杜金龍，羅 瑜，譚延國△，張 巖，胡 景，劉淑梅，杜海燕，唐春燕，董一紅，田 野，李卓敏，翟翠靜，陳偉東，邊洪禹，王 英，丁瑞恒

1.首都醫(yī)科大學附屬復興醫(yī)院檢驗科，北京100038；2.首都醫(yī)科大學臨床檢驗診斷學系，北京100038；首都醫(yī)科大學附屬復興醫(yī)院:3.消化內(nèi)科;4.病理科;5.腎內(nèi)科，北京100038

幽門螺桿菌(Hp)感染與胃潰瘍、胃癌、萎縮性胃炎、胃黏膜相關淋巴組織淋巴瘤等高度相關[1]。若患者證實有Hp感染，則推薦行根除治療[2]。但由于我國人口基數(shù)大，全部進行根除治療并不現(xiàn)實，通常要結合具體病情與其他風險因素再決定是否采取治療及如何治療，且評估方法和治療方案仍在探索[3]。加之人群中Hp自然感染率頗高(我國平均為50%左右)，故加大篩查力度非常重要。目前，Hp檢測“金標準”包括糞便Hp抗原(Hp-Ag)檢測、胃組織切片染色鏡檢法、13C呼氣試驗[4]，目前以13C呼氣試驗最常用，另外，還可測定血液中的Hp抗體(Hp-Ab)[5]。但13C呼氣試驗存在需服藥、檢測通量小、檢驗前質(zhì)量控制難度高、實驗過程中易傳播呼吸道病原體等缺點[6]，而糞便Hp-Ag檢測不但克服了上述缺點，同時具有很好的檢測效能。目前，糞便Hp-Ag檢測的普及率不高，且大多數(shù)以定性形式給出結果[7-8]，尚未實現(xiàn)定量或半定量。Hp-Ag半定量檢測的結果與Hp菌量、病理組織的嚴重程度、年齡、發(fā)病風險的關系，尚有待進一步研究。本研究擬對商用糞便Hp-Ag測定試劑盒做適當改良，使用膠體金免疫層析分析儀測定Hp陽性者條帶的灰度值，作為半定量的依據(jù)，評估Hp-Ag半定量檢測與其他Hp檢測方法的性能，以及上述關切的問題。

1 資料與方法

1.1一般資料 選取2020年11月至2021年5月共363例消化科患者和健康體檢者，其中男214例，女149例，年齡27～96歲，中位年齡59歲，分為如下3組，第1組：消化科就診患者，同時行Hp-Ag半定量檢測、胃組織切片染色鏡檢法23例；第2組：消化科就診患者，同時行Hp-Ag半定量檢測、13C呼氣試驗63例；第3組：健康體檢并接受隨訪者，同時行Hp-Ag半定量檢測和Hp-Ab檢測277例。

1.2儀器與試劑 膠體金酶聯(lián)免疫分析儀(廣西埃韋迪生物科技有限公司)、HCBT-01全智能紅外光譜分析儀與配套13C-UBT試劑盒(深圳中核海德威生物科技有限公司)、Hp-Ag測定試劑盒(膠體金法)(北京金沃夫生物工程有限公司)、血清Hp抗體試劑盒(膠體金法)(北京康美天鴻生物科技有限公司)、硼酸亞甲藍染液(福州邁新生物技術開發(fā)公司)，10%甲醛溶液、石蠟、載玻片、二甲苯、95%乙醇、75%乙醇。

1.3方法

1.3.1糞便Hp-Ag半定量檢測 用取樣棒取50 mg標本，插入樣品處理管中充分搖勻，滴加2～3滴樣品液至膠體金反應板的加樣孔中。反應15 min，將反應板條插入膠體金免疫層析分析儀中，讀取灰度值并記錄。判定標準：陽性為質(zhì)控線和檢測線均呈現(xiàn)紅色線條，且檢測線灰度值≥15；檢測線灰度值<15則為陰性；無效為質(zhì)控線無紅色線條。

1.3.2胃組織切片染色鏡檢法 用石蠟固定的2～3 mm胃組織，常規(guī)制備石蠟切片。染色前用二甲苯脫石蠟20 min，再用95%乙醇與75%乙醇梯度清洗殘留的二甲苯后，用Hp硼酸亞甲藍染色液染色3 min沖洗、晾干，顯微鏡下閱片至少10個高倍視野，并記錄平均高倍視野的細菌數(shù)。

1.3.313C呼氣試驗 向第1個氣袋內(nèi)吹氣后蓋緊袋口；口服1粒尿素13C膠囊，靜坐30 min；向第2個氣袋內(nèi)吹氣后蓋緊袋口。將氣袋分別放于紅外光譜分析儀上進行13C測定。13C-DOB>4.0判斷為Hp陽性。

1.3.4Hp-Ab檢測 采集空腹靜脈血2 mL，分離血清。按說明書要求測定Hp-Ab；結果判定以說明書的判定規(guī)則為準，測試條帶比對膠體金分析比色卡，判定顯色的程度并記錄數(shù)值。

2 結 果

2.1糞便Hp-Ag半定量檢測與胃組織切片染色鏡檢法的效能比較 在第1組中，兩種“金標準”方法任一陽性者為真陽性，共檢出13例陽性。Hp-Ag半定量檢測檢出率為56.52%(13/23)，靈敏度為100.00%(13/13)；胃組織切片染色鏡檢法的檢出率為47.83%(11/23)，平均菌量為25.8個/高倍視野，靈敏度為84.61%(11/13)，兩種方法的符合率為91.3%，檢出率比較差異無統(tǒng)計學意義(P=0.50)。Hp-Ag半定量檢測陽性標本的灰度值與胃組織切片染色鏡檢法Hp菌量高度符合3次擬合曲線關系(r=0.898，P<0.05)，見圖1。

圖1 糞便Hp-Ag半定量檢測灰度值與胃組織切片染色鏡檢法Hp菌量之間的擬合曲線

2.2糞便Hp-Ag半定量檢測與13C呼氣試驗的效能比較 在第2組中，兩種“金標準”方法任一陽性者為真陽性，共檢出35例陽性。Hp-Ag半定量檢測檢出率為53.97%(34/63)，靈敏度為97.14%(34/35)；13C呼氣試驗檢出率為34.92%(22/63)，靈敏度為62.86%(22/35)，兩種方法符合率為77.78%，兩種方法檢出率比較差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。Hp-Ag半定量檢測陽性標本的灰度值與13C呼氣試驗的DOB值之間符合線性相關關系(r=0.289,P<0.05),見圖2。

圖2 糞便Hp-Ag半定量檢測灰度值與13C呼氣試驗DOB值間相關性

2.3糞便Hp-Ag半定量檢測與Hp-Ab檢測的效能比較 第3組受試者中，Hp-Ag半定量檢測、Hp-Ab檢測的檢出率分別為48.38%(134/277)、49.82%(138/277)，聯(lián)合檢出率為63.53%(176/277)，兩種方法符合率為71.2%,檢出率比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。Hp-Ag半定量檢測陽性標本的灰度值與Hp-Ab比色卡判定值之間符合對數(shù)擬合曲線關系(r=0.125,P<0.05)。

2.4健康體檢人群Hp-Ag半定量檢測結果與年齡的關系 277例健康體檢人群Hp-Ag的總體檢出率為48.38%，27～40歲、>40～60歲、>60～96歲人群分別為47.06%(16/34)、54.55%(48/88)、45.16%(70/155)。陽性者中灰度值分布在15～50、>50～200、>200～600、>600者分別占28.36%、38.06%、25.37%、8.21%。Hp-Ag陽性的27～40歲人群，其灰度值在>50～200的比例明顯高于其他年齡段(62.50%vs.43.75%,28.57%，P<0.05)；在年齡27～40歲與>40～60歲的人群中，Hp-Ag陽性人群的灰度值在>50～200的比例最高(P<0.05)，而>60～96歲的人群中，Hp-Ag陽性人群的灰度值在各區(qū)間的比例比較，差異無統(tǒng)計學意義(P=0.168)。見表1。

3 討 論

本研究結果顯示，糞便Hp-Ag半定量檢測與胃組織切片染色鏡檢法對Hp的檢出率比較，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。Hp-Ag半定量檢測對Hp的檢出率明顯高于13C呼氣試驗,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)?？梢娮鳛榉乔秩胄詸z查的Hp-Ag半定量檢測，可替代胃組織切片染色鏡檢法及13C呼氣試驗。

Hp-Ag半定量檢測的檢出率明顯高于13C呼氣試驗，這與部分文獻報道不符[9-10]。其可能的原因：尿素酶可能會受到藥物的影響，通過改變胃環(huán)境或者抑制Hp菌株生長繁殖而導致13C呼氣試驗結果出現(xiàn)假陰性或假陽性,13C呼氣試驗還可能受胃腸道動力或胃結構的影響，而造成假陰性或假陽性結果等[11-12]。

本研究通過改良Hp-Ag試驗結果的判定方式，所得到半定量的灰度值結果與胃組織切片鏡檢平均每高倍視野的細菌數(shù)量存在相關性，而13C呼氣試驗與菌量間無相關性。這也為將來通過Hp-Ag半定量的結果估算個體攜帶的Hp菌量、判定發(fā)病風險、觀察藥物干預的治療效果提供重要依據(jù)[13]。

本研究發(fā)現(xiàn)，Hp-Ag半定量檢測與Hp-Ab檢測具有非常高的互補性，二者聯(lián)合檢測可將健康體檢人群Hp的檢出率由各自的48.38%與50.18%提升至63.53%。二者具有互補性的原因可能為：Hp感染初期，Hp-Ag呈陽性而Hp-Ab尚未產(chǎn)生；部分重癥患者免疫力低下，導致Hp-Ab產(chǎn)生少；藥物已經(jīng)根除Hp，Hp-Ag轉陰，但Hp-Ab仍可持續(xù)6個月以上[14]。故建議二者聯(lián)合檢測，同時分析Hp-Ag與Hp-Ab的結果，可以明顯提升Hp的檢出率。

本研究中，Hp在健康體檢人群中的檢出率為48.38%，與我國平均感染率基本相符。進一步分析顯示，>40～60歲人群中Hp檢出率最高，達到54.55%，Hp感染很難自愈，一旦感染如不治療將終身受累。關于攜帶的Hp菌量，由Hp-Ag半定量檢測的灰度值判定，青、中年大部分陽性者以低、中菌量為主，>60歲陽性者，則以中、高菌量為主。其原因可能與老年患者免疫力低下，胃部組織供血不足等原因?qū)е麦w內(nèi)清除Hp能力降低有關[15]。

Hp-Ag半定量檢測的靈敏度優(yōu)于13C呼氣試驗和胃組織切片染色鏡檢法，且Hp-Ag半定量檢測灰度值能準確地反映胃部Hp的帶菌量。另外Hp-Ag半定量檢測與Hp-Ab檢測具有較好的互補性，二者聯(lián)合檢測可提高Hp檢出率。