朱 勇,李懷國(guó)
(佛山市中醫(yī)院制劑中心,廣東 佛山 528000)
紫草是2020 版《中國(guó)藥典》中收載的中藥品種。紫草為紫草科紫草屬植物,以干燥的根入藥。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為,紫草性寒,味甘、咸,歸心經(jīng)、肝經(jīng),具有涼血活血、解毒透疹之功效[1]?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,紫草具有抗菌、消炎、抗病毒、抗腫瘤、鎮(zhèn)靜鎮(zhèn)痛、興奮平滑肌等作用,對(duì)金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌等均有抑制作用,且能加速上皮細(xì)胞的生長(zhǎng),在治療燙傷方面有特效[2]?,F(xiàn)階段的研究表明,紫草中的紫草素及乙酰紫草素是其能夠發(fā)揮抗炎作用的主要成分。2020 版《中國(guó)藥典》紫草項(xiàng)下羥基萘醌總色素含量的測(cè)定方法是:將紫草在50℃下干燥3 h,粉碎(過(guò)3 號(hào)篩),用95%的乙醇浸泡4 h 后震搖并稀釋,然后按照紫外-可見(jiàn)分光光度法(2020 版《中國(guó)藥典》四部通則0401)在516 nm 波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度,羥基萘醌總色素的含量不得少于0.8%(按左旋紫草素計(jì))[3]。我院自主研發(fā)的紫草油、傷科黃水、傷科黃油紗等均需要應(yīng)用到紫草,我院對(duì)紫草藥材質(zhì)量的要求較高,對(duì)紫草中羥基萘醌總色素含量的要求是《中國(guó)藥典》中規(guī)定的3 倍。本文主要是對(duì)紫草中羥基萘醌總色素含量測(cè)定的穩(wěn)定性進(jìn)行研究。
紫草(批號(hào):20200717,購(gòu)自佛山馮了性藥材有限公司),經(jīng)鑒定為紫草科紫草屬植物新疆紫草;左旋紫草素標(biāo)準(zhǔn)品(批號(hào):110769-200405,購(gòu)自中國(guó)生物制品有限公司);L5s 紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(由上海分析儀器廠生產(chǎn));AE200 型電子天平(由瑞士METTLER 公司生產(chǎn));CT-C-I 型熱風(fēng)循環(huán)烘箱(由常州益民干燥設(shè)備有限公司生產(chǎn));WIMER 3001 干粉激光粒度儀(由濟(jì)南微納儀器有限公司生產(chǎn))。
1.2.1 試驗(yàn)方法 1)紫草中羥基萘醌總色素含量的測(cè)定。取紫草中藥材,按照2020 版《中國(guó)藥典》(四部通則0401)中收載的方法,測(cè)定其中羥基萘醌總色素的含量,具體的操作方法是:在50℃的環(huán)境下將紫草干燥3 h,粉碎(過(guò)3 號(hào)篩),用95%的乙醇浸泡4 h 后震搖并稀釋,然后按照紫外-可見(jiàn)分光光度法(2020 版《中國(guó)藥典》四部通則0401)在516 nm波長(zhǎng)處測(cè)定其吸收度,明確其中羥基萘醌總色素的含量。2)精密度試驗(yàn)。配置左旋紫草素(含量為3%)乙醇溶液標(biāo)準(zhǔn)品及空白樣品,按照2020 版《中國(guó)藥典》(四部通則0401)中收載的方法及檢測(cè)條件重復(fù)檢測(cè)6 次,測(cè)定其中羥基萘醌總色素的含量。3)穩(wěn)定性考察。將同一批紫草粉碎成不同等級(jí)的細(xì)粉,在相同干燥時(shí)間、相同含水量下按照2020 版《中國(guó)藥典》(四部通則0401)中收載的方法及檢測(cè)條件測(cè)定羥基萘醌總色素的含量,考察該方法的穩(wěn)定性。4)準(zhǔn)確度試驗(yàn)。取已知左旋紫草素含量為3%的紫草乙醇溶液6 份(每份5 mL),在其中加入左旋紫草素標(biāo)準(zhǔn)品(左旋紫草素的含量為3%)乙醇溶液6 份(每份5 mL)。將上述兩種溶液混合,得到供試品溶液。按照2020 版《中國(guó)藥典》(四部通則0401)中收載的方法及檢測(cè)條件測(cè)定羥基萘醌總色素的含量,計(jì)算加樣回收率。加樣回收率(%)=(測(cè)得量-已知量)/加入量×100%。1.2.2 L9(34)正交試驗(yàn) 根據(jù)2020 版《中國(guó)藥典》中收載的紫草測(cè)定方法中的主要影響因素,以羥基萘醌總色素含量測(cè)定為指標(biāo)進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn),考察藥材的粉碎細(xì)度、干燥時(shí)間及含水量對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。L9(34)正交試驗(yàn)的影響因素和水平詳見(jiàn)表1。
表1 L9(34)正交試驗(yàn)的影響因素和水平
通過(guò)進(jìn)行精密度試驗(yàn)可知,左旋紫草素(含量為3%)乙醇溶液標(biāo)準(zhǔn)品及空白樣品的平均加樣回收率為101%,相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation,RSD)為1.46。
表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果
通過(guò)進(jìn)行穩(wěn)定性考察可知,在紫草藥材粉碎成極細(xì)粉的條件下測(cè)得羥基萘醌總色素的含量值較為穩(wěn)定。詳見(jiàn)表3。
表3 紫草粉碎的粗細(xì)度對(duì)羥基萘醌總色素含量測(cè)定值的影響
本研究中進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)的結(jié)果詳見(jiàn)表4。
表4 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果
對(duì)本研究中影響紫草中羥基萘醌總色素含量測(cè)定的因素進(jìn)行方差分析的結(jié)果顯示,藥粉細(xì)度是影響紫草中羥基萘醌總色素含量測(cè)定的主要因素,其次為藥粉干燥時(shí)間和藥粉含水量。詳見(jiàn)表5。
表5 羥基萘醌總色素含量測(cè)定影響因素的方差分析結(jié)果
本研究中通過(guò)進(jìn)行L9(34)正交試驗(yàn)可知,將藥材粉碎成極細(xì)粉、在50℃下干燥3 h、將藥粉的水含量控制在9.0%左右是測(cè)定紫草中羥基萘醌總色素含量的最佳條件。
紫草可涼血活血、解毒透疹,可用于治療血熱毒盛、麻疹、斑疹透發(fā)不暢諸證?,F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明,紫草中的羥基萘醌總色素是其主要藥理成分。通過(guò)對(duì)紫草中羥基萘醌總色素的含量進(jìn)行測(cè)定有利于對(duì)其進(jìn)行質(zhì)量控制[4]。我們發(fā)現(xiàn),按照2020 版《中國(guó)藥典》(四部通則0401)中收載的方法測(cè)定紫草中羥基萘醌總色素的含量時(shí),對(duì)檢測(cè)條件的要求過(guò)于寬泛,測(cè)定條件不夠細(xì)化,因此導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果存在較大差異。近年來(lái),我們?cè)跍y(cè)定紫草中羥基萘醌總色素的含量時(shí)細(xì)化了測(cè)定條件,提高了藥材含量測(cè)定的穩(wěn)定性,有利于藥材的質(zhì)量控制。
本研究的結(jié)果證實(shí),藥粉細(xì)度是影響紫草中羥基萘醌總色素含量測(cè)定的主要因素,其次為藥粉干燥時(shí)間和藥粉含水量。將藥材粉碎成極細(xì)粉、在50℃下干燥3 h、將藥粉的含水量控制在9.0% 左右是測(cè)定紫草中羥基萘醌總色素含量的最佳條件。