李楊杰, 黃佳穎, 方繼輝, 黃志業(yè)

(廣東省藥品檢驗(yàn)所, 國(guó)家藥品監(jiān)督管理局化妝品風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 廣東 廣州 510000)

化妝品作為日常生活用品,其質(zhì)量安全影響千家萬戶。隨著生活水平和審美要求的提高,人們對(duì)化妝品的需求越來越大,而有些不法商家為達(dá)到效果好、見效快、成本低等目的,在化妝品中添加各種激素、抗生素等禁用物質(zhì)[1-5],嚴(yán)重威脅了消費(fèi)者的身體健康。化妝品監(jiān)管部門通報(bào)的不合格化妝品問題顯示,添加禁用物質(zhì)和超量使用限用物質(zhì)是當(dāng)前化妝品質(zhì)量安全存在的主要問題。

目前,化妝品中禁用物質(zhì)的檢測(cè)主要采用《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》[6]和國(guó)標(biāo)[7,8]等檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)。但標(biāo)準(zhǔn)中禁限用物質(zhì)定性定量采用的液相色譜-三重四極桿質(zhì)譜(LC-MS/MS)只適用于已有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的已知物分析,且檢測(cè)通量受四極桿掃描速度的限制,無法實(shí)現(xiàn)高通量篩查。同時(shí),低分辨的四極桿質(zhì)量分析器無法區(qū)分質(zhì)荷比相近的干擾物,易造成假陽性結(jié)果。超高效液相色譜-四極桿-飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜(UPLC-Q-TOF HRMS)具有高質(zhì)量精度、高掃描速度、高通量和全質(zhì)量數(shù)據(jù)采集等優(yōu)勢(shì),可以大大提高定性篩查的準(zhǔn)確度,配合數(shù)據(jù)庫(kù)譜庫(kù)檢索功能可廣泛用于樣品中未知物篩查和多組分的高通量檢測(cè)[9]。

此外,目前已有的標(biāo)準(zhǔn)和檢測(cè)方法多是針對(duì)化妝品中的糖皮質(zhì)激素類[1,4]、抗生素類[5]、抗過敏類[10,11]、抗組胺類[12]、性激素類[13]等單一類別化合物進(jìn)行檢測(cè)。但化妝品中實(shí)際添加的禁用物質(zhì)種類繁多,檢測(cè)過程中需要多個(gè)標(biāo)準(zhǔn)或檢測(cè)方法組合使用,存在檢測(cè)成本高、周期長(zhǎng)和效率低等問題。而且檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)中的大部分化合物在實(shí)際樣品檢測(cè)中并未檢出過,目標(biāo)針對(duì)性不強(qiáng)。因此,需要整合化妝品中實(shí)際添加的多種類禁用物質(zhì),建立一種高效、準(zhǔn)確、覆蓋廣、針對(duì)性強(qiáng)的化妝品中常見禁用物質(zhì)的篩查方法,以實(shí)現(xiàn)對(duì)批量樣品的快速篩查。而目前對(duì)于化妝品中多種禁用物質(zhì)的同時(shí)檢測(cè)還鮮有報(bào)道。

本研究根據(jù)文獻(xiàn)[14-18]檢索結(jié)果和監(jiān)測(cè)結(jié)果篩選出在市售化妝品中檢出過的17大類73種常見禁用物質(zhì)作為目標(biāo)分析物,建立了化妝品中73種常見禁用物質(zhì)的UPLC-Q-TOF HRMS檢測(cè)方法。此外,在不合格化妝品通告和文獻(xiàn)[14-18]檢索的基礎(chǔ)上,還針對(duì)性地建立了化妝品中禁用物質(zhì)高分辨質(zhì)譜篩查數(shù)據(jù)庫(kù),并將數(shù)據(jù)庫(kù)應(yīng)用于日?；瘖y品監(jiān)督檢驗(yàn)和風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)。篩查數(shù)據(jù)庫(kù)的應(yīng)用大大提高了日常檢驗(yàn)的工作效率和化妝品安全風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)水平,對(duì)于保障化妝品質(zhì)量安全、保護(hù)消費(fèi)者健康具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器、試劑與材料

Exion LC超高效液相色譜儀、X500R四極桿-飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜儀(配有Sciex OS數(shù)據(jù)處理軟件和LibraryView數(shù)據(jù)庫(kù)軟件)(美國(guó)AB Sciex公司), 3-18KS高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)Sigma公司), MS3 basic旋渦振蕩器(德國(guó)IKA公司), XS205DU電子天平(瑞士Mettler公司), Ti-H20超聲波儀(德國(guó)Heidolpn公司), Milli-Q超純水處理系統(tǒng)(美國(guó)Millipore公司)。

乙酸銨(質(zhì)譜純,美國(guó)Sigma公司);甲酸(質(zhì)譜純)、甲醇、乙腈(色譜純)、N-丙基乙二胺(PSA)、十八烷基硅烷鍵合硅膠(C18)、無水硫酸鎂(優(yōu)級(jí)純)均購(gòu)自德國(guó)CNW公司。73種禁用物質(zhì)包括33種激素類(25種糖皮質(zhì)激素和8種性激素)、18種抗生素類(4種喹諾酮類、4種四環(huán)素類、4種磺胺類、3種林可酰胺類、2種硝基咪唑類和1種酰胺醇類)、7種抗真菌類、3種抗組胺類、3種香豆素類、3種局部麻醉類、2種腎上腺素類、1種解熱鎮(zhèn)痛類、1種育發(fā)類、1種抗寄生蟲類和1種促進(jìn)膠原蛋白合成類。73種禁用物質(zhì)按上述類別順序和同一類中化合物的保留時(shí)間順序依次列于表1。

表 1 73種化合物的品牌、純度和質(zhì)譜參數(shù)

表 1 (續(xù))

1.2 實(shí)驗(yàn)條件

1.2.1樣品前處理

準(zhǔn)確稱取化妝品樣品0.2 g,置于15 mL離心管中,加入3 mL飽和氯化鈉溶液,渦旋30 s,分散均勻,加入含0.2%甲酸的乙腈溶液10 mL,渦旋30 s,超聲提取30 min,渦旋混合搖勻,于0 ℃以8 000 r/min轉(zhuǎn)速冷凍離心5 min,吸取上清液5 mL,置于10 mL離心管中,加入50 mg PSA凈化吸附劑渦旋1 min混勻,于0 ℃以8 000 r/min轉(zhuǎn)速離心后,取上清液經(jīng)0.22 μm濾膜過濾后,上機(jī)測(cè)定。

1.2.2標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

分別精確稱取10 mg對(duì)照品,置于10 mL棕色容量瓶中,加入甲醇充分溶解后(對(duì)于在純甲醇中溶解性差的環(huán)丙沙星、美滿霉素、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲噻二唑和金霉素可加入少量甲酸或水促進(jìn)溶解),室溫超聲10 min,用甲醇定容至刻度,搖勻,配制成質(zhì)量濃度為1 000 mg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液,置于-18 ℃冰箱中儲(chǔ)存。用甲醇將標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液逐級(jí)稀釋成不同質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

取15 mL離心管8支,每支稱取與待測(cè)化妝品配方相同或相近的基質(zhì)空白樣品0.2 g,分別精密加入標(biāo)準(zhǔn)工作液適量,渦旋30 s混勻,按1.2.1節(jié)樣品前處理步驟進(jìn)行處理,配制成含量為50～10 000 μg/kg的系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.2.3色譜條件

色譜柱:Waters Acquity HSS T3色譜柱(100 mm×2.1 mm, 1.8 μm);柱溫:40 ℃;流速:0.35 mL/min。正離子模式流動(dòng)相:含0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸銨溶液(A)和含0.1%甲酸的甲醇(B);正離子模式梯度洗脫程序:0～1.0 min, 2%B; 1.0～3.0 min, 2%B～20%B; 3.0～8.0 min, 20%B～40%B; 8.0～15.0 min, 40%B～60%B; 15.0～20.0 min, 60%B～80%B; 20.0～25.0 min, 80%B～95%B; 25.0～27.0 min, 95%B; 27.0～27.5 min, 95%B～2%B; 27.5～30.0 min, 2%B。負(fù)離子模式流動(dòng)相:0.005%甲酸水溶液(C)和含0.005%甲酸的甲醇(D);負(fù)離子模式梯度洗脫程序:0～0.5 min, 2%D; 0.5～14.0 min, 2%D～98%D; 14.0～17.5 min, 98%D; 17.5～17.6 min, 98%D～2%D; 17.6～20.0 min, 2%D。進(jìn)樣量:5 μL。

1.2.4質(zhì)譜條件

離子源:電噴霧電離(ESI)源;離子化方式:ESI+和ESI-;毛細(xì)管溫度:600 ℃;霧化氣(gas 1)壓力:379.21 kPa(55 psi);干燥氣(gas 2)壓力:379.21 kPa (55 psi);氣簾氣(curtain gas)壓力:241.32 kPa (35 psi);碰撞氣(CAD gas)壓力:48.26 kPa (7 psi);監(jiān)測(cè)模式:多反應(yīng)監(jiān)測(cè)高分辨掃描模式(MRM HR);噴霧電壓:5.5/-4.5 kV;去簇電壓(DP):±80 V;一級(jí)全掃描模式:全掃描范圍m/z100～1 000;二級(jí)MRM HR模式:掃描范圍m/z60～600。73種化合物的母離子、子離子、碰撞能量(CE)、保留時(shí)間、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)純度等參數(shù)列于表1。

肺癌是常見的惡性腫瘤之一，近年來在我國(guó)的發(fā)病率逐年上升。手術(shù)切除是治愈肺癌的主要方法，但大多患者在肺癌確診時(shí)早已失去了手術(shù)治療的時(shí)機(jī)［11］。特別是當(dāng)前晚期非鱗非小細(xì)胞肺癌的治療目標(biāo)是緩解臨床癥狀，提高生存率及延長(zhǎng)生存時(shí)間［12］。

每次實(shí)驗(yàn)前,利用廠家提供的正、負(fù)離子調(diào)諧液,通過內(nèi)置調(diào)諧液傳輸系統(tǒng)(CDS)對(duì)儀器分別進(jìn)行MS和MS/MS模式的質(zhì)量精度校正。序列進(jìn)行中,每運(yùn)行5針樣品,利用廠家提供的校正液自動(dòng)進(jìn)行一次質(zhì)量精度校正。

2 結(jié)果與討論

2.1 高分辨質(zhì)譜篩查數(shù)據(jù)庫(kù)的建立和應(yīng)用

采用AB X500R Q-TOF構(gòu)建化妝品中禁用物質(zhì)高通量風(fēng)險(xiǎn)篩查質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(kù),目前已通過購(gòu)買標(biāo)準(zhǔn)品自建了化妝品中650種禁用物質(zhì)的高通量風(fēng)險(xiǎn)篩查識(shí)別數(shù)據(jù)庫(kù),并應(yīng)用于日?；瘖y品的風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)。采用信息依賴掃描模式(IDA)建立數(shù)據(jù)庫(kù)并應(yīng)用于樣品的快速篩查。通過數(shù)據(jù)庫(kù)中化合物的保留時(shí)間、母離子及碎片離子精確質(zhì)量信息、同位素豐度比等對(duì)樣品中的禁用物質(zhì)進(jìn)行快速篩查和定性確證。如果被測(cè)樣品出現(xiàn)了與標(biāo)準(zhǔn)品保留時(shí)間一致的色譜峰、精確質(zhì)量數(shù)偏差小于5×10-6、同位素豐度比差異小于5%、二級(jí)質(zhì)譜圖譜庫(kù)匹配得分大于70分時(shí),則可判斷被測(cè)樣品中存在相應(yīng)的化合物[19]。

以克羅米通的快速篩查確證為例,對(duì)未知樣品進(jìn)行IDA模式下的一級(jí)、二級(jí)全掃描檢測(cè),將檢測(cè)結(jié)果通過Library View軟件與自建數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行比對(duì)篩查和確證,結(jié)果篩查出克羅米通,匹配度為99.5%?？肆_米通的提取離子色譜圖、一級(jí)、二級(jí)高分辨質(zhì)譜圖及數(shù)據(jù)庫(kù)匹配結(jié)果見圖1。

圖 1 克羅米通的(a)色譜圖、(b)一級(jí)、(c)二級(jí)高分辨質(zhì)譜圖及數(shù)據(jù)庫(kù)鏡像結(jié)果Fig. 1 (a) Chromatogram, (b) mass spectrum (MS1),(c) mass spectrum (MS2) and mirror mass spectrum of crotamiton

2.2 質(zhì)譜條件選擇

根據(jù)73種化合物的電離性質(zhì),分別選用ESI+和ESI-作為離子化模式,采用流動(dòng)注射泵連續(xù)進(jìn)樣方式進(jìn)行一級(jí)質(zhì)譜全掃描,選擇響應(yīng)最強(qiáng)的目標(biāo)離子作為一級(jí)母離子,同時(shí)對(duì)去簇電壓、碰撞能量等質(zhì)譜參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化。氯霉素、雌酮和己烯雌酚均在負(fù)離子模式下響應(yīng)最大,準(zhǔn)分子離子為[M-H]-;其余化合物均在正離子模式下響應(yīng)最大,準(zhǔn)分子離子為[M+H]+。本文使用的飛行時(shí)間質(zhì)譜可以根據(jù)需要選擇IDA模式、連續(xù)窗口全理論碎片離子采集模式(SWATH)和高分辨多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式(MRM HR)等3種不同的掃描模式。其中,對(duì)于已知化合物的定量,選擇MRM HR模式響應(yīng)最好,并可通過根據(jù)化合物保留時(shí)間分段采集和設(shè)置最佳CE值來獲得質(zhì)譜最佳響應(yīng)。相較于IDA模式,MRM HR模式下，73種禁用物質(zhì)的質(zhì)譜響應(yīng)可提高約1.3～37倍。

2.3 色譜條件選擇

實(shí)驗(yàn)考察了不同流動(dòng)相組成(水-甲醇、0.1%甲酸水溶液-甲醇、含0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸銨溶液-含0.1%甲酸的甲醇)對(duì)待測(cè)化合物分離和質(zhì)譜響應(yīng)的影響。流動(dòng)相中酸度越強(qiáng),正離子模式下化合物響應(yīng)越高,負(fù)離子模式下化合物響應(yīng)受抑制。綜合考慮待測(cè)組分的化學(xué)性質(zhì)、色譜分離和質(zhì)譜響應(yīng),最終選擇正離子模式下含0.1%甲酸的5 mmol/L乙酸銨溶液和含0.1%甲酸的甲醇溶液作為流動(dòng)相。負(fù)離子模式下0.005%甲酸水溶液和含0.005%甲酸的甲醇溶液作為流動(dòng)相。

實(shí)驗(yàn)對(duì)梯度洗脫程序進(jìn)行了優(yōu)化,使得不同類別、不同性質(zhì)的化合物能夠較好地色譜分離,且保留時(shí)間分布較均勻。

由于17類73種常見禁用物質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)和化學(xué)性質(zhì)差異較大,本研究考察了73種禁用物質(zhì)在Waters Acquity HSS T3(100 mm×2.1 mm, 1.8 μm)、Agilent Poroshell 120 SB-AQ(100 mm×2.1 mm, 2.7 μm)和Agilent Poroshell 120 EC-C18(100 mm×2.1 mm, 2.7 μm)3款通用型色譜柱上的色譜行為(見附圖1,詳見http://www.chrom-China.com)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,73種禁用物質(zhì)在3款色譜柱上的色譜峰均對(duì)稱性好,峰形窄。相較于SB-AQ和EC-C18色譜柱,大多數(shù)化合物在HSS T3色譜柱上保留時(shí)間延長(zhǎng),且質(zhì)譜響應(yīng)信號(hào)也明顯增強(qiáng),有利于目標(biāo)分析物與樣品中雜質(zhì)的有效分離。Acquity HSS T3色譜柱采用亞微米填料技術(shù),比傳統(tǒng)的色譜柱具有更好的色譜分離度,特別可增強(qiáng)極性化合物的色譜保留。因此,本實(shí)驗(yàn)最終選擇HSS T3色譜柱用于73種禁用物質(zhì)的色譜分離。73種禁用物質(zhì)的提取離子色譜圖見圖2。

圖 2 73種禁用物質(zhì)的提取離子色譜圖Fig. 2 Extracted ion chromatograms of the 73 prohibited compounds

2.4 樣品前處理?xiàng)l件的優(yōu)化

2.4.1提取溶劑的選擇

圖 3 提取溶劑對(duì)73種禁用物質(zhì)回收率的影響Fig. 3 Effects of extraction solvents on the recoveries of the 73 prohibited compounds

本實(shí)驗(yàn)采用飽和氯化鈉溶液對(duì)化妝品樣品進(jìn)行加速破乳,但林可酰胺類等水溶性化合物因分布在水層而導(dǎo)致回收率低于30%,林可霉素回收率更是低于10%(見圖3),林可霉素較低的回收率與文獻(xiàn)[19]結(jié)果一致。因此,針對(duì)林可酰胺類物質(zhì)，如采用飽和氯化鈉溶液破乳,則需采用基質(zhì)匹配外標(biāo)法進(jìn)行定量。如果待測(cè)化妝品屬于“油包水”劑型,還可加入適量的四氫呋喃或異丙醇進(jìn)行破乳,以提高目標(biāo)化合物的回收率。

由于化妝品基質(zhì)較為復(fù)雜,考察了渦旋分散和超聲的提取方法,渦旋分散有利于樣品與提取溶劑充分接觸,超聲對(duì)于化合物的提取效率更高,兩者結(jié)合操作簡(jiǎn)便,提取效率更好。采用高速冷凍離心的方式凈化除雜,可快速簡(jiǎn)便地將提取溶液與化妝品基質(zhì)中的脂類等大分子物質(zhì)有效分離。

2.4.2凈化吸附劑的選擇

QuEChERS的原理是利用固體吸附劑選擇性吸附雜質(zhì)從而達(dá)到凈化樣品的目的,因此吸附劑的選擇和用量是一個(gè)重要的考察因素。常用凈化劑一般包括PSA、C18和無水硫酸鎂。PSA是同時(shí)含有伯胺和仲胺基團(tuán)的高純硅膠基質(zhì)類極性吸附劑,具有極性作用和弱陰離子交換作用,可有效去除有機(jī)酸、脂肪和色素等水溶性雜質(zhì)。C18是一種憎水硅膠基吸附劑,能夠吸附脂肪等非極性干擾物。無水硫酸鎂在凈化過程中可吸取多余的水分。

本研究比較了PSA、C18和硫酸鎂3種凈化吸附劑對(duì)化妝品中73種常見禁用物質(zhì)的凈化效果。選擇基質(zhì)更為復(fù)雜的膏霜樣品為考察基質(zhì),樣品加入200 ng混合標(biāo)準(zhǔn)溶液后按前處理方法提取,以17大類禁用物質(zhì)的平均回收率為考察指標(biāo),研究了PSA(0、50、100、200和500 mg)、C18(0、50、100和200 mg)和硫酸鎂(0、100、200、500、1 000和1 500 mg)用量對(duì)于各類化合物回收的影響(見圖4)。每個(gè)條件均進(jìn)行2次平行實(shí)驗(yàn),2次平行測(cè)定的相對(duì)偏差均小于15%。由圖4a可知,PSA對(duì)于喹諾酮類化合物具有明顯吸附作用,回收率隨著PSA用量的增加而顯著降低,與陳少波等[21]研究結(jié)果一致。糖皮質(zhì)激素、磺胺類、抗組胺類、腎上腺素類、阿法骨化醇等化合物均隨著PSA用量增加回收率降低,當(dāng)PSA用量為50 mg時(shí),對(duì)絕大多數(shù)化合物在有凈化效果的同時(shí)保證了較好的回收?？瞻赘嗨|(zhì)經(jīng)50 mg的PSA凈化前后的總離子流圖見圖5。由圖可見,50 mg的PSA具有很好的凈化效果,可大大降低基質(zhì)干擾。

圖 4 凈化吸附劑對(duì)73種禁用物質(zhì)回收率的影響Fig. 4 Effects of purification adsorbents on the recoveries of the 73 prohibited compounds

圖 5 采用PSA凈化前后膏霜?jiǎng)悠返目傠x子流色譜圖Fig. 5 Total ion chromatograms of the cream sample before and after primary secondary amine (PSA) purifying

由圖4b可知,C18對(duì)抗真菌類、抗組胺類、腎上腺激素類、米諾地爾、阿法骨化醇有一定的吸附作用,回收率隨著C18用量的增加而降低,且對(duì)大多數(shù)化合物,C18用量對(duì)化合物的回收影響不大,因此不采用C18作為凈化劑。

無水硫酸鎂可作為鹽析劑和除水劑,有利于有機(jī)相和水相分層,防止水分和雜質(zhì)進(jìn)入提取液,在商品化的QuEChERS凈化管中常與C18和PSA聯(lián)合使用。文獻(xiàn)[22]報(bào)道硫酸鎂可能與喹諾酮類化合物吸附結(jié)合,形成配合物,導(dǎo)致回收率低于10%,本研究中喹諾酮類化合物回收率較低與文獻(xiàn)結(jié)果一致,但硫酸鎂對(duì)其他類化合物的影響不顯著(見圖4c)。因此,不采用無水硫酸鎂作為凈化劑。

綜合各化合物的回收效果,本研究最終選擇50 mg PSA。

2.5 基質(zhì)效應(yīng)考察

基質(zhì)效應(yīng)(η)是指共流出干擾物對(duì)目標(biāo)物離子造成離子抑制或增強(qiáng)的效應(yīng),基質(zhì)效應(yīng)在質(zhì)譜分析中普遍存在,影響分析結(jié)果的準(zhǔn)確性。本研究選取膏霜?jiǎng)┖退畡┳鳛榈湫突|(zhì)對(duì)基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行考察,分別制備溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液、膏霜?jiǎng)┖退畡┑幕|(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液,測(cè)得溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線和2種基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線性方程的斜率?；|(zhì)效應(yīng)=(基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率-溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率)/溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率×100%[23],η的絕對(duì)值隨著基質(zhì)效應(yīng)的增強(qiáng)而變大,η為正值說明基質(zhì)增強(qiáng),負(fù)值則為基質(zhì)抑制。當(dāng)η絕對(duì)值<20%時(shí)表示基質(zhì)效應(yīng)微弱,η絕對(duì)值在20%～50%范圍時(shí)表示具有中等強(qiáng)度基質(zhì)效應(yīng),η絕對(duì)值>50%時(shí)表示基質(zhì)效應(yīng)較強(qiáng)[24]。膏霜?jiǎng)┖退畡┲?3種禁用物質(zhì)的η值見附表1,由附表1可知,水劑η值為-95.4%～-0.2%,膏霜?jiǎng)│侵禐?96.3%～-8.9%。水劑基質(zhì)中50%的化合物都具有中等以上強(qiáng)度的基質(zhì)抑制效應(yīng),膏霜基質(zhì)中88%的化合物都具有中等以上強(qiáng)度的基質(zhì)抑制效應(yīng)。因此,本實(shí)驗(yàn)采用基質(zhì)匹配工作溶液定量以減小基質(zhì)效應(yīng)的影響。

2.6 線性范圍、檢出限和定量限

本實(shí)驗(yàn)分別以水劑和膏霜?jiǎng)┗瘖y品空白樣品為基質(zhì),對(duì)8個(gè)含量在50～10 000 μg/kg(部分化合物對(duì)5個(gè)含量在500～10 000μg/kg)之間的系列混合基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)工作溶液進(jìn)行測(cè)定,以化合物含量為橫坐標(biāo)(μg/kg),以峰面積為縱坐標(biāo)繪制基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明,各化合物兩種基質(zhì)下在相應(yīng)范圍內(nèi)線性關(guān)系良好,相關(guān)系數(shù)(R2)均大于0.99。以信噪比(S/N)≥3確定檢出限,為5～150 μg/kg;以S/N≥10確定定量限,為15～450 μg/kg。73種禁用物質(zhì)水劑和膏霜?jiǎng)┑木€性范圍、檢出限和定量限見附表1。

2.7 回收率和精密度

分別選取膏霜和水劑空白基質(zhì)樣品,做3個(gè)添加水平(LOQ、5倍LOQ、10倍LOQ)的加標(biāo)回收試驗(yàn),每個(gè)添加水平分別連續(xù)測(cè)定6次和連續(xù)3 d每天連續(xù)測(cè)定6次,計(jì)算各待測(cè)物的平均回收率及日內(nèi)和日間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(見附表2)。結(jié)果表明,73種禁用物質(zhì)在膏霜?jiǎng)┘八畡﹥煞N基質(zhì)中3個(gè)加標(biāo)水平下的平均加標(biāo)回收率為60.3%～130.3%,日內(nèi)RSD為0.8%～10.0%(n=6),日間RSD為1.1%～15.0%(n=3)。

2.8 實(shí)際樣品測(cè)定

應(yīng)用本實(shí)驗(yàn)所建立的方法對(duì)日?；瘖y品風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)所抽取的692份化妝品樣品進(jìn)行分析。從其中16個(gè)樣品中檢出16種禁用物質(zhì),檢出的禁用物質(zhì)有磺胺甲基異噁唑、甲基潑尼松、林可霉素、對(duì)乙酰氨基酚、甲氧芐啶、阿法骨化醇、倍他米松戊酸酯、溴莫尼定、氯霉素、氯苯那敏、氯倍他索丙酸酯、克羅米通、益康唑、酮康唑、潑尼松醋酸酯和潑尼松,檢出禁用物質(zhì)的含量范圍為0.5～1 136.1 mg/kg,每個(gè)樣品平行測(cè)定2份,2份平行樣品的相對(duì)偏差均小于10%,樣品的測(cè)定結(jié)果見附表3。當(dāng)樣品中被測(cè)組分的含量超過基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線范圍后,用含0.2%甲酸的乙腈溶液對(duì)樣品提取液進(jìn)行適當(dāng)稀釋后進(jìn)行檢測(cè)。其中,阿法骨化醇、對(duì)乙酰氨基酚、甲基潑尼松、甲氧芐啶、克羅米通和溴莫尼定等6種化合物為現(xiàn)行檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)外的禁用物質(zhì)。

3 結(jié)論

本文采用UPLC-Q-TOF HRMS建立了化妝品中73種常見禁用物質(zhì)的快速篩查確證方法。經(jīng)實(shí)際樣品檢測(cè)考察,該方法準(zhǔn)確、快速、簡(jiǎn)便、實(shí)用,適用于化妝品中常見禁用物質(zhì)的同時(shí)檢測(cè),具有較強(qiáng)的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值,大大提高了日常監(jiān)督檢驗(yàn)和風(fēng)險(xiǎn)監(jiān)測(cè)的檢驗(yàn)效率,降低了檢測(cè)成本,方法的各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)也滿足現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)要求。同時(shí),本研究還建立了化妝品中安全風(fēng)險(xiǎn)物質(zhì)高分辨質(zhì)譜篩查數(shù)據(jù)庫(kù),并將其應(yīng)用于日常的監(jiān)管工作。數(shù)據(jù)庫(kù)的建立和應(yīng)用將為化妝品監(jiān)管提供新工具和新方法,有助于實(shí)現(xiàn)化妝品安全風(fēng)險(xiǎn)的及時(shí)監(jiān)測(cè)、準(zhǔn)確研判、科學(xué)預(yù)警和有效處置。