黃嘉樂(lè)，黨華，吳滋靈，岑建斌，黃嘉瑜，陳偉萍

（廣州檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證集團(tuán)有限公司，廣東廣州 511447）

《中國(guó)水產(chǎn)》發(fā)布的《2019 年全國(guó)漁業(yè)經(jīng)濟(jì)統(tǒng)計(jì)公報(bào)》[1]顯示，2019 年甲殼類水產(chǎn)咸（淡）水養(yǎng)殖產(chǎn) 量高達(dá)5.67×106t，產(chǎn)量及消費(fèi)量巨大，且呈增長(zhǎng)的趨勢(shì)。不法商販為了讓小龍蝦看上去干凈透亮、節(jié)省清洗時(shí)間，常常會(huì)使用“洗蝦粉”對(duì)甲殼類水產(chǎn)進(jìn)行清洗。該物質(zhì)為白色粉末且具有刺激性氣味，使用操作簡(jiǎn)便，對(duì)甲殼類水產(chǎn)的清潔快速高效，能在較短時(shí)間內(nèi)洗凈污物[2]，且甲殼類水產(chǎn)外表色澤鮮亮、易于出售。

研究表明，“洗蝦粉”主要成分為檸檬酸、亞硫酸鹽和草酸[3-4]，其中草酸作為一種化工生產(chǎn)原料，根據(jù)我國(guó)GB 2760-2014《食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定不允許用于食品中。此外草酸也可作為水體污染物遷移到甲殼類水產(chǎn)品。消費(fèi)者進(jìn)食大量經(jīng)草酸處理的甲殼類水產(chǎn)品時(shí)，容易出現(xiàn)高草酸血癥，心肌或傳導(dǎo)系統(tǒng)會(huì)受到體內(nèi)草酸過(guò)多的影響，并誘發(fā)心力衰竭和致命性心律失常[5]。

國(guó)內(nèi)外關(guān)于草酸含量測(cè)定的方法主要集中在色譜分析方法[6-8]、光譜分析方法[9]及酶聯(lián)免疫定性法[10-11]。其中分光光度法（光譜法）主要通過(guò)化學(xué)反應(yīng)，根據(jù)吸光度變化對(duì)草酸進(jìn)行檢測(cè)，相對(duì)色譜法便宜，但靈敏度不足。顯色法和酶聯(lián)免疫法則一般只適用于定性分析，無(wú)法對(duì)草酸進(jìn)行有效的定量。鑒于色譜分析方法特異性強(qiáng)、靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，適用于甲殼類水產(chǎn)品草酸殘留量的檢測(cè)。已有報(bào)道的離子色譜法，其研究對(duì)象均為小龍蝦，缺少對(duì)其他甲殼類水產(chǎn)品草酸殘留的研究，且只對(duì)小龍蝦體表的草酸進(jìn)行測(cè)定，沒(méi)有對(duì)樣品整體進(jìn)行更深入的研究。

由于國(guó)內(nèi)甲殼類水產(chǎn)品中草酸含量的測(cè)定無(wú)相關(guān)檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)及判定標(biāo)準(zhǔn)，國(guó)內(nèi)外對(duì)草酸分析方法的研究，主要集中在環(huán)境檢測(cè)及植物源性草酸測(cè)定，對(duì)甲殼類水產(chǎn)品中草酸含量的測(cè)定研究較少。而“洗蝦粉”導(dǎo)致的甲殼類水產(chǎn)品草酸超量引起中毒的現(xiàn)象，經(jīng)媒體報(bào)道后，立即成為群眾關(guān)心的熱點(diǎn)問(wèn)題。這些問(wèn)題受到了監(jiān)管部門的重視，目前，關(guān)于甲殼類水產(chǎn)品草酸含量的測(cè)定研究較少，監(jiān)管部門缺乏標(biāo)準(zhǔn)及技術(shù)支持，對(duì)監(jiān)管造成困難。因此，加強(qiáng)對(duì)甲殼類水產(chǎn)品中草酸含量的檢測(cè)技術(shù)研究，可有效保障人民生命財(cái)產(chǎn)的安全。

本文根據(jù)草酸水溶性強(qiáng)、在堿性條件下呈陰離子狀態(tài)穩(wěn)定存在的特點(diǎn)，建立了一個(gè)基于陰離子交換色譜分離，洗脫液背景抑制，電導(dǎo)檢測(cè)的分析方法，測(cè)定甲殼類水產(chǎn)品中草酸的殘留量。該方法無(wú)需衍生，具有抗非離子物質(zhì)干擾能力，靈敏度高，準(zhǔn)確性好，能滿足甲殼類水產(chǎn)品的檢測(cè)需求，具有良好應(yīng)用前景。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

Dionex ICS-3000 雙系統(tǒng)離子色譜儀，美國(guó)賽默飛世爾科技公司；EG 淋洗液自動(dòng)發(fā)生器、AS-AP 自動(dòng)進(jìn)樣器、DP 四元梯度泵、DC 控制單元、Chromeleon7.0色譜工作站（變色龍工作站），美國(guó)賽默飛世爾科技公司；KDC-1044 低速離心機(jī)，安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司；Milli-Q 超純水系統(tǒng)，美國(guó)Merk 密理博公司；MS3 basic 漩渦混合器，德國(guó)艾卡公司；KQ-250DV數(shù)控超聲波清洗儀，昆山市舒美牌超聲儀器有限公司；BrandTransferpette 移液槍（100～1000 μL、0.5～5 mL），德國(guó)BRAND 公司；固相萃取裝置，美國(guó)沃特世公司；5 mL 一次性注射器，湖南平安醫(yī)械科技有限公司；有機(jī)相針筒式濾膜過(guò)濾器（13 mm×0.22 μm），天津市津騰實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；Dionex OnGuardⅡRP2.5 mL 過(guò)濾柱，美國(guó)賽默飛世爾科技公司；Dionex OnGuard ⅡAg/H2.5 mL 過(guò)濾柱，美國(guó)賽默飛世爾科技公司；50 mL 高速離心管，美國(guó)Corning 公司；乙腈（色譜純），德國(guó)Merck 公司；草酸標(biāo)準(zhǔn)品（粉劑，純度97%），德國(guó)Dr.Ehrenstorfer 公司；超純水（18.2 MΩ），實(shí)驗(yàn)室自制。

根據(jù)實(shí)際需求稱取適量草酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用純水溶解配成草酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，放置于4 ℃冰箱保存，臨用前用超純水稀釋成所需濃度的工作液。

分析樣品：淡水小龍蝦、淡水河蟹、海水青蟹和海水明蝦樣品均購(gòu)于本地不同市場(chǎng)。

1.2 樣品的提取與凈化

提?。喝〖s50 g 甲殼類水產(chǎn)樣品，帶殼放入料理機(jī)粉碎機(jī)均質(zhì)（蟹類錘碎后整體粉碎），充分混勻。稱取均質(zhì)后的試樣5.00 g（精確至0.01 g）置于50 mL帶螺紋蓋的聚丙烯尖底離心管中，加入超純水10.0 mL，渦旋振蕩3 min，超聲提取30 min，以4000 r/min速率低溫冷凍離心3 min，去除脂肪，移取所有提取液至10 mL 容量瓶中并用超純水定容。

活化：OnGuard II RP 柱用10 mL 甲醇、10 mL 超純水活化，OnGuard II Ag/H 柱用10 mL 超純水活化，活化后的按照RP-Ag/H 的順序進(jìn)行串聯(lián)，柱后接上濾膜。

凈化：準(zhǔn)確移取容量瓶中樣品提取液1.00 mL 至10 mL 容量瓶中，加入1.00 mL 乙腈渦旋1 min，沉淀蛋白質(zhì)及其他雜質(zhì)。靜置分層后，再準(zhǔn)確移取1.00 mL樣品上清液至15 mL 帶螺紋蓋的聚丙烯尖底離心管中，加入4.00 mL 超純水，振蕩1 min 混勻后，經(jīng)過(guò)串聯(lián)固相萃取柱進(jìn)化。凈化時(shí)，先用3 mL 混合液潤(rùn)洗柱子，棄去，收集后續(xù)濾液，供離子色譜分析。

加標(biāo)樣品的制備：在50 mL 聚丙烯尖底離心管中，準(zhǔn)確稱取5.00 g（精確至0.01 g）均質(zhì)后的陰性甲殼類水產(chǎn)試樣并加入適量草酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，4 ℃冰箱冷藏放置12 h。

1.3 儀器條件

Dionex IonPac AS11-HC 分析柱（250 mm×4 mm）及IonPac AG-11 保護(hù)柱（50 mm×4 mm）；Dionex ADRS-600（4 mm）電解再生抑制器，抑制電流124 mA，外加水模式；AS-AP 自動(dòng)進(jìn)樣，定量環(huán)100 μL，滿環(huán)進(jìn)樣；柱溫箱溫度30 ℃；電導(dǎo)檢測(cè)，電導(dǎo)池溫度35 ℃；在線電解生成淋洗液，流速1.0 mL/min，淋洗程序見(jiàn)表l。

1.4 數(shù)據(jù)處理

樣品通過(guò)離子色譜分離電導(dǎo)測(cè)定，得到具有導(dǎo)電性化合物的離子色譜圖。使用Chromeleon 7.0 色譜工作站采集處理數(shù)據(jù)，使用色譜峰的保留時(shí)間定性，色譜峰面積定量。圖表采用Microsoft Excel 2016 軟件進(jìn)行繪制。

2 結(jié)果與討論

2.1 離子色譜柱的選擇及色譜條件的確立

為了提高目標(biāo)離子的電導(dǎo)響應(yīng)強(qiáng)度，進(jìn)樣量需達(dá)到100 μL，同時(shí)天然食品中高濃度的陰離子（如Cl-，SO42-等）會(huì)造成過(guò)載現(xiàn)象，因此，需要使用高柱容量（250 mm×4 mm）、氫氧根體系的陰離子色譜分析柱：AS11-HC、AS16-HC、AS18-HC、AS19-HC[12-13]。由于AS19-HC 適用于檢測(cè)樣品中的鹵氧化合物，AS18-HC 常用于無(wú)機(jī)陰離子的快速分離，AS16-HC主要用于分析樣品中的易極化陰離子，AS11-HC 適用于分離復(fù)雜基質(zhì)中的大量無(wú)機(jī)陰離子和有機(jī)酸陰離子，并具有改善一價(jià)羧酸的分離效果。

草酸易溶于水和堿性水溶液，不溶于有機(jī)溶劑，且在堿性水溶液中以二價(jià)草酸根陰離子狀態(tài)存在，適用于離子色譜體系分離檢測(cè)。根據(jù)離子交換色譜的特點(diǎn)，為了將痕量被測(cè)離子與基體中其它陰離子有效分離，本文選用高容量羥基選擇性陰離子交換色譜柱AS11-HC 作為分離色譜柱，可在分離復(fù)雜基質(zhì)中的有機(jī)、無(wú)機(jī)陰離子時(shí)，獲得最佳色譜分析速度和分離度。

草酸在KOH 淋洗液中以草酸根形式存在，草酸根在陰離子交換柱（AS11-HC）上是強(qiáng)保留離子，難以洗脫，為了使草酸和其它陰離子能夠完全分離，采用KOH 淋洗液梯度淋洗分離，梯度淋洗條件見(jiàn)表1。在上述色譜條件下，草酸出峰時(shí)間為11.7 min（圖1），峰形良好。

表1 甲殼類水產(chǎn)品中草酸分離的氫氧化鉀梯度淋洗程序Table 1 Gradient of potassium hydroxide eluent for separation of oxalic acid in crustacean aquatic products

圖1 草酸標(biāo)準(zhǔn)溶液（1.00 mg/L）的離子色譜圖Fig.1 Ion chromatogram of oxalic acid standard solution (1.00 mg/L)

2.2 提取條件的選擇

為了優(yōu)化草酸的提取，實(shí)驗(yàn)分別研究了超純水、50%乙腈水溶液、50%甲醇水溶液、1.00%甲酸水溶液、0.50% KOH水溶液對(duì)添加2.00 mg/kg草酸的甲殼類水產(chǎn)加標(biāo)樣品（小龍蝦、河蟹、青蟹、明蝦）提取效果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖2。數(shù)據(jù)顯示，當(dāng)使用50%乙腈水溶液和50%甲醇水溶液提取時(shí)，所有樣品草酸回收率均低于60%。甲殼類水產(chǎn)品中蛋白、脂肪含量較高，乙腈水溶液和甲醇水溶液均會(huì)將樣品中脂溶性物質(zhì)提取到提取液中，且草酸易溶于水，不溶于有機(jī)溶劑，導(dǎo)致這兩種溶劑對(duì)草酸的提取效率不理想。由于甲殼類水產(chǎn)樣品基質(zhì)較為復(fù)雜，在酸或堿溶液中會(huì)使樣品中部分物質(zhì)轉(zhuǎn)變成離子狀態(tài)進(jìn)入提取液中[14-15]，其特有的甲殼素類物質(zhì)，在堿性條件下會(huì)水解產(chǎn)生氨基葡萄糖，對(duì)提取液中草酸的離子色譜出峰造成嚴(yán)重干擾，無(wú)法進(jìn)行準(zhǔn)確定量。而采用超純水提取，草酸回收率大于85%，且不會(huì)增加其他離子干擾，因此本文采用超純水作為提取溶劑。

圖2 5 種提取液對(duì)甲殼類水產(chǎn)品中草酸回收率的影響Fig.2 Effect of five kinds extracting solution on the recoveries of oxalic acid in crustacean aquatic products (n=6)

此外，甲殼類水產(chǎn)品由于生長(zhǎng)及蛻殼需要，一般生活在含有鈣，鎂，鐵等離子的養(yǎng)殖水中[16]，甲殼類水產(chǎn)品的飼料亦含有大量鈣元素[17]。本文測(cè)定10 個(gè)銷售攤點(diǎn)養(yǎng)殖水的鈣含量，發(fā)現(xiàn)Ca2+含量均大于25.0 mg/L。草酸鈣在25 ℃水中溶解度為：6.70 mg/L，養(yǎng)殖水存在的草酸根，會(huì)與鈣離子形成不溶于水的草酸鈣晶體，無(wú)法進(jìn)入甲殼類水產(chǎn)品體內(nèi)。由于草酸鈣晶體不溶于水，當(dāng)用超純水提取樣品時(shí)，草酸鹽不會(huì)對(duì)草酸檢測(cè)結(jié)果造成影響。

超純水提取甲殼類水產(chǎn)品時(shí)，水產(chǎn)樣品中的大量水溶性蛋白、氨基酸、糖類物質(zhì)等會(huì)同時(shí)進(jìn)入提取液中。根據(jù)離子交換特性及相關(guān)研究[18-22]，我們通過(guò)乙腈沉淀法去除蛋白質(zhì)、糖類等雜質(zhì)。提取液加入乙腈后，乙腈打破了原有提取液中的電解質(zhì)平衡，在離子效應(yīng)、共沉效應(yīng)、電解質(zhì)作用等共同作用下，蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類等凝結(jié)成大分子物質(zhì)沉淀出來(lái)[23]，使樣品溶液更加清澈透明，提高了凈化效果。

2.3 固相萃取條件的優(yōu)化

樣品提取溶液經(jīng)過(guò)乙腈沉淀去除雜質(zhì)后，溶液中仍然存在低極性化合物與離子態(tài)干擾物，影響甲殼類水產(chǎn)品草酸殘留量的準(zhǔn)確測(cè)定。因此，需要對(duì)初步除雜后的樣品提取液進(jìn)行固相萃取凈化，以免干擾物質(zhì)對(duì)草酸的峰形及草酸的定性、定量產(chǎn)生影響。本文分別研究了四種固相萃取柱的凈化效果，包括反相吸附的C18（6 mL，500 mg）固相萃取柱，親水-親脂平衡吸附Oasis HLB（6 mL，500 mg）柱固相萃取柱，大孔樹(shù)脂填料的Dionex OnGuard Ⅱ RP（2.5 mL）串聯(lián)Ag/H（2.5 mL）固相萃取柱和富集凈化的弱陰離子交換柱（Oasis WAX，6 mL，500 mg）的凈化效果，結(jié)果見(jiàn)圖3、圖4。從離子色譜圖上發(fā)現(xiàn)，C18柱固相萃取凈化后，草酸回收率較好，但是譜圖上仍然存在干擾峰。HLB 柱可以去除甲殼類水產(chǎn)品提取液中的脂肪和極性物質(zhì)，但是作為極性物質(zhì)的草酸也會(huì)被吸附，回收率不理想。使用弱陰離子交換柱（Oasis WAX）凈化富集時(shí)，由于甲殼類水產(chǎn)樣品中含有大量有機(jī)酸、脂肪酸、蝦青素、氨基酸和Cl-等陰離子類雜質(zhì)，與草酸產(chǎn)生相應(yīng)的競(jìng)爭(zhēng)吸附，因此目標(biāo)化合物的回收率較低。

使用OnGuard Ⅱ RP 串聯(lián)Ag/H 固相萃取柱凈化時(shí)，不同基質(zhì)樣品回收率均達(dá)到70%以上。樣液先通過(guò)填料為大孔二乙烯基苯樹(shù)脂的OnGuard Ⅱ RP 柱去除甲殼類水產(chǎn)品基質(zhì)中的親脂型疏水物質(zhì)，且對(duì)親水性的草酸幾乎沒(méi)保留。然后通過(guò)填料為包含Ag+與H+的高容量強(qiáng)酸型聚苯乙烯型陽(yáng)離子交換樹(shù)脂的OnGuard Ⅱ Ag/H 柱去除提取液中的Cl-及微量重金屬。最后，使用0.22 μm 的有機(jī)針式過(guò)濾膜進(jìn)行過(guò)濾，不僅達(dá)到理想的凈化效果，還降低了提取液中固體懸浮顆粒對(duì)色譜系統(tǒng)的損害[24]（見(jiàn)圖3、圖4）。

圖3 不同固相萃取條件下添加20.00 mg/kg 草酸的小龍蝦樣品的離子色譜圖Fig.3 Ion chromatograms of the crustacean aquatic products of 20.00 mg/kg oxalic acid under different solid phase extraction conditions

圖4 4 種類型固相萃取條件對(duì)甲殼類水產(chǎn)品中草酸回收率的影響Fig.4 Effect on the recoveries of oxalic acid in crustacean aquatic products purified by four types of solid phase extraction conditions (n=6)

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，RP 串聯(lián)Ag/H 固相萃取柱的除雜效果明顯，洗脫溶液較透明干凈，目標(biāo)物回收率達(dá)到77%，凈化效果理想。綜上所述，選擇將甲殼類水產(chǎn)品提取液分別過(guò)經(jīng)活化的OnGuard Ⅱ RP 柱和OnGuard Ⅱ Ag/H 柱及有機(jī)相針式濾器的方式進(jìn)行凈化。

2.4 線性范圍與檢出限

在優(yōu)化條件下，分析草酸質(zhì)量濃度為0.050、0.10、0.50、1.00、2.00、5.00、10.00 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，以草酸的質(zhì)量濃度x(mg/L)對(duì)峰面積y建立標(biāo)準(zhǔn)工作曲線，得到草酸線性方程為y=0.4550x+0.0281，相關(guān)系數(shù)r2=0.9998。

以樣品進(jìn)樣量100 μL，將產(chǎn)生3 倍于噪音水平的信號(hào)所代表的待測(cè)組分的最小濃度來(lái)計(jì)算檢出限，將產(chǎn)生10 倍于噪音水平的信號(hào)所代表的待測(cè)組分的最小濃度來(lái)計(jì)算定量限。根據(jù)本文研究，草酸的檢出限分別為小龍蝦0.037 mg/kg、河蟹0.038 mg/kg、青蟹0.041 mg/kg、明蝦0.033 mg/kg；草酸的定量限分別為小龍蝦0.12 mg/kg、河蟹0.13 mg/kg、青蟹0.14 mg/kg、明蝦0.11 mg/kg。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，檢驗(yàn)方法準(zhǔn)確靈敏，符合檢測(cè)要求。

2.5 方法回收率與精密度

為驗(yàn)證方法的準(zhǔn)確度，按本文方法對(duì)甲殼類水產(chǎn)樣品（小龍蝦、河蟹、青蟹、明蝦）和超純水進(jìn)行了1.00、10.00、25.00 mg/kg，3 個(gè)水平的加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)（n=6）；采用中間添加水平（10.0 mg/kg）的樣品連續(xù)測(cè)定5 d，考察方法的日間精密度，扣除相應(yīng)本底值后，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2，甲殼類水產(chǎn)樣品基質(zhì)中草酸的平均回收率為75.71%～88.85%，日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）在1.74%～3.61%之間，日間精密度在2.11%～2.75%之間。超純水的平均回收率為96.35%～98.02%，日內(nèi)相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD，n=6）在1.73%～2.02%之間，日間精密度為1.83%。方法顯示了良好的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，且在前處理過(guò)程對(duì)草酸含量的損失較低。

表2 甲殼類水產(chǎn)樣品和超純水中草酸的加標(biāo)回收率及精密度Table 2 Recoveries and precisions for oxalic acid in crustacean aquatic products and water

2.6 實(shí)際樣品的測(cè)定

隨機(jī)購(gòu)買市場(chǎng)上10 個(gè)銷售攤點(diǎn)的樣品，采用本文方法對(duì)買回來(lái)的甲殼類水產(chǎn)樣品：小龍蝦、河蟹、青蟹、明蝦進(jìn)行分析，結(jié)果顯示所有樣品均有檢出草酸，結(jié)果見(jiàn)表3，其中甲殼類海水產(chǎn)樣品含量較低，青蟹分布在5.97～32.02 mg/kg 之間；明蝦分布在4.05～28.01 mg/kg 之間。甲殼類淡水產(chǎn)樣品含量較高，小龍蝦分布在40.86～88.73 mg/kg 之間；河蟹分布在28.90～57.85 mg/kg 之間。圖5 為其中一個(gè)陽(yáng)性小龍蝦樣品的離子色譜圖，檢出草酸含量為45.66 mg/kg。

表3 甲殼類水產(chǎn)樣品中草酸的含量范圍Table 3 Content range of oxalic acid in crustacean aquatic products

圖5 小龍蝦草酸陽(yáng)性樣品的離子色譜圖Fig.5 Ion chromatogram of a oxalic acid positive crayfish sample

2.7 甲殼類水產(chǎn)品中草酸的來(lái)源分析

本文將部分小龍蝦、河蟹、青蟹、明蝦用超純水洗刷5 次，浸泡超聲10 min 并更換超純水5 次，然后按照2.2 步驟進(jìn)行制樣和處理，測(cè)定水洗前后甲殼類水產(chǎn)品草酸的含量變化，結(jié)果見(jiàn)表3。從表3 的結(jié)果數(shù)據(jù)可見(jiàn)，用純水清洗后甲殼類水產(chǎn)品草酸殘留量明顯降低，這說(shuō)明有一部分草酸殘留在甲殼類水產(chǎn)品的體表。

為了進(jìn)一步了解草酸在甲殼類水產(chǎn)樣品不同部位的殘留情況，本文將甲殼類水產(chǎn)樣品按照肌肉、內(nèi)臟、外殼分別放入料理機(jī)粉碎機(jī)均質(zhì)，充分混勻，按照優(yōu)化后的提取凈化步驟進(jìn)行前處理，檢測(cè)甲殼類水產(chǎn)樣品不同部位草酸的殘留量范圍，結(jié)果見(jiàn)表4。從表4的結(jié)果數(shù)據(jù)可知，在甲殼類水產(chǎn)樣品各個(gè)部位中，內(nèi)臟草酸含量最高，外殼次之，肌肉最低。

表4 水洗前后及不同部位甲殼類水產(chǎn)樣品中草酸的含量范圍Table 4 Content range of oxalic acid in crustacean aquatic products before and after washing and products from different parts

根據(jù)相關(guān)文獻(xiàn)研究可知[25-26]，甲殼類水產(chǎn)樣品體內(nèi)的草酸可分為外源性草酸和內(nèi)源性草酸[27]，無(wú)論是外源性草酸還是內(nèi)源性草酸，最終均會(huì)富集在其內(nèi)臟中，所以其內(nèi)臟的草酸殘留最高。王陽(yáng)葆經(jīng)過(guò)研究[28]發(fā)現(xiàn)，甲殼質(zhì)對(duì)陰離子具有吸附作用，因此甲殼類水產(chǎn)樣品外殼的草酸殘留量高于其肌肉部分。

商販?zhǔn)褂谩跋次r粉”對(duì)甲殼類水產(chǎn)品進(jìn)行清洗時(shí)，因其見(jiàn)效快，一般浸泡時(shí)間較短，草酸來(lái)不及進(jìn)入甲殼類水產(chǎn)樣品體內(nèi)，因此，認(rèn)為來(lái)源于“洗蝦粉”的草酸主要附著在甲殼類水產(chǎn)品表面。此外，甲殼類水產(chǎn)品中體表殘留的草酸還有可能來(lái)自養(yǎng)殖土壤[29]、水體[30]、外部大氣環(huán)境中的污染物[31-32]等。本文購(gòu)買樣品時(shí)已確認(rèn)，所有樣品均未使用“洗蝦粉”進(jìn)行清洗，根據(jù)表3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，甲殼類水產(chǎn)樣品體表來(lái)源于土壤、水體、大氣污染的草酸含量為5.20～8.65 mg/kg。

3 結(jié)論

3.1 本文建立了一種快速提取、固相萃取凈化結(jié)合離子色譜測(cè)定的甲殼類水產(chǎn)品中草酸殘留量分析方法。樣品經(jīng)超純水提取、乙腈沉淀雜質(zhì)、固相萃取柱柱凈化，樣液中的草酸通過(guò)AS11-HC 色譜柱分離，電導(dǎo)檢測(cè)器檢測(cè)。與已有離子色譜法相比，本文研究了更多類型甲殼類水產(chǎn)品的草酸殘留情況，并對(duì)樣品中草酸的來(lái)源進(jìn)行了分析。檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，本文購(gòu)入的甲殼類水產(chǎn)品均檢出草酸殘留，結(jié)果在4.05～88.73 mg/kg之間；水產(chǎn)品各個(gè)部位的草酸殘留情況為內(nèi)臟＞外殼＞肌肉；經(jīng)過(guò)分析認(rèn)為樣品中草酸來(lái)源于消化系統(tǒng)的攝入富集和體外環(huán)境附著。

3.2 本方法具有良好的凈化效果、準(zhǔn)確的定性定量以及高效快捷的特點(diǎn)，適用于甲殼類水產(chǎn)品中草酸殘留的快速確認(rèn)和含量分析。本方法的建立和使用為食品安全實(shí)施監(jiān)督管理提供科學(xué)依據(jù)，相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)對(duì)政府部門監(jiān)管“洗蝦粉”濫用及甲殼類水產(chǎn)品的食品質(zhì)量安全具有重要意義。