朱羽莊,梅光明,楊盈悅,顧捷,孟春英

(1.浙江海洋大學(xué) 食品與藥學(xué)學(xué)院,舟山 316022;2.浙江省海洋水產(chǎn)研究所水產(chǎn)品加工與質(zhì)量安全研究室,舟山 316021;3.浙江省海水增養(yǎng)殖重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,舟山 316021)

硒是生物體必需的一種微量元素,它具有增強(qiáng)免疫力、抗癌、抗氧化和代謝重金屬等作用[1]。人體缺硒引發(fā)的疾病主要包括營(yíng)養(yǎng)不良、大骨節(jié)病、克山病和心機(jī)系統(tǒng)疾病等[2]。硒元素在地球上分別以無(wú)機(jī)硒和有機(jī)硒存在,無(wú)機(jī)硒包括硒單質(zhì)、亞硒酸鹽(Se4＋)和硒酸鹽(Se6＋);有機(jī)硒為硒元素的結(jié)合態(tài),主要有甲基硒代半胱氨酸(Me-Se-Cys)、硒代蛋氨酸(Se-Met)和硒代乙硫氨酸(Se-Et)等。硒元素的功能與硒含量、硒賦存形態(tài)均相關(guān)[3],如無(wú)機(jī)硒不易被人體消化吸收、攝入過(guò)量會(huì)對(duì)人體造成毒性[4];生物體必需的硒元素主要以有機(jī)形態(tài)存在,研究發(fā)現(xiàn)硒代蛋氨酸、甲基硒代半胱氨酸等有機(jī)硒具有維持中樞神經(jīng)、抗炎癥、抗氧化和抗腫瘤的功能[5]。由于富集作用,作為排放終端的海水中硒含量可達(dá)陸源土壤中的2倍多[6],其通過(guò)海洋生物的體內(nèi)吸收和蓄積轉(zhuǎn)化進(jìn)一步形成了結(jié)合態(tài)的有機(jī)硒[7]。因此,海產(chǎn)品消費(fèi)可以作為一種補(bǔ)硒食品的重要來(lái)源。掌握各種常見(jiàn)海產(chǎn)品中硒含量及形態(tài)分布特征能夠更科學(xué)地指導(dǎo)居民進(jìn)行補(bǔ)硒,為消費(fèi)人群提供合理的膳食建議。

目前分析硒形態(tài)的方法主要有高效液相色譜-原子熒光光譜法[8]、柱前衍生-反相高效液相色譜法[9]、高效液相色譜-電感耦合等離子體質(zhì)譜法(HPLC-ICP-MS)等[10]。其 中,HPLC-ICP-MS 由于結(jié)合了液相色譜法的化合物高效分離特性和電感耦合等離子體質(zhì)譜法(ICP-MS)在元素分析上的高準(zhǔn)確度優(yōu)勢(shì),目前已成為測(cè)定硒形態(tài)的主要方法。我國(guó)對(duì)于食品中硒元素測(cè)定的相關(guān)研究和方法有很多,但主要集中在乳品[11]、茶葉[12]、大豆[13]、谷物[14]等方面,關(guān)于海產(chǎn)品中的硒形態(tài)研究報(bào)告較少,已有報(bào)道多采用原子熒光光譜法檢測(cè),缺少HPLC-ICP-MS在海產(chǎn)品中硒測(cè)定的應(yīng)用。如文獻(xiàn)[15]采用1.5 mol·L－1氫氧化鉀作為提取液,用離子色譜-氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測(cè)定了海產(chǎn)品中亞硒酸鹽、硒酸鹽、硒代蛋氨酸和硒代乙硫氨酸等4種硒形態(tài)的含量,檢出限為0.30～1.72μg·L－1;文獻(xiàn)[16]以50%(體積分?jǐn)?shù))鹽酸溶液作為提取液,采用氫化物發(fā)生-原子熒光光譜法測(cè)定海產(chǎn)品中總有機(jī)硒和無(wú)機(jī)硒的含量。但上述方法存在檢出限高和可檢測(cè)有機(jī)硒種類(lèi)較少的缺點(diǎn)。本工作采用定性定量效果更佳的HPLC-ICP-MS測(cè)定海產(chǎn)品中亞硒酸鹽、硒酸鹽、硒代蛋氨酸、硒代乙硫氨酸和甲基硒代半胱氨酸等5種硒形態(tài)的含量,為今后研究海產(chǎn)品中硒形態(tài)分布特征提供定性與定量依據(jù),以便更科學(xué)地評(píng)價(jià)各類(lèi)海產(chǎn)品富硒營(yíng)養(yǎng)價(jià)值,為居民通過(guò)食用海產(chǎn)品進(jìn)行補(bǔ)硒提供科學(xué)膳食指導(dǎo)建議。

1 試驗(yàn)部分

1.1 儀器與試劑

Agilent 7900型電感耦合等離子體質(zhì)譜儀;Agilent 1260型高效液相色譜儀;VORTEX-5型旋渦混合器;GVS-2L 型超聲波清洗機(jī);JXN-30 型高速冷凍離心機(jī);Scientz-10N 型冷凍干燥機(jī);Millipore Milli-Q Advantage A10型超純水系統(tǒng);HT211B型全溫?fù)u床。

單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:取適量的亞硒酸鹽、硒酸鹽、硒代蛋氨酸、硒代乙硫氨酸和甲基硒代半胱氨酸的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì),用水分別溶解并定容至10 mL 容量瓶中,配制成質(zhì)量濃度依次為100,100,150,170,7.648 mg·L－1(均以硒計(jì))的單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,于4 ℃冷藏避光貯存。

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:1.0 mg·L－1(以硒計(jì)),取適量的亞硒酸鹽、硒酸鹽、硒代蛋氨酸、硒代乙硫氨酸和甲基硒代半胱氨酸的單標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,用水定容至10 mL容量瓶中,配制成質(zhì)量濃度為1.0 mg·L－1(均以硒計(jì))的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,于4 ℃冷藏避光貯存。

調(diào)諧液:內(nèi)含1.0μg·L－1鈰、鈷、鋰、鉈、釔的混合溶液。

亞硒酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 000 g·L－1);硒酸鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液(1 000 g·L－1);甲基硒代半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)品純度大于98%;硒代蛋氨酸標(biāo)準(zhǔn)品和硒代乙硫氨酸標(biāo)準(zhǔn)品純度均大于99%;大蝦粉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(GBW 10050);木瓜蛋白酶,800 U·mg－1;一水合檸檬酸和氨水均為優(yōu)級(jí)純;硝酸為分析純;試驗(yàn)用水為超純水。

小黃魚(yú)、帶魚(yú)、花蛤和口蝦蛄均購(gòu)于某菜場(chǎng),按照GB/T 30891－2014《水產(chǎn)品抽樣規(guī)范》[17]處理后,取可食組織于－45 ℃冷凍干燥并研磨粉碎后作為待測(cè)樣品。

1.2 儀器工作條件

1.2.1 微波消解條件

設(shè)定微波消解程序如下:0～5 min時(shí),升溫至140 ℃,加熱功率1 000 W;5～15 min時(shí),升溫至200 ℃,加熱功率1000W,保持20min;35～50 min時(shí),不加熱,降溫至室溫。

1.2.2 色譜條件

Agilent ZORBAX SB-AQ 色譜柱(250 mm×4.6 mm,5μm);進(jìn)樣量20μL;流動(dòng)相10 mmol·L－1的檸檬酸溶液(用氨水將酸度調(diào)至pH 4.75),等度洗脫;流量0.6 mL·min－1。

1.2.3 ICP-MS條件

射頻功率1 550 W;射頻電壓1.90 V;蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速0.1 r·min－1(用于測(cè)定總硒),0.5 r·min－1(用于測(cè)定各硒形態(tài));采樣深度10.00 mm;補(bǔ)償氣流量0.40 L·min－1,載氣流量0.80 L·min－1,氦氣流量0或5.0 mL·min－1;霧化室溫度－5 ℃;重復(fù)次數(shù)6次;積分時(shí)間0.1 s(用于測(cè)定總硒),0.3 s(用于測(cè)定各硒形態(tài));監(jiān)測(cè)離子數(shù)78Se。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 總硒測(cè)定的前處理

稱取0.2 g(精確至0.000 1 g)制備好的凍干海產(chǎn)品置于微波消解罐中,加入5.0 mL 硝酸和2.0 mL 30%(質(zhì)量分?jǐn)?shù))過(guò)氧化氫溶液,振蕩后加蓋放置過(guò)夜,次日按照1.2.1節(jié)設(shè)定程序進(jìn)行微波消解。消解完畢后,在150 ℃電熱板上加熱趕酸至無(wú)黃煙產(chǎn)生,冷卻至室溫后用水定容至50 mL,得到待測(cè)液。采用大蝦粉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW 10050 作為質(zhì)控樣對(duì)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制,同時(shí)進(jìn)行試劑空白試驗(yàn)。

1.3.2 總硒含量的測(cè)定

使用調(diào)諧液對(duì)ICP-MS的各項(xiàng)參數(shù)進(jìn)行調(diào)節(jié),使各項(xiàng)儀器性能達(dá)到最佳狀態(tài)。總硒含量測(cè)定時(shí)采用在線添加500μg·L－189Y 作為內(nèi)標(biāo)溶液進(jìn)行儀器響應(yīng)信號(hào)校正。將1.3.1節(jié)前處理得到的待測(cè)液按照1.2.3節(jié)ICP-MS條件進(jìn)行測(cè)定。

1.3.3 硒形態(tài)測(cè)定的前處理

稱取0.2 g(精確至0.000 1 g)制備好的凍干海產(chǎn)品置于50 mL離心管中,加入30 mg木瓜蛋白酶(800 U·mg－1)和20 mL水(預(yù)先用氨水將酸度調(diào)至pH 8.0),以轉(zhuǎn)速3 000 r·min－1渦旋3 min后置于恒溫?fù)u床中,在50 ℃、180 r·min－1的條件下振搖12 h,再以轉(zhuǎn)速3 000 r·min－1渦旋3 min,在4 ℃、8 000 r·min－1的條件下離心10 min。將上清液用0.22μm 濾膜過(guò)濾,得到待測(cè)液。

1.3.4 硒形態(tài)含量的測(cè)定

將1.3.3節(jié)得到的待測(cè)液按照1.2.2節(jié)色譜條件分離后,采用時(shí)間分辨分析(TRA)采集模式,按照1.2.3節(jié)ICP-MS條件進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

2.1 流動(dòng)相及色譜柱的選擇

液相色譜中流動(dòng)相的組分和酸度對(duì)化合物形態(tài)分離起著重要的作用,當(dāng)流動(dòng)相的酸度發(fā)生變化時(shí),目標(biāo)物的溶液離子狀態(tài)也會(huì)隨之發(fā)生變化[18],最終會(huì)影響色譜分離效果。硒形態(tài)的洗脫體系通常分為檸檬酸體系(5～20mmol·L－1,pH4.0～6.0)[8,16,19]、碳酸氫鈉體系(20 mmol·L－1,pH 12.0～13.0)[15]和磷酸氫二銨體系(30～40 mmol·L－1,pH 5.0～6.0)[20-22]。文獻(xiàn)[11,15]在水相中添加乙腈的梯度洗脫方式以提高分離效果和增大峰響應(yīng)強(qiáng)度,但考慮到有機(jī)相的添加會(huì)造成錐體結(jié)碳和錐孔損壞,ICP-MS的維護(hù)成本增加并造成計(jì)數(shù)誤差,只選用緩沖鹽溶液作為前端色譜分離的洗脫流動(dòng)相,將對(duì)后端ICP-MS測(cè)定更加具有吸引力。通過(guò)優(yōu)化,試驗(yàn)選擇10 mmol·L－1檸檬酸溶液(氨水將酸度調(diào)至pH 4.75)作為流動(dòng)相。

硒形態(tài)分析常用的色譜分離柱為Hamilton PRP-X100柱(250 mm×4.1 mm,10μm)[19,23-24]。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)在10 mmol·L－1檸檬酸溶液(氨水將酸度調(diào)至pH 4.75)、流量0.6 mL·min－1的相同洗脫條件下,與Hamilton PRP-X100柱相比,采用Agilent ZORBAX SB-AQ(250 mm×4.6 mm,5μm)作為分離柱時(shí),5 種不同硒形態(tài)色譜分離效果更好。采用Hamilton PRP-X100柱時(shí),分離時(shí)間更長(zhǎng),全部目標(biāo)物需要16.5 min完成分離,硒代乙硫氨酸峰形不夠尖銳,硒代蛋氨酸峰響應(yīng)強(qiáng)度很低,如圖1(a)所示。采用Agilent ZORBAX SB-AQ 柱(250 mm×4.6 mm,5μm)時(shí),5 種硒形態(tài)均能在11 min內(nèi)有效分離,出峰順序依次為硒酸鹽、亞硒酸鹽、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸、硒代乙硫氨酸,出峰時(shí)間快,信號(hào)響應(yīng)強(qiáng)度以及峰形均良好,如圖1(b)所示。

圖1 5種硒形態(tài)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜圖Fig.1 Chromatograms of the mixed standard solution of selenium in 5 species

綜上所述,試驗(yàn)選擇10 mmol·L－1的檸檬酸溶液(氨水將酸度調(diào)至pH 4.75)作為流動(dòng)相、Agilent ZORBAX SB-AQ 柱(250 mm×4.6 mm,5μm)作為分離柱和洗脫流量為0.6 mL·min－1的色譜分離條件,能取得較好的色譜分離效果。

2.2 前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.2.1 前處理酶

文獻(xiàn)[16,22]報(bào)道生物樣本中的硒主要以硒代蛋氨酸等有機(jī)硒形態(tài)存在,且與多肽、蛋白質(zhì)等大分子結(jié)合在一起,因此硒形態(tài)測(cè)定前處理一般采用酶解法使有機(jī)硒游離。目前常用的酶有XIV 蛋白酶[19]、胃蛋白酶[25]和木瓜蛋白酶[26]等。

試驗(yàn)以質(zhì)控樣大蝦粉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW 10050(總硒認(rèn)定值為5.10 mg·kg－1)作為測(cè)試樣品,在各自的酶活性最適溫度和酸度范圍內(nèi),比較了胃蛋白酶、胰蛋白酶、堿性蛋白酶、XIV 蛋白酶、木瓜蛋白酶等5種常見(jiàn)蛋白酶對(duì)硒形態(tài)的提取效果。測(cè)定結(jié)果也表明大蝦粉中的硒主要以硒代蛋氨酸的形態(tài)存在,如圖2所示。因此,后續(xù)試驗(yàn)以大蝦粉中硒代蛋氨酸(以硒計(jì))的提取率作為前處理?xiàng)l件優(yōu)化指標(biāo),篩選提取液的酸度、提取溫度和時(shí)間、蛋白酶用量等參數(shù),其中硒代蛋氨酸提取率以硒代蛋氨酸含量(以硒計(jì))除以總硒含量來(lái)計(jì)算。

圖2 大蝦粉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW 10050中硒形態(tài)的色譜圖Fig.2 Chromatogram of selenium specie in reference material GBW 10050 of prawn powder

大蝦粉標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)GBW 10050總硒測(cè)定的平均值為(4.97±0.14)mg·kg－1,與認(rèn)定值基本一致。不同蛋白酶的提取效果見(jiàn)表1。

表1 前處理酶對(duì)硒代蛋氨酸提取率的影響Tab.1 Effect of pretreatment enzyme on extraction ratio of Se-Met

由表1可知,在蛋白酶用量相同的情況下,硒代蛋氨酸提取率按從大到小順序排列為XIV 蛋白酶、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、堿性蛋白酶,而胰蛋白酶對(duì)硒形態(tài)沒(méi)有提取效果。由于XIV 蛋白酶價(jià)格遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于木瓜蛋白酶,而兩者對(duì)硒代蛋氨酸提取率相差不大,因此試驗(yàn)選用木瓜蛋白酶進(jìn)行樣品前處理。

2.2.2 提取液的酸度

所選用的木瓜蛋白酶在pH 6.0～8.0條件下具有最佳酶活力。在樣品中加入蛋白酶和用氨水調(diào)節(jié)pH 分別為5.0,6.0,7.0,8.0,9.0,10.0的水,探究不同酸度的提取液對(duì)硒代蛋氨酸提取率的影響,如圖3所示。

圖3 提取液酸度對(duì)Se-Met提取率的影響Fig.3 Effect of acidity of extract on extraction ratio of Se-Met

由圖3可知,提取液的酸度在pH 6.0～9.0內(nèi)時(shí),硒代蛋氨酸的提取率較高,在pH 8.0時(shí)硒代蛋氨酸的提取率最高。因此,試驗(yàn)選用pH 8.0的木瓜蛋白酶解液作為提取液。

2.2.3 提取溫度

木瓜蛋白酶的酶活力有效溫度為40～60℃,因此在30,35,40,45,50,55,60℃等7個(gè)溫度下,考察了提取溫度對(duì)硒代蛋氨酸提取率的影響,結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 提取溫度對(duì)硒代蛋氨酸提取率的影響Tab.2 Effect of extraction temperature on extraction ratio of Se-Met

由表2可知,在酶活力有效溫度范圍內(nèi),40～50 ℃時(shí)硒代蛋氨酸的提取率呈現(xiàn)隨溫度上升不斷增加的趨勢(shì),但50 ℃之后,硒代蛋氨酸的提取率逐漸減低,60 ℃時(shí)硒代蛋氨酸的提取率幾乎與30～35 ℃的提取率一致。因此,試驗(yàn)選取50 ℃作為最佳的提取溫度。

2.2.4 提取時(shí)間

試驗(yàn)考察了不同提取時(shí)間(2,4,6,8,10,12,14 h)對(duì)硒代蛋氨酸提取率的影響,結(jié)果如圖4所示。

圖4 提取時(shí)間對(duì)硒代蛋氨酸提取率的影響Fig.4 Effect of extraction time on extraction ratio of Se-Met

結(jié)果表明,隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng),硒代蛋氨酸提取率不斷增加,9 h后的提取率增加幅度加劇,但在10 h以后提取率增幅趨于平緩,14 h以后提取率開(kāi)始有所下降,可能是由于提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)導(dǎo)致硒形態(tài)發(fā)生轉(zhuǎn)變。因此,試驗(yàn)選用12 h為提取時(shí)間。

2.2.5 蛋白酶用量

試驗(yàn)考察了不同的蛋白酶用量(10,20,30,40,50 mg)對(duì)硒代蛋氨酸提取率的影響,結(jié)果見(jiàn)圖5。

由圖5可知:在10～30 mg的蛋白酶用量下,硒代蛋氨酸的提取率隨著蛋白酶用量的增加呈現(xiàn)不斷上升的趨勢(shì);而繼續(xù)加大蛋白酶用量(40～50 mg),提取率反而有所下降。大蝦粉取樣量在0.2 g時(shí),添加30 mg的木瓜蛋白酶酶解后,觀察到樣品得到充分酶解,形成透明澄清溶液。因此,試驗(yàn)選用30 mg作為木瓜蛋白酶的最佳用量。

圖5 蛋白酶用量對(duì)硒代蛋氨酸提取率的影響Fig.5 Effect of the amount of protease on extraction ratio of Se-Met

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線、檢出限及測(cè)定下限

取適量的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液,用水逐級(jí)稀釋,配制成質(zhì)量濃度分別為0,5,10,20,50,100,200,300,400,500μg·L－1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液系列。按照儀器工作條件進(jìn)行測(cè)定,以硒形態(tài)的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo),其對(duì)應(yīng)的78Se質(zhì)譜信號(hào)值(CPS計(jì)數(shù))為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明,硒酸鹽、亞硒酸鹽、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代乙硫氨酸在500μg·L－1內(nèi)均呈較好的線性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)均大于0.999 7,其線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)見(jiàn)表3。

以3倍信噪比(S/N)的響應(yīng)強(qiáng)度下的目標(biāo)物質(zhì)量濃度作為方法的檢出限(3S/N),以10倍信噪比且回收率大于70.0%時(shí)的目標(biāo)物質(zhì)量濃度作為方法的測(cè)定下限(10S/N),結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 線性參數(shù)、檢出限和測(cè)定下限Tab.3 Linearity parameters,detection limits and lower limits of determination

2.4 精密度和回收試驗(yàn)

以小黃魚(yú)為本底樣品進(jìn)行3個(gè)不同濃度水平的加標(biāo)回收試驗(yàn),每個(gè)濃度水平平行測(cè)定6次,連續(xù)測(cè)定6 d,計(jì)算回收率和測(cè)定值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD),結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 精密度和回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)Tab.4 Results of tests for precision and recovery(n=6)

結(jié)果表明,在1,5,20 mg·kg－1的添加濃度水平下,硒酸鹽、亞硒酸鹽、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代乙硫氨酸的回收率為81.3%～118%,日內(nèi)RSD 和日間RSD 均小于9.0%,表明該方法的準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好。

2.5 樣品分析

采用優(yōu)化后的試驗(yàn)方法對(duì)市售海產(chǎn)品進(jìn)行測(cè)定,結(jié)果表明,小黃魚(yú)中硒代蛋氨酸(以下均以硒計(jì))的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(0.47±0.17)mg·kg－1;帶魚(yú)中硒代蛋氨酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(0.56±0.19)mg·kg－1;口蝦蛄中硒代蛋氨酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(0.52±0.16)mg·kg－1,甲基硒代半胱氨酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(0.12±0.08)mg·kg－1;花蛤中硒代蛋氨酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(0.35±0.11)mg·kg－1,甲基硒代半胱氨酸的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為(0.04±0.01)mg·kg－1,實(shí)際樣品測(cè)定譜圖如圖6所示。試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明,小黃魚(yú)和帶魚(yú)中硒代蛋氨酸的測(cè)定結(jié)果比文獻(xiàn)[27]研究中的大西洋鮭魚(yú)和大西洋鱈魚(yú)的測(cè)定值都要高,說(shuō)明在我國(guó)食用小黃魚(yú)和帶魚(yú)能夠?yàn)榫用裱a(bǔ)充較高水平的硒代蛋氨酸,口蝦蛄也是補(bǔ)充硒代蛋氨酸的一種重要來(lái)源。

圖6 海產(chǎn)品硒形態(tài)的色譜圖Fig.6 Chromatograms of selenium species in seafood products

本工作采用HPLC-ICP-MS測(cè)定海產(chǎn)品中硒酸鹽、亞硒酸鹽、甲基硒代半胱氨酸、硒代蛋氨酸和硒代乙硫氨酸等5種硒形態(tài)含量。樣品采用木瓜蛋白酶酶解處理后經(jīng)ZORBAX SB-AQ 色譜柱快速分離,ICP-MS定性與定量檢測(cè)。該方法前處理簡(jiǎn)單快捷、檢測(cè)成本低、準(zhǔn)確度高、重現(xiàn)性好,可較好地用于海產(chǎn)品中硒形態(tài)的測(cè)定。