楊昌華，胡文勝，覃 琴，鄧春雷

（湖南師范大學(xué)醫(yī)學(xué)院，長(zhǎng)沙 410013）

恩替卡韋［1］，2-氨基-9-［（1S，3S，4S）-4-羥基-3-羥甲基-2-亞甲基環(huán)戊基］-1，9-二氫-6H-嘌呤-6-酮-水合物，臨床治療慢性乙肝，化學(xué)結(jié)構(gòu)式為：

本文擬用GC 法［2～4］測(cè)定其中的有機(jī)溶劑甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃和環(huán)己烷。

1 材料與方法

1.1 儀器 Agilent，7890B 氣相色譜儀，F(xiàn)ID 檢測(cè)器，Agilent，7697A 頂空進(jìn)樣器；MS205DU 梅特勒電子分析天平。

1.2 試劑 恩替卡韋，嘉實(shí)（湖南）醫(yī)藥有限公司，批號(hào)18112601，18112602，18112603。甲醇（西格瑪奧德里奇貿(mào)易有限公司，批號(hào)：WXBC2771V），乙醇（DIKMA，批號(hào)R141483），二氯甲烷（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20180612），乙酸乙酯（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號(hào)：20171128），四氫呋喃（GRACE，批號(hào)：6056785），環(huán)己烷（賽默飛世爾科技有限公司，批號(hào)：173029），二甲基亞砜（DMSO 阿拉丁，A1830084）。

1.3 方法

1.3.1 色譜方法 色譜柱為DB-624（30m×0.53mm，3μm）毛細(xì)管柱；柱溫40 ℃保持15min，10 ℃/min 至180℃保持5min；進(jìn)樣口溫度：160℃；檢測(cè)器溫度：220℃；載氣：氮?dú)猓涣魉伲?.0mL/min；分流比2：1；頂空參數(shù)：頂空瓶溫度：90℃，頂空瓶保溫時(shí)間：45min，進(jìn)樣循環(huán)時(shí)間：35min，LOOP 管（定量環(huán)）溫度：105℃，TR LINE（傳輸溫度）：115℃，加壓時(shí)間：0.50min；Loop EQ Time（定量環(huán)平衡時(shí)間）：0.05min，Loop Fill Time（定量環(huán)定量時(shí)間）：0.20min。

2 結(jié)果

2.1 專(zhuān)屬性 稀釋劑二甲基亞砜保留時(shí)間遠(yuǎn)大于恩替卡韋與殘留溶劑（甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷）；殘留溶劑間及與恩替卡韋無(wú)干擾。

2.2 準(zhǔn)確度 精密稱(chēng)取約60mg 甲醇、100mg 乙醇、12mg 二氯甲烷、100mg 乙酸乙酯、14.4mg 四氫呋喃和77.6mg 環(huán)己烷置100mL 量瓶，DMSO 溶解并稀釋至刻度，混勻。精密移取10mL 置20mL 量瓶，DMSO 稀釋至刻度，搖勻。精密量取5mL 置20mL 頂空瓶，測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

2.3 線性和范圍 精密稱(chēng)取約60mg 甲醇、100mg 乙醇、12mg 二氯甲烷、100mg 乙酸乙酯、14.4mg 四氫呋喃和77.6mg 環(huán)己烷置100mL 量瓶，DMSO 溶解并稀釋至刻度，混勻；精密移取2.0mL、5.0mL、8.0mL、10.0mL、12.0mL 分置100mL 量瓶，分別加DMSO 稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL 置頂空瓶，進(jìn)樣3 次，測(cè)定；以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，濃度（C）為橫坐標(biāo)回歸，結(jié)果如表2。

表2 線性范圍與回歸方程

2.4 精密度 稱(chēng)取約0.1g 恩替卡韋共6 份，精密稱(chēng)定，分置20mL 量瓶，精密移取10mL 線性?xún)?chǔ)備液，DMSO 溶解并稀釋至刻度，搖勻，為對(duì)照液。精密量取5mL 上述各溶液至20mL 頂空瓶，測(cè)定；不同分析人員、不同日期測(cè)定得中間精密度，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 重復(fù)性與中間精密度

2.5 耐用性 精密量取對(duì)照品溶液5mL 置20mL 頂空瓶，改變流速（1.8mL/min、2.0mL/min、2.2mL/min）、柱溫（38℃、40℃、42℃）、頂空瓶溫度（88℃、90℃、92℃）、頂空瓶保溫時(shí)間（43min、45min、47min），測(cè)定，保留時(shí)間RSD%（n=3）見(jiàn)表4。最低分離度2.3。

表4 耐用性結(jié)果

2.6 溶液穩(wěn)定性 取2.2 配置的對(duì)照品溶液，室溫下放置0h、6h、12h、18h、24h，測(cè)定回收率，結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 溶液穩(wěn)定性（RSD%）

2.7 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 精密量取各對(duì)照品溶液5mL 分置20mL 頂空瓶，依1.3.1 色譜方法測(cè)定，結(jié)果如表6。

表6 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)結(jié)果

2.8 供試品測(cè)定 精密稱(chēng)取不同批號(hào)的恩替卡韋約0.1g 3 份，置100mL 量瓶，DMSO 溶解并稀釋至刻度，搖勻。精密量取5mL 至20mL 頂空瓶，測(cè)定。

表7 供試品測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 樣品溶劑的選擇 有機(jī)溶劑N，N-二甲基甲酰胺、二甲基亞砜（DMSO）都有較高極性和沸點(diǎn)，常用于GC 法測(cè)定有機(jī)溶劑殘留量［6］。恩替卡韋生產(chǎn)中使用的有機(jī)溶劑較多，DMSO 沸點(diǎn)更高，有“萬(wàn)能溶劑”之稱(chēng)，試驗(yàn)表明其對(duì)各種殘留溶劑的測(cè)定無(wú)干擾，故選作溶劑。

3.2 色譜柱的選擇 甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氫呋喃、環(huán)己烷的極性差異較大，篩選了極性色譜柱HP-WAX、中等極性色譜柱DB-624 和非極性色譜柱DB-1，乙醇和二氯甲烷在極性色譜柱HP-WAX中達(dá)不到基線分離，而中極性色譜柱DB-624 的分離效果優(yōu)于非極性色譜柱DB-1，因此選擇DB-624 色譜柱。

色譜柱為DB-624（30m×0.53mm，3μm）毛細(xì)管柱，柱溫40℃保持15min，10℃/min 升至180℃保持5min；進(jìn)樣口溫度：160℃；檢測(cè)器溫度：220℃；載氣：氮?dú)?；流速?.0mL/min 分流進(jìn)樣，分流比：2：1；頂空瓶溫度：90℃；頂空瓶保溫時(shí)間：45min；進(jìn)樣循環(huán)時(shí)間：35min；LOOP 管溫度：105℃（定量環(huán)）TRLINE 溫度：115℃；加壓時(shí)間：0.50minLoop EQ Time：0.05min；Loop Fill Time：0.20min?？梢詫?zhuān)屬、靈敏、準(zhǔn)確地測(cè)定恩替卡韋中殘留的有機(jī)溶劑。