潘練華，麥愛(ài)芬，呂婉嫻，何玉怡，馮振華，梁權(quán)輝

佛山市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,廣東佛山 528000

血肌酐水平是臨床用于監(jiān)測(cè)患者腎小球?yàn)V過(guò)功能狀態(tài)及進(jìn)展的重要指標(biāo)，對(duì)慢性腎炎、尿毒癥等腎臟疾病的診斷和治療發(fā)揮著重要作用。目前，臨床常用的肌酐檢測(cè)方法有肌氨酸氧化酶法(簡(jiǎn)稱酶法)、堿性苦味酸法、高效液相色譜法等[1]，其中酶法具有測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定、重復(fù)性好、線性范圍寬、較苦味酸法特異性好等優(yōu)勢(shì)，在臨床檢驗(yàn)中被廣泛應(yīng)用。但隨著酶法的深入應(yīng)用，研究者發(fā)現(xiàn)其檢測(cè)過(guò)程會(huì)受一些藥物的干擾，如羥苯磺酸鈣、抗壞血酸、酚磺乙胺等[1]，其中羥苯磺酸鈣作為微血管保護(hù)藥，被廣泛應(yīng)用于糖尿病腎病、慢性腎功能不全等疾病治療中。鑒于臨床對(duì)結(jié)果質(zhì)疑情況頻現(xiàn)，且國(guó)內(nèi)對(duì)此現(xiàn)象評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)較少，本文通過(guò)添加定值羥苯磺酸鈣干擾物到4種醫(yī)學(xué)決定濃度的新鮮血清標(biāo)本中，探討新酶法、普通酶法和干化學(xué)法的3種不同肌酐檢測(cè)試劑對(duì)不同濃度羥苯磺酸鈣抗干擾能力，為臨床疾病治療提供參考[2-3]，避免出現(xiàn)由于方法學(xué)缺陷影響檢驗(yàn)結(jié)果的情況。

1 材料與方法

1.1一般資料 選取本院腎內(nèi)科及體檢中心無(wú)羥苯磺酸鈣藥物用藥史且當(dāng)天完成檢測(cè)無(wú)溶血、無(wú)乳糜、無(wú)黃疸、符合濃度要求的新鮮人血清標(biāo)本20份作為待測(cè)血清標(biāo)本。

1.2儀器與試劑 西門子ADVIA2400全自動(dòng)生化分析儀、強(qiáng)生Vitros4600全自動(dòng)生化免疫分析儀。中山標(biāo)佳新酶法肌酐檢測(cè)試劑(批號(hào)192830，試劑盒內(nèi)配套校準(zhǔn)品批號(hào)192830)，西門子普通酶法肌酐檢測(cè)試劑(批號(hào)56140，校準(zhǔn)品453025A)、強(qiáng)生干化學(xué)法肌酐檢測(cè)試劑(批號(hào)153134996628，校準(zhǔn)品0190)。羥苯磺酸鈣(寧夏康亞藥業(yè)有限公司，0.25 克/粒，國(guó)藥準(zhǔn)字：003982H00)。

1.3方法 (1)依據(jù)WS/T 416-2013干擾實(shí)驗(yàn)指南[4]，參考醫(yī)學(xué)決定濃度、定量上下限，選取標(biāo)本濃度40、141、530、1 000 μmol/L 4種肌酐濃度的新鮮標(biāo)本。(2)制備羥苯磺酸鈣干擾物原液濃度為696.4 mg/L，與生理鹽水比例配制為50、100、150、200、250、300、350 mg/L的溶液。(3)在4種濃度的新鮮標(biāo)本中，分別按9∶1的體積比例配置干擾物濃度，分別為0、5、10、15、20、25、30、35 mg/L。(4)應(yīng)用3種肌酐檢測(cè)試劑分別對(duì)混合后的血清標(biāo)本重復(fù)檢測(cè)3次，通過(guò)目測(cè)及散點(diǎn)圖檢查是否有缺失值和離群值；用各梯度測(cè)定均值減去最低濃度標(biāo)本均值得出偏差值，以偏差值對(duì)干擾物濃度繪圖，選定1/3允許總誤差(4%)作為最大允許干擾。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用Excel2019軟件和SPSS22.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。采用回歸方程及干擾效果圖分析3種檢測(cè)試劑對(duì)不同濃度梯度羥苯磺酸鈣抗干擾的效果。

2 結(jié) 果

2.1肌酐濃度在40 μmol/L時(shí)的干擾劑量效應(yīng) 血清標(biāo)本肌酐濃度為40 μmol/L時(shí)，8種濃度梯度羥苯磺酸鈣對(duì)其檢測(cè)的干擾效果見(jiàn)圖1。血清標(biāo)本濃度為40 μmol/L時(shí)，新酶法試劑負(fù)偏差為0.07%～4.00%；干擾物濃度為5 mg/L時(shí)，普通酶法試劑最小負(fù)偏差為25.00%，干擾物濃度35 mg/L時(shí)，普通酶法試劑最大負(fù)偏差為64.17%；隨著干擾物濃度增加，干化學(xué)法試劑負(fù)偏差依次為1.34%、5.35%、6.90%、9.13%、11.58%、11.14%、13.81%。新酶法在此濃度有優(yōu)越的抗干擾能力。

圖1 不同羥苯磺酸鈣濃度對(duì)肌酐濃度40 μmol/L血清標(biāo)本的劑量效應(yīng)圖

2.2肌酐濃度在141 μmol/L時(shí)的干擾劑量效應(yīng) 血清標(biāo)本肌酐濃度為141 μmol/L時(shí)，8種濃度梯度羥苯磺酸鈣對(duì)其檢測(cè)的干擾效果見(jiàn)圖2。新酶法、普通酶法和干化學(xué)法試劑在羥苯磺酸鈣濃度15 mg/L時(shí)負(fù)偏差分別為3.91%、29.67%、6.53%；只有新酶法試劑結(jié)果尚在最大允許干擾限內(nèi)，普通酶法試劑結(jié)果已超過(guò)允許總誤差。

圖2 不同羥苯磺酸鈣濃度對(duì)肌酐濃度141 μmol/L血清標(biāo)本的劑量效應(yīng)圖

2.3肌酐濃度在530 μmol/L時(shí)的干擾劑量效應(yīng) 血清標(biāo)本肌酐濃度為530 μmol/L，8種濃度梯度羥苯磺酸鈣對(duì)其檢測(cè)的干擾效果見(jiàn)圖3。干擾物濃度為5 mg/L時(shí)，新酶法試劑最小負(fù)偏差為0.76%，干擾物濃度為20 mg/L時(shí)，負(fù)偏差為3.75%；干擾物濃度為5 mg/L時(shí)，普通酶法試劑最小負(fù)偏差已達(dá)5.63%；干擾物濃度為5 mg/L時(shí)，干化學(xué)法試劑最小負(fù)偏差為0.31%，干擾物濃度為35 mg/L時(shí)，干化學(xué)法試劑最大負(fù)偏差為5.95%。

圖3 不同羥苯磺酸鈣濃度對(duì)血清肌酐濃度530 μmol/L的劑量效應(yīng)圖

2.4肌酐濃度在1 000 μmol/L時(shí)的干擾劑量效應(yīng) 血清標(biāo)本肌酐濃度為1 000 μmol/L時(shí)，8種濃度梯度羥苯磺酸鈣對(duì)其檢測(cè)的干擾效果見(jiàn)圖4。隨著羥苯磺酸鈣濃度的增加，新酶法試劑的負(fù)偏差依次為1.27%、2.19%、3.21%、4.37%、5.74%、6.83%、8.45%；普通酶法試劑依次為3.21%、6.69%、9.09%、11.66%、14.29%、16.62%、18.60%，唯一一點(diǎn)在最大允許干擾限內(nèi)；干化學(xué)法試劑依次為0.36%、1.40%、2.39%、3.02%、1.86%、4.40%、5.71%。在1 000 μmol/L肌酐濃度下，干化學(xué)法試劑展現(xiàn)良好的抗干擾能力。

圖4 不同羥苯磺酸鈣濃度對(duì)肌酐濃度1 000 μmol/L血清標(biāo)本的劑量效應(yīng)圖

3 討 論

在臨床檢測(cè)過(guò)程中，檢測(cè)結(jié)果會(huì)受多重因素的影響，如檢測(cè)試劑的性能、檢測(cè)儀器穩(wěn)定性及患者服用的藥物等，識(shí)別特定物質(zhì)對(duì)臨床常見(jiàn)檢測(cè)方法產(chǎn)生的偏差顯得尤其重要。臨床上，在全自動(dòng)生化分析儀應(yīng)用酶法檢測(cè)血清肌酐時(shí)，發(fā)現(xiàn)羥苯磺酸鈣會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，出現(xiàn)結(jié)果假性下降的情況[5]，石文等[6]研究通過(guò)配對(duì)差異實(shí)驗(yàn)確認(rèn)此干擾物質(zhì)，肌酐水平的假性下降嚴(yán)重影響臨床對(duì)患者病情進(jìn)展的判斷，為臨床診斷帶來(lái)困惑。檢測(cè)方法的總分析誤差可有3種主要來(lái)源：不精密度、方法特異性偏差、樣品特異性偏差。本文中的羥苯磺酸鈣對(duì)于酶法檢測(cè)肌酐過(guò)程中造成負(fù)偏差的影響，是屬于樣品特異性偏差，目前大致有3種觀點(diǎn)[7-9]：(1)酶法檢測(cè)肌酐是基于肌酐酶、肌酸酶和肌氨酸氧化酶降解肌酐及其反應(yīng)產(chǎn)物，然后通過(guò)偶聯(lián)終點(diǎn)比色法反應(yīng)檢測(cè)肌氨酸氧化產(chǎn)生的H2O2，而羥苯磺酸鈣的基本結(jié)構(gòu)是二羥基苯環(huán)，它具有還原性，可能會(huì)消耗H2O2，從而產(chǎn)生負(fù)干擾；(2)羥苯磺酸鈣可能與偶聯(lián)終點(diǎn)比色法反應(yīng)中的其他成分發(fā)生反應(yīng)，從而減少生色基團(tuán)的形成，使檢測(cè)結(jié)果假性降低；(3)羥苯磺酸鈣可能會(huì)影響生色基團(tuán)的穩(wěn)定性。血清肌酐水平可反映腎小球?yàn)V過(guò)功能，是衡量和監(jiān)測(cè)腎功能最常用的指標(biāo)之一[9]，內(nèi)源性干擾如溶血、脂濁、黃疸等容易被檢驗(yàn)人員關(guān)注，但外源性干擾如抗壞血酸、酚磺乙胺、羥苯磺酸鈣等藥物干擾較難被發(fā)現(xiàn)，探究其干擾機(jī)制、尋求更優(yōu)檢測(cè)方法是臨床一線工作者的重任。

本文依據(jù)WS/T 416-2013干擾實(shí)驗(yàn)指南[4]，探討羥苯磺酸鈣藥物對(duì)于新酶法、普通酶法和干化學(xué)法檢測(cè)血清肌酐水平試劑的干擾劑量效應(yīng)，旨在為臨床提供干擾參考依據(jù)。作為一種常見(jiàn)的改善微循環(huán)血管保護(hù)藥物[10-11]，羥苯磺酸鈣藥物穩(wěn)態(tài)谷濃度為6.64 mg/L；服藥500 mg后，藥物濃度在2～3 h達(dá)峰值，峰濃度為15.00 mg/L[12-15]。以15.00 mg/L作為最大干擾物濃度進(jìn)行劑量效應(yīng)實(shí)驗(yàn)，新酶法試劑在檢測(cè)過(guò)程中出現(xiàn)的負(fù)干擾控制在1/3總誤差內(nèi)；干化學(xué)法試劑對(duì)其負(fù)干擾效應(yīng)控制在1/2總誤差附近，且對(duì)于高濃度肌酐水平的標(biāo)本，展現(xiàn)的抗干擾能力甚至優(yōu)于新酶法；對(duì)于慢性腎炎、尿毒癥等腎臟疾病患者，干化學(xué)法可作為首選檢測(cè)方法。本研究結(jié)果顯示，作為目前臨床上常用的檢測(cè)方法，普通酶法試劑基本無(wú)羥苯磺酸鈣抗干擾能力，與之前國(guó)內(nèi)研究結(jié)果是一致[14-15]，僅在肌酐濃度1 000 μmol/L和干擾物質(zhì)5 mg/L下負(fù)偏差低于參考限。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)于羥苯磺酸鈣帶來(lái)嚴(yán)重的負(fù)性干擾，普通酶法檢測(cè)試劑無(wú)法具備臨床可接受的抗干擾能力，導(dǎo)致臨床無(wú)法準(zhǔn)確判斷患者治療效果；本院曾收到臨床反饋同一時(shí)間抽取的血清檢測(cè)肌酐，普通酶法和干化學(xué)法結(jié)果相差200 μmol/L，而患者有服用羥苯磺酸鈣類藥物史，這高度提示臨床醫(yī)生特別是腎內(nèi)科醫(yī)生在送檢血肌酐時(shí)，應(yīng)關(guān)注患者是否服用羥苯磺酸鈣類藥物，并應(yīng)結(jié)合血尿素、胱抑素C、腎小球?yàn)V過(guò)率等指標(biāo)[16]綜合判斷病情；同一醫(yī)療機(jī)構(gòu)若可同時(shí)采用干化學(xué)法檢測(cè)，應(yīng)以干化學(xué)法結(jié)果為準(zhǔn)。

新酶法試劑之所以具備抗干擾能力，在于試劑中添加了特殊物質(zhì)如硫酸聯(lián)氨、過(guò)氧乙酸、過(guò)氧丙酸等高分子過(guò)氧酸或碳酸鈉，可針對(duì)性地與羥苯磺酸鈣等藥物進(jìn)行反應(yīng)，有效減少該類物質(zhì)在后續(xù)顯色反應(yīng)中的干擾作用；而干化學(xué)自動(dòng)生化分析儀使用干片試劑擁有多層膜結(jié)構(gòu)，其擴(kuò)散層可過(guò)濾大分子物質(zhì)，將干擾效應(yīng)降低。本研究結(jié)果提示，臨床檢驗(yàn)工作者除應(yīng)關(guān)注飲食、標(biāo)本采集、試驗(yàn)方式、實(shí)驗(yàn)條件等影響臨床檢驗(yàn)結(jié)果因素外，更應(yīng)關(guān)注另一個(gè)非常重要的干擾因素：藥物干擾，且需要了解不同干擾物劑量對(duì)不同檢測(cè)系統(tǒng)和檢測(cè)方法之間檢驗(yàn)結(jié)果的差異性，逐步提高臨床檢驗(yàn)質(zhì)量的重視程度。

綜上所述，新酶法和普通酶法檢測(cè)原理均為肌氨酸氧化酶法，但前者增加抗藥物干擾能力，在臨床服用羥苯磺酸鈣血藥峰濃度下檢測(cè)肌酐濃度所產(chǎn)生負(fù)干擾效應(yīng)在最大允許干擾限內(nèi)，普通酶法肌酐試劑基本不具備抗干擾能力，容易造成使用類似藥物史的患者出現(xiàn)肌酐結(jié)果假性下降的情況，阻礙臨床對(duì)病情的正確判斷，干化學(xué)法試劑在高肌酐濃度檢測(cè)中抗干擾能力更為優(yōu)越。