劉柯靈，李奕葶，史維麗，班立桐，孫 寧，黃 亮

（天津農(nóng)學(xué)院農(nóng)學(xué)與資源環(huán)境學(xué)院，天津 300384）

古巴栓孔菌（Tramtes cubensis） 是一類屬于多孔菌科 （Polyporaceae） 栓菌屬 （Trametes） 的大型木腐真菌。栓菌屬含有的大量藥用真菌，具有抗炎、降血糖、抗腫瘤和抗氧化等功效[1]。迄今為止，栓菌屬中被馴化的有云芝（Coriolus versicolor）、香栓菌（Trametes suaveloens）、血紅栓菌 （Trametes san－guinea）、迷宮栓孔菌 （Trametes gibbosa） 等[2-4]。目前，關(guān)于古巴栓孔菌的研究鮮有報(bào)道，其藥用價(jià)值以及生理活性亟待深入研究。

真菌多糖具有良好的生理活性，如抗氧化、抗腫瘤、抑菌與調(diào)節(jié)免疫等[5]。雖然目前沒有關(guān)于古巴栓孔菌多糖的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，但已有研究證實(shí)同樣屬于多孔菌科的靈芝（Ganoderma lucidum）、茯苓（Poria cocos）、灰樹花 （Griflola frondosa），以及同屬多孔菌科栓菌屬的云芝、紅栓菌（Trametes sanguinea）等藥用真菌的多糖就具有顯著的生理活性[6]。如靈芝多糖不僅具有提高免疫力的作用，還具有抗腫瘤與降血糖等效果[7-10]；茯苓多糖具有增強(qiáng)免疫力的作用，Pu[11]研究表明茯苓多糖PCP（Poria cocos polysaccharide,PCP） 能激活NF-κB蛋白通過Ca2+/PKC/p38信號(hào)通路發(fā)揮免疫功能效果；灰樹花多糖在真菌多糖中具有最顯著的抗癌活性，其機(jī)制可能與增加BAK-1基因的表達(dá)，引起細(xì)胞凋亡有關(guān)[12]；云芝多糖具有顯著的抑制腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、消炎護(hù)肝、抗氧化等生理活性[13]；朱紅栓菌子實(shí)體與菌絲體的胞內(nèi)和胞外多糖，均具有良好的抗腫瘤以及調(diào)節(jié)免疫等效果[14]。

因此，為了進(jìn)一步探究古巴栓孔菌多糖的生理活性，通過液體深層發(fā)酵方法，獲取古巴栓孔菌的胞內(nèi)多糖與胞外多糖，對(duì)其進(jìn)行分離提取，并考察其體外抗氧化能力、α-淀粉酶抑制活性以及亞硝酸鹽清除能力，綜合評(píng)價(jià)這2種多糖的生物活性。試驗(yàn)結(jié)果不僅為古巴栓孔菌多糖的開發(fā)利用和進(jìn)一步研究提供了一定的理論與數(shù)據(jù)基礎(chǔ)，還為其他藥用真菌多糖的研究與應(yīng)用提供了思路和方向。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試菌株采自福建省廈門市廈門熱帶植物園，經(jīng)鑒定為古巴栓孔菌[1]，并保藏于天津農(nóng)學(xué)院食用菌研發(fā)中心。

1.2 主要試劑

拜唐蘋阿卡波糖片（50 mg/片），拜耳醫(yī)藥保健有限公司；枯草芽孢桿菌α-淀粉酶（≥4 000 U·g-1、豬胰腺α-淀粉酶（≥10 u·mg-1），上海鼓臣生物技術(shù)有限公司；ABTS，北京索萊寶科技有限公司；DPPH，東京化成工業(yè)株式會(huì)社；可溶性淀粉，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑科技有限公司。

1.3 主要儀器設(shè)備

JY88-II超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)，寧波新芝生物科技股份有限公司；RE-2000A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海亞榮生化儀器廠；Alpha1-2LDplus冷凍干燥機(jī)，德國克萊斯特有限公司；Centrifuge5430臺(tái)式高速離心機(jī)，德國艾本德生命科學(xué)公司；Enspire酶標(biāo)儀，美國珀金埃爾默（上海）有限公司；DNP-9272BS-III電熱恒溫培養(yǎng)箱，上海新苗醫(yī)療器械制造有限公司；ZWY-2112B恒溫培養(yǎng)振蕩器，上海智城分析儀器制造有限公司。

1.4 試驗(yàn)方法

1.4.1 菌種的培養(yǎng)

平板培養(yǎng)：取保存于PDA斜面培養(yǎng)基上的菌種于新鮮PDA固體培養(yǎng)基，25℃條件下靜置培養(yǎng)7 d。PDA固體培養(yǎng)基配方：土豆提取物 200 g·L-1、葡萄糖 20 g·L-1、瓊脂 20 g·L-1，pH 自然。

種子液培養(yǎng)：從平板培養(yǎng)基上取3塊5 mm2的菌塊，接入液體培養(yǎng)基，250 mL搖瓶裝液量為100 mL，于25℃、160 r·min-1條件下培養(yǎng)7 d。種子液體培養(yǎng)基配方：葡萄糖20 g·L-1、酵母浸粉5 g·L-1、KH2PO41 g·L-1、 MgSO40.5 g·L-1、VB10.01 g·L-1，蒸餾水1 L，pH自然。

液體深層發(fā)酵培養(yǎng)：將種子液按5%（v/v）的接種量接種于液體深層發(fā)酵培養(yǎng)基，250 mL搖瓶裝液量 100 mL，于 25℃、160 r·min-1條件下培養(yǎng)7 d[15]。發(fā)酵液配方：葡萄糖25 g·L-1、牛肉浸膏25 g·L-1、KH2PO41 g·L-1、 MgSO40.5 g·L-1、VB10.01 g·L-1，蒸餾水 1 L，pH 5。

1.4.2 發(fā)酵液體積及菌絲體生物量的測(cè)定

液體深層發(fā)酵培養(yǎng)7 d后，利用孔徑0.09 mm的過濾篩分離菌絲體和發(fā)酵液，分別收集。計(jì)算發(fā)酵液體積，收集后的菌絲體于40℃烘干、稱重后備用。

1.4.3 胞外多糖和胞內(nèi)多糖的提取

1）胞外多糖的提取

將發(fā)酵液濃縮至原體積的1/4，加入其4倍體積的無水乙醇，于4℃冰箱靜置12 h，7 000 r·min-1離心并收集沉淀。沉淀溶于蒸餾水，用Sevage法去除其蛋白質(zhì)成分，重復(fù)3次～5次，水相部分為胞外粗多糖溶液，收集后濃縮、凍干、稱重，儲(chǔ)存于干燥箱中備用。

2）胞內(nèi)多糖的提取

將收集到的菌絲體粉碎，采用超聲波輔助水提法，提取菌絲體胞內(nèi)多糖，料液比1∶15、功率150 W、超聲時(shí)間30 min[13]。水提后7 000 r·min-1離心15 min，取上清，濃縮到原體積的1/4，加入其4倍體積的無水乙醇，在4℃冰箱靜置12 h，再次離心后收集沉淀，沉淀溶于蒸餾水，用Sevage法去除其蛋白質(zhì)成分，重復(fù)3次～5次，水相部分為胞內(nèi)粗多糖溶液，收集后濃縮、凍干、稱重，儲(chǔ)存于干燥箱中備用。

1.4.4 多糖含量的測(cè)定

采用苯酚-硫酸法[16-17]測(cè)定古巴栓孔菌胞內(nèi)多糖與胞外多糖的含量。向試管中加入1 mL的多糖稀釋樣品液、5%苯酚試劑0.5 mL以及2.5 mL濃H2SO4，搖勻，煮沸15 min，冷卻后，在490 nm波長處測(cè)定。每組3個(gè)平行，由葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計(jì)算得出多糖含量。

1.4.5 抗氧化活性的測(cè)定

1） DPPH自由基清除活性

參考LI[17]與王敏[18]所述方法進(jìn)行，略做修改。將凍干后的多糖粉末，配制成質(zhì)量濃度梯度分別為0.156 mg·mL-1、 0.313 mg·mL-1、 0.625 mg·mL-1、1.500 mg·mL-1、 2.500 mg·mL-1、 5.000 mg·mL-1、10.000 mg·mL-1的多糖溶液。取多糖樣品溶液125 μL，加入500 μL的DPPH乙醇溶液（25 μg·mL-1），混合均勻后，置于黑暗處反應(yīng)30 min；然后在517 nm波長下用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度值，試驗(yàn)重復(fù)3次。DPPH自由基清除率（E1，%）計(jì)算公式為：

式中：A0為蒸餾水替代樣品的反應(yīng)體系吸光度值；A1為不同濃度多糖溶液的反應(yīng)體系吸光度值；A2為蒸餾水替代DPPH溶液的反應(yīng)體系吸光度值。

2） ABTS·+清除活性

參考張燕所述方法[19]并略作修改。將凍干的多糖粉末，配制成質(zhì)量濃度梯度分別為0.156 mg·mL-1、0.313 mg·mL-1、 0.625 mg·mL-1、 1.500 mg·mL-1、2.500 mg·mL-1、5.000 mg·mL-1、10.000 mg·mL-1的多糖溶液。取多糖樣品50 μL，加入ABTS·+溶液450 μL，混合均勻后反應(yīng)10 min；然后在734 nm波長下用酶標(biāo)儀測(cè)定其吸光度值，重復(fù)測(cè)試3次。ABTS·+自由基清除率 （E2，%） 計(jì)算公式為：

式中：A0為蒸餾水替代樣品的反應(yīng)體系吸光度值；A1為不同濃度多糖溶液以及陽性對(duì)照VC的反應(yīng)體系吸光度值；A2為蒸餾水替代ABTS·+溶液的反應(yīng)體系吸光度值。

3） 羥基自由基清除活性

根據(jù)李霞[20]與李奕葶[17]所述方法并略作修改。將凍干的多糖粉末，配制成質(zhì)量濃度梯度為0.156 mg·mL-1、0.313 mg·mL-1、0.625 mg·mL-1、1.500 mg·mL-1、 2.500 mg·mL-1、 5.000 mg·mL-1、 10.000 mg·mL-1的多糖溶液。取 9 mmol·L-1的 FeSO4與 9 mmol·L-1的水楊酸-乙醇溶液各1 mL，搖勻后加入多糖溶液1 mL、8.8 mmol·L-1的H2O2溶液1 mL；水浴37℃反應(yīng)1 h后，冷卻至室溫；在510 nm下測(cè)吸光度值，重復(fù)測(cè)試3次。羥基自由基清除率（E3，%）計(jì)算公式為：

式中：A0為蒸餾水替代樣品的反應(yīng)體系吸光度值；A1為不同濃度多糖溶液以及陽性對(duì)照VC的反應(yīng)體系吸光度值；A2為蒸餾水替代水楊酸溶液的反應(yīng)體系吸光度值。

4） 超氧陰離子清除活性

利用鄰苯三酚氧化法[21]進(jìn)行多糖超氧陰離子清除率的測(cè)定。將凍干后的多糖粉末，配制成質(zhì)量濃度梯度為 0.156 mg·mL-1、0.313 mg·mL-1、0.625 mg·mL-1、1.500 mg·mL-1、2.500 mg·mL-1、5.000 mg·mL-1、10.000 mg·mL-1的多糖溶液。取pH 8.2的Tris-HCl緩沖液3 mL和多糖溶液1 mL，25℃下保溫20 min；加入25℃下預(yù)熱的7 mmol·L-1的鄰苯三酚0.3 mL準(zhǔn)確反應(yīng) 4 min，加入 10 mmol·L-1的 HCl溶液 1 mL終止反應(yīng)；在420 nm處測(cè)定其吸光度值，試驗(yàn)重復(fù)3次，取其平均值，計(jì)算清除率。超氧陰離子清除率（E4，%） 計(jì)算公式為：

式中：A0為蒸餾水替代樣品的反應(yīng)體系吸光度值；A1為不同濃度多糖溶液以及陽性對(duì)照VC的反應(yīng)體系吸光度值；A2為蒸餾水替代鄰苯三酚溶液的反應(yīng)體系吸光度值。

1.4.6 α-淀粉酶活性抑制試驗(yàn)

采用碘-淀粉比色法分別測(cè)定古巴栓孔菌胞內(nèi)多糖及胞外多糖對(duì)豬胰腺、枯草芽孢桿菌來源α-淀粉酶的抑制活性[22]。試驗(yàn)在0.1 mol·L-1、pH 7.0的磷酸鉀緩沖液酶活力測(cè)定體系中進(jìn)行。將凍干后的多糖粉末，配制成質(zhì)量濃度梯度分別為0.156 mg·mL-1、0.312 mg·mL-1、 0.625 mg·mL-1、 1.500 mg·mL-1、2.500 mg·mL-1、5.000 mg·mL-1、10.000 mg·mL-1的多糖溶液。在試管中加入不同濃度的待測(cè)多糖樣品0.05 mL以及0.3 g·L-1的可溶性淀粉溶液1 mL，于37℃溫浴 5 min后加入 0.01 mg·mL-1的 α-淀粉酶0.05 mL。45℃反應(yīng) 3 min后，加入 0.01 mol·L-1的碘液1 mL進(jìn)行檢測(cè)，在紫外分光光度計(jì)660 nm處測(cè)定吸光度值，陽性對(duì)照為阿卡波糖?；衔飳?duì)α-淀粉酶的抑制率（E5，%）計(jì)算公式為：

式中：A0為淀粉溶液與碘液反應(yīng)后的吸光度值；A1為不同濃度多糖溶液以及陽性對(duì)照阿卡波糖的反應(yīng)體系吸光度值。

1.4.7 亞硝酸鹽清除能力的測(cè)定

將凍干后的多糖粉末，配制成質(zhì)量濃度梯度分別為 0.156 mg·mL-1、0.312 mg·mL-1、0.625 mg·mL-1、1.500 mg·mL-1、 2.500 mg·mL-1、 5.000 mg·mL-1、10.000 mg·mL-1的多糖溶液。在試管中加入濃度為5.0 μg·mL-1亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液1 mL以及不同濃度多糖溶液2 mL，反應(yīng)10 min后加入0.4%的對(duì)氨基苯磺酸溶液2 mL，靜置5 min后再加入0.2%的鹽酸萘乙二胺1 mL，顯色后靜置15 min，在波長538 nm處測(cè)定吸光度值，陽性對(duì)照為VC溶液[24]。多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除率（E6，%）計(jì)算公式為：

式中：A1為不同濃度樣品溶液的吸光度值；A0為蒸餾水代替樣品反應(yīng)的吸光度值。

2 結(jié)果與分析

2.1 菌絲體生物量與多糖含量

經(jīng)液體深層發(fā)酵后，古巴栓孔菌菌絲體生物量為 （2.15± 0.08） g·L-1，胞內(nèi)多糖含量為 （15.42±0.26） mg·g-1，胞外多糖的含量為 （44.82 ± 1.04）mg·L-1，去除蛋白質(zhì)后的胞內(nèi)多糖占提取物總質(zhì)量的91%，胞外多糖占提取物總質(zhì)量的94%。對(duì)比4種姬松茸與13種野生靈芝的胞外多糖以及胞內(nèi)多糖含量[24-26]，古巴栓孔菌的胞外與胞內(nèi)多糖含量均較低，究其原因與提取方法和發(fā)酵條件相關(guān)，后續(xù)試驗(yàn)會(huì)進(jìn)一步探討多糖的最優(yōu)提取條件與最適發(fā)酵條件。

2.2 抗氧化活性

古巴栓孔菌多糖對(duì)DPPH自由基清除活性試驗(yàn)結(jié)果見圖1。

圖1 多糖對(duì)DPPH自由基的清除率Fig.1 Scavenging rate of polysaccharide on DPPH·

圖1結(jié)果表明，陽性對(duì)照VC對(duì)DPPH自由基有很強(qiáng)的清除作用，濃度為0.156 mg·mL-1的VC的清除率即可達(dá)到80%以上。在0.156 mg·mL-1～10.000 mg·mL-1內(nèi)，古巴栓孔菌的胞內(nèi)多糖對(duì)DPPH自由基的清除率隨其濃度的增加而提高，在0.625 mg·mL-1～10.000 mg·mL-1范圍內(nèi)清除率明顯提升，最高可達(dá)57.32%。而古巴栓孔菌的胞外多糖的最高清除率只有23.64%，且隨濃度的升高，清除率并無明顯變化。雖然古巴栓孔菌的胞內(nèi)多糖對(duì)DPPH·的清除率低于VC，但也具有一定的抗氧化活性，而胞外多糖抗氧化活性明顯較弱。

ABTS·+清除試驗(yàn)通常用于評(píng)價(jià)化合物總抗氧化活性[24]，古巴栓孔菌多糖對(duì)ABTS·+清除活性試驗(yàn)結(jié)果見圖2。

圖2 多糖對(duì)ABTS·+的清除率Fig.2 Scavenging rate of polysaccharide on ABTS·+

如圖2所示，古巴栓孔菌的胞內(nèi)與胞外多糖均呈現(xiàn)良好的抗氧化活性，其胞內(nèi)多糖在2.5 mg·mL-1濃度時(shí)，清除率已基本達(dá)到100%，與陽性對(duì)照相似。胞外多糖濃度在10 mg·mL-1時(shí)，清除率也達(dá)到100%。所測(cè)樣品質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，隨著質(zhì)量濃度增加其ABTS·+清除活性隨之明顯增強(qiáng)，2種多糖都表現(xiàn)出較強(qiáng)的ABTS·+清除活性。

古巴栓孔菌多糖對(duì)羥基自由基清除活性試驗(yàn)結(jié)果見圖3。

圖3 多糖對(duì)羥基自由基的清除率Fig.3 Scavenging rate of polysaccharide on·OH

圖3結(jié)果表明，陽性對(duì)照VC對(duì)羥基自由基有很強(qiáng)的清除作用，并且古巴栓孔菌的胞內(nèi)多糖與胞外多糖的清除率隨著濃度的增加而提高。結(jié)果還表明，多糖濃度在2.5 mg·mL-1～10.0 mg·mL-1范圍內(nèi)，古巴栓孔菌胞內(nèi)多糖對(duì)羥基自由基的清除作用急劇上升；測(cè)試濃度范圍內(nèi)古巴栓孔菌的胞外多糖對(duì)羥基自由基的清除作用也隨濃度的增加平穩(wěn)升高，最高可達(dá)到92.85%。因此古巴栓孔菌的胞內(nèi)與胞外多糖對(duì)羥基自由基也具有一定的抗氧化活性。

古巴栓孔菌多糖對(duì)超氧陰離子清除活性試驗(yàn)結(jié)果見圖4。

圖4 多糖對(duì)超氧陰離子的清除率Fig.4 Scavenging rate of polysaccharide on O2-·

由圖4可知，多糖濃度范圍為0.156 mg·mL-1～10.000 mg·mL-1內(nèi)，2種多糖對(duì)超氧陰離子的清除作用平穩(wěn)上升，且與陽性對(duì)照VC對(duì)超氧陰離子清除作用相差較小。在濃度為10 mg·mL-1時(shí)，古巴栓孔菌的胞內(nèi)與胞外多糖對(duì)超氧陰離子的清除作用最高，胞內(nèi)多糖的清除率為94.52%，胞外多糖為93.61%。而陽性對(duì)照VC的最高清除率為95%，說明古巴栓孔菌的胞內(nèi)與胞外多糖對(duì)超氧陰離子的清除效果較好，且兩者效果相差不大。

2.3 α-淀粉酶抑制活性

α-淀粉酶抑制活性通常被用作評(píng)價(jià)降血糖能力的指標(biāo)之一[27]，古巴栓孔菌多糖對(duì)豬胰腺來源α-淀粉酶抑制活性試驗(yàn)結(jié)果見圖5。

圖5 多糖對(duì)豬胰腺來源α-淀粉酶活性的抑制率Fig.5 Inhibition rate of polysaccharide on α-amylase activity of porcine pancreas

如圖5所示，陽性對(duì)照阿卡波糖對(duì)α-淀粉酶的抑制活性隨濃度升高而提升，當(dāng)濃度為10 mg·mL-1時(shí)，其抑制率達(dá)到90.11%。而胞內(nèi)與胞外多糖在濃度為 0.156 mg·mL-1～2.500 mg·mL-1時(shí)，對(duì) α-淀粉酶的抑制率均低于陽性對(duì)照阿卡波糖，且抑制率無明顯梯度變化，基本在42.84%～45.08%。當(dāng)濃度上升至5 mg·mL-1時(shí)，胞內(nèi)與胞外多糖對(duì)α-淀粉酶的抑制率均有大幅提升，且胞內(nèi)多糖α-淀粉酶抑制率最高為56.81%；胞外多糖濃度為10 mg·mL-1時(shí)，α-淀粉酶的抑制率最高為55.98%。因此，古巴栓孔菌的胞內(nèi)與胞外多糖對(duì)豬胰腺來源的α-淀粉酶具有一定的抑制活性，且效果相似。

古巴栓孔菌多糖對(duì)枯草芽孢桿菌來源α-淀粉酶抑制活性試驗(yàn)結(jié)果見圖6。

由圖6可知，胞內(nèi)與胞外多糖質(zhì)量濃度在0.156 mg·mL-1～10.000 mg·mL-1時(shí)，陽性對(duì)照阿卡波糖對(duì)枯草芽孢桿菌來源α-淀粉酶的抑制活性隨濃度提升；當(dāng)濃度達(dá)到10 mg·mL-1時(shí)，其抑制率達(dá)到95.24%。而古巴栓孔菌胞內(nèi)與胞外多糖在濃度為0.156 mg·mL-1～2.500 mg·mL-1時(shí)，抑制效果無明顯差距，基本為58.92%～64.32%。當(dāng)古巴栓孔菌的胞內(nèi)與胞外多糖質(zhì)量濃度為5 mg·mL-1時(shí)，抑制效果有明顯的提升，且抑制率均達(dá)到最高，分別為74.06%與72.30%。而當(dāng)濃度達(dá)到10 mg·mL-1時(shí)，古巴栓孔菌的胞內(nèi)與胞外多糖對(duì)α-淀粉酶的抑制活性均有所下降。

圖6 多糖對(duì)枯草芽孢桿菌來源α-淀粉酶活性的抑制率Fig.6 Inhibition rate of polysaccharide on α-amylase activity from Bacillus subtilis

2.4 亞硝酸鹽清除能力

古巴栓孔菌多糖對(duì)亞硝酸鹽清除能力試驗(yàn)結(jié)果見圖7。

圖7 多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除能力Fig.7 Scavenging rate of polysaccharide on nitrite

如圖7所示，陽性對(duì)照VC對(duì)亞硝酸鹽的清除作用明顯，0.156 mg·mL-1VC的清除率就已經(jīng)達(dá)到50.61%，最高清除率可達(dá)88.86%。在0.15 mg·mL-1～10.000 mg·mL-1，古巴栓孔菌的胞內(nèi)多糖與胞外多糖對(duì)亞硝酸鹽的清除率隨其濃度的增加，在1.25 mg·mL-1～10.00 mg·mL-1其清除率明顯提升，胞內(nèi)與胞外多糖抑制率最高可達(dá)60.13%和58.97%。

3 討論與結(jié)論

真菌多糖可以與自由基結(jié)合，形成抑制物阻止氧化，促進(jìn)抗氧化酶生成以及提高抗氧化酶活性，因此具有抗氧化能力[26-28]。本研究結(jié)果表明，在清除羥自由基、ABTS·+、超氧陰離子的能力中，古巴栓孔菌的胞內(nèi)多糖與胞外多糖能力相差不大。但是在對(duì)DPPH自由基的清除中，2種多糖的能力差距明顯，古巴栓孔菌胞內(nèi)多糖的清除能力比胞外多糖顯著，并且隨著濃度的升高，清除能力也逐步提升。與栓菌屬中奶油栓孔菌（Trametes lactinea） 子實(shí)體多糖抗氧化活性相比，奶油栓孔菌子實(shí)體多糖濃度在1 mg·mL-1時(shí)，ABTS·+清除能力為100%；濃度增加至4 mg·mL-1時(shí)，其DPPH·清除能力為79.64%，超氧陰離子的清除能力為43.57%[29]。由此可見，奶油栓孔菌子實(shí)體多糖對(duì)ABTS+·和DPPH·清除能力，均優(yōu)于本研究中提取的古巴栓孔菌胞外與胞內(nèi)多糖。

α-淀粉酶可以將淀粉水解成低分子的糖類物質(zhì)，抑制其活性可以緩解人體內(nèi)淀粉的降解與葡萄糖的吸收。所以α-淀粉酶抑制劑可以降低II型糖尿病患者餐后血糖水平，以及減少糖尿病并發(fā)癥的發(fā)生。因此，從果、蔬、谷物、菌類等天然產(chǎn)物中尋找α-淀粉酶抑制劑成為當(dāng)今研究的熱點(diǎn)方向[30]。近年的研究證實(shí)，真菌多糖具有顯著的抑制α-淀粉酶活性的效果，其抑制活性與多糖的分子結(jié)構(gòu)、空間構(gòu)象以及含有的雜質(zhì)含量等均相關(guān)[31]。李井雷等[32]的試驗(yàn)表明，純化后的羊肚菌胞外多糖具有良好的α-淀粉酶抑制活性，且濃度達(dá)到0.8 mg·mL-1時(shí)，其抑制活性達(dá)到60%左右，與未純化的古巴栓孔菌胞內(nèi)和胞外多糖相比，具有顯著的抑制效果，究其原因與多糖的種類以及純化程度均有密切聯(lián)系。

亞硝酸鹽既可以直接導(dǎo)致DNA損傷，還能在酸性條件下與氨基酸和胺類物質(zhì)反應(yīng)生成亞硝胺，具有強(qiáng)致癌性。一些化學(xué)成分如黃酮類、多酚類、皂苷類、多糖類等，能與亞硝酸根發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，從而達(dá)到清除亞硝酸鹽的作用[23]。目前，古巴栓孔菌的多糖對(duì)亞硝酸鹽清除效果的研究尚未見報(bào)道，本研究結(jié)果顯示2種多糖濃度達(dá)到10 mg·mL-1時(shí)，亞硝酸鹽清除率均超過50%，具有較顯著的清除能力。

綜上所述，古巴栓孔菌的胞內(nèi)、胞外多糖具有較顯著的抗氧化和亞硝酸鹽清除能力，而且對(duì)α-淀粉酶的活性抑制效果明顯。試驗(yàn)結(jié)果為古巴栓孔菌胞內(nèi)、胞外多糖的進(jìn)一步研究提供了一定的數(shù)據(jù)及理論依據(jù)，為其作為功能性食品或食品添加劑奠定了研究基礎(chǔ)。今后，將對(duì)2種多糖進(jìn)一步研究，通過離子交換柱層析的方法進(jìn)行純化，深入探討各種生理活性與多糖的構(gòu)效關(guān)系。