公司，貨號(hào)：#500-0006）；BSA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（上海碧云天生物技術(shù)有限公司，貨號(hào)：P0012S）；Zymo Research BIOMICS DNA Microprep Kit（北京天漠科技有限公司，貨號(hào)：D4301）；KOD-Plus-Neo DNA Polymerase（東洋紡（上海）生物科技有限公司，貨號(hào)：KOD-401B）；NEBNext Ultra II DNA Library Prep Kit for Illumina（NEB（北京）有限公司，貨號(hào)：E7645L）；Hiseq Rapid SBS Kit v2（因美納（中國(guó)）科學(xué)器材有限公司）。

1.3 主要儀器 羅氏cobas c311全自動(dòng)生化分析儀（羅氏診斷產(chǎn)品（上海）有限公司），SpectraMax i3x型多功能酶標(biāo)儀（美谷分子儀器（上海）有限公司），Heidolph旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德祥科技有限公司），ASP 300S全自動(dòng)脫水機(jī)、EG 1150H組織包埋機(jī)、CM 1950冷凍臺(tái)、RM2235切片機(jī)、HI1210烘片機(jī)、、DM2500正置顯微鏡和圖文系統(tǒng)（均為德國(guó)萊卡儀器有限公司），Qubit@2.0 Fluorometer DNA定量?jī)x（賽默飛世爾科技有限公司），9700 PCR儀（美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司），Hiseq 2500測(cè)序儀（因美納（中國(guó)）科學(xué)器材有限公司）。

2 方法

2.1 分組與給藥 測(cè)定Uox-/-大鼠血清尿酸，按尿酸平均值相近隨機(jī)分為高尿酸組（Uox-/-）、健脾滲濕方組（JPSSF），野生型 SD 大鼠為對(duì)照組（WT），每組 8只。動(dòng)物自由飲水、進(jìn)食1周后開始實(shí)驗(yàn)。JPSSF組給予健脾滲濕方中藥液12.50 g/（kg·d）灌胃，高尿酸組和對(duì)照組給予相同體積的生理鹽水灌胃，連續(xù)給藥60 d。

2.2 腎功能檢測(cè) 末次給藥后，10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，眼眶靜脈叢取血，3 000 r/min離心10 min分離血清，采用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清尿酸（UA）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）水平。

2.3 尿蛋白的測(cè)定 給藥結(jié)束后，大鼠禁食、不禁水，收集24 h尿量并記錄。取1 mL收集的尿液，離心去除沉淀，參照考馬斯亮藍(lán)G-250法測(cè)定尿蛋白。簡(jiǎn)言之，將標(biāo)準(zhǔn)品和離心后尿液加入96孔板中，各孔再加入200 μL稀釋后的染色液，室溫放置5 min，酶標(biāo)儀595 nm測(cè)定OD值，計(jì)算各組大鼠1 d尿蛋白含量。

2.4 HE檢測(cè)高尿酸血癥模式動(dòng)物腎臟病理損傷程度水合氯醛麻醉大鼠，取腎臟固定于10%福爾馬林中，75%、85%、95%、100%濃度梯度乙醇依次對(duì)標(biāo)本進(jìn)行脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，切成4 μm薄片，二甲苯、濃度梯度乙醇脫蠟到水，蘇木素-伊紅（HE）染色，中性樹膠封片，光鏡下觀察腎臟組織病理損傷程度。

2.5 磷鎢酸法測(cè)定腸組織尿酸含量 精密稱取適量腸組織，加入9倍體積的PBS緩沖液冰上勻漿，4 000 r/min室溫離心10 min，取上清轉(zhuǎn)移至新的離心管，采用BSA蛋白測(cè)定試劑盒將腸組織蛋白含量調(diào)一致，接著按照尿酸測(cè)試盒說明書測(cè)定腸組織尿酸含量，酶標(biāo)儀690 nm測(cè)定OD值，計(jì)算各組大鼠腸組織尿酸含量。

2.6 熒光定量PCR（q-PCR）檢測(cè)腎臟組織尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相關(guān)基因的表達(dá) 精密稱取腎組織，加入RZ裂解液，冰上勻漿，15～30℃放置5 min，使核酸蛋白復(fù)合物完全分離，應(yīng)用Trizol試劑盒提取總RNA。取總RNA含量4 μg按Takara逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA。以合成的cDNA第1鏈為模板，按SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ（Tli RNaseH Plus）試劑盒說明書進(jìn)行q-PCR擴(kuò)增，檢測(cè)尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白基因：URAT1，UAT，OAT1的表達(dá)。設(shè)置GAPDH為內(nèi)參對(duì)照，目的基因表達(dá)的相對(duì)差異量用2-△△Ct法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。特異基因引物序列如下。

2.7 16S rRNA V4區(qū)檢測(cè)腸道菌群微生態(tài)結(jié)構(gòu)多樣性健脾滲濕方干預(yù)治療結(jié)束后，將大鼠置代謝籠內(nèi)，采集大鼠自然排出的新鮮糞便。每組隨機(jī)選出5只大鼠糞便，采用Zymo Research BIOMICS DNA Microprep Kit試劑盒純化糞便樣本gDNA。以每個(gè)樣品提取的DNA 為模板，引物序列：Primer 5’-3’：515F（5’-GTGYCAGCMGCCGCGGTAA-3’）和 806R（5’-GGACTACHVGGGTWTCTAAT-3’）擴(kuò)增16S rDNA基因V4區(qū)，瓊脂糖凝膠進(jìn)行目的片段電泳檢測(cè)、純化，按照每個(gè)樣本的測(cè)序量要求，進(jìn)行相應(yīng)比例的混合。NEBNext Ultra II DNA Library Prep Kit for Illumina試劑盒建庫，Hiseq Rapid SBS Kit v2試劑盒上機(jī)高通量測(cè)序，測(cè)序方式為PE250。在數(shù)據(jù)分析上：QIIME進(jìn)行質(zhì)控過濾掉不符合要求的序列，應(yīng)用UPARSE算法在97%一致性水平上進(jìn)行OTU聚類，用UCLUST分類法與SILVA數(shù)據(jù)庫注釋分析，R語言分析群落組成分。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，所有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，正態(tài)分布采用單因素方差分析，非正態(tài)分布資料采用非參數(shù)檢驗(yàn)，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 健脾滲濕方對(duì)高尿酸血癥大鼠腎功能的影響

腎功能檢測(cè)結(jié)果顯示，與WT組相比，Uox-/-組血清尿酸含量顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與Uox-/-組相比，健脾滲濕方干預(yù)后能有效降低血清尿酸水平（P＜0.05），結(jié)果見圖1A。Uox-/-組血清尿素氮和肌酐水平顯著高于WT組，其中血清尿素氮差異具有顯著性意義（P＜0.01）；JPSSF組尿素氮、肌酐水均低于 Uox-/-組，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），結(jié)果見圖1B-C。這些結(jié)果提示，健脾滲濕方對(duì)高尿酸血癥腎功能損傷具有顯著的保護(hù)作用。檢測(cè)腸組織尿酸含量，發(fā)現(xiàn)Uox-/-組尿酸水平顯著高于WT組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），健脾滲濕方干預(yù)后，對(duì)腸組織尿酸水平無顯著性影響（P＞0.05），結(jié)果見圖1D。

圖1 各組大鼠腎功能及腸組織尿酸的變化

3.2 健脾滲濕方對(duì)高尿酸血癥大鼠腎臟病理損傷及蛋白尿的影響 腎臟是尿酸排泄的主要器官，也是最主要的受累器官。HE染色結(jié)果如圖2A-C所示，WT組大鼠腎臟組織結(jié)構(gòu)正常，腎小球及周圍腎小管、腎皮質(zhì)、髓質(zhì)結(jié)構(gòu)清晰。與WT組相比，Uox-/-組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)紊亂甚至萎縮，出現(xiàn)大面積的炎細(xì)胞浸潤(rùn)，有尿酸鈉結(jié)晶析出；健脾滲濕方組大鼠腎小球結(jié)構(gòu)相對(duì)較完整，尿酸鈉結(jié)晶、炎癥反應(yīng)均顯著減輕。尿蛋白常作為預(yù)測(cè)腎病的指標(biāo)之一，檢測(cè)結(jié)果如圖2D所示，與WT組相比，Uox-/-組日尿蛋白量顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；健脾滲濕方干預(yù)后，JPSSF組日尿蛋白量低于Uox-/-組，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

圖2 各組大鼠腎臟形態(tài)學(xué)改變（HE染色，×20）及日尿蛋白量

3.3 健脾滲濕方對(duì)高尿酸血癥大鼠腎臟組織尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的影響 位于腎小管頂膜、基底膜的4種尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（UAT、URAT1、OAT1、OAT3）參與了人近曲腎小管對(duì)尿酸鹽的轉(zhuǎn)運(yùn)，進(jìn)而促進(jìn)尿酸的代謝。結(jié)果顯示：Uox-/-組 URAT1、UAT、OAT1 基因轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平高于 WT組（P＜0.05），JPSSF組 URAT1轉(zhuǎn)錄水平低于Uox-/-高尿酸血癥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），UAT、OAT1轉(zhuǎn)錄水平?jīng)]有變化。提示健脾滲濕方干預(yù)能抑制腎近曲小管對(duì)尿酸鹽的重吸收，結(jié)果見圖3A-C。

圖3 各組大鼠腎臟組織在轉(zhuǎn)錄組水平尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白相關(guān)基因mRNA表達(dá)

3.4 健脾滲濕方對(duì)高尿酸血癥大鼠腸道菌群多樣性的影響 采用主坐標(biāo)分析（PCoA）和非度量多維尺度分析（NMDS）法考察大鼠腸道菌群樣本間的差異程度以及差異變化規(guī)律。PCoA結(jié)果顯示，WT組菌群組成比較相似，Uox-/-組點(diǎn)間距離比較遠(yuǎn)，表明高尿酸血癥引起腸道菌群紊亂，而JPSSF組組內(nèi)點(diǎn)間距離和Uox-/-組相近，提示健脾滲濕方藥物干預(yù)后對(duì)高尿酸血癥大鼠腸道菌群無明顯的影響，結(jié)果見圖4A。NMDS分析結(jié)果顯示，Uox-/-組菌群間波動(dòng)較大，而健脾滲濕方干預(yù)后，高尿酸血癥大鼠腸道菌群波動(dòng)變小，菌群穩(wěn)態(tài)，結(jié)果見圖4B。采用Alpha多樣性指數(shù)評(píng)價(jià)組內(nèi)菌群的多樣性。Shannon指數(shù)和Simpson指數(shù)結(jié)果顯示，WT組、Uox-/-組之間菌群多樣性無明顯變化，JPSSF組菌群多樣性較Uox-/-組有下降趨勢(shì)（P＞0.05），結(jié)果見圖 4C-D。

圖4 各組大鼠Beta多樣性和Alpha多樣性分析

3.5 健脾滲濕方對(duì)高尿酸血癥大鼠腸道菌群門水平的影響 物種相對(duì)豐度結(jié)果顯示，在門水平上厚壁菌門（Firmicutes）、變形菌門（proteobacteria）、擬桿菌門（Bacteroidetes）、放線菌門（Actinobacteria）、螺旋菌（Spirochaetes）為優(yōu)勢(shì)物種，結(jié)果見圖5A。與WT組大鼠相比，Uox-/-模型組大鼠腸道微生物Firmicutes明顯 減 少 ，Bacteroidetes、Actinobacteria、Spirochaetes、Patescibacteria大量增加；與Uox-/-組相比，健脾滲濕方干預(yù)后 Firmicutes、Proteobacteria、Bacteroidetes 持續(xù)增加，而 Actinobacteria、Spirochaetes、Patescibacteria占比下降且具有一定向WT組恢復(fù)趨勢(shì)，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果見表1。聚類熱圖結(jié)果顯示，WT組和JPSSF組的物種組成相似性大于WT組和Uox-/-組，結(jié)果見圖5B。這些結(jié)果提示，高尿酸血癥改變了大鼠腸道菌群的組成，而健脾滲濕方藥物干預(yù)后，在門水平上改善腸道菌群變化的作用有限。

圖5 各組大鼠門水平上物種的相對(duì)豐度（A）和聚類熱圖（B）

表1 健脾滲濕方對(duì)門水平占比較高物種的影響（x± s，n=5，%）

3.6 健脾滲濕方對(duì)高尿酸血癥大鼠腸道菌群屬水平的影響 統(tǒng)計(jì)豐度排名前10的物種，在屬水平上埃希氏菌-志賀氏菌屬（Escherichia-Shigella）、乳桿菌屬（Lactobacillus）、腸球菌屬（Enterococcus）、梭菌屬（Clostridium sensu stricto 1）為優(yōu)勢(shì)物種，結(jié)果見圖6A。Uox-/-組豐度前10的物種總量占比明顯低于WT組 ， 其 中 Escherichia-Shigella，Clostridium sensu stricto 1，Prevotellaceae NK3B31 group，Aerococcus占比大量減少，Proteus，Bifidobacterium占比明顯增加，Lactobacillus，Enterococcus無明顯變化，差異均無顯著性意義（P＞0.05）；與 Uox-/-組相比，JPSSF 組大鼠腸道菌群 Lactobacillus，Proteus，Prevotellaceae NK3B31 group大量增加且Prevotellaceae NK3B31 group占比接近 WT 組，Clostridium sensu stricto 1，Bifidobacterium占比減少且Bifidobacterium有向WT組恢復(fù)趨勢(shì)，而 Escherichia-Shigella，Aerococcus，Bacteroides無明顯變化，差異均無顯著性意義（P＞0.05），結(jié)果與屬水平聚類熱圖一致，見表2和圖6B。這些結(jié)果表明，健脾滲濕方對(duì)高尿酸血癥誘導(dǎo)的腸道菌群失調(diào)有一定恢復(fù)的趨勢(shì)，但作用并不顯著。

表2 健脾滲濕方對(duì)屬水平占比較高物種的影響（x± s，n=5，%）

圖6 各組大鼠屬水平上物種的相對(duì)豐度（圖A）和聚類熱圖（圖B）

4 討論

動(dòng)物體內(nèi)的外源性或內(nèi)源性嘌呤物質(zhì)會(huì)代謝成黃嘌呤，黃嘌呤在黃嘌呤脫氫酶（Xdh）的催化下生成溶解度較低的尿酸，尿酸在尿酸酶（Uox）的催化下可以進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成溶解度較高的尿囊素[6]。課題組采用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除Uox基因，獲得遺傳性狀穩(wěn)定的尿酸酶基因缺失大鼠，該模式動(dòng)物表型明顯，體內(nèi)尿酸水平明顯高于野生型，腎功能異常且腎臟存在損傷[7]，為高尿酸血癥和痛風(fēng)的研究提供與人類尿酸代謝規(guī)律最接近的模型大鼠。

腎臟是尿酸排泄的主要器官，也是尿酸損傷的重要靶器官，尿酸鹽結(jié)晶沉積腎臟引起的直接、間接損傷，使腎臟的結(jié)構(gòu)與功能發(fā)生病變，導(dǎo)致終末期腎臟疾病的發(fā)生[8]。痛風(fēng)性腎病常以尿酸性腎結(jié)石、慢性間質(zhì)性腎炎和纖維化為特征[9]。在尿酸酶基因缺失高尿酸血癥模式動(dòng)物上，發(fā)現(xiàn)腎功能指標(biāo)包括尿酸及尿素氮顯著高于野生對(duì)照組，腎小球及腎小管具有顯著的病理損傷，而健脾滲濕方藥物干預(yù)后顯著降低尿酸酶基因缺失大鼠血清尿酸和尿素氮水平，減少尿酸鈉結(jié)晶沉積于腎臟及誘導(dǎo)炎癥反應(yīng)，對(duì)尿酸酶基因缺失高尿酸血癥模式動(dòng)物腎損傷具有較好的保護(hù)作用。課題組前期在酵母喂養(yǎng)型高尿酸血癥模型中，發(fā)現(xiàn)健脾滲濕方上調(diào)腎小管尿酸鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白UAT、OAT3，下調(diào)URAT1，從而促進(jìn)尿酸排泄[10]；同時(shí)顯著改善模型大鼠腎間質(zhì)纖維化程度，下調(diào)大鼠腎臟內(nèi) COX-2、TNF-α、TGF-β1表達(dá)，從而發(fā)揮對(duì)腎臟的保護(hù)作用[11]，上述研究結(jié)果與前期的文獻(xiàn)報(bào)道一致，進(jìn)一步證明健脾滲濕方對(duì)尿酸晶體沉積于腎組織引起腎臟損害及纖維化具有較好的保護(hù)效應(yīng)。

大多數(shù)哺乳動(dòng)物體內(nèi)的尿酸被尿酸酶催化為更易排出體外的尿囊素，而人類在進(jìn)化過程中尿酸酶基因發(fā)生突變失去功能性，尿酸不能進(jìn)一步分解[5]，使得尿酸的代謝與排泄只能依靠尿液、糞便排出或腸道微生物進(jìn)一步分解代謝。對(duì)于人體來說，體內(nèi)的尿酸約2/3經(jīng)腎臟排泄，不到1/3經(jīng)腸道排泄。盡管院內(nèi)制劑健脾滲濕方療效顯著，然而課題組前期研究主要聚焦腎臟尿酸代謝途徑及相關(guān)的損傷，而對(duì)于尿酸腸道分解代謝途徑，特別是腸道微生物研究較少，因此值得進(jìn)一步深入研究。

腸道菌群及其構(gòu)成的微生態(tài)環(huán)境對(duì)機(jī)體維持健康有重大意義，充分參與人體的生理、生化、病理和藥理的整個(gè)過程[12]。有研究報(bào)道，機(jī)體1/4到1/3的尿酸可以在糞便中恢復(fù)，這表明膽道或（和）腸道的分泌是尿酸排泄的一個(gè)重要的替代途徑，可能潛在地調(diào)節(jié)血清尿酸水平[13]。大多數(shù)健康人腸道菌群由厚壁菌門、擬桿菌門2個(gè)優(yōu)勢(shì)類群組成[14]，本研究體系中各組大鼠的優(yōu)勢(shì)類群是厚壁菌門、變形菌門、擬桿菌門。與野生對(duì)照組相比，尿酸酶缺失高尿酸血癥模型大鼠Firmicutes豐度減少，Bacteroidetes豐度增加，這一結(jié)果與高脂飼料誘導(dǎo)高尿酸血癥模型腸道菌群分布一致[15]。厚壁菌門的代表性有益作用是產(chǎn)生丁酸鹽，緩解腸道炎癥反應(yīng)[16]。健脾滲濕方組大鼠腸道Lactobacillus，Proteus，Prevotellaceae NK3B31 group 有 一定增加，而 Clostridium sensu stricto 1，Bifidobacterium具有減少趨勢(shì)，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），提示健脾滲濕方對(duì)腸道微生物紊亂無明顯的影響，其主要通過影響腎臟尿酸排泄途徑，減少尿酸晶體沉積于腎組織，從而減輕痛風(fēng)性腎損害。該方臨床更適合具有腎功能損傷的痛風(fēng)患者，該研究為健脾滲濕方臨床應(yīng)用治療痛風(fēng)及相關(guān)并發(fā)癥提供科學(xué)依據(jù)。