梁耕源，申吉泓，郭彩芬，曾一真，尹金理，高振華（通訊作者）

（1 昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院泌尿外科 云南 昆明 650000）

（2 昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)影像科 云南 昆明 650000）

（3 昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院耳鼻喉一科 云南 昆明 650000）

隨著人類社會(huì)的進(jìn)步、科技水平的不斷發(fā)展，由各種事故、意外所導(dǎo)致的尿道創(chuàng)傷逐年增加；不良文化的影響也成了導(dǎo)致尿道損傷的一大因素[1]。尿道狹窄（urethral stricture）作為尿道損傷最常見(jiàn)、最嚴(yán)重的并發(fā)癥，其治療一直是困擾泌尿外科醫(yī)生的難題。尿道狹窄主要表現(xiàn)前、后尿道的管腔狹窄、攣縮和瘢痕形成?；颊咴诔跗跁?huì)表現(xiàn)為排尿困難等下尿路癥狀，同時(shí)伴有結(jié)石、尿路感染等問(wèn)題。后期可逐漸發(fā)展為腎衰竭、敗血癥甚至威脅生命[2]。對(duì)于尿道創(chuàng)傷和狹窄的病理機(jī)制深入研究不足以及治療時(shí)機(jī)的選擇錯(cuò)誤導(dǎo)致目前的治療方法成功率低、復(fù)發(fā)率高。為了更好地研究尿道狹窄的發(fā)生發(fā)展機(jī)制，早日解決尿道狹窄的治療問(wèn)題，一個(gè)良好的尿道狹窄動(dòng)物模型是必不可少的。本研究通過(guò)導(dǎo)尿管氣囊法構(gòu)建兔尿道狹窄模型，旨在找到更加經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、可靠的尿道狹窄模型建立方法，為尿道狹窄的研究提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本研究選用30 只體重（2.5±0.5）kg 的成年雄性新西蘭家兔（昆明楚商科技實(shí)驗(yàn)動(dòng)物銷售有限公司）。飼養(yǎng)在通風(fēng)、干燥溫度適宜的環(huán)境中，單只獨(dú)立飼養(yǎng)，標(biāo)準(zhǔn)維持飼料（昆明楚商科技實(shí)驗(yàn)動(dòng)物銷售有限公司）定時(shí)定量喂養(yǎng)，飲水充足，于新環(huán)境飼養(yǎng)觀察2 周后所有動(dòng)物健康生長(zhǎng)，無(wú)異常行為。

主要試劑及材料：戊巴比妥鈉（北京寰宇科創(chuàng)生物科技發(fā)展有限公司）、碘海醇、安爾碘（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)有限公司）、0.9%氯化鈉溶液（昆明南疆制藥有限公司）、氣囊導(dǎo)尿管（巴德醫(yī)療技術(shù)有限公司）、輸尿管導(dǎo)管（上海上醫(yī)康鴿醫(yī)用器材有限公司）、一次性無(wú)菌注射器（漯河市曙光醫(yī)療器材有限公司）、嚙齒動(dòng)物類手術(shù)器械（江西洪達(dá)器械集團(tuán)有限公司）。

主要儀器：動(dòng)物手術(shù)臺(tái)、數(shù)字化移動(dòng)式醫(yī)用X 射線機(jī)（南京普愛(ài)醫(yī)療設(shè)備股份有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組 將30 只雄性新西蘭兔隨機(jī)分解剖組、正常對(duì)照組、4 mL 組、10 mL 組、15 mL 組，均為6 只。其中解剖組用來(lái)確定氣囊放入尿道的位置與氣囊大小。正常對(duì)照組：采用0.7%戊巴比妥鈉（6 mL／kg）耳緣靜脈緩慢注射麻醉，麻醉成功后將兔仰臥位置于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上并用繩子固定四肢，顯露尿道外口，安爾碘局部消毒，經(jīng)尿道外口插入8F 小兒尿管于膀胱內(nèi)，不進(jìn)行其他操作，留置導(dǎo)尿管2.5 h 后，拔除導(dǎo)尿管并局部消毒。術(shù)后待兔清醒后將其放回籠內(nèi)，送至動(dòng)物房。

解剖組：（1）確定尿道長(zhǎng)度：采用0.7%戊巴比妥鈉（6 mL／kg）耳緣靜脈緩慢注射麻醉，麻醉成功后將兔仰臥位置于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上并用繩子固定四肢，顯露尿道外口，安爾碘部消毒。經(jīng)尿道外口插入8F 小兒尿管，見(jiàn)導(dǎo)尿管口有尿液流出后繼續(xù)插入2 cm，向氣囊內(nèi)注射10 mL 0.9%氯化鈉溶液后向外拉導(dǎo)尿管至無(wú)法拉動(dòng)，在導(dǎo)尿管上標(biāo)記尿道口位置，拔出尿管，并重新注水10 mL 用于測(cè)量尿道長(zhǎng)度。估測(cè)新西蘭雄兔尿道長(zhǎng)度（尿道長(zhǎng)度=標(biāo)記處長(zhǎng)度-注水后球囊遠(yuǎn)端至尿管尖端開口的距離）。（2）確定氣囊放入位置：采用耳緣靜脈空氣栓塞方法處死兔，兔仰臥位置于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上，將兔泌尿系統(tǒng)仔細(xì)完整分離下來(lái)。經(jīng)尿道外口插入8F小兒尿管，觀察整個(gè)尿道。將氣囊置于前尿道中央位置（置管深度約5.0 cm），向氣囊內(nèi)注射0.9%氯化鈉溶液10 mL，見(jiàn)導(dǎo)尿管氣囊因受到海綿體壓迫無(wú)法膨大。將氣囊置于前尿道近尿道球部（置管深度約6.0 cm）位置，向氣囊內(nèi)注射0.9%氯化鈉溶液，見(jiàn)導(dǎo)尿管氣囊在尿道球部處膨大。故將氣囊放入的位置確定在距尿道球部（置管深度約6.0 cm）。（3）確定氣囊大?。翰捎枚夓o脈空氣栓塞方法處死兔，兔仰臥位置于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上，將兔泌尿系統(tǒng)仔細(xì)完整分離下來(lái)。經(jīng)尿道外口插入8F 小兒尿管，觀察整個(gè)尿道。將氣囊置于前尿道近尿道球部（置管深度約6.0 cm）位置，分別向氣囊內(nèi)注射0.9%氯化鈉溶液4、10、15 mL，觀察并記錄尿道形態(tài)變化。

1.2.2 新型尿道狹窄模型建立 兔隨機(jī)分為三組（4 mL 組、10 mL 組、15 mL 組），每組6 只。采用0.7%戊巴比妥鈉（6 mL／kg）耳緣靜脈緩慢注射麻醉，麻醉成功后將兔仰臥位置于動(dòng)物手術(shù)臺(tái)上并用繩子固定四肢，顯露尿道外口，安爾碘部消毒。經(jīng)尿道外口插入8F 小兒尿管，置管深度約6.0 cm。分別向各分組兔的球囊內(nèi)注水4、10、15 mL，固定導(dǎo)尿管，持續(xù)2.5 h 后，拔除導(dǎo)尿管并局部消毒。所有的手術(shù)都是由同1 名泌尿科醫(yī)生以同樣的方式進(jìn)行的。動(dòng)物手術(shù)前后均不使用抗生素治療，術(shù)后均小心將兔置于無(wú)菌熱墊上待其清醒后放入動(dòng)物房，單籠喂養(yǎng)，可以正常進(jìn)食及飲水，自由活動(dòng)。術(shù)后每日觀察兔排尿情況，3 周后行逆行尿道造影，同時(shí)測(cè)量遠(yuǎn)端正常尿道內(nèi)徑和狹窄遠(yuǎn)端尿道內(nèi)徑。根據(jù)以往的研究，當(dāng)尿道管腔縮小至50%，便認(rèn)為其形成了尿道狹窄，遠(yuǎn)端正常尿道內(nèi)徑減去狹窄段內(nèi)徑與遠(yuǎn)端正常尿道內(nèi)徑的比即為縮窄率，比值越大說(shuō)明狹窄程度越重[3]。

1.2.3 逆行尿道造影 術(shù)后3 周，X線透視下行逆行尿道造影。采用耳緣靜脈空氣栓塞方法處死兔，將兔仰臥位置于X 線床上。首先對(duì)兔進(jìn)行骨盆攝影，以確認(rèn)正常解剖，然后打開腹腔暴露膀胱，尿道灌注石蠟油2 mL潤(rùn)滑。將碘海醇注射液與0.9%氯化鈉溶液按1:2 比例稀釋作為造影劑，然后將F6 輸尿管導(dǎo)管置入膀胱內(nèi)，使用20 mL 注射器將20 mL 造影劑緩慢由輸尿管導(dǎo)管注滿膀胱。在鉛衣防護(hù)下進(jìn)行逆行尿道造影，機(jī)器輔助腹部加壓膀胱使造影劑由尿道外口流出（注意加壓平均用力），模擬兔排尿過(guò)程，同時(shí)進(jìn)行X攝片，保存造影圖片，測(cè)量狹窄直徑。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用GraphPad Prism 7 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件，數(shù)據(jù)表述以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（± s）表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間比較采取單因素分析，兩兩比較采取t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 術(shù)后排尿情況

平均手術(shù)時(shí)間3 h，在實(shí)驗(yàn)期間，各組兔均未出現(xiàn)意外死亡情況。10 mL 組6 只兔中，3 只術(shù)后出現(xiàn)尿道出血，在0.5 h 內(nèi)自行消退；15 mL 組6 只兔中，6 只術(shù)后出現(xiàn)尿道出血，5 只出血在0.5 h 內(nèi)自行消退，1 只在9 h 后恢復(fù)正常。其余各組兔均排尿正常。

2.2 解剖組

（1）所有實(shí)驗(yàn)雄兔尿道平均長(zhǎng)度為（7.8±0.5）cm。（2）氣囊放入位置與大小。氣囊均準(zhǔn)確放置在尿道球部位置，氣囊大小與尿道形態(tài)變化：注入4 mL 0.9%氯化鈉溶液，尿道黏膜脹大；注入10 mL 0.9%氯化鈉溶液，尿道黏膜被撐破或撕破，形成（9.87±6.07）mm2大小不等創(chuàng)面；注入15 mL 0.9%氯化鈉溶液，尿道黏膜被撕破，形成（27.94±3.24）mm2大小不等創(chuàng)面，見(jiàn)圖1。

圖1 10 mL 組、15 mL 組創(chuàng)傷面積

2.3 逆行尿道造影

術(shù)后3 周，X線透視下對(duì)各組兔行逆行尿道造影。正常對(duì)照組均無(wú)尿道狹窄形成；4 mL 組術(shù)后測(cè)量尿道球部狹窄段內(nèi)徑（4.02±0.11）mm，正常對(duì)照組術(shù)后球部相應(yīng)段內(nèi)徑（4.03±0.09）mm，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；10 mL 組術(shù)后測(cè)量尿道球部狹窄段內(nèi)徑（2.97±0.97）mm，正常對(duì)照組術(shù)后球部相應(yīng)段內(nèi)徑（4.03±0.09）mm，兩組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；15 mL 組術(shù)后測(cè)量尿道球部狹窄段內(nèi)徑（1.95±0.09）mm，正常對(duì)照組術(shù)后球部相應(yīng)段內(nèi)徑（4.03±0.09）mm，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），狹窄段與尿道遠(yuǎn)端正常段相比較，縮窄率范圍在47.5%～55.0%,提示尿道狹窄，見(jiàn)圖2。

圖2 各組中球部狹窄段直徑

3.討論

尿道狹窄是泌尿外科常見(jiàn)疾病。主要因各種因素造成的尿道黏膜上皮被破壞，損傷局部收到持續(xù)的尿液侵襲和炎癥刺激，導(dǎo)致上皮下海綿體組織纖維化，堵塞尿道。造成患者排尿困難、尿潴留等癥狀，后期甚至發(fā)展為腎臟功能衰竭[4]。尿道狹窄可分為先天性和后天性尿道狹窄兩大類，其中后天性尿道狹窄按照病因可分為創(chuàng)傷性、醫(yī)源性、炎癥性、硬化性苔蘚等[5]。在我國(guó)，創(chuàng)傷性尿道狹窄仍然是主要病因，醫(yī)源性損傷等非創(chuàng)傷性病因所致的尿道狹窄逐年快速增加[6]。尿道狹窄的治療是泌尿外科急需解決的問(wèn)題。近年來(lái)，其治療方式逐漸由腔內(nèi)尿道手術(shù)向開放尿道成形術(shù)轉(zhuǎn)變[7]。腔鏡微創(chuàng)技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單、并發(fā)癥少，但是成功率低，而尿路重建手術(shù)成功率高，但技術(shù)要求也高[8]。同時(shí)各種抗纖維化藥物的治療層出不窮，性功能的恢復(fù)也日益受到重視[9]。而建立一個(gè)良好的尿道狹窄模型對(duì)于尿道狹窄治療的研究是尤為重要的。

目前尚無(wú)尿道狹窄模型的標(biāo)準(zhǔn)建立方式，多以切口法和電凝法為主。切口法即行開放手術(shù)切除尿道黏膜，此方法可準(zhǔn)確控制切除面積，狹窄成功率高，但手術(shù)過(guò)程相對(duì)復(fù)雜，對(duì)兔創(chuàng)傷較大，易導(dǎo)致感染和其他并發(fā)癥[10]；電凝法即利用小兒電切鏡在直視下將尿道黏膜灼燒至潰瘍，此方法成功率較低且所需器械條件苛刻，后有學(xué)者改進(jìn)了此方法，將尿道黏膜電切出更大的創(chuàng)面，從而提高了尿道狹窄成功率[11]。但有些模型建立者面臨缺少小兒電切鏡的問(wèn)題，從而無(wú)法應(yīng)用此方法[12]。

本課題組受到臨床工作中導(dǎo)尿管氣囊損傷尿道的患者及產(chǎn)傷導(dǎo)致尿失禁患者的啟發(fā)，建立了導(dǎo)尿管氣囊尿道狹窄模型。有研究表明，與電凝法相比，切口法和電切法所形成的較大創(chuàng)傷更有利于尿道狹窄的形成[13]。所以本研究利用注水氣囊導(dǎo)致球部尿道黏膜局部缺血、黏膜撕裂、連續(xù)性中斷，形成與切口法和電切法大小相似的創(chuàng)傷，而不損傷海綿體等尿道周圍組織，從而避免了對(duì)兔造成較大損傷。我們通過(guò)解剖組確定了導(dǎo)尿管置管深度為6 cm，并驗(yàn)證了預(yù)先設(shè)置的三組不同大小水囊對(duì)尿道黏膜的影響。4 mL 組可以使尿道黏膜撐大但無(wú)創(chuàng)口形成；10 mL 組可以使尿道黏膜撐破，但創(chuàng)口大小不等；15 mL 組可以使尿道黏膜撐破，且創(chuàng)口較大，與常用切口法所造成的10 mm×5 mm 大小相近。尿道狹窄的形成一般需要3 周時(shí)間，所以我們?cè)谛g(shù)后3 周對(duì)兔進(jìn)行逆行尿道造影，對(duì)照組和4 mL 組無(wú)尿道狹窄形成，10 mL 組和15 mL 組均有尿道狹窄形成但15 mL 組成功率和縮窄率更高。4 mL 組、10 mL 組與對(duì)照組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），15 mL 組與對(duì)照組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。故可采用15 mL 組方法建立尿道狹窄。此方法步驟簡(jiǎn)便、器械容易獲得、成功率較高，可為尿道狹窄的治療提供可靠的動(dòng)物模型，但日后還需進(jìn)行HE染色和尿道鏡直視下觀察，以進(jìn)一步從多方面驗(yàn)證狹窄的形成。

綜上所述，利用導(dǎo)尿管氣囊注入15 mL 0.9%氯化鈉溶液建立兔尿道狹窄模型的方法可以有效模擬出切口法造成的尿道損傷，方法簡(jiǎn)潔、經(jīng)濟(jì)、成功率高，可作為尿道狹窄模型建立方式。4 mL 及10 mL 組因?yàn)閾p傷較小，不能有效地建立尿道狹窄模型。