馮月超, 王建鳳, 侯 帆, 丁 奇, 楚弘宇, 劉 艷

(北京市科學(xué)技術(shù)研究院分析測(cè)試研究所(北京市理化分析測(cè)試中心), 北京市食品安全分析測(cè)試工程技術(shù)研究中心, 北京 100089)

食源性興奮劑是指來(lái)源于食品的興奮劑,包括一般性食品及保健食品從生產(chǎn)到加工過(guò)程中天然存在或故意添加而殘留的興奮劑成分[1]。世界反興奮劑機(jī)構(gòu)(WADA)發(fā)布的《2021年禁用清單》[2]中明確規(guī)定β2-激動(dòng)劑、蛋白同化制劑、糖皮質(zhì)激素、利尿劑等興奮劑為運(yùn)動(dòng)員禁、限用物質(zhì)。由于食物種類非常多,而且從農(nóng)田到餐桌供應(yīng)鏈條長(zhǎng),食源性興奮劑的防范難度較大,運(yùn)動(dòng)員因食物導(dǎo)致的興奮劑陽(yáng)性案例在體育賽事中屢見(jiàn)不鮮[3,4]。此外,一些合成類孕激素已經(jīng)被我國(guó)明令禁止,如《食品動(dòng)物中禁止使用的藥品及其他化合物清單(農(nóng)業(yè)農(nóng)村部公告第250號(hào))》(2019年12月)中規(guī)定食用動(dòng)物中禁止使用醋酸美侖孕酮等激素。為了保障大型體育賽事的成功舉辦,防止違禁物質(zhì)污染食物,評(píng)估食品中食源性興奮劑等激素的風(fēng)險(xiǎn),建立高通量、快速、準(zhǔn)確的食源性興奮劑等激素的檢測(cè)方法非常必要。

食源性興奮劑等激素物質(zhì)的檢測(cè)方法主要有色譜-質(zhì)譜法、酶聯(lián)免疫法、生物芯片等技術(shù)[5,6],色譜-質(zhì)譜法因準(zhǔn)確度高、靈敏度高、檢測(cè)通量高等優(yōu)勢(shì)是食源性興奮劑等激素的主要檢測(cè)手段,但依然面臨較大挑戰(zhàn),主要有以下2點(diǎn):(1)同類物質(zhì)極性差異太大,采用同一種檢測(cè)方法難以獲得較好的回收率,比如苯丙酸諾龍的極性較弱,導(dǎo)致樣品處理中因?yàn)槊撝^(guò)程而有較大損失[7,8];(2)對(duì)食源性興奮劑檢出限的要求高,通常為痕量甚至是超痕量,且食品基質(zhì)復(fù)雜,基質(zhì)效應(yīng)顯著[9],樣品前處理步驟繁瑣。目前傳統(tǒng)的固相萃取[10-12]和溶劑萃取[13]等前處理過(guò)程復(fù)雜,檢測(cè)周期較長(zhǎng),近年發(fā)展的濾過(guò)型凈化柱法則存在成本高的問(wèn)題[14,15]。QuEChERS方法已應(yīng)用在食源性興奮劑和孕激素的檢測(cè)中[16],但多數(shù)研究?jī)H針對(duì)單一種類的物質(zhì)[17-23],研究肉中興奮劑高通量多殘留檢測(cè)方法的較少[24-28]。本研究以運(yùn)動(dòng)員禁、限用興奮劑和孕激素為研究對(duì)象,采用QuEChERS前處理方法,建立了一種同時(shí)測(cè)定畜禽肉中44種食源性興奮劑和6種孕激素的超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜(UPLC-MS/MS)檢測(cè)方法,該方法通用性較強(qiáng),實(shí)現(xiàn)了高通量高效率,可為國(guó)內(nèi)外體育賽事中肉類興奮劑檢測(cè)提供技術(shù)支持。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、材料和試劑

ACQUITY UPLC超高效液相色譜儀、Xevo TQ-S串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀,美國(guó)WATERS;高速冷凍離心機(jī):GR 22 GIII,日本HITACHI;氮吹儀:N-EVAPTM112,配備OA-SYSTM水浴加熱裝置,美國(guó)Organomation;多管渦旋混勻儀:MS 200,杭州瑞誠(chéng)儀器有限公司;渦旋混合器:Vortex-genie 2,美國(guó)Scientific Industries;數(shù)控超聲波清洗器:KQ-500 DE,昆山市超聲儀器有限公司。

甲醇、乙腈(色譜純)均購(gòu)于美國(guó)Fisher Scientific有限公司;無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉、中性氧化鋁(100～200目)購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)試劑公司;N-丙基乙二胺鍵合固相吸附材料(PSA, 40～60 μm)、十八烷基鍵合硅膠吸附材料(C18, 40～60 μm)、氨基吸附劑(NH2, 40～60 μm)均購(gòu)于博納艾杰爾有限公司;實(shí)驗(yàn)室用水由Milli-Q超純水凈化處理系統(tǒng)制備。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

50種被測(cè)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)(純度大于95%)和11種內(nèi)標(biāo)(100 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液)購(gòu)于美國(guó)Sigma-Aldrich、德國(guó)Dr. Ehrenstorfer等公司。被測(cè)物按照物質(zhì)的分類用甲醇配制成1～10 mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,內(nèi)標(biāo)用甲醇配制成質(zhì)量濃度均為100 μg/L的混合內(nèi)標(biāo)中間液。置于-20 ℃冷凍保存。

1.3 樣品處理

1.3.1提取

準(zhǔn)確稱取粉碎均質(zhì)后的肉樣品5.0 g于50 mL螺蓋離心管中,加入40 μL混合內(nèi)標(biāo)中間液,再加入5 mL超純水,渦旋10 s后,準(zhǔn)確加入20 mL含0.5%乙酸的乙腈溶液,振蕩提取15 min,加入1.0 g氯化鈉和4.0 g無(wú)水硫酸鎂,快速混勻,繼續(xù)振蕩10 min, 8 000 r/min離心5 min。

1.3.2凈化

移取上清液10 mL于另一事先裝入凈化劑(PSA 165 mg+C18165 mg+中性氧化鋁165 mg+無(wú)水硫酸鎂900 mg)的螺蓋離心管中,振蕩混勻10 min, 8 000 r/min離心5 min。準(zhǔn)確移取上清液5 mL,置于氮吹儀上45 ℃氮?dú)獯蹈?加入1.0 mL甲醇/水(含0.1%甲酸和5 mmol/L乙酸銨)(1/9, v/v),渦旋復(fù)溶,過(guò)0.22 μm微孔濾膜后,UPLC-MS/MS待測(cè)。

1.3.3基質(zhì)空白提取液的制備

取不含被測(cè)物的雞肉樣品,不加內(nèi)標(biāo)物,按照1.3.1節(jié)和1.3.2節(jié)的操作處理,得到基質(zhì)空白提取液,用于配制系列基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 儀器條件

1.4.1液相色譜

色譜柱:Waters Acquity BEH C18反相液相色譜柱(100 mm×2.1 mm, 1.7 μm);柱溫:30 ℃;進(jìn)樣量:5 μL。流動(dòng)相:A為甲醇,B為含0.1%甲酸和5 mmol/L乙酸銨的水溶液,流速為0.3 mL/min,梯度洗脫程序:0～0.5 min, 5%A; 0.5～1.0 min, 5%A～10%A; 1.0～6.0 min, 10%A～70%A; 6.0～8.0 min, 70%A～80%A; 8.0～9.0 min, 80%A～100%A; 9.0～10.0 min, 100%A; 10.1～12.0 min, 5%A。

1.4.2質(zhì)譜

電噴霧正離子掃描,多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式,毛細(xì)管電壓:0.5 kV;錐孔電壓:30 V;脫溶劑氣流速:650 L/h;脫溶劑氣溫度:450 ℃;錐孔氣流速:150 L/h。其他質(zhì)譜分析參數(shù)見(jiàn)表1。

2 結(jié)果與討論

2.1 UPLC-MS/MS條件選擇

2.1.1質(zhì)譜條件的優(yōu)化

分別將100 μg/L單一標(biāo)準(zhǔn)溶液注入離子源,進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜全掃描,在最佳碰撞電壓下確認(rèn)目標(biāo)化合物的母離子m/z值,然后進(jìn)行二級(jí)質(zhì)譜優(yōu)化,通過(guò)優(yōu)化碰撞能量,對(duì)碎片離子進(jìn)行全掃描,選取響應(yīng)最強(qiáng)與次強(qiáng)的碎片離子作為定量和定性離子,經(jīng)優(yōu)化后得到的質(zhì)譜條件參數(shù)見(jiàn)表1。

表 1 50種目標(biāo)分析物及11種內(nèi)標(biāo)物的保留時(shí)間及主要質(zhì)譜參數(shù)

表 1 (續(xù))

實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)所有被測(cè)物均在ESI+下具有較強(qiáng)的信號(hào)值,大部分被測(cè)物可獲得較高豐度的[M+H]+峰。螺內(nèi)酯的相對(duì)分子質(zhì)量為416.58,但在ESI+或ESI-模式下都找不到其母離子信息,在m/z341.5處出現(xiàn)了脫去乙?；鶐€基的[M-C2H3OS]+峰,該峰信號(hào)穩(wěn)定,可作為螺內(nèi)酯的一級(jí)質(zhì)譜信號(hào),其二級(jí)特征離子信號(hào)重現(xiàn)性好,可滿足監(jiān)測(cè)要求。

2.1.2色譜條件的優(yōu)化

先后采用乙腈、甲醇、水、0.1%甲酸水溶液、含0.1%甲酸和5 mmol/L乙酸銨的水作為流動(dòng)相,觀察標(biāo)準(zhǔn)溶液各個(gè)色譜峰的峰形、分離度等。結(jié)果發(fā)現(xiàn),甲酸的加入能夠明顯提高被測(cè)物的離子化效率,提高分離度,再加入乙酸銨能夠使大部分被測(cè)物的峰信號(hào)明顯增強(qiáng)。用乙腈時(shí)較早出峰的β2-激動(dòng)劑類在濃度高時(shí)峰有分叉現(xiàn)象,甲醇-水(含0.1%甲酸和5 mmol/L乙酸銨)為流動(dòng)相時(shí)所有物質(zhì)的峰形較好。

試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)5 cm長(zhǎng)的色譜柱無(wú)法將同分異構(gòu)體美睪酮和美雄諾龍的色譜峰分離,最終選擇10 cm長(zhǎng)的色譜柱。在本實(shí)驗(yàn)條件下,被測(cè)物中兩對(duì)具有相同母離子和子離子的同分異構(gòu)體(美睪酮和美雄諾龍)和同系物(螺內(nèi)酯和坎利酮)的色譜峰均能夠較好的分離,見(jiàn)圖1。

圖 1 同分異構(gòu)體(美睪酮和美雄諾龍)和同系物(螺內(nèi)酯和坎利酮)的色譜圖Fig. 1 Chromatograms of pairs of isomers (mesterolone and mestanolone) and homologs (spironolactone and canrenone)

50種目標(biāo)化合物及11種內(nèi)標(biāo)的MRM色譜圖見(jiàn)附圖(詳見(jiàn)https://www.chrom-China.com)。

2.2 前處理方法的優(yōu)化

2.2.1提取溶劑的選擇

考察了乙腈中分別加入0、5%、10%、20%、50%的甲醇(均含有0.5%乙酸)6種提取劑的提取效果。隨著甲醇在乙腈體系中的比例增大,其蛋白沉淀效果越來(lái)越差,在樣品前處理-氮吹濃縮過(guò)程中可以看到有明顯的白色脂類析出,復(fù)溶后過(guò)濾膜壓力大,且溶液混濁,最終選擇乙腈作為提取溶劑。

2.2.2提取溶劑酸度的考察

基于絕大多數(shù)目標(biāo)物均帶有酸性基團(tuán),采用酸溶液提取更有利于化合物的溶出,分別考察了乙腈中含0.1%、0.5%、1%、2%乙酸的提取效果,結(jié)果見(jiàn)圖2,β2-激動(dòng)劑、β-阻斷劑類、蛋白同化激素在酸度超過(guò)0.5%時(shí),有基質(zhì)干擾,回收率有降低的趨勢(shì);糖皮質(zhì)激素、孕酮和利尿劑對(duì)提取液中乙酸的比例不敏感。當(dāng)采用含0.5%乙酸的乙腈溶液作為取溶劑時(shí),所有被測(cè)物的回收率均大于50%,確定為最優(yōu)提取劑。

圖 2 采用含不同量乙酸的乙腈做提取液時(shí)回收率大于50%的化合物個(gè)數(shù)占該類化合物總個(gè)數(shù)的百分比(基質(zhì)為雞肉) Fig. 2 Percentages of compounds with recoveries greater than 50%, using an extraction solution of acetonitrile containing different proportions of acetic acid in the chicken matrix

2.2.3樣品凈化劑的選擇

對(duì)QuEChERS方法中常用的4種吸附劑(PSA、C18、NH2、中性氧化鋁)單獨(dú)及組合使用的凈化效果和吸附作用進(jìn)行了考察。

單獨(dú)采用NH2吸附劑時(shí),大約有45%的化合物回收率比使用其他3種凈化劑時(shí)低,且基線噪聲較大,干擾峰多,表明NH2對(duì)被測(cè)物有吸附作用,凈化效果不理想;PSA、C18和中性氧化鋁對(duì)目標(biāo)化合物的吸附相對(duì)較小,提取回收良好,且無(wú)明顯雜質(zhì)峰干擾。

進(jìn)一步采用以下4種組合方案:① PSA 250 mg+C18250 mg; ② PSA 250 mg+中性氧化鋁250 mg; ③ C18250 mg+中性氧化鋁250 mg; ④ PSA 165 mg+C18165 mg+中性氧化鋁165 mg,考察雞肉基質(zhì)中的加標(biāo)回收率,見(jiàn)圖3。結(jié)果表明,采用凈化劑組合①時(shí)β-興奮劑類回收率最高,但蛋白同化激素、糖皮質(zhì)激素和孕激素的回收率低;采用組合②或③時(shí),蛋白同化激素和糖皮質(zhì)激素回收率較高,但對(duì)β-興奮劑類和孕激素回收率不理想;組合④ PSA+C18+Al2O33種復(fù)配時(shí),糖皮質(zhì)激素的回收率較高,且被測(cè)物回收率低于20%的最少。

圖 3 采用不同凈化劑時(shí)雞肉基質(zhì)中不同回收率范圍的目標(biāo)物個(gè)數(shù)占總被測(cè)物個(gè)數(shù)的比例Fig. 3 Percentages of target compounds in total analytes within different ranges of recoveries using different purifying agents in the chicken matrix ① PSA 250 mg+C18 250 mg; ② PSA 250 mg+neutral alumina 250 mg; ③ C18 250 mg+neutral alumina 250 mg; ④ PSA 165 mg+C18 165 mg+neutral alumina 165 mg.

綜合以上多重因素,本試驗(yàn)最終采用組合④作為最終凈化劑。其中PSA可以去除肉中的脂肪酸類和糖類干擾,C18則對(duì)脂肪和非極性化合物的吸附效果比較明顯,中性氧化鋁容易吸附雜環(huán)類、芳香烴和有機(jī)胺等富電化合物,3種聯(lián)合使用達(dá)到凈化的目的,最終上機(jī)溶液為澄清透明溶液。

2.2.4復(fù)溶溶劑的選擇

根據(jù)流動(dòng)相和各目標(biāo)化合物的溶解性能,考察了3種復(fù)溶溶劑:①乙腈/水(含0.1%甲酸)(1/9, v/v); ②甲醇/水(含0.1%甲酸)(1/9, v/v); ③甲醇/水(含0.1%甲酸和5 mmol/L乙酸銨)(1/9, v/v)。通過(guò)比較發(fā)現(xiàn),當(dāng)采用溶劑①稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣品時(shí),會(huì)出現(xiàn)明顯峰分叉現(xiàn)象,而采用②時(shí)則峰形很好,由于使用的流動(dòng)相中有0.1%甲酸和5 mmol/L乙酸銨水溶液,又考察了溶劑③,結(jié)果發(fā)現(xiàn)溶劑②和③沒(méi)有明顯差別,最終采用溶劑③作為復(fù)溶溶劑。

2.2.5對(duì)應(yīng)內(nèi)標(biāo)物的選擇

對(duì)內(nèi)標(biāo)化合物與被測(cè)物的匹配進(jìn)行了選擇,以被測(cè)物和內(nèi)標(biāo)物結(jié)構(gòu)類似、色譜峰保留時(shí)間相近、回收率接近為原則,選擇最為合適的內(nèi)標(biāo)物。最終確定11種內(nèi)標(biāo)物對(duì)應(yīng)50種被測(cè)物,具體見(jiàn)表2。

2.2.6基質(zhì)效應(yīng)的考察

為了評(píng)價(jià)基質(zhì)效應(yīng),本研究采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率的比值(signal suppression/enhancement, SSE)考察了目標(biāo)物在基質(zhì)中的信號(hào)增強(qiáng)或抑制的程度。SSE值在80%～120%之間表明基質(zhì)效應(yīng)影響不大,當(dāng)其高于120%時(shí)顯示基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng),當(dāng)其低于80%時(shí)顯示基質(zhì)抑制效應(yīng)。本試驗(yàn)以雞肉為基質(zhì)考察了其SSE值,見(jiàn)表2。有2種化合物有基質(zhì)抑制效應(yīng),有12種化合物有基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng),其余36種化合物無(wú)顯著影響。為了消除基質(zhì)的影響,采用基質(zhì)空白提取液稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

2.3 方法的線性關(guān)系與靈敏度

采用基質(zhì)空白提取液稀釋標(biāo)準(zhǔn)溶液配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)溶液,以被測(cè)化合物定量離子對(duì)的峰面積與內(nèi)標(biāo)定量離子對(duì)峰面積比為縱坐標(biāo)(y),以被測(cè)物的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(x, μg/L)繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線,考察被測(cè)物的線性關(guān)系,結(jié)果見(jiàn)表2,β2-激動(dòng)劑類(No. 1～19)和β-阻斷劑類(No. 20～22)的線性范圍是0.1～20 μg/L,蛋白同化激素類(No. 23～33)、孕激素類(No. 34～39)、利尿劑類(No. 40～42)的線性范圍是0.2～50 μg/L,糖皮質(zhì)激素類(No. 43～50)的線性范圍0.5～200 μg/L。所有目標(biāo)分析物在其線性范圍內(nèi)線性擬合良好,線性相關(guān)系數(shù)(R2)均超過(guò)0.99。

表 2 50種被測(cè)物對(duì)應(yīng)的內(nèi)標(biāo)化合物、線性范圍、線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限、定量限及基質(zhì)效應(yīng)(SSE)

由于定性離子對(duì)比定量離子對(duì)的信號(hào)弱,為了確保能夠準(zhǔn)確定性,本試驗(yàn)以定性離子對(duì)的3倍信噪比(S/N=3)對(duì)應(yīng)的濃度作為檢出限,S/N=10對(duì)應(yīng)的濃度作為定量限,見(jiàn)表2。本方法的檢出限范圍為0.03～0.12 μg/kg,定量限范圍為0.1～0.4 μg/kg。莊玥等[25]建立的方法與本研究所建方法和被測(cè)物類似,是將待測(cè)樣品先經(jīng)乙酸乙酯提取,再經(jīng)氮?dú)獯蹈梢译娑ㄈ?QuEChERS(45 mg PSA+25 mg C18+50 mg無(wú)水硫酸鎂)凈化后以HPLC-MS/MS檢測(cè),該方法定量限為0.1～1 μg/kg。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法GB/T 21981-2008《動(dòng)物源食品中激素多殘留檢測(cè)方法 液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜法》的定量限為0.4～2.0 μg/kg。與上述兩種方法相比本方法的定量限更低。

2.4 方法準(zhǔn)確度和精確度

分別考察了雞肉、豬肉、羊肉、牛肉基質(zhì)中目標(biāo)化合物的加標(biāo)回收率和精密度(RSD),并同時(shí)測(cè)定相應(yīng)的基質(zhì)空白樣品。結(jié)果見(jiàn)表3～6,雞肉的加標(biāo)回收率范圍50.3%～114.7%,精密度范圍0.42%～15.1%;豬肉的加標(biāo)回收率范圍50.3%～116.3%,精密度范圍0.58%～13.1%;羊肉的加標(biāo)回收率范圍52.0%～119.9%,精密度范圍0.50%～15.0%;牛肉的加標(biāo)回收率范圍50.4%～117.7%,精密度范圍0.76%～13.2%。盡管內(nèi)標(biāo)在整個(gè)試驗(yàn)過(guò)程中對(duì)目標(biāo)分析物的定量都起著糾偏和校正的作用,但是仍有3種化合物司坦唑醇、美睪酮、美雄諾龍的回收率較低(50%～60%),其他化合物的回收率良好(>60%)。

表 3 雞肉中目標(biāo)物的加標(biāo)回收率及精密度(n=6)

表 4 豬肉中目標(biāo)物的加標(biāo)回收率及精密度(n=6)

表 5 羊肉中目標(biāo)物的加標(biāo)回收率及精密度(n=6)

表 6 牛肉中目標(biāo)物的加標(biāo)回收率及精密度(n=6)

結(jié)果還發(fā)現(xiàn),畜禽肉中常含有一些內(nèi)源性激素,例如本實(shí)驗(yàn)所采用的4種基質(zhì),除雞肉外,其他3種基質(zhì)中均檢出了激素:氫化可的松(豬肉、羊肉、牛肉)、可的松(豬肉、羊肉)、睪酮(羊肉)、孕酮(牛肉),因此推薦用雞肉做基質(zhì)空白配制標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.5 方法比對(duì)及樣品的測(cè)定

2.5.1方法比對(duì)

同時(shí)采用本方法和國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)方法GB/T 21981-2008測(cè)定了9個(gè)市售肉類樣品。驗(yàn)證的被測(cè)物(兩個(gè)方法重合的被測(cè)物)有21個(gè):群勃龍、勃地酮、諾龍、雄烯二酮、美雄酮、睪酮、脫氫表雄酮(普拉雄酮)、甲睪酮、康力龍、美睪酮、美雄諾龍、17-α-羥孕酮、醋酸氯地孕酮、孕酮、醋酸甲羥孕酮、波尼松、可的松、氫化可的松、波尼松龍、地塞米松、倍氯米松。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表7,除氫化可的松、可的松、雄烯二酮外其他物質(zhì)均未檢出。

為了分析比對(duì)自建方法和國(guó)標(biāo)方法的一致性,針對(duì)氫化可的松和可的松的12組檢測(cè)數(shù)據(jù)(見(jiàn)表7),采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,計(jì)算本方法所得結(jié)果與國(guó)標(biāo)方法所得結(jié)果的差值,選擇α=5%顯著性水平作為判斷標(biāo)準(zhǔn),當(dāng)n=6時(shí),查t分布雙側(cè)臨界值表t(0.05,n-1)=2.571,經(jīng)計(jì)算得到t氫化可的松=1.62,t可的松=0.33,均小于2.571,說(shuō)明兩組結(jié)果數(shù)據(jù)沒(méi)有顯著差異,兩種方法具有良好的一致性。國(guó)標(biāo)方法是首先酶解肉樣品,酶解液用石墨化炭黑柱和氨基柱凈化后測(cè)定。本方法的定量限低于或等于國(guó)標(biāo)方法的定量限,且國(guó)標(biāo)方法過(guò)程繁瑣,消耗試劑耗材多,方法測(cè)定時(shí)間長(zhǎng),因此本方法優(yōu)于國(guó)標(biāo)方法。

表 7 肉類樣品采用兩種方法檢測(cè)的結(jié)果(n=2)

2.5.2樣品測(cè)定

采用本方法測(cè)定了12個(gè)牛肉樣品中的50種化合物,這些牛肉均采自某養(yǎng)殖場(chǎng),飼料中不含人為添加興奮劑和孕激素。結(jié)果見(jiàn)表8,共檢出了4種化合物。氫化可的松的檢出率最高,含量最高;可的松次之,雄烯二酮和睪酮含量最低。本次檢出的氫化可的松和可的松結(jié)果與莊玥等[25]、楊奕等[29]的測(cè)定結(jié)果基本一致,GB 31650-2019《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中獸藥最大殘留限量》規(guī)定可的松和氫化可的松屬于允許用于食品動(dòng)物,但不需要制定殘留限量的獸藥。

表 8 12個(gè)牛肉樣品的測(cè)定結(jié)果(n=2)

3 結(jié)論

本研究建立了畜禽肉品中50種激素類藥物殘留檢測(cè)方法,該方法采用QuEChERS樣品前處理技術(shù),結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)方法,回收率和精密度穩(wěn)定,具有高通量、高靈敏度的優(yōu)點(diǎn),能夠滿足檢測(cè)需求。該方法可以快速準(zhǔn)確地篩查畜禽肉中的44種食源性興奮劑和6種孕激素藥物殘留,可用于風(fēng)險(xiǎn)預(yù)警、日常監(jiān)測(cè)及應(yīng)急檢測(cè),確保運(yùn)動(dòng)員食品食源性興奮劑含量在安全范圍內(nèi),該方法的建立可以為重大賽事活動(dòng)中畜禽肉類食品安全提供有力的技術(shù)支撐。