周 穎，唐登峰，張文婷，毛思浩，馬臨科，昝 珂

（1.浙江省食品藥品檢驗(yàn)研究院/國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價(jià)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江 杭州310052；2.中國食品藥品檢定研究院，北京102629）

益母草又名茺蔚，為唇形科植物益母草Leonurus japonicas Houtt.的新鮮或干燥地上部分，具有活血調(diào)經(jīng)、利尿消腫、清熱解毒的功效，是臨床常用的婦科良藥[1]。益母草在全國大部分地區(qū)均有分布，主產(chǎn)江蘇、福建、廣東、廣西、貴州、云南、四川等地[2]。益母草主要化學(xué)成分有生物堿類、二萜類、黃酮類、苯丙醇苷類、環(huán)烯醚萜類、香豆素及木脂素[3]，并含有錳、鐵、硒、鋅等多種微量元素[4]，其中益母草堿和鹽酸水蘇堿是益母草藥材中主要的活性成分[5-6]。

國家于2013年啟動了第四次中藥資源普查項(xiàng)目，對全國的中藥資源進(jìn)行系統(tǒng)梳理，益母草因土壤、水分、光照強(qiáng)度和物候等因素的影響，導(dǎo)致其質(zhì)量參差不齊[7-9]。為科學(xué)地評價(jià)益母草質(zhì)量狀況，依照2015年版《中華人民共和國藥典》一部益母草項(xiàng)下方法，對本次全國中藥資源普查中采集的益母草藥材進(jìn)行了檢驗(yàn)，并對質(zhì)量進(jìn)行分析與評價(jià)，針對發(fā)現(xiàn)的問題，通過探索性研究尋找對策，為該藥的質(zhì)量監(jiān)管提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試劑

戴安Ultimate3000超高效液相色譜儀（美國Thermo Fisher公司，配置SRD-3600真空在線脫氣機(jī)，DGP-3600雙三元梯度泵，WPS-3000TRS自動進(jìn)樣儀，TCC-3000RS柱溫箱，DAD-3000RS二極管陣列檢測器，VWD-3400RS可變波長檢測器，Chromeleon 7.2 SR5色譜工作站）；LC-20A 1200型高效液相色譜儀（美國Agilent，配制G1322A真空在線脫氣機(jī)，G1311A四元梯度泵，G1329B自動進(jìn)樣儀，G1316柱溫箱，G1314B可變波長檢測器）；ELSD 2000ES蒸發(fā)光散射檢測器（美國Alltech公司）；DHG-9140恒溫干燥箱（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）；XPE-2015型電子天平[d=0.01 mg，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；Mili-Q去離子水發(fā)生器（美國Milipore公司）。

鹽酸水蘇堿對照品（批號：110712-201513）、鹽酸益母草堿對照品（批號：111823-201202）（中國食品藥品檢定研究院）；乙腈（色譜純，Sigma公司）；辛烷磺酸鈉（批號：201303401，山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司）；冰醋酸、磷酸（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；實(shí)驗(yàn)用水為超純水。檢測樣品由中國中醫(yī)科學(xué)院中藥資源中心提供，采集時間為2012年5月至2014年7月，源于全國10個省市共82批次。

2 方 法

2.1 普查方法 針對我國中藥領(lǐng)域一直存在“家底”不清、資源動態(tài)不明等問題，國家開展了第四次全國中藥資源普查工作。通過調(diào)查代表性區(qū)域的藥用資源的分布等信息，制訂出樣品采集要求。（1）采集地點(diǎn)：本次普查以區(qū)域?yàn)閱卧?，對區(qū)域內(nèi)所有中藥資源（野生和栽培）進(jìn)行調(diào)查，益母草屬于一般品種藥材，在普查區(qū)域內(nèi)遇到即采集；（2）采集數(shù)量：每份益母草樣品要求來源10個植株以上，每份藥材一般500 g；（3）采集時間：益母草全草均可用藥，而全草多在植物充分生長時采集；（4）采集后處理：通過曬干或烘干方式對樣品進(jìn)行干燥；（5）樣品保存：在保證益母草充分干燥的情況下，進(jìn)行真空包裝，確保不漏氣，經(jīng)過冷凍殺菌，并在包裝箱內(nèi)添加適量樟腦，同時控制貯藏溫濕度，以確保樣品盡可能減少變質(zhì)現(xiàn)象[10-11]。

本次資源普查的82批次的益母草樣品中，采集區(qū)域涉及到全國10個省市自治區(qū)，具有一定的代表性。資源普查信息顯示2批來源為細(xì)葉益母草（Leonurussibiricus L），1批來源為鬃尾草狀益母草（Leonuruschaituroides C.Y.），其余均為益母草（Leonurus japonicus Houtt.）。采集部位為地上部分的有69批次，全草有11批次，標(biāo)明莖葉的1批次，標(biāo)明其他的為1批次，本次抽樣的82批次樣品均為干品。采集時間段主要集中在6—9月，見表1～2。中藥資源普查工作的重點(diǎn)在于中藥材的資源種類、分布等相關(guān)信息，解決中藥材的“量”的問題，對于中藥材“質(zhì)”的問題，則需要進(jìn)一步對普查樣品開展大量的性狀、有效成分等的檢測分析工作，為科學(xué)嚴(yán)謹(jǐn)制修訂《中華人民共和國藥典》提供數(shù)據(jù)支撐。

表1 益母草藥材采集時間與批次情況

表2 益母草藥材采集地與批次情況

2.2 檢驗(yàn)方法 按2015年版《中華人民共和國藥典》一部檢驗(yàn)，主要檢驗(yàn)項(xiàng)目有[性狀]、[鑒別]（顯微鑒別、薄層色譜鑒別）、[檢查]（水分）、[浸出物]、[含量測定]（鹽酸水蘇堿、鹽酸益母草堿）。82批益母草樣品有41批不合格[不合格率為50.00%（41/82）]，不合格樣品涉及8個省。

3 結(jié)果分析

3.1 品種混亂問題 本次收集的82批益母草，按2015年版《中華人民共和國藥典》一部進(jìn)行檢驗(yàn)，有8批樣品性狀不符合規(guī)定，此8批經(jīng)鑒別為夏至草。益母草莖表面灰綠色或黃綠色；體輕，質(zhì)韌，斷面中部有髓。葉片灰綠色，多皺縮、破碎，易脫。輪傘花序腋生，小花淡紫色，花萼筒狀，花冠二唇形[1]。夏至草為唇形科植物夏至草Lagopsissupine(Steph.)Ik.-Gal.的全草[2]。夏至草和益母草是同科不同屬的兩種植物，目前云南、甘肅、四川仍稱夏至草為白花益母草，河北、山東也以此混充益母草入藥[12-13]。本次采收的部分批次性狀為不規(guī)則段，莖方形，斷面中空，表面黃綠色被有細(xì)毛，苞片呈剛毛狀，花萼外面?zhèn)溆屑?xì)毛[14]，以上特征和夏至草的描述相符合，鑒定為夏至草。益母草與夏至草性狀特征見圖1。

圖1 益母草與夏至草性狀特征圖

從性狀上看，益母草與夏至草性狀不同，很容易區(qū)分，但在抽樣過程中仍有混淆品存在，推測可能與其藥材基原有關(guān)。經(jīng)文獻(xiàn)考證，二者在古代共同作為茺蔚入藥。茺蔚始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》。因夏至草和益母草在花色、花期上明顯不同,三四月夏至草開花，而益母草莖部分還未長出。本草中正式記載益母草花色是在李時珍的《本草綱目》：“四五月間，穗內(nèi)開小花，紅紫色，亦有微白色，其草生時有臭氣，夏至后即枯，其根白色……白者能入氣分，紅者能入血分，別而用之可也?！盵15]這里茺蔚中白花者是夏至草，紫花者為益母草。夏至草在歷代本草中列于茺蔚項(xiàng)下，是作為茺蔚的一種來應(yīng)用的，直到清代以后才將茺蔚明確分為兩種[16-17]?？梢娤闹敛轂橐婺覆莸幕煜贩N，歷史悠久，然而除性狀可以區(qū)分外，二者化學(xué)成分、藥理作用各異。夏至草主要化學(xué)成分為半日花烷型二萜類、黃酮及黃酮苷類、苯丙素苷類化合物[18]，而生物堿一直被認(rèn)為是益母草的有效成分，常作為質(zhì)控指標(biāo)[19]；在生物活性方面，一方面夏至草作為中藥使用具有活血祛瘀的功效，與益母草的活血祛瘀功效成分半日花烷型二萜類是吻合的，半日花烷型二萜類化合物已證明具有抗凝、抗血小板聚集、消炎止痛等生物活性[20]；另一方面，益母草的有效成分生物堿有其獨(dú)特的藥理活性，是夏至草無法取代的。文獻(xiàn)已報(bào)道益母草總生物堿可以顯著緩解縮宮素引起的大鼠子宮強(qiáng)烈收縮作用，且表現(xiàn)一定的量效關(guān)系[21]。夏至草雖與益母草為同科植物，但不具有益母草的上述功效。另外《本草綱目》“白者能入氣分，紅者能入血分，別而用之可也”，也說明二者功效有別。因此益母草和夏至草雖有相似之處，但并不相同，不可混淆使用或代益母草藥用，而應(yīng)仔細(xì)鑒別，正確應(yīng)用。

3.2 采收期不符問題 通過對82批次的樣品開展水溶性浸出物測定檢驗(yàn)，共有14批次樣品低于限度（限度為不得少于15.0%），不合格率為17.07%（14/82）。通過分析不合格的樣品性狀，發(fā)現(xiàn)其大多已經(jīng)過了花盛期，顏色近枯黃色或基本上僅剩莖稈。

通過對82批次的樣品開展鹽酸水蘇堿的含量測定，鹽酸水蘇堿測定結(jié)果范圍為0%～3.95%，其中24批次樣品低于檢出限度（＜0.5%），不合格率為29.27%（24/82），其中11批次樣品未檢出鹽酸水蘇堿，典型圖譜見圖2。

圖2 鹽酸水蘇堿HPLC色譜圖

通過對82批次的樣品開展鹽酸益母草堿的含量測定，鹽酸益母草堿測定結(jié)果范圍為0～0.291%，其中41批次樣品低于檢出限度（＜0.050%），合格率為50.00%（41/82），除去11批次樣品未檢出鹽酸益母草堿外，鹽酸益母草堿平均含量為0.08%，可見目前的限度要求略微偏低。結(jié)合不合格的樣品性狀，發(fā)現(xiàn)混淆品夏至草未檢出或極少量檢出鹽酸益母草堿。典型圖譜見圖3。

圖3 鹽酸益母草堿HPLC色譜圖

運(yùn)用SPSS25.1軟件，對水溶性浸出物、鹽酸水蘇堿和鹽酸益母草堿含量進(jìn)行相關(guān)性分析，鹽酸水蘇堿與浸出物相關(guān)系數(shù)為0.812，雙側(cè)顯著性值P<0.001，表明二者之間呈極顯著性正相關(guān)，鹽酸水蘇堿與鹽酸益母草堿相關(guān)系數(shù)為0.540，雙側(cè)顯著性值P<0.001，二者存在顯著性正相關(guān)，即從總體水平來看鹽酸水蘇堿含量隨浸出物的上升而上升，鹽酸水蘇堿含量與鹽酸益母草堿含量相關(guān)性較大。

4 討 論

本課題依據(jù)2015年版《中華人民共和國藥典》一部的方法與限度對本次普查收集的樣品進(jìn)行評價(jià)，發(fā)現(xiàn)國內(nèi)益母草藥材主要存在兩個問題，一是混淆品的存在，二是錯過最佳采收時間。本次樣品采集過程中9.76%（8/82）為混淆品，說明益母草在種植、采收加工環(huán)節(jié)缺乏真?zhèn)舞b別能力，建議加強(qiáng)對益母草等藥材相關(guān)知識的宣傳與培訓(xùn)，讓相關(guān)人員了解與掌握益母草的性狀，以便與夏至草區(qū)別使用。

在益母草資源普查過程中，59.76%（49/82）的益母草樣品采收期在7—10月之間，此時已是花盛開之后，莖稈呈枯黃色，使得采集到的樣品色澤偏黃或葉片缺失，采收季節(jié)已錯過《中華人民共和國藥典》所要求的莖葉茂盛、花未開或花初開采割的規(guī)定，進(jìn)而導(dǎo)致有效成分含量下降，82批益母草樣品有效成分含量見表3。

表3 82批益母草樣品2種有效成分含量信息表

通過兩種有效成分的含量和水溶性浸出物的相關(guān)性分析，特別是鹽酸水蘇堿與浸出物，說明有效成分鹽酸水蘇堿的富集與浸出物的結(jié)果相關(guān)性較大。對于莖葉茂盛的益母草，其浸出物較多，推斷益母草藥材因其特殊性，受植株特征影響較大。由于我國幅員遼闊，建議采收要求不必描述為“夏季”之類的限定詞，可根據(jù)植株本身特性進(jìn)行描述，如“莖葉茂盛、花未開或初開時采割”。