王牧 喻滿霞

過(guò)敏是一類臨床常見(jiàn)疾病，其中以IgE 介導(dǎo)的過(guò)敏性疾病為最常見(jiàn)，包括哮喘、鼻炎、嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)、藥物過(guò)敏、食物過(guò)敏、濕疹、蕁麻疹和血管性水腫等。全球范圍內(nèi)包括發(fā)達(dá)國(guó)家和發(fā)展中國(guó)家過(guò)敏性疾病的患病率都在急劇上升，已經(jīng)成為重大的社會(huì)衛(wèi)生問(wèn)題。據(jù)世界衛(wèi)生組織WHO 統(tǒng)計(jì)，全球有數(shù)億人患有鼻炎，估計(jì)有3 億人有哮喘，且每年有25萬(wàn)人死于可以避免的哮喘[1]。

引起過(guò)敏反應(yīng)的物質(zhì)叫過(guò)敏原，亦稱為變應(yīng)原。防治過(guò)敏性疾病的關(guān)鍵在于發(fā)現(xiàn)過(guò)敏原并避免與之接觸，或進(jìn)行免疫治療，因此過(guò)敏原特異性IgE（sIgE）檢測(cè)是診斷和防治過(guò)敏性疾病的重要依據(jù)。

通常過(guò)敏原sIgE 檢測(cè)可以分為兩大類：一類是體內(nèi)試驗(yàn)，如皮膚試驗(yàn)、激發(fā)試驗(yàn)等；一類是體外試驗(yàn)，如血清學(xué)過(guò)敏原sIgE 檢測(cè)、嗜堿性粒細(xì)胞激活試驗(yàn)（BAT）等。如果按照過(guò)敏原sIgE 的顯示證據(jù)鏈，可分為反映sIgE 直接證據(jù)的體外血清學(xué)過(guò)敏原sIgE 檢測(cè)和反映sIgE 間接證據(jù)的皮膚試驗(yàn)和體外BAT 等。又如根據(jù)過(guò)敏原制備的差異，又可以分為粗提取物試驗(yàn)和蛋白組分試驗(yàn)。

1 皮膚試驗(yàn)

用于過(guò)敏原sIgE 檢測(cè)的皮膚試驗(yàn)通常包括皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)和皮內(nèi)試驗(yàn)。皮膚斑貼試驗(yàn)是用于輔助診斷遲發(fā)型細(xì)胞介導(dǎo)的過(guò)敏反應(yīng)，與IgE 介導(dǎo)的速發(fā)型過(guò)敏反應(yīng)沒(méi)有相關(guān)性。所有的皮膚試驗(yàn)，都需采用合適的陽(yáng)性組胺對(duì)照和陰性對(duì)照以確認(rèn)陽(yáng)性或陰性試驗(yàn)結(jié)果的有效性。采用的陰性質(zhì)控取決于所采用的過(guò)敏原提取物的溶媒[2]。如點(diǎn)刺液是過(guò)敏原的甘油生理鹽水溶液，采用的陰性對(duì)照就應(yīng)該是甘油生理鹽水溶液。皮膚試驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)就在于患者可以立刻知道自己對(duì)哪種過(guò)敏原過(guò)敏或者什么是引起他/她的癥狀的原因，而且與激發(fā)試驗(yàn)的相關(guān)性很好，尤其是皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)，但是可能有引起系統(tǒng)性反應(yīng)或其他不適的風(fēng)險(xiǎn)。所以不是所有患者都愿意接受皮膚試驗(yàn)，而且有些患者也不適合做皮膚試驗(yàn)，如具有皮膚劃痕癥或者全身濕疹，又或者使用過(guò)抗組胺藥等。此外，皮膚試驗(yàn)還有其他局限性，如皮膚試驗(yàn)用過(guò)敏原提取液標(biāo)準(zhǔn)化很難，不同廠家的過(guò)敏原提取液蛋白含量不同，批與批之間也會(huì)有很大差異，有些過(guò)敏原蛋白在提取過(guò)程中會(huì)缺失等[3-5]。因此，皮膚試驗(yàn)用的過(guò)敏原提取液的標(biāo)準(zhǔn)化和皮膚試驗(yàn)操作流程的標(biāo)準(zhǔn)化都非常有必要。

1.1 皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)

皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)（Skin Prick Test, SPT）可用于確認(rèn)各種過(guò)敏原的臨床敏感度，可以采用不同的器具不同的方法做[6]。SPT 是一類表皮試驗(yàn)，將少量高度純化的過(guò)敏原提取物溶液滴于患者前壁，再用點(diǎn)刺針或柳葉刀透過(guò)過(guò)敏原溶液輕輕刺入皮膚表層。然后一般 15～20min 后查看結(jié)果[2，6]。

研究顯示，與金標(biāo)準(zhǔn)口服食物激發(fā)試驗(yàn)相比，食物SPT 相當(dāng)敏感，陰性預(yù)測(cè)值超過(guò)90%[7]。SPT 陽(yáng)性結(jié)果（風(fēng)團(tuán)直徑超過(guò)陰性對(duì)照3mm[8]）僅是確認(rèn)致敏，不能單獨(dú)肯定診斷，不過(guò)風(fēng)團(tuán)直徑越大，測(cè)試食物引起過(guò)敏反應(yīng)的可能性增加，因此SPT 結(jié)果應(yīng)該評(píng)估風(fēng)團(tuán)大小，而不應(yīng)僅僅是記錄陰陽(yáng)性。如Sporik和其同事[9]定義在兒童人群以下幾種食物發(fā)生反應(yīng)的皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)平均風(fēng)團(tuán)直徑：牛奶＞8mm；雞蛋＞7mm；花生＞8mm。由于目前商業(yè)過(guò)敏原提取物尚無(wú)標(biāo)準(zhǔn)化，相對(duì)于吸入性過(guò)敏原提取物，一些食物蛋白不穩(wěn)定，導(dǎo)致商業(yè)提取物組分不夠，還是推薦使用新鮮食物做皮膚試驗(yàn)[10]。

使用SPT 診斷過(guò)敏時(shí)，在使用前，必須停用對(duì)SPT 結(jié)果有影響的藥物，如第一代抗組胺藥一般需要停用7d，第二代抗組胺藥一般停用24h，具有第一代抗組胺活性的抗抑郁藥停用一周，SPT 試驗(yàn)皮膚在試驗(yàn)前三周應(yīng)該避免使用長(zhǎng)效大劑量局部類固醇[8]。

1.2 皮內(nèi)試驗(yàn)

皮內(nèi)試驗(yàn)是把過(guò)敏原稀釋溶液直接注射到患者真皮，通常在注射后10～15min 觀察結(jié)果。皮內(nèi)試驗(yàn)比SPT 更敏感，因?yàn)樵摲椒ㄟ^(guò)于敏感且有誘發(fā)全身性反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)，尤其是在食物過(guò)敏患者，目前已不建議用于食物過(guò)敏的診斷[6]。

通常也不采用皮內(nèi)試驗(yàn)診斷呼吸道過(guò)敏，除非皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)陰性，或者是昆蟲(chóng)毒液過(guò)敏或者藥物過(guò)敏[8]。

2 激發(fā)試驗(yàn)

激發(fā)試驗(yàn)是模擬自然發(fā)病條件，以少量過(guò)敏原引起一次較輕的變態(tài)反應(yīng)發(fā)作，用于確定變應(yīng)原的試驗(yàn)，它被認(rèn)為是診斷過(guò)敏的金標(biāo)準(zhǔn)。根據(jù)患者發(fā)病部位的不同，可以進(jìn)行不同器官的激發(fā)試驗(yàn)，常做的是支氣管激發(fā)試驗(yàn)、鼻黏膜激發(fā)試驗(yàn)、結(jié)膜激發(fā)試驗(yàn)和口腔激發(fā)試驗(yàn)。由于其復(fù)雜性和危險(xiǎn)性，尤其是吸入性激發(fā)試驗(yàn)，通常用于研究目的。但口腔激發(fā)試驗(yàn)常用于研究食物和藥物過(guò)敏。

2.1 口服食物激發(fā)試驗(yàn)

自1976 年口服食物激發(fā)試驗(yàn)（Oral Food Challenge, OFC）用于兒童，1982 年用于成人診斷食物過(guò)敏后，雙盲安慰劑對(duì)照食物激發(fā)試驗(yàn)（DBPCFC）被用作食物過(guò)敏的診斷金標(biāo)準(zhǔn)[11，12]。由于DBPCFC 耗時(shí)，且耗費(fèi)資源，所以許多病例有客觀明確的反應(yīng)時(shí)，開(kāi)放的OFC 足以診斷食物過(guò)敏。

如果觀察到客觀臨床反應(yīng)或使用了最終劑量沒(méi)有觀察到臨床癥狀，通常應(yīng)立即停止食物過(guò)敏激發(fā)試驗(yàn)。速發(fā)型反應(yīng)通常出現(xiàn)在最后食物攝取后的2h 內(nèi)，特應(yīng)性濕疹可在口服激發(fā)試驗(yàn)后幾h 或幾d加重。蕁麻疹和血管性水腫是最常見(jiàn)的客觀體征，而胃腸道、呼吸道或心血管系統(tǒng)也常見(jiàn)累及。

為了優(yōu)化安全性，進(jìn)行OFC 時(shí)應(yīng)密切監(jiān)測(cè)生命體征，設(shè)備和經(jīng)過(guò)適當(dāng)培訓(xùn)的人員應(yīng)該到位，以便處理可能發(fā)生的過(guò)敏反應(yīng)包括嚴(yán)重過(guò)敏反應(yīng)。

3 體外檢測(cè)

自1966 年Ishizaka 夫婦和S. Johannson 同時(shí)發(fā)現(xiàn)免疫球蛋白 E（IgE）后[13，14]，體外檢測(cè)成為過(guò)敏診斷的一部分。過(guò)敏原特異性IgE 抗體是診斷過(guò)敏性疾病確定個(gè)體過(guò)敏原暴露的最重要的血清學(xué)標(biāo)志物。因此血清特異性IgE 抗體測(cè)定是臨床主要的體外檢測(cè)手段[15]。其他體外檢測(cè)有血清總IgE 測(cè)定、細(xì)胞測(cè)定、血清胰蛋白酶、嗜酸性陽(yáng)離子蛋白等。

3.1 總 IgE 測(cè)定

早期的一些研究已經(jīng)對(duì)各種變態(tài)反應(yīng)性疾病患者中總IgE 的作用進(jìn)行過(guò)評(píng)估，研究發(fā)現(xiàn)，在過(guò)敏性疾病患者中常出現(xiàn)總IgE 水平升高的傾向，其中大約有60%患者總IgE 水平在正常范圍以上，但正常個(gè)體和過(guò)敏性疾病患者之間的血清總IgE 水平有明顯的交叉[16，17]?？侷gE 水平還受年齡、性別等因素影響[18]。因此總IgE 水平測(cè)定有助于解釋過(guò)敏原檢測(cè)結(jié)果，但不能用來(lái)診斷過(guò)敏性疾病，更不能用來(lái)作為過(guò)敏原特異性診斷。雖然總IgE 不能用于診斷過(guò)敏性疾病，但其是變應(yīng)性支氣管肺曲霉?。ˋBPA）的診斷標(biāo)準(zhǔn)之一[19]，且其對(duì)過(guò)敏性疾病的抗IgE 治療具有重要意義，是單抗藥物劑量的選擇依據(jù)[20，21]。

3.2 體外過(guò)敏原sIgE 測(cè)定

體外過(guò)敏原sIgE 測(cè)定臨床上主要見(jiàn)于血清過(guò)敏原sIgE 檢測(cè)，后者在過(guò)敏原體外檢測(cè)中占有重要地位，被廣泛使用，它是過(guò)敏原特異性診斷最可靠的方法之一。自Wide 等[22]采用瓊脂糖珠作為固相載體第一次體外測(cè)定特異性IgE，后來(lái)開(kāi)發(fā)了不同的固相載體甚至是可溶性系統(tǒng)測(cè)定特異性IgE。其基本原理就是采用競(jìng)爭(zhēng)法或非競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)定形成的抗原抗體復(fù)合物的免疫測(cè)定。所有反應(yīng)系統(tǒng)的共同點(diǎn)是其使用的過(guò)敏原要有患者待檢血清中特異性IgE抗體所對(duì)應(yīng)的特定抗原表位，并且要有足夠且適當(dāng)?shù)目谷薎gE 的抗體。系統(tǒng)越好，可檢測(cè)的sIgE 抗體水平越低?？煽康膹S家提供的系統(tǒng)應(yīng)該確保反應(yīng)結(jié)合的特異性，即只能檢測(cè)IgE 抗體，也只能檢測(cè)到相應(yīng)過(guò)敏原特異性IgE 抗體，不會(huì)受其他不檢測(cè)的抗體包括總IgE 抗體干擾。高非特異性IgE 水平不會(huì)導(dǎo)致陽(yáng)性結(jié)果。

相對(duì)于皮膚試驗(yàn)，體外過(guò)敏原sIgE 檢測(cè)除了具有結(jié)果客觀，重復(fù)性好，不受藥物、皮膚等因素的影響，風(fēng)險(xiǎn)低等優(yōu)點(diǎn)外，還可以通過(guò)過(guò)敏原抑制檢查過(guò)敏原的特異性和交叉反應(yīng)性。另外有些局部過(guò)敏反應(yīng)只能采用體外過(guò)敏原sIgE 檢測(cè)，如檢測(cè)鼻分泌物中的sIgE 來(lái)診斷鼻局部sIgE 升高帶來(lái)的過(guò)敏癥狀，這類患者皮膚試驗(yàn)通常為陰性。

目前體外過(guò)敏原sIgE 檢測(cè)采用的主要是標(biāo)記免疫分析技術(shù)，主要包括放射性標(biāo)記免疫分析法、酶標(biāo)記免疫分析法、熒光免疫標(biāo)記分析法、化學(xué)發(fā)光免疫標(biāo)記分析法、膠體金標(biāo)記免疫分析法等，通過(guò)單一測(cè)試或者多重組合測(cè)試進(jìn)行測(cè)定。

3.2.1 放射性過(guò)敏原吸附試驗(yàn)（RAST）

RAST 是最早使用的過(guò)敏原檢測(cè)方法[23]，該方法敏感性、特異性和重復(fù)性均很高，易于自動(dòng)化，在國(guó)外得到廣泛應(yīng)用。但因?yàn)樵撛囼?yàn)需要放射性同位素，價(jià)格昂貴，半衰期短，且易污染環(huán)境，2010 年美國(guó)國(guó)家過(guò)敏及傳染性疾病研究所（NIAID）/國(guó)立衛(wèi)生研究院（NIH）建議停止采用RAST 診斷過(guò)敏，用更敏感的免疫方法代替[24]。

3.2.2 酶免法（EIA）

EIA 的特異性和敏感性與RAST 相似，它除了有RAST 的優(yōu)點(diǎn)外，而且還相對(duì)價(jià)廉，無(wú)放射性污染，安全等特點(diǎn)。原理是過(guò)敏原吸附在微孔板或紙片上，當(dāng)加入含有特異性IgE 抗體的待測(cè)血清時(shí)，抗體便與相應(yīng)的過(guò)敏原結(jié)合，再加入酶標(biāo)記的抗人IgE 抗體和相應(yīng)底物，就可以顯色測(cè)定血清特異性IgE 的含量。通常用于過(guò)敏原特異性IgE 的檢測(cè)有間接法和捕獲法，絕大多數(shù)過(guò)敏原體外檢測(cè)系統(tǒng)采用間接法。

3.2.3 金標(biāo)免疫技術(shù)

金標(biāo)免疫技術(shù)是以膠體金為標(biāo)記物，應(yīng)用于抗原抗體反應(yīng)的一種新型免疫標(biāo)記技術(shù)。其優(yōu)點(diǎn)是快速、簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)實(shí)用，穩(wěn)定性好，其缺點(diǎn)是靈敏度不如酶標(biāo)技術(shù)，一般作為定性，不易定量。臨床上采用的是斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)，如ImmunoCAP Rapid，但由于是定性結(jié)果，臨床應(yīng)用受到一定的限制。

3.2.4 免疫印跡法（IBT）

IBT 是在普通EIA 基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的新型技術(shù)，其特點(diǎn)是較ELISA 特異性更高，目前主要見(jiàn)于德國(guó)敏篩過(guò)敏原等檢測(cè)系統(tǒng)。其原理是將過(guò)敏原通過(guò)機(jī)器劃線，非共價(jià)吸附于硝酸纖維膜上，更好地保留了過(guò)敏原蛋白的空間構(gòu)象，其特點(diǎn)是可靠性高，特異性好。并融合了生物素親和素放大系統(tǒng)，大大提高了反應(yīng)的敏感度，可以進(jìn)行微量的抗體檢測(cè)，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。研究顯示，其敏感度與皮試相近，并與CAP 系統(tǒng)單項(xiàng)過(guò)敏原檢測(cè)試驗(yàn)結(jié)果相符[25]。

3.2.5 熒光免疫分析（FIA）

FIA 具有專一性強(qiáng)、靈敏度高、標(biāo)記物不易失活、無(wú)放射性污染等優(yōu)點(diǎn)。但一般熒光測(cè)定存在本底較高等問(wèn)題，在一般熒光免疫測(cè)定技術(shù)上發(fā)展了一些新型檢測(cè)技術(shù)，其中一種就是引入酶標(biāo)記技術(shù)，如Phadia 的CAP 系統(tǒng)采用的就是熒光酶免技術(shù)，該系統(tǒng)是目前國(guó)際上獲得較為廣泛應(yīng)用的過(guò)敏原體外定量檢測(cè)系統(tǒng)。其主要原理是過(guò)敏原包被在經(jīng)溴化氫活化的帽狀纖維素衍生物載體上，后者與過(guò)敏原有極高的結(jié)合能力，標(biāo)記β-半乳糖苷酶的抗人IgE 抗體作用于4-甲基傘酮-β-D 半乳糖苷產(chǎn)生4-甲基傘酮發(fā)出熒光。CAP 系統(tǒng)主要是定量檢測(cè)過(guò)敏原提取物或過(guò)敏原組分，但近年有文獻(xiàn)報(bào)道，由于其固相載體含碳水化合物抗原決定簇CCD 結(jié)構(gòu)，高達(dá)25%的患者可能出現(xiàn)假陽(yáng)性情況[26]。

3.2.6 化學(xué)發(fā)光免疫分析（CLIA）

CLIA 是將發(fā)光系統(tǒng)與免疫反應(yīng)相結(jié)合，具有免疫反應(yīng)的特異性，更具有發(fā)光反應(yīng)的高敏感性，是繼放免分析、酶免分析、熒光免疫分析之后發(fā)展起來(lái)的新型免疫測(cè)定技術(shù)。目前采用該技術(shù)的有日立的MAST 和西門(mén)子的IMMULITE 2000 系統(tǒng)，不同于CAP 系統(tǒng)，MAST 系統(tǒng)是組合檢測(cè)，一次同時(shí)半定量檢測(cè) 36 種過(guò)敏原；IMMULITE 2000 系統(tǒng)和 CAP 系統(tǒng)類似，可檢測(cè)500 多種過(guò)敏原，且可用于其它各種免疫分析檢測(cè)，是一種通用化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)。新近美國(guó)Hycor 推出的NOVEOS 系統(tǒng)采用熒光磁微?；瘜W(xué)發(fā)光免疫法，一個(gè)測(cè)試只需要4μL 血清，且不受 CCD 的干擾[27]。

3.2.7 過(guò)敏原微陣列芯片法（Allergen-MicroArrays）

微陣列芯片技術(shù)基礎(chǔ)研究始于20 世紀(jì)80 年代末，從生物遺傳學(xué)領(lǐng)域發(fā)展而起。微陣列技術(shù)是利用分子雜交的原理，用自動(dòng)化儀器把不同的，數(shù)以百計(jì)、千計(jì)已知部分序列的DNA 探針或蛋白質(zhì)“印”在玻片或尼龍膜上而成陣列。主要是DNA 芯片和蛋白質(zhì)芯片。Wiltshiere 等[28]第一次把該方法用于過(guò)敏原sIgE 檢測(cè)。該方法較以往常規(guī)的檢測(cè)技術(shù)，具有大通量、標(biāo)本用量少、平行性檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn)，使得同時(shí)檢測(cè)上百種過(guò)敏原蛋白成為可能，被視為是最有前景的診斷工具之一，尤其適用于小兒過(guò)敏的診斷。目前國(guó)際上已有若干家過(guò)敏原檢測(cè)產(chǎn)品采用該方法，但廣為接受的就是瑞典Phadia 的ImmunoCAP ISAC?；谏镄酒膬?yōu)點(diǎn)，目前也有很多廠家或組織嘗試研發(fā)不同類型的生物芯片技術(shù)用于sIgE 檢測(cè)，如Feyzkhanova 等[29]研發(fā)的水凝膠生物芯片60ul 血清可以測(cè)定21 種過(guò)敏原sIgE和總IgE，測(cè)定結(jié)果與德國(guó)Fooke 的酶免試劑盒測(cè)定結(jié)果具有很好的相關(guān)性；Christian Lupinek 等[30]介紹了歐洲研究項(xiàng)目—MeDALL 過(guò)敏原芯片，這是相較上述ImmunoCAP ISAC 更先進(jìn)成熟的技術(shù)平臺(tái)，可以檢測(cè)將近170 種過(guò)敏原分子的IgE，具有很好的敏感度和特異性，適用于過(guò)敏研究、過(guò)敏的精確診斷、疾病的監(jiān)測(cè)、以及療效的監(jiān)測(cè)等[30]。目前具有最大檢測(cè)通量的也是最新的微陣列芯片檢測(cè)是奧地利的FABER 測(cè)試，可檢測(cè)將近300 種過(guò)敏原提取物或分子的特異性IgE。但是，由于很多過(guò)敏原蛋白及過(guò)敏原組分尚未經(jīng)過(guò)臨床評(píng)價(jià)，微陣列芯片法目前還不適用于過(guò)敏性疾病的常規(guī)診斷。

不過(guò)，目前過(guò)敏原特異性IgE 的檢測(cè)尚無(wú)任何的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)，由于各個(gè)廠家使用的過(guò)敏原原料的來(lái)源，過(guò)敏原結(jié)合到載體的方法和檢測(cè)方法均不同，所以不同的廠家對(duì)同一樣本的過(guò)敏原特異性IgE 檢測(cè)的結(jié)果可能會(huì)存在差異，尤其是定量的結(jié)果之間往往缺乏較好的可比性，Libeer 等[31]在對(duì)比ImmunoCAP、Immulite 和Adcia Centaur 三個(gè)系統(tǒng)發(fā)現(xiàn)，雖然三個(gè)產(chǎn)品都是過(guò)敏原定量檢測(cè)系統(tǒng)，但值差異還是很大，花生sIgE 的ImmunoCAP 值明顯高于另外兩個(gè)產(chǎn)品的值；Park 等[32]在比較 ImmunoCAP 和 Immulite的時(shí)候發(fā)現(xiàn)，蝦的sIgE 值的相關(guān)系數(shù)只有0.643，不同的過(guò)敏原相關(guān)性差異很大。因此過(guò)敏原的標(biāo)準(zhǔn)化亟待解決。

近幾年基因組學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)等分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展從根本上改變了體外診斷技術(shù)的水平，并使變態(tài)反應(yīng)學(xué)的基礎(chǔ)研究和過(guò)敏性疾病的臨床診療獲得了長(zhǎng)足的進(jìn)步。用于檢測(cè)特異性IgE 抗體的基因重組過(guò)敏原組分蛋白的成功合成使得過(guò)敏原組分診斷（Component-Resolved Diagnosis, CRD）成為可能。最近，CRD 已經(jīng)用于榛子和花生過(guò)敏研究，并與DBPCFC 結(jié)果進(jìn)行比較，E. Eller Bindslev-Jensen 的最近研究顯示，其主要過(guò)敏原Ara h2 蛋白的診斷效能顯著優(yōu)于花生粗提取物，抗Ara h 2 特異性IgE＞1.63kU/L 作為臨床相關(guān)花生過(guò)敏的Cutoff值同時(shí)具有較好的敏感度和特異性[33]；但是Beyer等[34]研究認(rèn)為抗Ara h 2 特異性IgE 在14.4kU/L 具有90%的花生激發(fā)試驗(yàn)陽(yáng)性預(yù)測(cè)值，抗Cor a 14 特異性IgE 在47.8kU/L 具有90%的榛子激發(fā)試驗(yàn)陽(yáng)性預(yù)測(cè)值。CRD 進(jìn)一步結(jié)合生物芯片技術(shù)可為過(guò)敏性疾病患者提供更精準(zhǔn)快速的sIgE 檢測(cè)結(jié)果[35]。

目前已經(jīng)有很多常規(guī)的檢測(cè)方法采用過(guò)敏原組分蛋白，如在歐洲一些國(guó)家，已經(jīng)有采用天然組分過(guò)敏原蛋白用于臨床常規(guī)SPT 檢測(cè)，如純化的天然桃子蛋白Pru p 3 以及純化的天然棗子profilin[36]；Andersson[37]在榛子提取物中摻入Cor a 1.04，大大提高了體外sIgE 檢出率，且研究發(fā)現(xiàn)，與DBPCFC 相比，可以大大提高陰性預(yù)測(cè)值[38]。而且也越來(lái)越多的常規(guī)檢測(cè)方法開(kāi)始采用基因重組過(guò)敏原組分蛋白代替?zhèn)鹘y(tǒng)天然純化過(guò)敏原蛋白，Kollmann 等[39]在最近的研究中采用純化重組Mal d 1 和Bet v1 及樺樹(shù)花粉提取物用于皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)，在本研究中，21 位患者就有20 位患者對(duì)50ug/ml 濃度的rMal d 1 反應(yīng)陽(yáng)性，皮膚點(diǎn)刺試驗(yàn)陽(yáng)性率為95%；在對(duì)奧地利花生過(guò)敏患者的研究發(fā)現(xiàn)，有癥狀的患者主要是對(duì)Ara h 2 和Ara h 6 過(guò)敏，如果同時(shí)伴隨有樺木花粉過(guò)敏，在Ara h 2 特異性IgE 陰性的情況下，應(yīng)該檢測(cè)Ara h 8[40]；另外研究發(fā)現(xiàn)，兒童花生過(guò)敏通常是對(duì) Ara h 1、2 和 3 過(guò)敏，且 Ara h 2 特異性 IgE≥1.0kUA/L 與發(fā)生花生引起的系統(tǒng)反應(yīng)顯著相關(guān)[41]。

重組過(guò)敏原組分蛋白的使用，將使過(guò)敏原標(biāo)準(zhǔn)化正逐漸成為可能。

3.3 嗜堿性粒細(xì)胞激活試驗(yàn)

在過(guò)敏原與IgE 發(fā)生橋聯(lián)反應(yīng)時(shí)，人嗜堿性粒細(xì)胞的分泌反應(yīng)激活，這一特點(diǎn)被廣泛用于研究，作為過(guò)敏原特異性IgE 抗體的替代測(cè)定方法[42-44]。但是因?yàn)楹臅r(shí)長(zhǎng)且價(jià)格昂貴，這些方法直到現(xiàn)在也未廣泛用于過(guò)敏性疾病的診斷。嗜堿性粒細(xì)胞激活試驗(yàn)（BAT）是通過(guò)加入懷疑的過(guò)敏原預(yù)孵育然后檢測(cè)全血中嗜堿性粒細(xì)胞的活性。該反應(yīng)活性可以通過(guò)測(cè)定釋放的組胺（組胺釋放試驗(yàn)） 或白三烯C4（CAST-ELISA）來(lái)體現(xiàn)。在上世紀(jì)90 年代后期，研究發(fā)現(xiàn)嗜堿性粒細(xì)胞被過(guò)敏原激活后，許多表面蛋白表達(dá)增加，如 CD45，CD63，CD69 和 CD203c[45-47]，可以通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)到這些蛋白，從而使嗜堿性粒細(xì)胞激活試驗(yàn)取得了新的發(fā)展[48]。

近年來(lái)，全球過(guò)敏性疾病的發(fā)病率逐漸增高，過(guò)敏原sIgE 檢測(cè)是過(guò)敏性疾病診治的最重要的環(huán)節(jié)之一，隨著基因組學(xué)和蛋白組學(xué)等學(xué)科的飛速發(fā)展，新的過(guò)敏原sIgE 檢測(cè)方法的不斷涌現(xiàn)，傳統(tǒng)方法的靈敏度和準(zhǔn)確度得到進(jìn)一步提高，過(guò)敏原sIgE檢測(cè)正呈現(xiàn)大通量，標(biāo)準(zhǔn)化的趨勢(shì)，從而進(jìn)一步推動(dòng)過(guò)敏性疾病的防治技術(shù)的不斷進(jìn)步。