黃娟，劉麗，何俊梅，白世光，李紅，金蘭花，劉宇，李久龍，金呂飛

1.昆明醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，云南個舊 661000；2.云南省金平縣人民醫(yī)院內(nèi)科，云南金平 661500

近年來，隨著人們生活水平的提高，中國人群的血脂水平也逐步上升。2012 年全國調(diào)查結(jié)果顯示，全國血脂異常的患病率已高達40.4%，其中高膽固醇血癥的患病率為4.9%，高三酰甘油血癥的患病率為12.1%[1]。除了某些疾病及藥物引起的繼發(fā)性高脂血癥外，原發(fā)性高脂血癥大多是由于不良生活習(xí)慣（如吸煙、飲酒、高脂高糖飲食等）和單個或多個基因突變引起。HLA 是公認(rèn)的最具復(fù)雜多態(tài)性的基因系統(tǒng)，各民族間HLA 多態(tài)性分布具有其各自的特點。目前，多種疾病都被證實與HLA 密切相關(guān)。為探討少數(shù)民族地區(qū)人群血脂異常是否與HLA 相關(guān)聯(lián)，該次對2020 年8—12 月期間收集的202 名云南省金平縣芒人進行血脂異常與HLA-B、HLA-DR 基因分型的研究?，F(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

對云南省金平縣金水河鎮(zhèn)的龍鳳村、坪河村、雷公打牛村共3 個自然村的16 歲以上且自愿參與調(diào)查的芒人居民，排除外出務(wù)工、精神異常者以及懷孕婦女，共202 名，其中男102 名，女100 名。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

根據(jù)《中國居民營養(yǎng)與慢性病狀況報告（2015）》，高三酰甘油（triglycerides，TG）血癥中TG≥1.70 mmol/L,TC<5.72 mmol/L；高膽固醇血癥（total cholesterol，TC）中TC≥5.72 mmol/L,TC<1.70 mmol/L；混合型高脂血癥定義為TG≥1.70 mmol/L,TC≥5.72 mmol/L。本文中，高TG定義為TG≥1.70 mmol/L，高TC 定義為TC≥5.72 mmol/L。

1.3 標(biāo)本采集和檢驗

采用普查的方法，結(jié)合村委會的常住人口花名冊，由當(dāng)?shù)卮甯刹吭谥付ㄕ{(diào)查日期召集至村會議室，要求受檢者空腹10 h 以上，次日8:00 開始采集EDTA 抗凝全血及促凝全血各5 mL，促凝全血集中離心處理后送至昆明醫(yī)科大學(xué)第五附屬醫(yī)院生化室進行血清三酰甘油及血清膽固醇的測定，EDTA抗凝全血送至昆明醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院風(fēng)濕免疫科實驗室進行外周血DNA 提取，采用寡聚核苷酸探針方法（PCR-SSO）進行DNA 擴增和樣本雜交后，用luminex200 機器讀取數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)導(dǎo)入Labtype 軟件進行HLA-B 位點、HLA-DR 位點等位基因和血清型分型。調(diào)查過程符合《昆明醫(yī)科大學(xué)醫(yī)學(xué)倫理》要求，并明確告知調(diào)查內(nèi)容及其利弊，簽署知情同意書。

1.4 儀器與試劑

采用貝克曼5800 全自動生化分析儀。三酰甘油、膽固醇試劑盒由日本積水醫(yī)療株式會社提供。采用PCR system 9700 儀（賽默飛世爾科技有限公司）、Luminex 200（美國ZEUS 公司）、5424R 小型臺式高速冷凍離心機（EPPENDORF 公司）、震蕩儀（江蘇天力醫(yī)療器械有限公司）、轉(zhuǎn)速4 000 rpm 離心機（江蘇江堰有限公司）、電熱恒溫溫箱（江蘇天力醫(yī)療器械有限公司）。血液等位基因組DNA 提取試劑盒（北京天根公司）、序列特異性寡核苷酸探針法（One lambda 公司）、taqDNA 聚合酶（One lambda 公司）、無水乙醇（天津市化學(xué)試劑三廠）。

1.5 統(tǒng)計方法

采用SPSS 23.0 統(tǒng)計學(xué)軟件處理數(shù)據(jù)，計數(shù)資料以[n（%）]表示，組間差異比較采用χ2檢驗，等級資料采用秩和檢驗。P<0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 高脂血癥的患病情況分析

本研究中202名芒人TG的平均值為1.43 mmol/L，TC 的平均值為4.59 mmol/L。高TG 組共54 名，男29 名，女25 名；高TC 組共28 名，男13 名，女15 名；TC 及TG 均升高組共11 名（男5 名，女6 名）；血脂正常組共131 名，男65 名，女66 名。高脂血癥的總患病率為35.1%（男36.3%；女34.0%）；高TG 的患病率為26.7%（男28.4%；女25.0%）；高TG 的患病率為13.9%（男12.7%；女15.0%）。男女間高TG、高TC 患病率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。各年齡段高TG、高TC 患病率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表1。

表1 不同性別及年齡段高TG 和高TC 的患病情況分析[n(%)]

2.2 HLA-B、HLA-DR 等位基因的優(yōu)勢基因分布

排除15 例（高TG 組有6 例，高TC 組有2 例，血脂正常組有8 例）未檢測出HLA-B 等位基因；25 例（高TG 組有11 例，高TC 組有4 例，血脂正常組有13例）未檢測出HLA-DR 等位基因，共檢測出19 種HLA-B 位點等位基因、14 種HLA-DRB1 位點等位基因。其中，HLA-B*40:01 是HLA-B 基因中攜帶人數(shù)最多的基因型，占30.2%；HLA-DR*12:02 是HLA-DR 基因中攜帶人數(shù)最多的基因型，占34.5%。

2.3 高TG 與HLA-B、HLA-DR 等位基因的關(guān)聯(lián)

云南省金平縣芒人高TG 組HLA-B*13:01 頻率顯著高于血脂正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），攜帶該基因的芒人罹患高TG 的風(fēng)險高于未攜帶者。HLA-B*40:02 頻率顯著低于血脂正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），攜帶該基因的芒人罹患高TG 的風(fēng)險低于未攜帶者。高TG 組與正常組間的HLA-DR 等位基因差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表2、表3。

表2 云南省金平縣芒人高TG 組與血脂正常組HLA-B 位點等位基因頻率比較[n(%)]

表3 云南省金平縣芒人高TG 組與血脂正常組HLA-DRB1 位點等位基因頻率比較[n(%)]

2.4 高TC 與HLA-B、HLA-DR 等位基因的關(guān)聯(lián)

高TC 組與正常組間的HLA-B、HLA-DR 等位基因差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表4、表5。

表4 云南省金平縣芒人高TC 組與血脂正常組HLA-B 位點等位基因頻率比較[n(%)]

表5 云南省金平縣芒人高TC 組與血脂正常組HLA-DRB1 位點等位基因頻率比較[n(%)]

2.5 高TG 與HLA-B、HLA-DR 血清型的關(guān)聯(lián)

共檢測出12 種HLA-B 位點血清型、8 種HLADRB1 位點血清型。高TG 組與血脂正常組間的HLA-DR 血清型差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表6。高TG 組的HLA-B13 血清型頻率顯著高于血脂正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），攜帶該血清型的云南省金平縣芒人罹患高TG 的風(fēng)險高于未攜帶者；高TG 組的HLA-B15 血清型頻率顯著低于血脂正常組，攜帶該血清型的芒人罹患高TG 的風(fēng)險低于未攜帶者。見表7。

表6 云南省金平縣芒人高TG 組與正常組HLA-DR 血清型比較[n(%)]

表7 云南省金平縣芒人高TG 組與正常組HLA-B 血清型比較[n(%)]

2.6 高TC 與HLA-B、HLA-DR 血清型的關(guān)聯(lián)

高TC 組與血脂正常組的HLA-DR 血清型差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。見表8。高TC 組的HLAB15 血清型頻率顯著高于血脂正常組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。攜帶該血清型的云南省金平縣芒人罹患高TC 的風(fēng)險高于未攜帶者。見表9。

表8 云南省金平縣芒人高TC組與正常組HLA-DR血清型比較[n(%)]

表9 云南省金平縣芒人高TC組與正常組HLA-B血清型比較[n(%)]

3 討論

遺傳相關(guān)的高脂血癥一般是由單個或多個基因突變引起。HLA 復(fù)合物位于第6 號染色體上，具有多等位基因、高度多態(tài)性、單倍型遺傳、連鎖不平衡的特征，是人類最復(fù)雜的基因系統(tǒng)，其分布與人種、民族密切相關(guān)。目前，HLA 已被證明和多種疾病顯著相關(guān)，比如強直性脊柱炎[2]、類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎[3]、系統(tǒng)性紅斑狼瘡[4]等。那么，HLA 是否也參與了高脂血癥的形成呢？日本一項研究證明HLA-DRB1*14:03可能是女性高膽固醇的危險因素[5]，國內(nèi)張印則等[6]發(fā)現(xiàn)家族性高膽固醇和HLA-DRB1*03、HLADRB1*11 呈強正相關(guān)，而與HLA-DRB1*12、HLADRB1*15 呈強負(fù)相關(guān)。但陳萬春等[7]研究中并未發(fā)現(xiàn)HLA 與高膽固醇血癥有明顯相關(guān)性。然而，近期我國臺灣在關(guān)于高脂血癥、性別和HLA-B 基因的聯(lián)系性研究中則有了陽性發(fā)現(xiàn)[8]。以上研究顯示，高脂血癥與HLA-B、HLA-DR 基因多態(tài)性是具有一定關(guān)聯(lián)的。但是，對于HLA 分型對高脂血癥的發(fā)生是否具有預(yù)測作用還需擴大樣本量深入分析。

對云南省金平縣芒人-我國少數(shù)民族中人口最少的一個小群體（共900 余人）進行高脂血癥的流行病學(xué)調(diào)查，結(jié)果表明，該民族高脂血癥的粗患病率為35.1%，其中TG 的平均值為1.43 mmo/L,高TG的患病率為26.7%,TC 的平均值為4.59 mmol/L,高TC患病率為13.9%，血脂水平及患病率均高于2012 年的全國調(diào)查結(jié)果。2012—2015 年我國35 歲以上人群血脂分布特點為男性高于女性[9]，而在芒人群體中尚未發(fā)現(xiàn)限制的性別及年齡分布特點。

為進一步探索高脂血癥與HLA 基因的聯(lián)系，本次研究采用PCR-SSO 對云南省金平縣芒人高TG、高TC 人群的HLA-B、HLA-DR 基因多態(tài)性進行分析，結(jié)果表明芒人患高TG 的人群攜帶HLA-B13 血清型、HLA-B*13:01 基因型的頻率顯著高于血脂正常組，HLA-B*40:02 基因型及HLA-B15 血清型頻率顯著低于正常組（P<0.05）?；几逿C 的人群中HLA-B15 的頻率明顯高于正常組（P<0.05）。對于HLA-B13，有研究發(fā)現(xiàn)該血清型與骨肉瘤的不良預(yù)后[10]、強直性脊柱炎[11]相關(guān)，尤其是HLA-B*13:01已被確定為某些藥物（卡馬西平、氨苯砜、三氯乙烯）誘發(fā)超敏反應(yīng)的標(biāo)志[12-14]。也有HLA-B*40:02與再生障礙性貧血[15-16]、HLA-B15 與抗癲癇藥物超敏反應(yīng)相關(guān)聯(lián)[17-18]的報道。尚未發(fā)現(xiàn)HLA-B13、HLA-B15、HLA-B40 和血脂異常相關(guān)研究。

本研究有關(guān)于高脂血癥與HLA 的陽性發(fā)現(xiàn)，但由于樣本量的限制，對于HLA-B13、HLA-B40 是否真的是罹患高TG 的危險因素，HLA-B15 是否為患高TG 的保護性因素以及患高TC 的危險因素尚不明確，還有待于擴大樣本量進一步探討。本研究不僅擴充了云南省邊疆少數(shù)民族人群基因庫，了解到該民族高脂血癥的患病情況，而且也為邊疆少數(shù)民族的慢性病防控和深入研究血脂異常與HLA 基因 分型的聯(lián)系提供了寶貴的資料。