雷 鳴 周 杰 王美元 馮瑞偉 向 珊 劉 遄 郭劍華

（1.重慶市中醫(yī)院，重慶 400021；2.重慶市中醫(yī)骨科醫(yī)院，重慶 400012）

腰痛主要表現(xiàn)為一側(cè)或者兩側(cè)疼痛，多因內(nèi)傷、外感、跌傷閃挫引起。內(nèi)傷由于先天稟賦不足，腎虛腰府失養(yǎng)；外感因風(fēng)、寒、濕、熱等諸邪阻滯經(jīng)脈，或閃腰岔氣、氣滯血瘀、經(jīng)絡(luò)不通，以外感寒邪發(fā)病常見(jiàn)［1］。寒為陰邪，收斂凝閉、侵襲肌膚經(jīng)脈、阻遏衛(wèi)陽(yáng)，導(dǎo)致腰府氣血不暢［2］。腰痹舒膠囊是經(jīng)全國(guó)名中醫(yī)郭劍華經(jīng)驗(yàn)方腰痹舒湯改良劑型而成，方中炮干姜、炒白術(shù)、茯苓、炙甘草、芍藥、桑寄生、獨(dú)活、牛膝散寒除濕、補(bǔ)益肝腎［3］。本研究在前期腰痹舒湯制作工藝、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)的基礎(chǔ)上，觀察了腰痹舒膠囊的鎮(zhèn)痛作用及對(duì)寒濕痹阻腰痛模型大鼠的血液流變學(xué)影響，為腰痹舒膠囊治療寒濕痹阻腰痛癥提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 C57小鼠50只，雌、雄各半，體質(zhì)量250～270 g；60只SD大鼠，雌、雄各半，體質(zhì)量250～270 g，均由重慶市中藥研究院動(dòng)物所提供（生產(chǎn)廠家：湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司）。實(shí)驗(yàn)大鼠于SPF屏障環(huán)境中喂養(yǎng)，采用大鼠專用飼料，保證大鼠食水充足及環(huán)境衛(wèi)生。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方案符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利倫理的相關(guān)規(guī)定。大、小鼠維持墊料及飼料均由重慶市中藥研究院動(dòng)物所提供（生產(chǎn)廠家：江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物工程有限責(zé)任公司）。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物 腰痹舒膠囊提取物（重慶市中醫(yī)院，批號(hào)：20200601，20200603，20200605），由重慶市中醫(yī)院藥劑科提供；阿司匹林腸溶片（拜耳醫(yī)藥保健有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字J20130078）；復(fù)方丹參片（北京同仁堂科技發(fā)展股份有限公司制藥廠，國(guó)藥準(zhǔn)字Z11021185）；冰醋酸（無(wú)錫陽(yáng)山生化有限責(zé)任公司，批號(hào)為20200801）。

1.3 試劑及儀器 瑪福爾人工氣候培養(yǎng)箱（天津瑪福爾科技有限公司），JC-DZSJ-15型純水機(jī)（青島聚創(chuàng)環(huán)保集團(tuán)有限公司），0.01 g實(shí)驗(yàn)室精密分析電子天平（東莞市衡之邦有限公司），202-0S型電熱鼓風(fēng)干燥箱（紹興萬(wàn)力儀器有限公司），F(xiàn)ASCO-2050A型全自動(dòng)血流變快測(cè)儀（重慶維多科技有限公司），奧林巴斯BX43雙目顯微鏡，萊卡ASP300S型脫水機(jī)，萊卡石蠟包埋機(jī)、切片機(jī)，CB-800V型潔凈工作臺(tái)［蘇潔醫(yī)療器械（蘇州）有限公司］，6 kg/0.2 g電子計(jì)重計(jì)數(shù)秤（上海凡展衡器有限公司），蘇木精染色液（批號(hào)：20200406）、伊紅染色液（批號(hào)：20200406）均由重慶葉脈生物技術(shù)有限責(zé)任公司提供。

1.4 小鼠鎮(zhèn)痛作用實(shí)驗(yàn)［4-5］取C57小鼠50只，按照小鼠體質(zhì)量分為模型組，陽(yáng)性藥組，以及腰痹舒膠囊高劑量組、腰痹舒膠囊中劑量組和腰痹舒膠囊低劑量組，每組各10只。適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，模型組灌胃等體積純化水，陽(yáng)性藥組灌胃阿司匹林腸溶片61.0 mg/kg，腰痹舒膠囊高、中、低劑量組分別灌胃生藥20.8、10.4、5.2 g/kg，給藥劑量均為20 mL/kg，每日1次，連續(xù)5 d。末次給藥后1 h，各組小鼠均腹腔注射0.8%冰醋酸0.2 mL，記錄注射后20 min內(nèi)小鼠出現(xiàn)扭體反應(yīng)的次數(shù)及其潛伏期。

1.5 大鼠寒濕痹阻模型干預(yù)實(shí)驗(yàn) 60只SD大鼠按體質(zhì)量分為空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性藥組及腰痹舒膠囊高劑量組、中劑量組、低劑量組，每組各10只，將瑪福爾人工氣候培養(yǎng)箱設(shè)置為溫度4℃，濕度60%，進(jìn)行寒濕痹阻模型造模。造模結(jié)束后，模型組取2只大鼠處死，取腰部皮下筋膜肌肉組織（2 cm×2 cm），立即放入10%甲醛溶液中固定，常規(guī)脫水后石蠟包埋切片，行HE染色，鏡下觀察病理組織變化，以確定是否成模。造模成功后，模型組灌胃等體積純化水，陽(yáng)性藥組灌胃復(fù)方丹參片1.1 g/kg，腰痹舒膠囊高、中、低劑量組分別灌胃生藥10.4、5.2、2.6 g/kg，每日1次，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后，處死全部大鼠，測(cè)定血液流變學(xué)指標(biāo)，同時(shí)取腰部皮下筋膜肌肉組織進(jìn)行病理觀察，方法同上。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)量資料以（±s）表示，行t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 各組小鼠扭體反應(yīng)潛伏期及扭體反應(yīng)次數(shù)的比較 見(jiàn)表1。與模型組比較，陽(yáng)性藥組、腰痹舒膠囊高劑量組、腰痹舒膠囊中劑量組小鼠扭體反應(yīng)潛伏期延長(zhǎng)，且扭體反應(yīng)次數(shù)減少（P<0.01），腰痹舒膠囊低劑量組小鼠僅扭體潛伏期延長(zhǎng)（P<0.05）。

表1 各組小鼠扭體反應(yīng)潛伏期及扭體反應(yīng)次數(shù)的比較（±s）

表1 各組小鼠扭體反應(yīng)潛伏期及扭體反應(yīng)次數(shù)的比較（±s）

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01。

images/BZ_62_1310_1564_2315_1631.png模型組陽(yáng)性藥組腰痹舒膠囊高劑量組腰痹舒膠囊中劑量組腰痹舒膠囊低劑量組30.6±7.7 23.2±5.7**25.8±6.6**26.8±4.7**28.3±9.1 10 10 10 10 10 3.5±0.7 5.3±1.9**4.9±0.8**4.7±1.0**4.3±0.7*

2.2 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)的比較 見(jiàn)表2。與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠的血黏度、血漿黏度、血細(xì)胞比容、還原黏度、紅細(xì)胞變形指數(shù)以及紅細(xì)胞剛性指數(shù)均顯著升高（P<0.05或P<0.01）；與模型組比較，陽(yáng)性藥組大鼠高切全血黏度、高切還原黏度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)、紅細(xì)胞變形指數(shù)和紅細(xì)胞剛性指數(shù)均顯著降低（P<0.05或P<0.01）；腰痹舒膠囊高劑量組及腰痹舒膠囊中劑量組大鼠低切全血黏度和低切還原黏度均顯著降低（P<0.05或P<0.01）。

表2 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較（±s）

表2 各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)比較（±s）

注：與模型組比較，*P<0.05，**P<0.01；與空白對(duì)照組比較，△P<0.05，△△P<0.01。

images/BZ_63_165_422_2252_552.png 空白對(duì)照組模型組陽(yáng)性藥組腰痹舒膠囊高劑量組腰痹舒膠囊中劑量組腰痹舒膠囊低劑量組5.85±1.19 7.61±0.74△△6.14±0.95*7.42±1.43 7.26±1.01 7.63±0.96 10 8 10 10 10 10 4.84±0.52 7.08±0.65△△6.18±0.68*7.05±0.92 6.77±0.62 6.71±0.56 10.59±0.57 13.03±0.58△12.26±0.66 11.94±0.95**12.00±0.95**12.77±0.51 1.58±0.06 1.78±0.12△1.81±0.08 1.76±0.15 1.75±0.10 1.71±0.16 0.36±0.01 0.39±0.01△△0.40±0.012 0.39±0.01 0.39±0.02 0.40±0.02 10.8±1.4 15.5±2.0△△13.2±1.7*14.3±1.8 14.6±1.7 15.4±2.5 27.0±1.7 30.8±2.5△△28.7±1.6 27.9±2.6*27.7±2.0**29.4±2.3 1.01±0.09 1.08±0.06 0.98±0.08*1.05±0.11 1.05±0.07 1.08±0.06 6.74±0.58 7.34±0.30△△6.78±0.43**6.82±0.83 6.88±0.79 7.52±0.62

2.3 各組大鼠組織病理學(xué)指標(biāo)的比較 圖1～圖3示空白組皮下膠原、肌組織、脂肪組織均顯示正常，未見(jiàn)淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。圖4～圖7示模型組皮下膠原、肌組織、脂肪組織，顯示肌纖維變性、壞死，纖維化伴淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)、橫紋肌灶性萎縮、壞死提示造模成功。圖9顯示灌胃1周后腰痹舒膠囊組纖維間質(zhì)水腫，少許淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)；圖10顯示模型組自然愈合1周后，纖維間質(zhì)水腫，少許淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。兩組對(duì)比無(wú)明顯差異。

圖1 空白組皮下膠原

圖2 空白組正常肌組織

圖3 空白組正常脂肪組

圖4 模型組皮下膠原（400倍）

圖5 模型組肌組織（200倍）

圖6 模型組肌組織（200倍）

圖7 模型組脂肪組織（400倍）

圖8 腰痹舒膠囊組（400倍）

圖9 腰痹舒膠囊組（400倍）

圖10 模型組（100倍）

3 討 論

腰痛又稱“腰脊痛”，為臨床上常見(jiàn)病，多因外感六淫之邪，或因勞傷、閃挫，或因腎氣不足等導(dǎo)致局部氣血運(yùn)行不暢，腰府失養(yǎng)、筋脈拘急，造成以椎旁或棘間、棘上疼痛為主的一類病癥［6］。重慶地處西南，陰冷潮濕，以寒濕痹阻型多見(jiàn)［7］。中醫(yī)藥在治療寒濕痹阻型腰痛方面具有明顯優(yōu)勢(shì)，有艾灸、電針、山火拍打法、掌擦法、火罐等中醫(yī)外治法［8-9］，此外也有以中藥腎著湯、溫經(jīng)通絡(luò)湯、干姜術(shù)苓湯、薏仁蠲痹湯等療法［10-11］，并取得了可觀的療效。全國(guó)名中醫(yī)郭劍華教授擅長(zhǎng)于頸肩腰腿痛等疑難病癥的治療，在長(zhǎng)期的臨床實(shí)踐中逐漸形成了治療寒濕痹阻型腰痛的經(jīng)驗(yàn)方“腰痹舒湯”，并進(jìn)一步開(kāi)發(fā)成了膠囊劑，以方便患者服用［3］。腰痹舒膠囊由干姜、炒白術(shù)、茯苓、炙甘草、白芍、桑寄生、獨(dú)活、牛膝8味藥組成，干姜溫經(jīng)止血、溫中止痛為君藥；炒白術(shù)、茯苓、白芍補(bǔ)脾益氣為臣藥，桑寄生、獨(dú)活、牛膝善于祛風(fēng)除濕，通痹止痛為佐藥；炙甘草調(diào)和藥性為使藥，以上諸藥共奏祛寒濕、活血止痛之效?，F(xiàn)代研究表明，干姜中所含姜酚類化合物能抑制二甲苯致耳腫脹［12］，對(duì)二磷酸腺苷、花生四烯酸、腎上腺素、膠原引起的血小板聚集也有良好的抑制作用［13］；白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ能抑制LPS刺激的RAW264.7細(xì)胞中的炎性細(xì)胞因子［14］，白術(shù)多糖可調(diào)節(jié)巨噬細(xì)胞活性，增強(qiáng)特異性體液免疫應(yīng)答［15］；牛膝總皂苷具有明顯抗炎鎮(zhèn)痛作用，其中廣東土牛膝乙醇提取液對(duì)蛋清致大鼠足跖腫脹、棉球肉芽腫增生的抑制作用優(yōu)于阿司匹林［16］；白芍總提物對(duì)抑制炎性水腫和炎性滲出均有很好的效果［17］。

本研究結(jié)果顯示，腰痹舒膠囊低劑量能延長(zhǎng)冰醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)潛伏期，高、中劑量不僅能顯著延長(zhǎng)潛伏期，還能明顯減少小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)。在大鼠血液流變學(xué)試驗(yàn)中，高、中劑量能明顯降低寒濕痹阻模型大鼠的低切全血黏度和低切還原黏度，且高切還原黏度也呈降低趨勢(shì)，表現(xiàn)其具有一定的活血化瘀作用。進(jìn)一步組織病理學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，腰痹舒膠囊各組與模型組自然愈合無(wú)明顯差異。綜上所述，腰痹舒膠囊有一定的活血化瘀及鎮(zhèn)痛作用，其活血化瘀作用可能與降低低切全血黏度和低切還原黏度有關(guān)。其具體機(jī)制還有待從細(xì)胞及分子生物學(xué)水平進(jìn)行深入研究。