黃建猷　胡筱?！∽T曉　屈信成　陸國壽　黃周鋒

中圖分類號(hào) R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號(hào) 1001-0408（2021）21-2624-07

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2021.21.11

摘 要 目的：建立瑤藥消瘤藤的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，為其質(zhì)量控制提供參考。方法：采集10批廣西產(chǎn)消瘤藤藥材，觀察其性狀，并對(duì)其根、莖的橫切面以及藥材粉末進(jìn)行顯微鑒別;以7-羥基香豆素為指標(biāo)成分建立該藥材的薄層色譜（TLC）鑒別方法;測(cè)定該藥材中水分、總灰分、酸不溶性灰分和醇溶性浸出物;采用高效液相色譜（HPLC）法同時(shí)測(cè)定該藥材中茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素的含量。結(jié)果：消瘤藤根和莖表面皺紋明顯、質(zhì)硬，氣微、味微苦，橫切面有分泌細(xì)胞和針晶細(xì)胞分布;藥材粉末中有草酸鈣針晶、草酸鈣方晶、石細(xì)胞和淀粉粒。TLC結(jié)果顯示，供試品色譜中，在與7-羥基香豆素對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。10批藥材的水分測(cè)定結(jié)果為9.1%～11.8%，總灰分為3.6%～6.7%，酸不溶性灰分為0.10%～0.44%，醇溶性浸出物為8.9%～14.0%。茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素的質(zhì)量濃度分別在6.088～182.640、1.568～47.040、1.096～32.880 μg/mL范圍內(nèi)與其對(duì)應(yīng)色譜峰峰面積成良好的線性關(guān)系（r均不低于0.999 7）;平均加樣回收率分別為99.47%、101.07%、99.89%（RSD均小于2%）;精密度、穩(wěn)定性（24 h）、重復(fù)性、耐用性試驗(yàn)的RSD均小于2%。茵芋苷等3種待測(cè)成分的含量分別為1.337～9.534、0.348～2.236、0.083～1.088 mg/g。結(jié)論：初步擬定消瘤藤中水分不得過12.0%、總灰分不得過7.0%、醇溶性浸出物不得少于8.0%、茵芋苷含量不得少于1.30 mg/g、7-羥基香豆素含量不得少于0.30 mg/g、7-羥基-8-甲氧基香豆素含量不得少于0.06 mg/g。

關(guān)鍵詞 瑤藥;消瘤藤;質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn);薄層色譜法;高效液相色譜法;顯微鑒別;性狀鑒別;茵芋苷;7-羥基香豆素;7-羥基-8-甲氧基香豆素

ABSTRACT? ?OBJECTIVE： To establish the quality standard of Yao medicine Pileostegia tomentella，and to provide reference for its quality control. METHODS：Totally 10 batches of P. tomentella were collected from Guangxi area. The properties of P. tomentella were observed and microscopic identification was conducted for the transverse section of its stems， roots and powder.TLC method was established by using 7-hydroxycoumarin as reference. The contents of water， total ash， acid-insoluble ash and alcohol-soluble extract in P. tomentella were determined. The contents of skimmin，7-hydroxycoumarin and 7-hydroxy-8- methoxycoumarin in P. tomentella were determined by HPLC. RESULTS： The root and stem surface of P. tomentella possessed obvious wrinkles， hard texture， slight smell and bitter taste， and there were secretory cells and needle crystal cells in the cross section. The medicinal powder contained calcium oxalate needle crystal， calcium oxalate square crystal， sclerotic cell and starch granules. The results of TLC showed that the spots of the same color were found in the corresponding positions of chromatograms of test samples and 7-hydroxycoumarin control. In the 10 batch of P. tomentella，the contents of water were 9.1%-11.8%; those of total ash were 3.6%-6.7%; those of acid-insoluble ash were 0.10%-0.44%; those of alcohol-soluble extract were 8.9%-14.0%.The linear range of skimmin， 7-hydroxycoumarin and 7-hydroxy-8-methoxycoumarin were 6.088-182.640， 1.568-47.040 and 1.096- 32.880 μg/mL （all r not less than 0.999 7）. The average recoveries were 99.47%，101.07% and 99.89%（RSD were all less than 2%）. RSDs of precision， stability （24 h）， reproducibility and durability tests were all lower than 2%. The contents of 3 components such as skimmin were 1.337-9.534， 0.348-2.236， 0.083-1.088 mg/g， respectively. CONCLUSIONS： It is preli- minarily proposed that the content of water in P. tomentella is not more than 12.0%; that of total ash is not more than 7.0%; that of alcohol-soluble extract is not less than 8.0%; that of skimmin is not less than 1.30 mg/g; that of 7-hydroxy- coumarin is not less than 0.30 mg/g; that of 7-hydroxy-8-methoxycoumarin is not less than 0.06 mg/g.

KEYWORDS? ?Yao medicine;Pileostegia tomentella;Quality standard;TCL;HPLC;Microscopic identification; Character identification; Skimmin; 7-hydroxycoumarin;7-hydroxy-8-methoxycoumarin

消瘤藤又名星毛冠蓋藤、腫瘤藤等，為虎耳草科植物星毛冠蓋藤Pileostegia tomentella Hand.-Mazz.的干燥根和莖，被《中國高等植物圖鑒（第二冊(cè)）》《中國植物志（第三十五卷）》《中華本草（第四冊(cè)）》《廣西植物志（第二卷）》《廣西藥用植物名錄》等收載[1-5]，且已被列為《廣西壯族自治區(qū)瑤藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（第二卷）》擬收錄品種。該藥主要分布于我國廣西、浙江、江西、福建、湖南、廣東、貴州等地[3]，在廣西主要分布于上林、防城、靈山、賀州、鐘山、平樂、龍勝等地[5]。據(jù)文獻(xiàn)記載，消瘤藤主要含有香豆素類、苯丙素類、環(huán)烯醚萜類和揮發(fā)油類等化學(xué)成分，具有祛風(fēng)除濕、散瘀止痛、消腫解毒的功效[6-9]。藥理研究表明，該藥具有抗腫瘤、抗氧化等活性[10-13]。廣西民間瑤醫(yī)多年的臨床實(shí)踐證明，該藥具有抗腫瘤作用，可用于治療多種惡性腫瘤[6-8，14]。在其質(zhì)量控制方面，李耀燕等[14]對(duì)廣西產(chǎn)消瘤藤的生藥學(xué)進(jìn)行了研究;盧森華等[15]對(duì)不同產(chǎn)地消瘤藤藥材的質(zhì)量進(jìn)行了評(píng)價(jià);李詠梅等[16]對(duì)消瘤藤不同藥用部位的化學(xué)成分進(jìn)行了高效液相色譜（HPLC）分析;肖冰梅等[17]對(duì)湖南產(chǎn)消瘤藤的水分、灰分、浸出物等進(jìn)行了研究，等等。但上述研究都相對(duì)簡(jiǎn)單且不夠系統(tǒng)，不能有效滿足對(duì)消瘤藤藥材的質(zhì)量控制;同時(shí)，由于生長(zhǎng)環(huán)境的不同，不同產(chǎn)地的消瘤藤藥材在質(zhì)量、形態(tài)及組織結(jié)構(gòu)等方面可能會(huì)有所不同。因此，有必要建立系統(tǒng)而完善的消瘤藤質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。鑒于此，本研究收集了廣西不同產(chǎn)地的消瘤藤樣品，建立了快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、有效的質(zhì)量分析方法，旨在為消瘤藤藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用的主要儀器有E2695型HPLC儀（美國Waters公司）、1260型HPLC儀（美國Agilent公司）、RM2245型切片機(jī)（德國Leica公司）、Ni-U型生物顯微鏡（日本Nikon公司）、XS205型十萬分之一電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）、KS-3200DE型液晶超聲波清洗器（昆山潔力美超聲儀器有限公司）、ZF1-Ⅱ型紫外分析儀（上海嘉鵬科技有限公司）、SX2-23-10型箱式電阻爐（沈陽市節(jié)能電爐廠）、AK-400A型搖擺式粉碎機(jī)（溫嶺市林大機(jī)械有限公司）、硅膠G薄層色譜（TLC）板（青島海洋化工有限公司，批號(hào)20190408）、Milli-Q型超純水系統(tǒng)（美國Millipore公司）。

1.2 主要藥品與試劑

本研究所用的主要藥品與試劑有7-羥基-8-甲氧基香豆素對(duì)照品、7-羥基香豆素對(duì)照品（上海源葉生物科技有限公司，批號(hào)分別為X14O10L100104、A04A6L1，純度≥98%），茵芋苷對(duì)照品（四川省維克奇生物科技有限公司，批號(hào)wkq19011409，純度≥98%），乙腈（色譜純，美國Merck公司），磷酸、乙醇、甲醇（分析純，廣東光華科技股份有限公司），氯仿、丙酮（分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）。

10批消瘤藤藥材采自廣西各個(gè)產(chǎn)地，經(jīng)廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究院黃云峰副研究員鑒定，均為虎耳草科植物星毛冠蓋藤P. tomentella Hand.-Mazz.的干燥根和莖。取部分藥材，洗凈，切片，備用。10批消瘤藤藥材樣品的來源信息如表1所示。

2 方法與結(jié)果

2.1 性狀鑒別

本品根為圓柱形，表面呈灰褐色，具縱皺紋及支根痕，直徑0.2～1 cm;質(zhì)硬，難折斷，斷面皮部呈棕褐色，木部呈灰白色。莖為圓柱形，表面呈灰褐色，具縱皺紋及細(xì)小氣生根痕，老莖栓皮有明顯的不規(guī)則溝槽，直徑0.6～3 cm;質(zhì)硬，難折斷，斷面皮部呈灰褐色，木部呈黃白色，有細(xì)密的放射狀紋理，中部有灰黃色髓或中空。其飲片多為斜切片，厚0.2～0.8 cm，直徑0.5～4 cm。本品氣微，味微苦。消瘤藤的性狀鑒別圖如圖1所示。

2.2 顯微鑒別

2.2.1 根橫切面的顯微鑒別 本品根有木栓層細(xì)胞5～10列，呈扁方形或類圓形。皮層內(nèi)散布著分泌細(xì)胞和針晶細(xì)胞，部分分泌細(xì)胞內(nèi)含棕黃色分泌物質(zhì)。韌皮部較窄，可見分泌細(xì)胞和針晶細(xì)胞分布。木質(zhì)部導(dǎo)管多單個(gè)徑向排列，直徑15～86 μm;木射線細(xì)胞1～3列;部分薄壁細(xì)胞內(nèi)含淀粉?；蜃攸S色分泌物質(zhì)。消瘤藤根橫切面的顯微鑒別圖如圖2所示。

2.2.2 莖橫切面的顯微鑒別 本品莖有木栓層細(xì)胞3～10列，呈長(zhǎng)方形或類圓形。皮層外側(cè)有2～3層石細(xì)胞斷續(xù)排列成環(huán)，皮層和韌皮部可見分泌細(xì)胞和針晶細(xì)胞分布。木質(zhì)部寬廣，導(dǎo)管多為單個(gè)徑向排列，直徑18～46 μm;木射線細(xì)胞有1～3列。髓部外側(cè)細(xì)胞壁較厚，中部細(xì)胞壁較薄，可見分泌細(xì)胞和針晶細(xì)胞分布，且分泌細(xì)胞內(nèi)含棕黃色分泌物質(zhì)。消瘤藤莖橫切面的顯微鑒別圖如圖3所示。

2.2.3 藥材粉末的顯微鑒別 本品粉末呈棕黃色。纖維成束或分離，先端圓鈍或折斷;胞腔較寬，直徑13～36 μm。石細(xì)胞較多，單個(gè)或數(shù)個(gè)相連，呈多角形、類圓形、長(zhǎng)橢圓形等;細(xì)胞壁較厚;孔溝明顯，長(zhǎng)40～105 μm，寬15～55 μm。草酸鈣針晶較多，散在或存在于薄壁細(xì)胞中。草酸鈣柱晶粗細(xì)和長(zhǎng)短不一，直徑寬至5 μm，長(zhǎng)45～180 μm。草酸鈣方晶較少，直徑8～16 μm。淀粉粒為單?；驈?fù)粒，復(fù)粒由2～5個(gè)分粒組成，呈圓形、半圓形或類圓形;臍點(diǎn)呈點(diǎn)狀或裂縫狀，直徑4～13 μm。梯紋導(dǎo)管少見，直徑18～31 μm。消瘤藤藥材粉末的顯微鑒別圖如圖4所示。

2.3 TLC鑒別

取本品粉末（過40目篩，下同）2 g，加95%乙醇50 mL回流提取1.5 h，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取7-羥基香豆素對(duì)照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。參照2020年版《中國藥典》（四部）通則“0502 TLC法”操作[18]：吸取上述2種溶液各5～10 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G TLC板上，以氯仿-丙酮（9.5 ∶ 0.5，V/V）為展開劑，在溫度30 ℃、相對(duì)濕度68%的條件下展開;取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。結(jié)果可見，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。消瘤藤的TLC鑒別圖如圖5所示。

2.4 水分測(cè)定

參照2020年版《中國藥典》（四部）通則“0832水分測(cè)定法第二法”對(duì)消瘤藤藥材中的水分進(jìn)行測(cè)定[18]，每批樣品平行測(cè)定3次。結(jié)果顯示，10批樣品的水分為9.1%～11.8%，平均值為10.3%（RSD=8.6%，n=3）?？紤]到藥材來源差異，本研究以略高于最高測(cè)定值設(shè)限，初步擬定消瘤藤藥材中水分不得過12.0%。消瘤藤藥材中水分的測(cè)定結(jié)果如表2所示。

2.5 總灰分和酸不溶性灰分測(cè)定

參照2020年版《中國藥典》（四部）通則“2302灰分測(cè)定法”對(duì)消瘤藤藥材中的灰分進(jìn)行測(cè)定[18]，每批樣品平行測(cè)定3次。結(jié)果顯示，10批樣品的總灰分測(cè)定值為3.6%～6.7%，平均值為4.9%（RSD=21.5%，n=3）?？紤]到藥材來源差異，本研究以略高于最高測(cè)定值設(shè)限，初步擬定消瘤藤藥材中總灰分不得過7.0%。酸不溶性灰分測(cè)定值為0.10%～0.44%，平均值為0.22%（RSD=48.9%，n=3）。鑒于實(shí)測(cè)值均較小，故暫不設(shè)定其酸不溶性灰分的限度。消瘤藤藥材中總灰分和酸不溶性灰分的測(cè)定結(jié)果如表2所示。

2.6 醇溶性浸出物測(cè)定

消瘤藤中富含香豆素及其苷類成分[7-9]，這些成分溶于乙醇，故本研究考慮將醇溶性浸出物作為該藥材質(zhì)量控制的指標(biāo)之一;同時(shí)，考慮到熱浸法可以節(jié)省時(shí)間，提取率也高，故采用熱浸法進(jìn)行測(cè)定，具體方法參照2020年版《中國藥典》（四部）通則“2201浸出物測(cè)定法”項(xiàng)下的“醇溶性浸出物測(cè)定法”[18]，每批樣品平行測(cè)定3次。結(jié)果顯示，10批樣品的醇溶性浸出物測(cè)定值為8.9%～14.0%，平均值為10.8%（RSD=12.5%，n=3）?？紤]到藥材來源差異，本研究以略低于最低測(cè)定值設(shè)限，初步擬定消瘤藤藥材中醇溶性浸出物不得少于8.0%。消瘤藤藥材中醇溶性浸出物的測(cè)定結(jié)果如表2所示。

2.7 茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素的含量測(cè)定

2.7.1 溶液的制備 （1）供試品溶液的制備：取樣品粉末約0.5 g，精密稱定，置于具塞三角瓶中，精密加入80%甲醇25 mL，稱定質(zhì)量，超聲（功率180 W，頻率40 kHz）處理40 min;放至室溫，再次稱定質(zhì)量，用80%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，以0.22 μm微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。（2）混合對(duì)照品溶液的制備：取茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素對(duì)照品各適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含茵芋苷304.4 μg、7-羥基香豆素78.4 μg和7-羥基-8-甲氧基香豆素54.8 μg的溶液，作為混合對(duì)照品貯備液。精密吸取上述混合對(duì)照品貯備液1 mL，置于10 mL量瓶中，加甲醇制成每1 mL含茵芋苷30.44 μg、7-羥基香豆素7.84 μg和7-羥基-8-甲氧基香豆素5.48 μg的溶液，作為混合對(duì)照品溶液。

2.7.2 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以Waters XBridge? C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）為色譜柱，以乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫（0～45 min，5%A→30%A;45～46 min，30%A→5%A;46～60 min，5%A）;檢測(cè)波長(zhǎng)為320 nm;流速為1 mL/min;柱溫為25 ℃;進(jìn)樣體積為10 μL。

分別精密吸取“2.7.1”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液、供試品溶液（編號(hào)S1）和空白對(duì)照（80%甲醇）適量，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖（圖6）。結(jié)果顯示，茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素的分離度均大于1.5，理論板數(shù)均不低于8 000;空白對(duì)照不干擾測(cè)定。

2.7.3 線性關(guān)系考察 分別精密吸取“2.7.1（2）”項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備液0.2、0.6、1.0、2.0、4.0、6.0 mL，分別置于10 mL量瓶中，用甲醇稀釋并定容，搖勻，得茵芋苷（6.088、18.264、30.440、60.880、121.760、182.640 μg/mL）、7-羥基香豆素（1.568、4.704、7.840、15.680、31.360、47.040 μg/mL）、7-羥基-8-甲氧基香豆素（1.096、3.288、5.480、10.960、21.920、32.880 μg/mL）系列混合對(duì)照品溶液，按“2.7.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)（Y）、待測(cè)成分的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（X）進(jìn)行線性回歸，結(jié)果如表3所示。由表3可知，3種待測(cè)成分在各自的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)與峰面積成良好的線性關(guān)系。

2.7.4 精密度試驗(yàn) 取“2.7.1（2）”項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按“2.7.2”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果顯示，茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素峰面積的RSD分別為0.23%、0.43%、0.36%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.7.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液（編號(hào)S1）適量，按“2.7.2”項(xiàng)下色譜條件分別于室溫下放置0、2、4、8、12、24 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果顯示，茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素峰面積的RSD分別為1.21%、1.24%、1.34%（n=6），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.7.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品粉末（編號(hào)S1）約0.5 g，共6份，精密稱定，分別按“2.7.1（1）”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.7.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算樣品含量。結(jié)果顯示，茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素的平均含量分別為6.061、1.585、1.086 mg/g，RSD分別為0.71%、1.05%、1.48%（n=6），表明本方法重復(fù)性良好。

2.7.7 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取同一批已知含量的樣品粉末（編號(hào)S1）約0.25 g，共6份，精密加入“2.7.1（2）”項(xiàng)下混合對(duì)照品貯備液5 mL，按“2.7.1（1）”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.7.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果如表4所示。由表4可知，本方法準(zhǔn)確度良好。

2.7.8 耐用性試驗(yàn) （1）不同色譜柱：分別采用Waters XBridge? C18、Waters SunFire? C18和Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 等3種不同色譜柱（規(guī)格均為250 mm×4.6 mm，5 μm）測(cè)定同一供試品溶液（編號(hào)S1）中茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素的含量，其余條件同“2.7.2”項(xiàng)。結(jié)果顯示，3種待測(cè)成分的平均含量依次為6.045、1.601、1.097 mg/g，RSD分別為1.24%、1.16%、1.35%（n=3）。（2）不同HPLC儀：分別采用Waters e2695和Agilent 1260兩臺(tái)不同HPLC儀測(cè)定同一供試品溶液（編號(hào)S1）中茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素的含量，其余條件同“2.7.2”項(xiàng)。結(jié)果顯示，3種成分的平均含量依次為6.055、1.594、1.088 mg/g，RSD分別為0.94%、1.08%、1.52%（n=2）。上述結(jié)果均表明本方法耐用性良好。

2.7.9 樣品含量測(cè)定 取10批消瘤藤藥材樣品，分別按“2.7.1（1）”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，再按“2.7.2”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算各批藥材中茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素的含量，每批樣品平行測(cè)定3次，結(jié)果如表5所示。

由表5可知，10批樣品中茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素的含量分別為1.337～9.534、0.348～2.236、0.083～1.088 mg/g，平均含量分別為4.295、1.073、0.417 mg/g。考慮到藥材來源差異，本研究以略低于含量最低值設(shè)限，初步擬定本品中茵芋苷的含量不得少于1.30 mg/g、7-羥基香豆素的含量不得少于0.30 mg/g、7-羥基-8-甲氧基香豆素的含量不得少于0.06 mg/g。

3 討論

3.1 TLC鑒別條件的選擇

筆者前期分別考察了不同展開劑[氯仿-乙酸乙酯（9 ∶ 1，V/V）、氯仿-丙酮（9 ∶ 1，V/V）、氯仿-丙酮（9.5 ∶ 0.5， V/V）和正己烷-正丙醇（9 ∶ 1，V/V）]、不同觀察方法（紫外光燈254 nm、紫外光燈365 nm、日光）、不同展距（8、10、12 cm）對(duì)TLC鑒別結(jié)果的影響。結(jié)果顯示，以氯仿-丙酮（9.5 ∶ 0.5，V/V）為展開劑、展距為8 cm、在紫外光燈365 nm條件下觀察到的分離效果較好，主斑點(diǎn)的比移值（Rf）適宜，且斑點(diǎn)清晰。

3.2 HPLC法供試品溶液制備方法的選擇

筆者在前期研究中對(duì)消瘤藤藥材超聲提取和回流提取的結(jié)果進(jìn)行了對(duì)比，發(fā)現(xiàn)回流提取的樣品含量略高于超聲提取，但回流提取所得雜質(zhì)相對(duì)較多，同時(shí)考慮到超聲提取比較方便，因此最終選擇超聲提取法來提取樣品。在提取溶劑上，筆者曾對(duì)甲醇、無水乙醇、95%乙醇、80%乙醇、80%甲醇的提取效果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)采用80%甲醇提取所得樣品含量較高，因此選擇80%甲醇作為提取溶劑。在提取時(shí)間上，筆者發(fā)現(xiàn)提取40 min后樣品含量無明顯增加，故選擇提取時(shí)間為40 min。

3.3 HPLC條件的選擇

筆者通過HPLC-二極管陣列檢測(cè)器在210～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描，可得茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素的最大吸收波長(zhǎng)分別為318、324、321 nm，其中在320 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)時(shí)各色譜峰的分離度均大于1.5且基線平穩(wěn)，故綜合各方面因素考慮，最終選擇320 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。筆者前期還對(duì)甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%磷酸溶液、乙腈-0.1%磷酸溶液、甲醇-0.1%甲酸溶液、乙腈-0.1%甲酸溶液、甲醇-0.1%冰醋酸溶液、乙腈-0.1%冰醋酸溶液等流動(dòng)相體系進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)以乙腈-0.1%磷酸溶液作為流動(dòng)相所得色譜峰的分離度和峰形較好，故選擇其作為本研究中HPLC法的流動(dòng)相。

3.4 HPLC法指標(biāo)成分的選擇

根據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，從消瘤藤藥材中可分離得到茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素等香豆素類化合物[6-8]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，茵芋苷可治療腎功能不全[19];7-羥基香豆素對(duì)人膀胱癌細(xì)胞系E-J細(xì)胞株的增殖具有抑制作用[20]，并具有α-葡萄糖苷酶抑制活性和全齒復(fù)活線蟲致死活性等[21];7-羥基-8-甲氧基香豆素能抑制丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶的活性[22]。三者的藥理活性與消瘤藤散瘀止痛、消腫解毒的功效相符，故本研究選其作為指標(biāo)性成分進(jìn)行含量測(cè)定。

綜上所述，本研究建立了瑤藥消瘤藤的性狀及顯微鑒別方法，以7-羥基香豆素為指標(biāo)成分的TLC鑒別方法，以及同時(shí)測(cè)定藥材中茵芋苷、7-羥基香豆素和7-羥基-8-甲氧基香豆素含量的HPLC法，制訂了該藥材中水分、總灰分、醇溶性浸出物和上述3種有效成分的檢測(cè)限度，所建標(biāo)準(zhǔn)可為消瘤藤藥材的質(zhì)量控制提供參考。但本研究只采集了廣西各產(chǎn)地藥材，且時(shí)間跨度較長(zhǎng)、樣本范圍較為局限，后續(xù)研究還將采集其他省份藥材進(jìn)行研究，以建立更加完善的藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 中國科學(xué)院植物研究所.中國高等植物圖鑒：第二冊(cè)[M].北京：科學(xué)出版社，1972：111.

[ 2 ] 中國科學(xué)院中國植物志編輯委員會(huì).中國植物志：第三十五卷[M].北京：科學(xué)出版社，1995：175-177.

[ 3 ] 國家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編委會(huì).中華本草：第四冊(cè)[M].上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，1999：40-41.

[ 4 ] 廣西植物研究所.廣西植物志：第二卷[M].南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2005：296-299.

[ 5 ] 廣西壯族自治區(qū)中醫(yī)藥研究所.廣西藥用植物名錄[M].南寧：廣西人民出版社，1986：203.

[ 6 ] 陸國壽，盧文杰，黃周鋒，等.瑤藥消瘤藤的化學(xué)成分分析[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2017，23（14）：78-81.

[ 7 ] 王云卿，馬國需，趙丹，等.瑤藥星毛冠蓋藤正丁醇部位化學(xué)成分研究[J].中國藥學(xué)雜志，2017，52（18）：1580-1584.

[ 8 ] 王云卿，馬國需，梁瓊平，等.瑤藥“腫瘤藤”（星毛冠蓋藤）的化學(xué)成分研究[J].中草藥，2016，47（24）：4326-4330.

[ 9 ] 陳宇，鐘盈盈，劉佳明，等.氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法分析消瘤藤中揮發(fā)油成分[J].中國民族民間醫(yī)藥，2020，29（9）：20-22.

[10] 胡筱希，劉瑛，黃建猷，等.瑤藥消瘤藤體外抗腫瘤活性部位篩選[J].中藥藥理與臨床， 2019，35（5）：52-56.

[11] 劉瑛，陸國壽，胡筱希，等.基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的消瘤藤總香豆素抗腫瘤潛在機(jī)制探討[J].中藥藥理與臨床，2019，35（6）：57-63.

[12] 劉瑛，陸國壽，王麗，等.消瘤藤醇提物對(duì)H22荷瘤鼠的抑瘤作用研究[J].中國藥學(xué)雜志，2016，51（12）：981-984.

[13] 黃周鋒，陸國壽，盧文杰，等.星毛冠蓋藤脂溶性成分及其抗氧化活性研究[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2017，23（15）：51-53.

[14] 李耀燕，裴艷艷，黃珊艷，等.瑤藥腫瘤藤（星毛冠蓋藤）的生藥學(xué)研究[J].作物雜志，2018（1）：62-65.

[15] 盧森華，黎強(qiáng)，樊文研，等. HPLC特征指紋圖譜結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)評(píng)價(jià)不同產(chǎn)地消瘤藤的藥材質(zhì)量[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2020，34（6）：52-56.

[16] 李詠梅，佘朋桂，肖冰梅.星毛冠蓋藤不同藥用部位的高效液相色譜分析[J].中國民族民間醫(yī)藥，2013，22（18）：17-18，20.

[17] 肖冰梅，佘朋桂，李詠梅，等.星毛冠蓋藤的質(zhì)量研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2012，18（13）：131-133.

[18] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典：四部[S]. 2020年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020：59-60，114-115，232，234.

[19] 李法慶，劉東鋒.一種茵芋苷的制備方法：CN 102911224 A?[P]. 2013-02-06.

[20] 段志富，陳建偉，李詳.傘形科藥用植物中香豆素類成分及其藥理作用研究現(xiàn)狀[J].中國藥房，2008，19（3）：223- 226.

[21] 許書慧，陳惠琴，范玉嬌，等.黃皮種子中香豆素類化合物的分離、鑒定及其α-葡萄糖苷酶抑制活性和全齒復(fù)活線蟲致死活性研究[J].中國藥房，2019，30（4）：518-522.

[22] 蔣太白，張洪，危英，等. HPLC同時(shí)測(cè)定山辣子皮中3種抗HCV NS3/4A蛋白酶香豆素的含量[J].中藥材，2017，40（12）：2895-2898.

（收稿日期：2021-04-06 修回日期：2021-09-22）

（編輯：胡曉霖）