寧慧波 周 洋 王華龍

（天康生物制藥有限公司，江蘇蘇州 215124）

口蹄疫（foot and mouth disease,FMD）是一種由口蹄疫病毒引起的急性、熱性、高度接觸性傳染病[1]。本病具有強(qiáng)烈的傳染性，發(fā)病率幾乎達(dá)100%，一旦發(fā)病，傳染速度很快，往往造成大流行，且不易控制和消滅，給養(yǎng)殖企業(yè)帶來(lái)嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）一直將本病列為發(fā)病必須報(bào)告的A類(lèi)動(dòng)物疫病之首，我國(guó)也將口蹄疫列為一類(lèi)家畜傳染病。因此，實(shí)際養(yǎng)豬生產(chǎn)中，應(yīng)采取綜合防控措施，全面預(yù)防口蹄疫等動(dòng)物疫病。

疫苗免疫是防控口蹄疫的重要手段，安全高效的疫苗是成功預(yù)防乃至凈化FMD的先決條件[2,3]。我國(guó)對(duì)口蹄疫的防控政策主要是預(yù)防為主、撲殺為輔。我國(guó)針對(duì)口蹄疫防控實(shí)行強(qiáng)制免疫政策，免疫抗體水平檢測(cè)既是疫苗免疫質(zhì)量評(píng)估的常用手段，也是免疫效果好壞的重要評(píng)價(jià)指標(biāo)，同時(shí)也可以為科學(xué)制定免疫程序、做好疫病風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供可靠的技術(shù)支持。疫苗質(zhì)量受到毒株、抗原含量、佐劑、保質(zhì)期等因素影響。為了更科學(xué)地評(píng)估口蹄疫疫苗抗原含量對(duì)免疫效果的影響程度，本研究對(duì)2款口蹄疫產(chǎn)品進(jìn)行免疫試驗(yàn)并跟蹤評(píng)估免疫效果，為口蹄疫疫苗的選擇及臨床使用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

廣東某規(guī)?；i場(chǎng)，經(jīng)產(chǎn)母豬存欄9 600頭，兩點(diǎn)式生產(chǎn)，封閉式管理，豬群整體健康狀況良好。

1.2 試驗(yàn)材料

口蹄疫O型、A型二價(jià)滅活疫苗X，購(gòu)自新疆某公司；口蹄疫O型、A型二價(jià)滅活疫苗Y，購(gòu)自內(nèi)蒙古某公司；紫外分光光度計(jì)，購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；口蹄疫O型抗體液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 疫苗抗原含量測(cè)定

采取蔗糖密度梯度離心法獲得一定體積口蹄疫病毒146S病毒粒子，使用紫外分光光度計(jì)在259 nm紫外光下檢測(cè)吸收峰，從而測(cè)定口蹄疫疫苗抗原含量。

1.3.2 免疫方案

分別選取經(jīng)產(chǎn)母豬和9周齡仔豬進(jìn)行試驗(yàn)，免疫方案見(jiàn)表1。

表1 試驗(yàn)免疫方案

1.3.3 抗體測(cè)定

于免疫當(dāng)天、免疫后8周對(duì)每組母豬隨機(jī)采血100份，于免疫當(dāng)天、免疫后4周對(duì)每組仔豬隨機(jī)采血100份，分離血清，－20℃冷凍保存，進(jìn)行豬口蹄疫O型抗體測(cè)定?？谔阋逴型抗體檢測(cè)按照相應(yīng)試劑盒說(shuō)明書(shū)，判定標(biāo)準(zhǔn)：抗體效價(jià)＜1∶64為陰性，1∶64～1∶128為可疑，≥1∶128為陽(yáng)性。

2 結(jié)果與分析

2.1 抗原146S含量檢測(cè)結(jié)果

如圖1所示：疫苗X的146S含量為33.7 μg/mL，是疫苗Y的2倍以上，二者在抗原檢測(cè)方面表現(xiàn)差異顯著（P＜0.05）。

圖1 兩種口蹄疫疫苗146S含量檢測(cè)結(jié)果

2.2 口蹄疫O型抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2.1 母豬抗體檢測(cè)結(jié)果

如圖2所示，免疫前兩組抗體陽(yáng)性率均低于80%，免疫8周后抗體水平有了明顯提升，且疫苗X組陽(yáng)性率明顯高于疫苗Y組。疫苗X組陽(yáng)性率（98%）提升了19個(gè)百分點(diǎn)；疫苗Y組抗體陽(yáng)性率（89%）提升了12個(gè)百分點(diǎn)，疫苗X組增幅明顯高于疫苗Y組。免疫前兩組抗體離散度均較大，免疫后均降低，且疫苗X組明顯低于疫苗Y組；疫苗X組離散度顯著降低至10%（P＜0.05），降幅達(dá)35個(gè)百分點(diǎn)；疫苗Y組離散度降低至39%，降幅3個(gè)百分點(diǎn)。

圖2 母豬免疫前后O型抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2.2 仔豬抗體檢測(cè)結(jié)果

如圖3所示，免疫前兩組抗體陽(yáng)性率較高，均超過(guò)90%。免疫后，疫苗X組陽(yáng)性率升至100%，而疫苗Y組陽(yáng)性率卻降至65%。對(duì)比兩組免疫后抗體效價(jià)，疫苗X組不同效價(jià)的抗體比例均遠(yuǎn)高于疫苗Y組，且疫苗Y組抗體效價(jià)＞1∶512的比例高達(dá)70%，結(jié)果如圖4。兩組抗體結(jié)果差異顯著（P＜0.05）。

圖3 仔豬免疫前后O型抗體檢測(cè)結(jié)果

圖4 仔豬免疫后O型抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

口蹄疫流行毒株復(fù)雜多變，有7個(gè)血清型，各血清型之間無(wú)交叉免疫性，同血清型的口蹄疫病毒拓?fù)湫灾g也僅有部分交叉免疫保護(hù)。口蹄疫病毒的傳播途徑眾多，可通過(guò)氣溶膠隨風(fēng)移動(dòng)50～100 km，據(jù)英國(guó)資料報(bào)道最遠(yuǎn)可達(dá)300 km。豬是口蹄疫氣溶膠的最大制造者，一天可排出108感染單位病毒，可使1 000萬(wàn)頭牛感染發(fā)病。生物安全對(duì)于口蹄疫的防控至關(guān)重要，但并不能保證萬(wàn)無(wú)一失。目前，國(guó)際公認(rèn)免疫注射口蹄疫疫苗是防控該病最經(jīng)濟(jì)有效的措施。

近幾年，我國(guó)主要流行O、A型口蹄疫，亞洲Ⅰ型處于非免疫無(wú)疫狀態(tài)。目前，臨床生產(chǎn)中主要使用的是口蹄疫滅活疫苗。此類(lèi)疫苗抗原是完整的病毒顆粒（146S），具有充分的T細(xì)胞和B細(xì)胞位點(diǎn)[4]。口蹄疫疫苗的免疫應(yīng)答以體液免疫為主，在一定范圍內(nèi)體液中抗原含量越高，產(chǎn)生抗體水平越高、抗體維持時(shí)間也就越久。更為重要的是，抗原含量高才能對(duì)“撲朔迷離”的田間流行毒株產(chǎn)生更好的交叉保護(hù)力。同時(shí)，抗原含量高，更容易削弱母源抗體的干擾作用，縮短甚至避免仔豬免疫空窗期[5,6]。此外，合理的免疫程序?qū)τ诔浞职l(fā)揮疫苗作用至關(guān)重要。

本研究評(píng)估了兩款口蹄疫疫苗的抗原含量、母豬及仔豬免疫前后抗體變化情況。結(jié)果顯示，兩款疫苗抗原含量差距顯著，疫苗X的146S顯著高于疫苗Y。母豬群分別免疫后，抗體陽(yáng)性率均顯著提升，離散度均下降；但疫苗X組抗體的陽(yáng)性率及離散度變化均明顯優(yōu)于疫苗Y組。同時(shí)也發(fā)現(xiàn)，該場(chǎng)母豬群抗體陽(yáng)性率并未達(dá)到100%，這可能與豬群健康度或疫苗免疫程序有關(guān)，后續(xù)可以對(duì)母豬群進(jìn)行加強(qiáng)免疫。仔豬群分別免疫后，抗體陽(yáng)性率均顯著變化；疫苗X組陽(yáng)性率升至100%，而疫苗Y組卻下降至65%，結(jié)果“大相徑庭”；疫苗X組不同效價(jià)的抗體比例均遠(yuǎn)高于疫苗Y組。這可能與母源抗體的干擾作用有關(guān)，疫苗X由于抗原含量高，可以快速產(chǎn)生高水平的抗體，更大程度地削弱母源抗體的干擾作用。后續(xù)可以對(duì)母源抗體進(jìn)行中和抗體測(cè)定，以制定更科學(xué)的免疫程序。

口蹄疫疫苗的穩(wěn)定性相對(duì)較差，疫苗中的146S含量及穩(wěn)定性對(duì)于疫苗免疫效果至關(guān)重要。疫苗中的146S在4℃時(shí)相對(duì)穩(wěn)定，但在37℃及以上溫度下穩(wěn)定性較差。因此，需加強(qiáng)口蹄疫疫苗的運(yùn)輸及儲(chǔ)存環(huán)節(jié)管控[7]。為了更好地發(fā)揮疫苗效果，一般采用油性佐劑，低溫條件下較為黏稠，刺激性較大，回溫操作可以大大降低疫苗黏稠度、提高疫苗通針性、減輕疫苗應(yīng)激、降低勞動(dòng)量，從而進(jìn)一步提升疫苗使用效果[8]。