周麗麗 徐 皓

（長春市食品藥品檢驗中心，吉林 長春 130000）

近年來，中醫(yī)學(xué)在臨床治療中得到越來越多的應(yīng)用，傳統(tǒng)中藥、中成藥相關(guān)質(zhì)控工作越來越受重視。落新婦根為虎耳草科植物落新婦的根莖，味辛、性溫。中醫(yī)理論中本品有散瘀鎮(zhèn)痛、清熱解毒之效，常用于治療跌打損傷、蛇毒咬傷、風(fēng)熱感冒等[1]?，F(xiàn)代藥理學(xué)分析指出，落新婦根藥材中主要有效成分為巖白菜素，對此落新婦根藥材質(zhì)控主要圍繞巖白菜素開展[2]。目前，常規(guī)中藥材質(zhì)控方法包括薄層色譜鑒別、高效液相色譜法等，通過定性定量分析對藥材質(zhì)量進行有效把控[3]。但臨床關(guān)于落新婦根藥材內(nèi)巖白菜素質(zhì)控研究尚少。本文為進一步探索相關(guān)質(zhì)控方法，使用薄層色譜法及高效液相色譜法對落新婦根完成質(zhì)控研究，以期為相關(guān)質(zhì)控工作提供理論指導(dǎo)，具體如下。

1 材料及設(shè)備

美國Agilent 1260高效液相色譜儀，梅特勒電子分析天平，精度為0.1 mg，型號MS105DU；上海超聲波儀器廠生產(chǎn)的CQ-250超聲清洗器；蘇州南光電子科技有效公司提供的XP-213型顯微鏡；對照品巖白菜素為中國食品藥品檢測研究院提供；硅膠為青島海洋化工廠提供；水為實驗室自備蒸餾水。以甲醇作為色譜純，其他各種試劑作為分析純。落新婦根藥材為吉林省地區(qū)范圍內(nèi)采集。

2 方法及結(jié)果

2.1 落新婦根的薄層色譜鑒別 取10批落新婦根各1 g，研磨至粉末狀各置于有塞試管內(nèi)，每個試管中加入甲醇10 mL，浸泡≥12 h后完成過濾，取適量濾液作為樣品溶液，再取巖白菜素對照品，加入適量甲醇配制為0.5 mg/mL溶液，即得對照品溶液。后依照薄層色譜法將對照品溶液及樣品溶液各取5 μL，分開點在同一硅膠G薄板上，以三氯甲烷（CHCl3）-乙酸乙酯（C4H8O2）-甲醇（CH3OH）（5∶4∶2）作為展開劑，展開至11 cm后取出，靜置晾干后噴以濃度為1%混合溶液[濃度為1%鐵氰化鉀+濃度為1%三氧化鐵（比例1∶1）]進行顯色，于正常陽光下檢視，觀察本次供試品色譜與對照品色譜相同位置均呈現(xiàn)出同樣的藍色斑點。

2.2 供試品溶液制備方法 精密稱取樣品粉末（過三號篩）0.1 g，置于50 mL量瓶內(nèi)，加入30%的甲醇適量，超聲0.5 h后常規(guī)室溫下放冷，再加入30%甲醇稀釋至刻度，搖勻后，棄去初濾液，收集續(xù)濾液，使用濾孔為0.45 μm濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.3 色譜條件 使用日本島津公司所生產(chǎn)的色譜柱，規(guī)格為4.6 mm×150 mm，5 μm，二極管陣列檢測器，檢測波長設(shè)置為275 nm以甲醇-水，比例20∶80為流動相，流速控制為1.0 mL/min，控制柱溫30 ℃，進樣量控制在20 μL。

2.4 線性關(guān)系研究 精密量取巖白菜素對照品溶液1 mL、2 mL、4 mL、8 mL、10 mL分別置入5個10 mL量瓶內(nèi)，加30%甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密吸取5個量瓶中溶液各20 μL，逐次注入高效液相色譜儀，并逐次完成測定，設(shè)峰面積為縱坐標(biāo)，設(shè)對照品濃度作為橫坐標(biāo)完成曲線回歸，計算后所獲得回歸方程為：Y=28159x+50585，r=0.9999，表明在0.025～0.250 mg/mL濃度范圍內(nèi)巖白菜素對照平與峰面積有良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度實驗 精密吸取同一供試品溶液，進樣次數(shù)控制為6次，每次進樣量保持10 μL，完成測定后求得其峰面積積分值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.43%，表明進樣精密度較高。

2.6 穩(wěn)定性實驗 取同一供試品溶液，選取0 h、3 h、6 h、9 h、12 h時間取樣10 μL，注入液相色譜分析儀完成含量測定，計算得相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.1%，表明供試品溶液與在12 h內(nèi)相對穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性實驗 取同一批樣品，依照此前2.2中記錄供試品制備方法制備6份供試品溶液，測得溶液巖白菜素含量為7.991 mg/g，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.8%，表明重復(fù)良好。

2.8 加樣完成回收率實驗 精密稱取已確定巖白菜素含量的藥材樣品10份，各加入巖白菜素對照品1 mg，依照前文2.2中供試品相關(guān)制作方法制備所需回收率供試品溶液，其測定結(jié)果見表1。2.910批樣品含量測定 取10批落新婦根樣本以上述2.2所述供試品溶液制作方法制備，測定其巖白菜素含量，具體結(jié)果見表2。

表1 本次加樣回收試驗結(jié)果

表2 10批樣品含量測定結(jié)果

3 討 論

醫(yī)藥質(zhì)控作為臨床醫(yī)藥質(zhì)量監(jiān)督的重中之中，質(zhì)控環(huán)節(jié)明確受檢藥物的有效成分含量是確保該批藥材具有臨床使用價值，保障患者入院可獲得有效治療的前提。近年來，我國中醫(yī)藥被廣泛用于臨床，相關(guān)中藥質(zhì)控工作越來越受重視[4]。落新婦根作為臨床常用中藥材，在多種疾病治療中可起到良好的治療效果。本藥的主要成為巖白菜素，關(guān)于本藥材的質(zhì)控活動即需圍繞巖白菜素檢測開展定性定量研究[5]。

目前，各類藥品質(zhì)控活動中定性定量研究方法較多。如紙層析技術(shù)具有快速、簡便等優(yōu)點，在多種中藥成分的分離中具良好應(yīng)用效果；柱層析為去除提取物中糖、礦物質(zhì)等成分的有效方法；薄層分析則是質(zhì)控活動中常用于分離藥材之中有效成分的傳統(tǒng)且普遍的方法之一，也是目前定性分析中主要方法；高效液相色譜法在多種中藥有效成分定量分析中有著分析時間短、分辨率高且無熱分解的優(yōu)點；高速逆流色譜法作為一種無載體液液分配色譜，在分離柱內(nèi)無須加入固態(tài)載體，可有效排除載體對分離過程的影響；光譜分析法具有鑒別速度快等優(yōu)點[6-8]。

落新婦根內(nèi)有效成分巖白菜素的定性定量研究較少，在如何確定定性定量方法上依然需要深入摸索[9-12]。對此本文以薄層色譜法與高效液相色譜法作為定性定量方法，對巖白菜素進行定性定量分析，結(jié)果提示薄層色譜法在落新婦根定性分析中，供試品與對照品均呈現(xiàn)藍色斑點。本文所采取的展開劑及其他薄層色譜條件較為合理，而薄層色譜法在落新婦根藥材巖白菜素的定性分析中具有精準(zhǔn)定性效果。

高效液相色譜法是目前應(yīng)用最廣的定量分析方法。相關(guān)文獻在關(guān)于巖白菜素的高效液相色譜法的研究中指出，對比30%乙醇、95%乙醇、60%甲醇，濃度在30%的甲醇作為提取溶劑可獲得最佳檢測效果，在此條件下檢測的巖白菜素含量較其他提取溶劑顯著更高。本次研究遂采用30%甲醇作為提取溶劑進行定量分析，而在檢測波長的選取環(huán)節(jié)，巖白菜素藥典內(nèi)推薦波長為275 nm，經(jīng)研究驗證在此波長處巖白菜素達到最大吸收，遂選取275 nm為本次檢測波長。后續(xù)實驗環(huán)節(jié)依次進行精密度實驗、穩(wěn)定性實驗、重復(fù)性實驗、回收率實驗，實驗結(jié)果提示為本次所用定性定量分析法具有較高準(zhǔn)確性、可重復(fù)性、回收率高的優(yōu)點。

綜上所述，在落新婦根巖白菜素的定性定量分析中，采用薄層色法及高效液相色譜法具有多重優(yōu)點，具體操作方案可以本次操作方法為指導(dǎo)，用于落新婦根藥品質(zhì)量監(jiān)控。