楊歆 劉瓊

【摘要】目的：測評結(jié)核分枝桿菌（MTB）γ-干擾素（γ-IFN）釋放試驗（IGRAs）用于結(jié)核感染疾病診斷中的價值。方法：選擇2018年10月至2019年12月期間在我院就診的88例MTB感染患者，其中痰涂陽性肺結(jié)核32例（甲組）、痰涂陰性肺結(jié)核38例（乙組）與單純結(jié)核性胸膜炎18例（丙組），取同期健康體檢志愿者45例（空白組），以受試者均進行IGRAs與TB-DNA檢測，統(tǒng)計試驗檢測情況。結(jié)果：甲組、乙組、丙組及空白組IGRAs陽性率分別為87.50%、68.42%、50.00%、4.44%，差異存在統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；對比不同分型結(jié)核菌感染內(nèi)痰涂片與TB-DNA檢出陽性率，未見顯著性差異（P>0.05）；IGRAs的敏感性、特異性分別為90.91%、77.27%，和PPD皮試76.14%、52.27%相比較，存在顯著性差異（P<0.05）。結(jié)論：結(jié)核感染臨床檢查診斷中配合使用IGRAs，表現(xiàn)出較高的診斷價值，值得普及推廣。

【關(guān)鍵詞】結(jié)核感染；γ-干擾素；釋放試驗；診斷價值

[中圖分類號]R52；R446.5 [文獻標識碼]A [文章編號]2096-5249（2021）13-0153-02

MTB能以呼吸道、消化道與破損皮膚等為載體感染機體，可能還會導(dǎo)致多種臟器組織的結(jié)核病。結(jié)核病診斷始終是本病防治領(lǐng)域中的一大難題，結(jié)核培養(yǎng)與涂片抗酸染色為診斷結(jié)核的“金標準”，但暴露出培養(yǎng)周期長、靈敏度偏低、假陰性率偏高的不足[1]。肺外結(jié)核因完整標本獲得困難或載菌量偏低等，構(gòu)建病原學(xué)診斷的概率偏少，進一步增加結(jié)核感染診斷及鑒別診斷的難度，增加漏診、誤診率，很可能使患者錯過最佳治療時機。IGRAs能激活CD4+、CD8+T細胞產(chǎn)生的MTB，進而定性判斷其是否存在著MTB感染，為結(jié)核病臨床診治提供較可靠的支持[2]。為明確IGRAs診斷MTB感染的價值，本課題研究納入了88例MTB感染患者與45例健康體檢志愿者資料，均進行了IGRAs檢測，針對具體情況作出如下報告分析。

1 資料與方法

1.1一般資料 選擇2018年10月至2019年12月期間在我院就診的88例MTB感染患者，45例健康體檢者資料進行分析，參照結(jié)核類型把88例患者分為三組：甲組32例中男女比17： 15，年齡22～74歲，平均年齡（54.1±5.6）歲；乙組38例內(nèi)男女比1： 1，年齡21～75歲，平均年齡（55.7±5.0）歲；丙組18例中男女比11： 7，年齡20～77歲，平均年齡（56.7±5.9）歲?？瞻捉M45例中男女比8： 7，年齡19～77歲，平均年齡（55.8±6.0）歲。以上受試者基線資料兩兩比較后，均無顯著性差異（P>0.05）。MTB感染者均有確診診斷[3]，均有進行IGRAs的指征，排除HIV感染、并發(fā)糖尿病、免疫抑制劑用藥史、孕期婦女。肺部有典型結(jié)核病灶，且痰涂片找抗酸桿菌陽性即為痰涂陽性患者；肺部有典型結(jié)核病灶，但痰涂片找抗酸桿菌陰性即為痰涂陰性患者；肺部無典型結(jié)核病灶，僅一側(cè)或雙側(cè)胸腔積液，抽取胸水完善檢查明確胸水性質(zhì)為結(jié)核性者為單純結(jié)核性胸膜炎患者。

1.2方法 ①IGRAs：MTB感染者于次日晨起空腹狀態(tài)下抽取4 mL肘靜脈血，空白組于體檢當日抽取4 mL靜脈血，分別安放于兩支抗凝管內(nèi)，P、T、N管內(nèi)分別添加植物血凝素、培養(yǎng)濾過蛋白10（CFP-10）、生理鹽水，以上三管依次作為陽性對照、試驗刺激管、空白對照管。把三管均安放于37℃恒溫水浴箱內(nèi)，連續(xù)培養(yǎng)24h，分離后予以12 min的離心處理，4800r/min，分離血清后提取上層血清，采用ELISA試驗檢測MTB。②痰結(jié)核分枝桿菌核酸（TB-DNA）： 采集受試者血清（EDTA抗凝管，室溫條件下3000r/min離心10 min， 取上層清液），嚴格依照磁珠法核酸提取說明書提取DNA，針對提取的DNA樣本量安放于-20℃冰箱內(nèi)保存，備用。利用MTB DAN熒光定量PCR完成擴增，配合使用PE7500分析軟件設(shè)定基線和閾值，建設(shè)標準曲線，每個標準店均要重復(fù)兩次，觀察曲線的斜率與相關(guān)系數(shù)，通過斜率計算出擴增效率。

1.3觀察指標 痰涂陽性結(jié)核：結(jié)核痰涂片陽性結(jié)果，結(jié)核相關(guān)臨床癥狀與影像學(xué)表現(xiàn)，而后對結(jié)核病作出診斷。痰涂陰性結(jié)核：符合如下≥3項時就預(yù)示著臨床診斷成立：①出現(xiàn)經(jīng)典的肺結(jié)核臨床癥狀與肺CT表征；②能剔除他類非結(jié)核性肺疾??；③PPD或抗結(jié)核抗體顯陽性；④確診經(jīng)抗結(jié)核方案醫(yī)治有效。檢測效能；分別記錄兩組檢測方法對肺結(jié)核病診斷的敏感性、特異性、準確性。

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 用SPSS16.0軟件包處理數(shù)據(jù)，x±s表示計量資料；率（%）表示計數(shù)資料，c2檢驗。檢驗水準為c2=0.05。

2 結(jié)果

2.1IGRAs檢測情況 四組受試者都完成了IGRAs檢測，甲組、乙組、丙組及空白組IGRAs陽性檢出分別有28例、26例、9例、2例，占比依次為87.50%（28/32）、68.42%（26/38）、50.00%（9/18）、4.44%（2/45），比較不同分組受試者IGRAs陽性率，差異存在著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。比較兩組肺結(jié)核患者血IGRAs與痰TB-DNA陽性檢出率后，確認其無顯著性差異，詳見表1。

2.2兩種不同方法的檢測情況 IGRAs與PPD皮試方法的陽性檢出率分別為90.91%（80/88）、89.77%（79/88）。兩種方法對結(jié)核病的診斷準確率差異不顯著，IGRAs檢測的敏感度、特異性更高于PPD皮試法，有統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。詳見表2。

3 討論

結(jié)核病是由MTB感染引起的，呼吸道傳播是人群傳播的主要途徑，解除排菌的肺結(jié)核患者是主要的傳染源。MTB可以侵犯機體周身各個器官，以肺臟為主，腦膜、腹膜、骨骼等也有繼發(fā)感染的可能。在環(huán)境污染、個體免疫機能降低等諸多因素作用下，近些年結(jié)核病致死人員有增加趨勢，WHO預(yù)算[4]，2017年全球結(jié)核病潛伏感染17億人，結(jié)核病發(fā)病率為133/10萬，結(jié)核病致死157萬人。除了少數(shù)是急性起病之外，臨床上結(jié)核病發(fā)病通常是慢性進展性的，患者經(jīng)常有低熱、乏力等全身性癥狀與咳嗽、咯血等呼吸系統(tǒng)表現(xiàn)，一些結(jié)核病也可能沒有癥狀。藥物療法是當下治療結(jié)核病的重要手段之一，本病治療周期相對較漫長，針對活動性結(jié)核患者，通常需要連續(xù)用藥6～9月。

盡早對結(jié)核病作出正確診斷，進而采用規(guī)范化對癥治療，能盡早減輕或消除疾病癥狀體征，促進病情康復(fù)，改善患者生命健康質(zhì)量?，F(xiàn)如今，臨床可供選擇診斷結(jié)核感染的方法手段較多，其中細菌性培養(yǎng)為診斷本病的“金標準”，但其敏感性較低并且會耗用較長時間，在診斷肺外結(jié)核病方面不占優(yōu)勢，影像學(xué)、MTB抗體檢查、分子診斷等方法在應(yīng)用過程中均有一定局限性[5]。故而，臨床繼續(xù)探尋一種靈敏度高、特異性強的方法，盡早在結(jié)核感染發(fā)病早期作出準確診斷。

IGRAs是最近幾年中開發(fā)出的一種新型免疫學(xué)方法，其能對MTB感染快速作出診斷。原理可以做出如下闡述：人體在感染MTB以后，體內(nèi)就存在了特異的記憶T淋巴細胞，其于體外再次受到CFP-10等 MTB特異抗原刺激作用時，便會快速分泌于釋放出γ-IFN，這樣我們便可以通過檢測γ-IFN水平，進而感知機體對MTB表現(xiàn)出的免疫應(yīng)答狀態(tài)，進而對機體是否出現(xiàn)MTB感染作出科學(xué)判斷[6]。在本次研究中，甲組、乙組、丙組及空白組IGRAs陽性率分別為87.50%、68.42%、50.00%、4.44%，數(shù)據(jù)差異較為顯著，存在統(tǒng)計學(xué)意義。而比較兩組肺結(jié)核患者血IGRAs與痰TB-DNA陽性檢出率后，確認其無顯著性差異。另外，本次課題研究中IGRAs檢測時采用了國產(chǎn)TB-IGRA是新鮮外周全血直接刺激培養(yǎng)，對實驗室設(shè)備沒有提出特別要求，CFP-10試劑為致病性特有但卡介疫苗沒有的片段，其能較準確的辨識真性結(jié)核感染，解除BCG接種等方法形成的干擾。統(tǒng)計研究結(jié)果，IGRAs的敏感性、特異性分別為90.91%、77.27%，均高于PPD方法下的76.14%、52.27%，均形成較明顯的差異，這間接的提示IGRAs是結(jié)核病診斷“金標準”之外的一個十分有效的輔助診斷方法[7]。并且TB-IGRA試劑在成本方面占據(jù)優(yōu)勢，能為我國基層醫(yī)院診斷MTB感染提供一個有力、可靠工具。試劑有操作流程簡單、迅速特征，24h便可出報告，為早發(fā)現(xiàn)、診治結(jié)核病提供較科學(xué)依據(jù)[8]。

綜合全文論述內(nèi)容，IGRAs用于診斷MTB感染表現(xiàn)出較高的敏感度與特異性，能幫助臨床醫(yī)生盡早發(fā)現(xiàn)結(jié)核病，為診療方案制定工作提供較科學(xué)依據(jù)，可見其有較高的普及與推廣價值。

參考文獻

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基金項目：衡陽市科技計劃項目“肺部高分辨率CT、IFN-γ釋放試驗、痰TB-DNA在肺結(jié)核中的診斷價值比較”（編號：S2018F9031021259）

作者簡介：楊歆（1984.08-）， 女， 研究生， 主治醫(yī)師， 研究方向：常見傳染病的臨床診治；

*通信作者：劉瓊（1986.08-），女，碩士，主治醫(yī)師，研究方向：病毒性肝炎、結(jié)核病的診治。E_mail：drliuqiong@163.com