周 媛，孫璐璐#，宋佳星，劉 勇，安倍瑩，陳立國，柴劍男，尹 磊，許建成△

吉林大學(xué)第一醫(yī)院:1.檢驗(yàn)科;2.基因診斷中心，吉林長春 130021

按照吉林省新型冠狀病毒肺炎(COVID-19)疫情防控統(tǒng)一部署要求，2021年1月17日起，吉林省新型冠狀病毒核酸檢測隊175名隊員隨同8輛移動微生物檢測車奔赴通化市，助力當(dāng)?shù)匾咔榉揽?。核酸檢測隊連夜選址、布電、安裝調(diào)試設(shè)備及軟件、調(diào)配物資、確認(rèn)樣本處理環(huán)境和更衣環(huán)境、現(xiàn)場培訓(xùn)、制作標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程、完成預(yù)實(shí)驗(yàn)等。與固定場所實(shí)驗(yàn)室相比，移動檢測車有較高的機(jī)動性，可實(shí)現(xiàn)即達(dá)即檢。本文總結(jié)在通化市使用移動微生物檢測車進(jìn)行新型冠狀病毒核酸檢測的工作經(jīng)驗(yàn)，以期為未來使用移動微生物檢測車對突發(fā)公共衛(wèi)生事件的遠(yuǎn)程應(yīng)急支援核酸檢測提供參考。

1 移動微生物檢測車介紹

1.1移動微生物檢測車基本情況 移動微生物檢測車由吉林省衛(wèi)生健康委員會聯(lián)合遼源市汽車改裝有限公司設(shè)計制造，包括兩種型號。LYF9350XJC-HS型車廂長13.61 m，寬2.55 m，高2.75 m。LYF5181XJC-HS型車廂長9.85 m，寬2.55 m，高2.75 m。檢測車由解放牌汽車底盤承載，車體結(jié)構(gòu)為鍍鋅鋼管拼焊組成，形成全承載結(jié)構(gòu)。外蒙皮及地板均為2 mm厚304不銹鋼制作，雙層保溫材料。全車分為3個試驗(yàn)區(qū)和3個緩沖區(qū)，試驗(yàn)區(qū)與緩沖區(qū)的氣密門互鎖，每個緩沖區(qū)分別設(shè)門與室外相通。車內(nèi)潔凈度等級為7級。車內(nèi)裝有不間斷電源，并有加熱、制冷、加濕、除濕功能。

1.2駐車場地選擇與水電供應(yīng) 移動微生物檢測車需在380 V電壓下運(yùn)行，加之生物安全管理要求，本次駐車環(huán)境選擇遠(yuǎn)離市區(qū)且具備380 V電源的固定場所。移動微生物檢測車未配備電力保障車，但筆者建議在野外工作時，應(yīng)配備電力保障車，以確保移動微生物檢測車的供電。為避免人為破壞或誤入，當(dāng)?shù)毓膊块T派遣警力在場外維持秩序。駐車場地選擇靠近周邊建筑物的場所，以利于從建筑物中取水以供應(yīng)移動微生物檢測車。

1.3車內(nèi)實(shí)驗(yàn)室布局 移動微生物檢測車的分區(qū)、各區(qū)內(nèi)部壓力等與固定實(shí)驗(yàn)室相似，但各區(qū)面積均大大減少，導(dǎo)致人員及設(shè)備配置受限。為提高檢測能力，共派遣8輛移動微生物檢測車支援通化，通過整合與優(yōu)化人員、設(shè)備、流程等方式提高工作效率。

LYF5181XJC-HS型及LYF9350XJC-HS型差異在于整車實(shí)驗(yàn)室空間和儀器設(shè)備數(shù)量不同。兩種型號移動微生物檢測車的實(shí)驗(yàn)室均劃分為3個試驗(yàn)區(qū)：試劑準(zhǔn)備區(qū)(Ⅰ區(qū))、樣本制備區(qū)(Ⅱ區(qū))、擴(kuò)增檢測區(qū)(Ⅲ區(qū))，每區(qū)均設(shè)置緩沖間。以LYF5181XJC-HS型(圖1)為例，緩沖間進(jìn)深0.6 m。樣本先送至Ⅱ區(qū)緩沖間，再進(jìn)入Ⅱ區(qū)。Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)、Ⅲ區(qū)的面積分別不少于4 m2、10 m2、4 m2。各區(qū)內(nèi)部壓力符合加強(qiáng)型二級生物安全實(shí)驗(yàn)室要求，Ⅱ區(qū)為核心工作間，壓強(qiáng)為-10 Pa，Ⅰ區(qū)及Ⅲ區(qū)壓強(qiáng)均為0 Pa。各區(qū)之間通過傳遞窗傳遞物品。Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)和Ⅲ區(qū)均有水池，可用于配制含氯消毒液，水池下方設(shè)有可更換廢液桶。Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)和Ⅲ區(qū)車頂設(shè)置換氣裝置，Ⅱ區(qū)設(shè)有應(yīng)急門通往車外。各區(qū)的區(qū)域、儀器設(shè)備等標(biāo)識清晰。

1.4車內(nèi)主要儀器設(shè)備清單 主要儀器設(shè)備由各家醫(yī)療機(jī)構(gòu)采購，提前安裝到位。移動微生物檢測車與固定實(shí)驗(yàn)室的主要儀器設(shè)備種類相似，但受空間限制，其儀器設(shè)備數(shù)量無法擴(kuò)增。以LYF5181XJC-HS型移動微生物檢測車為例：Ⅰ區(qū)主要儀器設(shè)備包括超凈工作臺1臺，醫(yī)用冰箱1臺(-20 ℃，存放擴(kuò)增試劑)，振蕩器及掌式離心機(jī)各1臺，移動式紫外線消毒車1臺，5～50 μL可調(diào)8通道移液器1把，單通道移液器組合(1～20 μL、5～50 μL、10～200 μL、200～1 000 μL)1套，移液器架1個，感應(yīng)清洗池等。Ⅱ區(qū)主要儀器設(shè)備包括雙人生物安全柜1臺，96孔全自動核酸提取儀1臺，醫(yī)用冰箱1臺(-20 ℃)，恒溫干燥箱1臺，移動式紫外線消毒車1臺，5～50 μL可調(diào)8通道移液器2把，單通道移液器組合(5～50 μL、10～200 μL、200～1 000 μL)2套，移液器架1個，振蕩器1臺，感應(yīng)清洗池，緩沖區(qū)有高壓蒸汽滅菌器1臺。Ⅲ區(qū)主要儀器設(shè)備包括實(shí)時熒光定量PCR儀2臺，筆記本電腦2臺，移動式紫外線消毒車1臺，掌式離心機(jī)1臺，過氧化氫發(fā)生器1臺，感應(yīng)清洗池等。對講機(jī)4個，每區(qū)1個，檢測車外1個。

注：1為醫(yī)用冰箱；2為超凈工作臺；3為實(shí)驗(yàn)桌；4為感應(yīng)清洗池；5為傳遞窗；6為恒溫干燥箱；7為生物安全柜；8為全自動核酸提取儀；9為高壓滅菌器；10為熒光定量PCR儀。

2 車外空間的利用

移動微生物檢測車未配備更衣區(qū)、樣本接收區(qū)、醫(yī)療垃圾存放區(qū)，在實(shí)際工作中，用帳篷在車外搭建相應(yīng)區(qū)域。更衣區(qū)(準(zhǔn)備區(qū))用于耗材、防護(hù)物資存放及工作人員穿戴防護(hù)用品等，置于移動微生物檢測車前1 m處。醫(yī)護(hù)人員通道位于移動微生物檢測車一側(cè)，樣本接收區(qū)位于移動微生物檢測車另一側(cè)，醫(yī)療垃圾存放處位于樣本接收區(qū)同側(cè)，相距約10 m。存放于帳篷中的醫(yī)療垃圾由當(dāng)?shù)蒯t(yī)療垃圾轉(zhuǎn)運(yùn)車定時轉(zhuǎn)運(yùn)。

3 試劑及其他設(shè)備、耗材的供應(yīng)及儲存

試劑及耗材由當(dāng)?shù)匦l(wèi)生健康委員會提供，種類、規(guī)格等由雙方提前商定。使用國家市場監(jiān)督管理總局批準(zhǔn)有注冊文號的提取試劑和擴(kuò)增試劑，在選擇樣本保存液和核酸提取試劑時，使用試劑盒說明書上建議的配套試劑。依托周邊建筑物，由當(dāng)?shù)匦l(wèi)生健康委員會征調(diào)冰箱1臺，用于暫時存放試劑。確保試劑運(yùn)輸、儲存符合要求。試劑使用前，試劑盒標(biāo)簽等各組分應(yīng)齊全完整，液體無滲漏。當(dāng)?shù)貧鉁囟嘣?20 ℃以下，為克服惡劣天氣影響，每班次應(yīng)根據(jù)工作量一次性從車外臨時征調(diào)的冰箱中取出試劑，分別運(yùn)送至Ⅰ區(qū)和Ⅱ區(qū)緩沖間。根據(jù)工作量，提前2 d將所需的試劑及耗材告知當(dāng)?shù)匦l(wèi)生健康委員會備貨。

4 生物安全管理

根據(jù)移動微生物檢測車分區(qū)的功能與風(fēng)險程度不同，選擇合適個人防護(hù)物品以保護(hù)人員安全。Ⅱ區(qū)人員應(yīng)采取三級生物安全防護(hù)，在移動微生物檢測車外的更衣區(qū)，工作人員應(yīng)穿戴好一次性帽子、醫(yī)用N95口罩、一次性防護(hù)服及隔離衣、一次性鞋套、一次性防水靴套、防護(hù)目鏡、面屏和乳膠手套后，再進(jìn)入車內(nèi)Ⅱ區(qū)進(jìn)行樣本處理工作。Ⅰ區(qū)和Ⅲ區(qū)人員進(jìn)行二級生物安全防護(hù)后經(jīng)相應(yīng)緩沖區(qū)進(jìn)入工作區(qū)。對于樣本的各種操作都應(yīng)在生物安全柜內(nèi)完成。3個試驗(yàn)區(qū)的工作人員應(yīng)在各區(qū)緩沖間內(nèi)脫掉防護(hù)物品，裝入醫(yī)用垃圾袋中。Ⅱ區(qū)的醫(yī)用垃圾在緩沖間內(nèi)高壓蒸汽滅菌器中高壓后，由Ⅱ區(qū)人員取出存放于移動微生物檢測車外的醫(yī)療垃圾存放區(qū)。Ⅰ區(qū)和Ⅲ區(qū)的醫(yī)用垃圾不需高壓處理，由各區(qū)人員運(yùn)送至移動微生物檢測車外的醫(yī)療垃圾存放區(qū)。

84消毒液主要用于試管表面消毒，含氯消毒液主要用于地面消毒，75%乙醇擦拭生物安全柜、臺面和移液器表面。Ⅰ區(qū)、Ⅱ區(qū)和Ⅲ區(qū)產(chǎn)生的廢水量約為1 L/24 h，主要為含氯消毒液，廢液桶裝滿后轉(zhuǎn)交至醫(yī)療垃圾轉(zhuǎn)運(yùn)車集中處理。皮膚被污染物污染時，應(yīng)立即清除污染物，再用一次性吸水材料蘸取0.5%聚維酮碘擦拭消毒3 min以上，使用清水清洗干凈。應(yīng)加強(qiáng)人員培訓(xùn)，按照操作規(guī)程形成規(guī)范良好的操作習(xí)慣；處理樣本時動作要小心輕柔，避免移液器接觸到樣本；實(shí)驗(yàn)過程中所用離心管及吸頭等耗材均應(yīng)一次性使用。

檢測車各區(qū)環(huán)境污染監(jiān)測必不可少。筆者采用空白對照品用于環(huán)境污染評估，將多個空白對照管開蓋放置在提取儀或操作臺面上過夜，放在空白對照孔中進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，對檢測當(dāng)日的環(huán)境進(jìn)行評估。移動微生物檢測車各區(qū)較臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室空間較小，但各區(qū)管理也應(yīng)嚴(yán)格參照臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)嚴(yán)格分區(qū)，各區(qū)域使用的儀器、設(shè)備、耗材應(yīng)專用，不得交叉使用，避免污染。

5 工作流程

5.1Ⅰ區(qū)工作流程 核酸提取及擴(kuò)增試劑配制完畢后，在檢測記錄單上填寫提取和擴(kuò)增試劑的品牌、批號、有效期、配制時間、配制人等信息，將配制好的試劑和檢測記錄單通過傳遞窗傳遞到Ⅱ區(qū)。

5.2Ⅱ區(qū)工作流程 (1)檢測前準(zhǔn)備：由于移動微生物檢測車的空間有限，應(yīng)在開始工作前盡量將本班次使用的耗材準(zhǔn)備好，并擺放在易獲取的位置，以減少不必要的活動。如根據(jù)大致應(yīng)處理的樣本量將吸頭盒的塑料薄膜去除后放在生物安全柜旁，將醫(yī)用垃圾袋擺放在每臺核酸提取儀下面，將記號筆放在觸手可及的位置。(2)檢測流程：樣本由轉(zhuǎn)運(yùn)人員運(yùn)送至移動微生物檢測車附近的樣本接收區(qū)，再由接收人員整理登記后分發(fā)至各檢測車Ⅱ區(qū)緩沖間，由Ⅱ區(qū)工作人員接收。接收時應(yīng)記錄每批次樣本數(shù)量。在樣本架上插入一張寫好編號范圍的卡紙。每96孔板加91個樣本，2個陰性對照、2個空白對照和1個陽性對照。將提取核酸后的樣本按同樣編號加入已有擴(kuò)增試劑的8連管中，然后與檢測記錄單(填好檢測日期、樣本編號、提取核酸完成時間及操作者)傳遞給Ⅲ區(qū)。如Ⅲ區(qū)檢測結(jié)果可疑或陽性，通過對講機(jī)反饋給Ⅱ區(qū)工作人員，立即復(fù)檢該樣本。復(fù)檢時采取雙試劑、雙孔不同板位檢測，雙孔位置為2個空白對照。(3)檢測后處理：所有樣本檢測后應(yīng)按批次的先后順序排列在Ⅱ區(qū)的特定區(qū)域，方便查找。樣本保存24 h后，裝入醫(yī)用垃圾袋封口，置緩沖間內(nèi)的高壓蒸汽滅菌器中高壓121 ℃、20 min后，存放于移動微生物檢測車外的醫(yī)療垃圾存放區(qū)。每24小時用移動式紫外線消毒車照射環(huán)境30 min。在工作區(qū)內(nèi)完成交接班，報告剩余試劑、耗材數(shù)量，核對已收到、已處理、未處理及已報告的樣本數(shù)量。

5.3Ⅲ區(qū)工作流程 在核酸擴(kuò)增前，將8連管低速瞬離，按順序?qū)?連管放入擴(kuò)增儀內(nèi)。擴(kuò)增結(jié)束后，取出反應(yīng)管，不要開蓋，直接裝入醫(yī)療垃圾袋，封好袋口，不需高壓處理。每班工作結(jié)束后，Ⅲ區(qū)工作人員將之運(yùn)送至移動微生物檢測車外的醫(yī)療垃圾存放區(qū)。根據(jù)當(dāng)前最新版新型冠狀病毒感染的肺炎診療方案[1]、新型冠狀病毒感染的肺炎防控方案[2]及2019年新型冠狀病毒核酸檢測專家共識[3]進(jìn)行結(jié)果判讀及解釋。

6 人員分工

共28名檢測隊員負(fù)責(zé)1臺LYF5181XJC-HS型及1臺LYF9350XJC-HS型檢測車，包括領(lǐng)隊1名、檢測人員27名。每名隊員均具備PCR檢測資質(zhì)并熟練掌握核酸提取、核酸擴(kuò)增技術(shù)和生物安全防護(hù)技能。核酸檢測隊下設(shè)5組，技術(shù)組：主要負(fù)責(zé)檢測前的預(yù)實(shí)驗(yàn)，評估檢測試劑性能，以點(diǎn)帶線，對各小組內(nèi)的人員進(jìn)行技術(shù)培訓(xùn)，對進(jìn)入Ⅱ區(qū)的人員進(jìn)行比對試驗(yàn)；設(shè)備組：主要負(fù)責(zé)設(shè)備的搬運(yùn)、安裝及調(diào)試；后勤組：主要負(fù)責(zé)隊員們的試劑、耗材、生活物資供應(yīng)；文控組：負(fù)責(zé)匯總各區(qū)工作流程，制訂出各區(qū)的儀器操作、試劑配制等標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程；宣傳組：搜集現(xiàn)場素材、宣傳報道。

為節(jié)省防護(hù)服穿脫時間、節(jié)約抗疫物資，延長隊員集中休息時間，保證檢測工作銜接，將檢測人員分成3組，每組9名，每班工作8 h。每組負(fù)責(zé)2臺移動微生物檢測車，其中LYF5181XJC-HS型車4名、LYF9350XJC-HS型5名。崗位分配采取1+2+1及1+3+1的模式，即Ⅰ區(qū)1名、Ⅱ區(qū)2或3名、Ⅲ區(qū)1名。共運(yùn)行3臺核酸提取儀，6臺實(shí)時熒光定量PCR儀，即1臺核酸提取儀配比2臺實(shí)時熒光定量PCR儀，該配比可達(dá)到最大檢測能力，即每臺實(shí)時熒光定量PCR儀24 h最大檢測能力為1 000管。根據(jù)核酸篩查的樣本量及送達(dá)時間，隨時調(diào)整輪轉(zhuǎn)班次，盡可能保證隊員休息，避免身心過度透支。

關(guān)注隊員健康，每天測1次體溫，每周做1次新型冠狀病毒核酸檢測，為隊員準(zhǔn)備降壓、止瀉、止痛等必備藥物。領(lǐng)隊加強(qiáng)對檢測人員的心理疏導(dǎo)，通過開展線上黨組織生活會及小組微信群內(nèi)交流、談心等多種方式，為檢測人員減壓、舒緩情緒，使檢測人員保持良好正向心態(tài)。所屬單位在后方做好家屬的心理關(guān)懷和務(wù)實(shí)照顧，使一線人員沒有后顧之憂。檢測隊返程后，隊員在酒店中集中隔離14 d。

7 經(jīng)驗(yàn)、教訓(xùn)與展望

本隊接管的移動微生物檢測車在出發(fā)當(dāng)天才完成裝配和調(diào)試。國內(nèi)鮮見使用移動微生物檢測車的報道，故沒有經(jīng)驗(yàn)可借鑒。為使移動微生物檢測車到達(dá)現(xiàn)場后即可開展工作，核酸檢測隊提前與當(dāng)?shù)卣靶l(wèi)生健康委員會進(jìn)行溝通，雙方共同確認(rèn)場地、電源、環(huán)境、試劑、耗材、輔助設(shè)施、輔助人員、樣本量、出報告時間、檢測能力等。但在實(shí)際工作中，依然出現(xiàn)了許多無法意料的問題。移動微生物檢測車應(yīng)選擇遠(yuǎn)離市區(qū)、有自來水、有380 V電源、有更衣場所、能處理醫(yī)療垃圾、感控與布局合理的建筑物，但這樣的場所并不容易尋找，最終核酸檢測隊通過請當(dāng)?shù)靥峁┽t(yī)療垃圾轉(zhuǎn)運(yùn)車等輔助方式解決。當(dāng)?shù)匦l(wèi)生健康委員會提供試劑及耗材的種類、規(guī)格等與移動微生物檢測車設(shè)備是否匹配無法判斷，且不同廠家試劑性能驗(yàn)證、新批號試劑驗(yàn)收等無法完成，因此，核酸檢測隊到達(dá)后立即進(jìn)行設(shè)備、試劑及耗材驗(yàn)收，使用當(dāng)?shù)匾呀?jīng)檢測完畢的弱陽性及陰性樣本開展預(yù)實(shí)驗(yàn)，篩選適合于移動微生物檢測車的試劑及耗材。為存放試劑，由當(dāng)?shù)匦l(wèi)生健康委員會征調(diào)冰箱1臺。樣本接收須20余名工作人員，由核酸檢測隊中的護(hù)士及當(dāng)?shù)爻檎{(diào)的護(hù)士共同完成。試劑及耗材的驗(yàn)收、保管、發(fā)放者3名，由核酸檢測隊行政管理人員兼職完成。感控工作人員2名，負(fù)責(zé)核酸檢測隊的感控管理工作。因條碼系統(tǒng)不能廣泛實(shí)施，試管上的信息常為手寫，75%乙醇消毒易造成脫色，應(yīng)使用84消毒液消毒。擺放樣本的試管架往往隨樣本高壓而造成數(shù)量不足，應(yīng)提前足量準(zhǔn)備。

在全員核酸檢測情況下，為保證大批量樣本結(jié)果的迅速回報，降低隔離群眾的恐慌，進(jìn)行快速有效的新型冠狀病毒核酸檢測更顯得尤為迫切。本隊優(yōu)化檢驗(yàn)流程，調(diào)整各區(qū)分工，創(chuàng)造了單車單日最高檢測能力4 300份的記錄。在寒冷的東北地區(qū)開展野外移動核酸檢測，本隊為每輛檢測車配備棉大衣1件，由車外人員攜帶棉大衣護(hù)送隊員出入檢測車。此外，與固定實(shí)驗(yàn)室核酸檢測人員要求相同，檢測人員應(yīng)做好安全防護(hù)，嚴(yán)格按各區(qū)的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程工作，確保檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。

與固定實(shí)驗(yàn)室相比，移動微生物檢測車有較高的機(jī)動性，車內(nèi)實(shí)驗(yàn)設(shè)備均已提前配備到位，可實(shí)現(xiàn)迅速奔赴一線，即達(dá)即檢。與其他支援團(tuán)隊到達(dá)支援地后，需對當(dāng)?shù)靥峁┑膱龅剡M(jìn)行改造[4]相比，移動微生物檢測車節(jié)省了時間，緩解了當(dāng)?shù)蒯t(yī)療及社會保障機(jī)構(gòu)等多方壓力。移動微生物檢測車的實(shí)驗(yàn)室空間固定，可通過多輛移動微生物檢測車的組合、檢驗(yàn)流程的優(yōu)化和配備充足人員等方式提高檢測能力，可更好地應(yīng)對未來出現(xiàn)的突發(fā)公共衛(wèi)生事件。