孫秋，王海英，閆禹竹*

(1.黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150040；2.哈爾濱市第二醫(yī)院，黑龍江 哈爾濱 150056)

糖尿病足是指由糖尿病引起的神經(jīng)、血管病變，可累及全身神經(jīng)、血管系統(tǒng)[1]，其中最常見的末端感覺神經(jīng)及血管病變，并由末端微血管病變和(或)細(xì)菌感染而導(dǎo)致的局部疼痛、慢性潰瘍或末端壞疽等病變，常常由于缺血、神經(jīng)病變和感染3種因素協(xié)同發(fā)生作用[2]。糖尿病患者由于長(zhǎng)期的慢性血糖升高導(dǎo)致周圍的血管和神經(jīng)病變，可能會(huì)出現(xiàn)一系列并發(fā)癥，比如指端并發(fā)癥，由于周圍神經(jīng)功能失調(diào)，微小血管功能障礙，患者可能出現(xiàn)下肢潰瘍、足部感染、神經(jīng)性關(guān)節(jié)炎的等癥狀[3]。糖尿病合并壞疽在古代中醫(yī)學(xué)有較多的記載或論述，其中“脫疽”一詞在實(shí)際臨床表現(xiàn)上與糖尿病足有很多相似[4]，從歷代醫(yī)家表述來(lái)看本病屬中醫(yī)“痹證”“消渴”“脫疽”之范疇[5]。玉米須為禾本科植物玉蜀黍ZeamaysL.的花柱和柱頭，全國(guó)大部分均產(chǎn)，夏、秋果實(shí)成熟時(shí)收集，除去雜質(zhì)后鮮用或曬干生用，是我國(guó)傳統(tǒng)的常用中藥材[6]，民間常用于藥膳中，是預(yù)防和治療糖尿病的常用藥物?！吨兴幋筠o典》記載玉米須味甘淡，性平，歸膀胱、肝、膽經(jīng)，功能利水消腫、利濕退黃[7]?，F(xiàn)代藥理研究表明玉米須含有多種脂肪油、揮發(fā)油以及樹脂、苦味糖苷、皂苷、生物堿、檸檬酸等，具有較強(qiáng)的抑制細(xì)菌、利尿、降血壓、降血糖、降血脂及增強(qiáng)機(jī)體免疫力等功效[8]。本研究通過建立糖尿病足小鼠模型，利用玉米須提取物對(duì)小鼠模型進(jìn)行干預(yù)，觀察小鼠的體質(zhì)量、血清中胰島素、內(nèi)皮功能的部分指標(biāo)，探討玉米須的實(shí)用性藥用價(jià)值。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

清潔級(jí)KM小鼠150只，體質(zhì)量(24.0±3.0)g，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK(黑)2013-012，實(shí)驗(yàn)前自由飲水，常規(guī)飼養(yǎng)，飼養(yǎng)溫度為20～26℃，相對(duì)濕度40%～70%。

1.2 藥物與試劑

玉米須由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院中藥房提供;鏈脲佐菌素(STZ)、檸檬酸為美國(guó)西格瑪(Sigma)公司生產(chǎn);血糖儀和血糖試紙為德國(guó)羅氏診斷公司(Roche Diagnostics)生產(chǎn);血清胰島素(FINS)由上海赫果生物有限公司提供;血清血栓素B2(TXB2)試劑盒由武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司提供;6-酮-前列腺素F-1α(6-K-PGF-1α)試劑盒由南京奧青生物技術(shù)公司提供。

1.3 儀器

細(xì)胞粉碎機(jī)(上海凈信，XM-650T)；恒溫水浴振蕩器(精達(dá)儀器，HZS-HA)；低溫冰箱(博科，BDF-86V398)；實(shí)驗(yàn)室專用天平(德國(guó)Sartorius，BSA224S)；離心機(jī)(中國(guó)Anke，TGL-20B)；酶標(biāo)儀(賽默飛世爾，Multiskan FC)。

2 方法

2.1 玉米須提取液制備

將200 g干燥玉米須粉碎，將1 500 mL蒸餾水于50 ℃水浴振蕩器提取2遍，過濾后收集濾液，離心后留上清液，在80 ℃水浴濃縮后用真空干燥器干燥，至水分蒸發(fā)，得到玉米須提取物，密封保存于-80 ℃低溫冰箱備用，實(shí)驗(yàn)時(shí)將蒸餾水溶解配制成玉米須提取物水溶液[8]。

2.2 糖尿病足模型建立

將150只清潔級(jí)小鼠給予自然照明、自由進(jìn)水食、基礎(chǔ)飼料等適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，隨機(jī)選出30只小鼠作為空白對(duì)照組，其余進(jìn)行糖尿病足造模。造模后隨機(jī)分為模型對(duì)照組,玉米須提取液高、中、低劑量組，每組30只，空白對(duì)照組給予自然照明、自由進(jìn)水食、基礎(chǔ)飼料飼養(yǎng)，其余組給予自然照明、自由進(jìn)水食、高脂高糖飼料直至實(shí)驗(yàn)結(jié)束。第12周開始，進(jìn)行糖尿病足模型造模，造模前要對(duì)小鼠進(jìn)行禁食12 h以上，但可自由飲水，用濃度為0.1 mmol/L的檸檬酸(pH 4.2)緩沖液溶解鏈脲佐菌素(STZ)，按照40 mg/(kg·d)的劑量給模型組小鼠進(jìn)行腹腔注射，每日1次，連續(xù)5 d。測(cè)量小鼠6 h空腹血糖值，大于11.1 mmol/L顯示造模成功[8]。

2.3 給藥方式

空白對(duì)照組、模型對(duì)照組不給予玉米須提取液。按照400、200、100 mg/kg的標(biāo)準(zhǔn)將玉米須提取物分別配成濃度為20、10、5 g/L的玉米須提取液，按照0.2 mL/10 g給予高劑量組、中劑量組、低劑量組灌胃。持續(xù)給藥30 d，給藥第30天后1 h，禁食12 h以上，行小鼠尾采血進(jìn)行指標(biāo)檢驗(yàn)[8]。

2.4 檢測(cè)指標(biāo)

觀察小鼠用藥前后的血糖(FBG)、血清胰島素(FINS)、體質(zhì)量變化水平，內(nèi)皮功能血清血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列腺素F-1α(6-K-PGF-1α)的指標(biāo)含量變化。

2.5 數(shù)據(jù)處理

3 結(jié)果

3.1 玉米須提取液對(duì)小鼠FBG、FINS的影響

由表1可知，各模型組小鼠空腹血糖均值高于11.1 mmol/L說(shuō)明造模成功，給藥前空白對(duì)照組與各造模組比較具有明顯差異(P<0.01)，給藥后玉米須提取液高、中、低劑量組與模型對(duì)照組相比較均具有降低FBG、提高FINS水平的作用(P<0.01)，且呈現(xiàn)給藥劑量依賴性，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，玉米須提取液高劑量組的降低FBG、提高FINS水平效果要明顯優(yōu)于低劑量組。

表1 玉米須提取液對(duì)小鼠FBG、FINS的影響

3.2 玉米須提取液對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響

由表2可知，給藥前各組與空白對(duì)照組比較體質(zhì)量無(wú)明顯差異(P>0.05)，說(shuō)明各組數(shù)據(jù)具有可比性。給藥后，除空白對(duì)照組外，各組小鼠經(jīng)治療后體質(zhì)量均減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型對(duì)照組相比，玉米須提取液高劑量組小鼠的體質(zhì)量較重，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，玉米須提取液中、低劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表2 玉米須提取液對(duì)小鼠體質(zhì)量的影響

3.3 玉米須提取液對(duì)TXB2、6-K-PGF-1α因子的影響

由表3可知，給藥前各組TXB2、6-K-PGF-1α與空白對(duì)照組比較具有明顯差異(P<0.01)。給藥后高、中、低劑量組與模型對(duì)照組相比較均具有降低TXB2的作用(P<0.01)，且呈現(xiàn)治療劑量依賴性，高劑量組要明顯優(yōu)于低劑量組降低TXB2的作用，組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。給藥后高、中、低劑量組與模型對(duì)照組相比較均具有提升6-K-PGF-1α的作用(P<0.01)，且呈現(xiàn)治療劑量依賴性，高劑量組要明顯優(yōu)于低劑量組提升6-K-PGF-1α的作用，組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

表3 玉米須提取液對(duì)TXB2、6-K-PGF-1α因子的影響

4 討論

糖尿病足是指因下肢血管管壁硬化，進(jìn)而形成周圍血管閉塞，或皮膚微血管異常病變，或因細(xì)菌感染而導(dǎo)致的四肢末梢發(fā)涼、肢痛、破潰乃至壞疽病變，常因缺血、神經(jīng)病變、感染3種因素互相發(fā)生作用[9]。糖尿病患者可因長(zhǎng)期的慢性血糖異常升高而導(dǎo)致周圍血管及神經(jīng)病變，并出現(xiàn)一系列并發(fā)癥，比如指(趾)端并發(fā)癥，由于周圍神經(jīng)功能失調(diào)和微小血管功能障礙，患者可出現(xiàn)肢體潰瘍、足部感染、神經(jīng)性關(guān)節(jié)炎的等諸多癥狀[10]。中醫(yī)理論認(rèn)為糖尿病足核心病因是陽(yáng)氣虛衰導(dǎo)致寒凝，氣不帥血，陽(yáng)衰不溫煦，寒凝致血瘀不行，久則肢端壞死而成疽，屬中醫(yī)“痿痹”“脫疽”之范疇[11]。本病病機(jī)因消渴持久，氣陰兩傷，經(jīng)脈閉阻，末肢端血運(yùn)失暢，或伴有熱毒瘀滯、夾濕熱下注而成濕毒熱盛之型。

在正常的生理狀態(tài)下，TXB2主要功能是保持正常的血管緊張度、血流的通暢性[12]，6-K-PGF-1α主要功能是防止血管的痙攣、閉塞、血栓的形成，兩者處于一種相對(duì)動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)[13]。TXB2由血栓素A2(簡(jiǎn)稱TXA2)代謝生成、而6-K-PGF-1α由前列環(huán)素(簡(jiǎn)稱PGI2)代謝而來(lái)，血小板和平滑肌細(xì)胞膜上的特異性受體與TXA2相結(jié)合，促血管攣縮和增強(qiáng)血小板聚集的特性得到強(qiáng)烈的發(fā)揮，在機(jī)體病理情況下可導(dǎo)致廣泛微小血栓形成[14]，而PGI2是由內(nèi)皮細(xì)胞釋放的重要抑制血管攣縮物質(zhì)，具有廣泛的擴(kuò)血管、抑制血小板凝聚、穩(wěn)定血管內(nèi)膜細(xì)胞的作用[15]。

綜上所述，玉米須提取液可不同程度地降低FBG、TXB2以及提高FINS、6-K-PGF-1α水平，同時(shí)能夠改善糖尿病足小鼠的體質(zhì)量狀態(tài)，改善小鼠的胰島素和血管內(nèi)皮狀態(tài)，尤其是高劑量組的各項(xiàng)指標(biāo)改善最為明顯。本研究結(jié)果提示，在糖尿病足的病理過程中，玉米須提取液可以改善體質(zhì)量和胰島素的狀態(tài)、改善血管內(nèi)皮的損傷狀態(tài)，有利于糖尿病足的康復(fù)。通過此項(xiàng)研究再一次證實(shí)了玉米須這種普通的藥物還有更多的藥用價(jià)值等待開發(fā)，以期通過不斷的研究能夠降低糖尿病足的治療成本，為臨床實(shí)際工作提供依據(jù)，造福更多的國(guó)民。