付志麗 蒲健 李龔路 譚丹 鄭林 李勇軍 黃勇

中圖分類號(hào) R285.5 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2021）09-1077-06

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.09.09

摘 要 目的：研究金骨蓮膠囊對(duì)炎癥模型大鼠的抗炎作用及機(jī)制。方法：將48只大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、金骨蓮膠囊低、中、高劑量組（0.66、1.32、2.64 g/kg）和地塞米松組（陽(yáng)性對(duì)照，0.945 mg/kg），每組8只。空白對(duì)照組和模型組大鼠灌胃等體積水，其余各組大鼠灌胃相應(yīng)藥物，每天給藥2次，連續(xù)3 天。末次給藥后30 min，模型組和給藥組大鼠腹腔注射脂多糖（10 mg/kg）以復(fù)制炎癥模型。腹腔注射6 h后，于大鼠尾靜脈取血，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測(cè)大鼠血清中腫瘤壞死因子（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、IL-6、前列腺素E2（PGE2）的含量;測(cè)定大鼠肺組織濕質(zhì)量/干質(zhì)量（W/D）比值;采用蘇木精-伊紅染色法觀察大鼠肺組織的病理學(xué)形態(tài)變化;采用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)法檢測(cè)大鼠肺組織中TNF-α、IL-6、PGE2、IL-1β mRNA的表達(dá)水平;采用Western blot法檢測(cè)大鼠肺組織中核因子κB（NF-κB）p65蛋白的磷酸化水平和NF-κB抑制蛋白α（IκBα）蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果：與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2的含量，肺組織W/D比值，肺組織中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2 mRNA的表達(dá)水平和NF-κB p65蛋白磷酸化水平均顯著升高，IκBα蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.05或P<0.01）;大鼠肺組織中大量肺泡萎縮塌陷、壁增厚，可見(jiàn)肺實(shí)質(zhì)化及大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。與模型組比較，金骨蓮膠囊各劑量組大鼠血清中TNF-α、IL-1β（低劑量組除外）、IL-6、PGE2的含量，以及肺組織中TNF-α（低劑量組除外）、IL-1β、IL-6（低、高劑量組除外）、PGE2 mRNA的表達(dá)水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01）;金骨蓮膠囊高劑量組大鼠肺組織W/D比值顯著降低（P<0.05或P<0.01）;金骨蓮膠囊中劑量組大鼠肺組織中NF-κB p65蛋白磷酸化水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01），IκBα蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.05）;大鼠肺泡結(jié)構(gòu)較為清晰、壁輕度增厚，并見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)。結(jié)論：金骨蓮膠囊對(duì)炎癥模型大鼠具有良好的抗炎作用，其作用機(jī)制可能與抑制NF-κB信號(hào)通路有關(guān)。

關(guān)鍵詞 金骨蓮膠囊;抗炎作用;炎癥因子;核因子κB信號(hào)通路

Study on Anti-inflammatory Effect and Mechanism of Jingulian Capsule on Inflammatory Model Rats

FU Zhili1，2，3，PU Jian4，LI Gonglu1，3，TAN Dan4，ZHENG Lin1，LI Yongjun1，HUANG Yong1（1. Guizhou Provincial Key Labortary of Pharmaceutics/National Key Labortay of Efficacy and Utilization of Medicinal Plants， Guizhou Medical University， Guiyang 550004， China; 2. Dept. of Pharmaceutics， Guizhou Nursing Vocational College， Guiyang 551300， China; 3. College of Pharmacy， Guizhou Medical University， Guiyang 550004， China; 4. Guizhou Yibai Pharmaceutical Co.， Ltd.， Guiyang 550004， China）

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To study the anti-inflammatory effect and mechanism of Jingulian capsule on inflammatory model rats. METHODS： Totally 48 rats were randomly divided into blank control group， model group， Jingulian capsule low-dose， medium-dose and high-dose groups （0.66， 1.32， 2.64 g/kg）， dexamethasone group （positive control， 0.945 mg/kg）， with 8 rats in each group. Blank control group and model group were given constant volume of water intragastrically， and other groups were given relevant medicine intragastrocally， twice a day， for consecutive 3 days. Thirty minutes after last administration， model group and administration groups were given lipopolysaccharide （10 mg/kg） intraperitoneally to induce inflammatory model. Six hours after intraperitoneal injection， the contents of TNF-α， IL-1β， IL-6， PGE2 in serum were detected by ELISA. The wet to dry weight （W/D） ratio of lung tissue were determined. HE staining was used to observe the pathological changes of lung tissue. RT-PCR was used to detect the mRNA expression of TNF-α， IL-6， PGE2 and IL-1β in lung tissue. Western blot assay was used to detect the phosphorylation of NF-κB p65 protein and the expression of? ? IκBα protein in lung tissue. RESULTS： Compared with blank control group， the contents of TNF-α， IL-1β， IL-6 and PGE2 in serum， the W/D ratio of lung tissue， the expression of TNF-α， IL-1β， IL-6 and PGE2 mRNA and the phosphorylation level of NF-κB p65 protein in lung tissue of model group were significantly increased， and the expression of IκBα protein was significantly decreased （P<0.05 or P<0.01）; a large number of alveolar atrophy and collapse， alveolar wall thickening， lung consolidation， and a large number of inflammatory cell infiltration could be seen in lung tissue. Compared with model group， the contents of TNF-α， IL-1β （except for low-dose group）， IL-6 and PGE2 in serum， as well as the expression of TNF-α （except for high-dose group）， IL-1β， IL-6 （except for low-dose， high-dose groups） and PGE2 mRNA in lung tissue were decreased significantly in Jingulian capsule groups （P<0.05 or P<0.01）; the W/D ratio of lung tissue was decreased significantly in Jingulian high-dose group （P<0.05 or P<0.01）; the expression of phosphorylation level of NF-κB p65 protein in lung tissue of Jingulian medium-dose group were decreased significantly （P<0.05 or P<0.01）， while the expression of IκBα protein was increased significantly （P<0.05）; the alveolar structure was clear， the alveolar wall was slightly thickened， and a small amount of inflammatory cell infiltration was seen in lung tissue. CONCLUSIONS： Jingulian capsule has good anti-inflammatory effect on inflammatory model rats， the mechanism of which may be related to the inhibition of NF-κB signal pathway.

KEYWORDS? ?Jingulian capsule; Anti-inflammatory effect; Inflammatory cytokines; NF-κB signal pathway

炎癥是機(jī)體對(duì)損傷因子產(chǎn)生的正常防御反應(yīng)，機(jī)體很多疾病均與炎癥有關(guān)[1]，如風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、肺炎等，嚴(yán)重的炎癥會(huì)導(dǎo)致多器官衰竭、危及生命[2-3]。目前，治療炎癥的主要有非甾體類、糖皮質(zhì)激素類藥物，但這類藥物的不良反應(yīng)較多，不適宜長(zhǎng)期使用[4]。研究發(fā)現(xiàn)，中藥在治療炎癥方面具有療效較好、毒副作用小等優(yōu)點(diǎn)[5]。因此，開(kāi)發(fā)抗炎類中藥對(duì)臨床治療炎癥具有重要意義。

金骨蓮膠囊源于經(jīng)典苗藥組方，具有祛風(fēng)除濕、消腫止痛的功效，為治療風(fēng)濕痹證的苗藥獨(dú)家品種，收載于《國(guó)家中成藥標(biāo)準(zhǔn)匯編》[6]和《國(guó)家基本醫(yī)療保險(xiǎn)和工傷保險(xiǎn)藥品目錄》[7]。金骨蓮膠囊由大血藤、八角楓、透骨香、漢桃葉和金鐵鎖組方而成，其組方藥味含有大血藤素、八角楓總堿、漢桃葉有機(jī)酸等多種抗炎活性成分[8]。金骨蓮膠囊前期基礎(chǔ)研究薄弱，其研究主要集中于臨床應(yīng)用方面，如治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、急性軟組織損傷等[9-10]，但其抗炎作用機(jī)制尚不明確。

相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，炎癥的產(chǎn)生與多種炎癥介質(zhì)的失控性釋放有關(guān)，這些炎癥介質(zhì)的釋放主要受到核因子κB（NF-κB）調(diào)節(jié)[11]。NF-κB是一種存在于真核細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子，在細(xì)胞的炎癥反應(yīng)、免疫應(yīng)答等過(guò)程中起到關(guān)鍵性作用[12]。在結(jié)構(gòu)上，NF-κB是一個(gè)二聚體，在活化的細(xì)胞中最常見(jiàn)的NF-κB二聚體形式是NF-κB p65或p50。正常情況下，NF-κB與其抑制蛋白IκBα結(jié)合，以無(wú)活性的三聚體形式存在于細(xì)胞漿中[13];當(dāng)細(xì)胞受到外界信號(hào)的激活時(shí)，NF-κB與IκBα發(fā)生解離并活化，活化的NF-κB迅速?gòu)募?xì)胞漿轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，并與相應(yīng)基因上的κB位點(diǎn)結(jié)合，啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄程序，引起腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、IL-6、前列腺素E2（PGE2）等炎癥因子釋放，造成炎癥級(jí)聯(lián)放大反應(yīng)[14]?；诖?，本研究采用腹腔注射脂多糖（LPS）制備炎癥模型大鼠[15]，通過(guò)測(cè)定大鼠血清中TNF-α等相關(guān)炎癥因子的水平、肺組織濕質(zhì)量/干質(zhì)量（W/D）比值，觀察大鼠肺組織的病理學(xué)形態(tài)變化，檢測(cè)肺組織中TNF-α等相關(guān)炎癥因子的表達(dá)以及NF-κB p65蛋白的磷酸化水平和IκBα蛋白的表達(dá)水平，初步探討金骨蓮膠囊的抗炎作用機(jī)制，以期更好地指導(dǎo)其臨床合理應(yīng)用。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有：680型酶標(biāo)儀（上海伯樂(lè)生命醫(yī)學(xué)產(chǎn)品有限公司），Water purifier型實(shí)驗(yàn)室專用超純水機(jī)（沃特世科技上海有限公司），AE240型十萬(wàn)分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司），Allegra 64R型低溫高速離心機(jī)（美國(guó)Beckman Coulter公司），TGL-16G型高速離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠），DHP-9052型恒溫培養(yǎng)箱（上海捷呈實(shí)驗(yàn)儀器有限公司），ZH-2型渦旋混合器（天津藥典標(biāo)準(zhǔn)儀器廠），Nanodrop2000型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司），Chemidoc XRS型凝膠成像儀、CFX Connect型熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）儀（美國(guó)BioRad公司），DYY-6C型電泳槽（北京六一生物科技有限公司），ECLIPSE CI型光學(xué)顯微鏡（日本Nikon公司）。

1.2 主要藥品與試劑

本研究所用主要藥品與試劑有：金骨蓮膠囊（貴州益佰制藥股份有限公司，批號(hào)20190806，規(guī)格0.25 g），LPS（美國(guó)Sigma公司，批號(hào)039M4004V），地塞米松片（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號(hào)171007，規(guī)格0.75 mg），TNF-α、IL-6、IL-1β、PGE2酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）測(cè)定試劑盒（南京建成生物技術(shù)有限公司，批號(hào)分別為20191111、20190430、20190905、20190621），Trizol試劑（日本Takara公司，批號(hào)9109），蘇木素-伊紅（HE）染液（武漢市皮諾飛生物科技有限公司，批號(hào)10011），iScript cDNA Synthesis kit 反轉(zhuǎn)錄試劑盒、iTaqTM universal SYBR Green Supermix、ECL化學(xué)發(fā)光底物（美國(guó)BioRad公司，批號(hào)分別為170-8890、1725122、1705060），兔源磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）單克隆抗體（中國(guó)Abways公司，批號(hào)CY5095），兔源NF-κB p65多克隆抗體、兔源IκBα多克隆抗體、鼠源β-actin單克隆抗體（中國(guó)ABclonal公司，批號(hào)分別為ab16502、A19714、ab6276），辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔免疫球蛋白G抗體（二抗）、BCA蛋白檢測(cè)試劑盒（武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司，批號(hào)分別為E-AB-1037、E-BC-K318-M）;PCR引物由北京擎科生物科技有限公司合成（引物序列與產(chǎn)物長(zhǎng)度見(jiàn)表1）;其余試劑為實(shí)驗(yàn)室常用規(guī)格，水為純凈水。

1.3 動(dòng)物

本研究所用動(dòng)物為健康SD雄性大鼠，體質(zhì)量（300±20） g，購(gòu)于長(zhǎng)沙天勤生物技術(shù)有限公司，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)為SCXK（湘）2019-0014。大鼠飼養(yǎng)于照明充足（12 h/12 h光暗調(diào)節(jié)）、空調(diào)通風(fēng)良好、相對(duì)濕度50%、室溫22 ℃的條件下。

2 方法

2.1 動(dòng)物造模、分組與給藥

將48只大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、地塞米松組（陽(yáng)性對(duì)照，0.945 mg/kg，劑量為臨床等效劑量的3倍）和金骨蓮膠囊低、中、高劑量組（0.66、1.32、2.64 g/kg，劑量為臨床等效劑量的5、10、20倍），每組8只?？瞻讓?duì)照組和模型組大鼠灌胃等體積水，其余組大鼠灌胃相應(yīng)藥物（臨用時(shí)以水溶解），每天給藥2次，連續(xù)3天。末次給藥后30 min，除空白對(duì)照組腹腔注射等體積生理鹽水外，其余組大鼠腹腔注射LPS（10 mg/kg）以復(fù)制炎癥模型。腹腔注射6 h后，于各組大鼠尾靜脈取血，室溫靜置20 min后，以3 000 r/min離心20 min，分離血清，然后采用ELISA法測(cè)定各組大鼠血清中TNF-α的含量。如果各組大鼠血清中TNF-α較空白對(duì)照組顯著升高，則表明模型建立成功。

2.2 取材

確定造模成功后，于各組大鼠尾靜脈取血，室溫靜置20 min后，以3 000 r/min離心20 min，分離血清樣品。取血后，采用頸椎脫臼法處死大鼠，剖取其雙肺，將左肺保存于-80 ℃冰箱中，用于PCR和Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè);將右肺上葉以10%甲醛固定，用于肺組織病理學(xué)形態(tài)觀察;將右肺下葉用于肺組織W/D比值的測(cè)定。

2.3 大鼠血清中TNF-α、IL-1β、 IL-6、PGE2的含量測(cè)定

取“2.2”項(xiàng)下各組大鼠血清樣品，按相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書方法操作，采用酶標(biāo)儀于450 nm下測(cè)定血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2的含量。

2.4 大鼠肺組織W/D比值測(cè)定

取“2.2”項(xiàng)下各組大鼠右肺下葉，用濾紙吸干其表面水分，并稱質(zhì)量，記為濕質(zhì)量（W）;然后于80 ℃恒溫干燥箱中烘烤約48 h后，稱質(zhì)量，記為干質(zhì)量（D）;計(jì)算肺組織W/D比值，以反映肺組織的水腫程度。

2.5 大鼠肺組織病理學(xué)形態(tài)觀察

取“2.2”項(xiàng)下固定于10%甲醛中的各組大鼠右肺上葉，經(jīng)常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片（厚度為3 μm）后，以HE染液進(jìn)行染色，然后于光學(xué)顯微鏡下觀察大鼠肺組織的病理學(xué)形態(tài)變化，并拍照。

2.6 大鼠肺組織中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2 mRNA的表達(dá)水平檢測(cè)

采用逆轉(zhuǎn)錄（RT）-PCR法進(jìn)行檢測(cè)。取“2.2”項(xiàng)下各組大鼠的左肺組織適量，按照試劑盒說(shuō)明書方法操作提取總RNA，然后逆轉(zhuǎn)為cDNA進(jìn)行PCR。PCR反應(yīng)體系（10 ?L）包括：PCR Mixture 5 ?L，上下游引物各0.5 ?L，cDNA 2 ?L，H2O 2 ?L。反應(yīng)條件為：95 ℃預(yù)變性5 min;95 ℃變性15 s，60 ℃退火15 s，72 ℃延伸15 s，共45個(gè)循環(huán)。以GAPDH為內(nèi)參，采2-ΔΔCt法計(jì)算TNF-α、IL-1β、IL-6及PGE2 mRNA的表達(dá)水平。

2.7 大鼠肺組織中NF-κB p65磷酸化和IκBα蛋白表達(dá)水平的檢測(cè)啊

采用Western blot法進(jìn)行檢測(cè)。取“2.2”項(xiàng)下各組大鼠的左肺組織適量，剪碎，加入蛋白提取試劑，提取蛋白質(zhì)，利用組織勻漿儀制備組織勻漿，于冰上裂解30 min，以12 000 r/min離心5 min，取上清液，經(jīng)BCA蛋白試劑盒測(cè)定蛋白濃度后，加熱變性處理10 min。取變性后蛋白進(jìn)行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳（SDS-PAGE）分離，轉(zhuǎn)膜，以5%脫脂奶粉封閉1 h;分別加入NF-κB p65一抗（稀釋比例1 ∶ 500）、p-NF-κB p65一抗（稀釋比例1 ∶ 500）、IκBα一抗（稀釋比例1 ∶ 1 000）、β-actin一抗（稀釋比例1 ∶ 10 000），于4 °C條件下孵育過(guò)夜;以TBST清洗5 min×5次，加入二抗（稀釋比例1 ∶ 3 000）室溫孵育1 h;以TBST清洗5 min×5次，加入ECL顯色后，置于凝膠成像系統(tǒng)中成像。采用Alpha Ease FC 4.0軟件分析圖像，以p-NF-κB p65與NF-κB p65灰度值比值表示NF-κB p65蛋白的磷酸化水平，以IκBα蛋白與內(nèi)參β-actin的灰度值比值表示IκBα蛋白表達(dá)水平。

2.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。數(shù)據(jù)以x±s表示，采用單因素方差分析進(jìn)行多組間樣本均數(shù)比較，組間兩兩比較采用LSD檢驗(yàn)。P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 金骨蓮膠囊對(duì)炎癥模型大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2含量的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2含量均顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，金骨蓮膠囊低、中、高劑量組和地塞米松組大鼠血清中TNF-α、IL-1β（金骨蓮膠囊低劑量組除外）、IL-6、PGE2含量均顯著降低（P<0.05或P<0.01），詳見(jiàn)表2。

3.2 金骨蓮膠囊對(duì)炎癥模型大鼠肺組織W/D比值的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠肺組織W/D比值顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，金骨蓮高劑量組和地塞米松組大鼠肺組織W/D比值均顯著降低（P<0.05或P<0.01），詳見(jiàn)表3。

3.3 金骨蓮膠囊對(duì)炎癥模型大鼠肺組織病理學(xué)形態(tài)的影響

空白對(duì)照組大鼠肺泡結(jié)構(gòu)清晰、壁薄，肺間質(zhì)無(wú)炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);模型組大鼠肺組織出現(xiàn)大量肺泡萎縮塌陷、壁增厚，可見(jiàn)肺實(shí)質(zhì)化以及大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);金骨蓮低、中、高劑量組和地塞米松組大鼠肺組織病理學(xué)改變較模型組有所減輕，肺泡結(jié)構(gòu)較為清晰、壁輕度增厚，可見(jiàn)少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，詳見(jiàn)圖1（圖中箭頭所指處為炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)）。

3.4 金骨蓮膠囊對(duì)炎癥模型大鼠肺組織中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2 mRNA表達(dá)的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠肺組織中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2 mRNA的表達(dá)水平均顯著升高（P<0.01）;與模型組比較，金骨蓮膠囊低、中、高劑量組和地塞米松組大鼠肺組織中TNF-α（金骨蓮膠囊低劑量組除外）、IL-1β、IL-6（金骨蓮膠囊低、高劑量組除外）、PGE2 mRNA的表達(dá)水平均顯著降低（P<0.05或P<0.01），詳見(jiàn)表4。

3.5 金骨蓮膠囊對(duì)炎癥模型大鼠肺組織中NF-κB p65磷酸化和IκBα蛋白表達(dá)的影響

與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠肺組織中NF-κB p65蛋白磷酸化水平顯著升高（P<0.05），IκBα蛋白表達(dá)水平顯著降低（P<0.01）;與模型組比較，金骨蓮膠囊中劑量組和地塞米松組大鼠肺組織中NF-κBp65蛋白磷酸化水平顯著降低（P<0.05），IκBα蛋白表達(dá)水平顯著升高（P<0.05），詳見(jiàn)圖2、表5。

4 討論

LPS是革蘭氏陰性菌細(xì)胞壁中的一種組成成分，將其純化后，可用于構(gòu)建動(dòng)物炎癥模型，且此類模型是目前用于評(píng)價(jià)抗炎藥物藥效和探索其作用機(jī)制的有效體內(nèi)模型[16]。因此，本研究采用腹腔注射LPS復(fù)制炎癥模型，以探索金骨蓮膠囊的抗炎作用及機(jī)制。在脂多糖的刺激下，炎癥細(xì)胞因子的釋放可導(dǎo)致中性粒細(xì)胞向肺組織聚集、活化，活化后的中性粒細(xì)胞進(jìn)一步釋放炎性細(xì)胞因子，從而破壞肺泡毛細(xì)血管屏障，導(dǎo)致肺通透性增加，形成肺水腫[17]，使肺成為最易受損的器官[18-19];而經(jīng)藥物治療后，可通過(guò)觀察肺的W/D比值、組織病理改善情況等研究藥物的抗炎作用。本研究結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠肺組織W/D比值顯著升高，表明其出現(xiàn)了明顯的肺水腫現(xiàn)象;與模型組比較，金骨蓮膠囊高劑量組大鼠肺組織W/D比值顯著降低，表明金骨蓮膠囊可減輕大鼠的肺部水腫。肺組織病理學(xué)形態(tài)觀察結(jié)果顯示，模型組大鼠肺泡間隔明顯增厚、大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn);經(jīng)金骨蓮膠囊干預(yù)后，其肺組織病變不同程度地減輕、浸潤(rùn)的炎癥細(xì)胞減少，可見(jiàn)金骨蓮膠囊可減少炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，改善肺組織損傷，減輕LPS所致炎癥反應(yīng)，產(chǎn)生抗炎作用。

NF-κB通路是炎癥反應(yīng)的重要轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一[20]。NF-κB未受刺激時(shí)主要以非活化狀態(tài)存在于細(xì)胞質(zhì)中，并可與抑制性的IκBα蛋白結(jié)合形成NF-κB/IκBα復(fù)合物，而其中IκBα蛋白的活化又被IκBα蛋白激酶復(fù)合物控制，該復(fù)合物可被外來(lái)刺激誘導(dǎo)活化，從而引起IκBα蛋白磷酸化，進(jìn)而導(dǎo)致IκBα蛋白迅速泛素化降解，釋放出NF-κB p65，使其恢復(fù)轉(zhuǎn)錄活性并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核內(nèi)，促進(jìn)細(xì)胞炎癥因子如TNF-α、IL-1β、IL-6等的表達(dá)[21-23]，同時(shí)使環(huán)氧酶（COX）的表達(dá)增加，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體內(nèi)PGE2的表達(dá)[24]。本研究結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠血清中TNF-α、IL-1β、IL-6、PGE2含量均顯著升高，表明LPS使大鼠產(chǎn)生了全身炎癥反應(yīng);與模型組比較，金骨蓮膠囊各劑量組大鼠血清中TNF-α、IL-1β（低劑量組除外）、IL-6、PGE2的含量，肺組織中TNF-α（高劑量組除外）、IL-1β、IL-6（低、高劑量組除外）、PGE2 mRNA的表達(dá)水平均顯著降低，表明金骨蓮膠囊能通過(guò)降低上述炎癥因子的表達(dá)而產(chǎn)生抗炎作用。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，金骨蓮膠囊中劑量組大鼠肺組織中NF-κB p65蛋白磷酸化水平顯著降低，IκBα蛋白表達(dá)水平顯著升高，表明金骨蓮膠囊抗炎作用可能與抑制NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。

綜上所述，金骨蓮膠囊可抑制大鼠血清及肺組織中TNF-α、IL-1β、IL-6及PGE2等炎癥因子的表達(dá)，減輕脂多糖誘導(dǎo)大鼠的炎癥反應(yīng)，其作用機(jī)制可能與抑制NF-κB信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路有關(guān)。

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（收稿日期：2020-12-14 修回日期：2021-02-25）

（編輯：唐曉蓮）