馬玉著，陳素玉，劉昱婕

妊娠期糖尿病是孕期女性常見并發(fā)癥之一，據(jù)統(tǒng)計，其發(fā)病率為1%～5%，并有逐年增高的趨勢[1]。該病以糖脂代謝紊亂等為主要特點，可對孕婦、胎兒及新生兒造成嚴重危害，已成為威脅母嬰健康的社會公共衛(wèi)生問題[2]。目前，臨床上多采用控制飲食、科學運動，必要時配合胰島素等藥物治療，但仍有部分患者出現(xiàn)不良妊娠結局。因此，探索影響妊娠期糖尿病母嬰不良結局的相關風險因素以指導臨床早期干預對改善妊娠結局具有非常重要的意義。微小核糖核酸(microRNA，miR)屬于小分子非編碼RNA，在多種生物學過程中發(fā)揮重要作用，已有研究指出[3]，miR表達水平的異常與妊娠期糖尿病的發(fā)生密切相關。miR-15a是新發(fā)現(xiàn)的與血管生成相關的miR家族成員，有研究[4]表明，miR-15a表達水平變化在2型糖尿病病情發(fā)展中起重要作用。但目前關于miR-15a表達水平在妊娠期糖尿病的變化情況及其是否與不良母嬰結局相關尚未完全清楚。鑒于此，該研究擬通過檢測妊娠期糖尿病患者血清miR-15a表達水平，并分析其與不良妊娠結局的關系，以為臨床診治提供參考。

1 材料與方法

1.1 一般資料選取2018年8月～2020年8月中國科學技術大學附屬第一醫(yī)院婦產科收治的妊娠期糖尿病患者143例為實驗組，另選取同期孕檢健康的124例正常孕婦為對照組。納入標準：實驗組均符合婦產科學(第9版)[5]妊娠期糖尿病的診斷標準，且入院后給予常規(guī)治療(胰島素控制血糖、科學飲食及運動鍛煉等)；對照組均為孕檢正常孕婦；兩組均自然受孕，孕周≥24周，單胎；均知情同意，自愿參與；患者依從性良好，能配合完成隨訪。排除標準：伴妊娠期高血壓、子癇前期等其他妊娠期合并癥者；心肺肝腎等重要臟器功能不全者；妊娠前已存在糖尿病、甲狀腺疾病、腎上腺疾病等內分泌系統(tǒng)疾病者；惡性腫瘤者；血液系統(tǒng)疾病、自身免疫性疾病者；精神疾病患者；近期感染性疾病、子宮畸形者；瘢痕子宮；胎盤早剝、前置胎盤、胎位不正者；不良生活習慣如嗜酒、吸煙等。兩組受試者年齡、孕周等一般資料見表1，實驗組與對照組在孕婦年齡、孕周、孕前體質量指數(shù)、生產史方面比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表1 一般資料比較

1.2 方法

1.2.1血清miR-15a表達水平檢測 采用實時熒光定量逆轉錄聚合酶鏈反應(qRT-PCR)檢測血清miR-15a表達水平。實驗組于治療前、對照組于體檢時，抽取受試者空腹靜脈血5 ml，3 000 r/min離心10 min，分離血清；按照TRIzol試劑盒(美國Invitrogen公司)說明書提取血清總RNA，以紫外分光光度計測量提取RNA的濃度與純度；參照逆轉錄試劑盒(TapMan Reverse Transcription Kit試劑盒，北京金福賽生物科技有限公司)將RNA逆轉錄為cDNA；擴增cDNA，使用熒光定量試劑盒(SYBR Premix Ex Taq，杭州科聯(lián)美訊生物醫(yī)藥科技有限公司)、實時熒光定量PCR測試儀檢測，其中miR-15a引物由上海信帆生物科技有限公司設計，正向引物5′-TAGCAGCACATAATGGTTTGTG-3′，反向引物5′-GCCTCTAACATTGAGACAGC-3′，均設置3復孔，反應體系為50 μl，反應條件為95 ℃10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 60 s，共40個循環(huán)，以U6作為內參，以2-ΔΔct法計算血清中miR-15a表達水平，見圖1A、1B。對比實驗組、對照組血清miR-15a表達水平。

圖1 RT-PCR檢測miR-15a、U6表達水平A: RT-PCR檢測miR-15a表達水平；B：RT-PCR檢測U6表達水平

1.2.2母嬰不良結局判斷 兩組均隨訪至分娩結束，觀察母嬰結局，其中母體不良結局包括流產、胎膜早破、羊水過多、產后出血、產后感染等；圍生兒不良結局包括早產兒、巨大兒、胎兒窘迫、死胎、新生兒窒息、新生兒呼吸窘迫綜合征、新生兒低血糖等。對比實驗組、對照組母嬰不良結局發(fā)生情況。

1.2.3關系分析 整理可能影響妊娠期糖尿病患者母嬰不良結局的相關因素，如年齡、孕前體質量指數(shù)、不良孕產史(既往妊娠胎兒畸形、停育、死胎、死產及產后大出血等)、生產史、血糖控制情況(血糖控制在正常范圍為控制良好，否則為控制不良)、血清miR-15a表達水平等，將以上指標設為自變量，另將母嬰不良結局設為因變量，賦值(表2)，進行多因素Logistic回歸性分析。分析miR-15a表達水平與妊娠期糖尿病患者母體不良結局、圍生兒不良結局的關系：比值比(OR值)、95%可信區(qū)間(95%CI)。

表2 指標賦值情況

1.3 統(tǒng)計學處理數(shù)據(jù)分析采用SPSS 24.0軟件，計量資料以表示，采用t檢驗進行比較；計數(shù)資料采用χ2檢驗，若理論頻數(shù)為1～5，則校正卡方值，理論頻數(shù)<1則用Fisher精確檢驗；血清miR-15a表達水平與妊娠期糖尿病患者母嬰不良結局的關系分析采用多因素Logistic回歸性分析法，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組血清miR-15a表達水平比較實驗組血清miR-15a表達水平(3.78±0.71)高于對照組(1.69±0.32)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2 兩組母嬰不良結局發(fā)生情況比較實驗組流產、胎膜早破、羊水過多、產后出血、產后感染、早產兒、巨大兒、胎兒窘迫、新生兒窒息、新生兒呼吸窘迫綜合征、新生兒低血糖發(fā)生率及母體、圍生兒不良結局總發(fā)生率均高于對照組(P<0.05)，實驗組死胎發(fā)生率與對照組比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)，見表3、4。

表3 兩組母體不良結局發(fā)生情況[n(%)]

表4 兩組圍生兒不良結局發(fā)生情況[n(%)]

2.3 血清miR-15a表達水平與妊娠期糖尿病患者母體不良結局的關系母體結局不良組年齡>35歲、孕前體質量指數(shù)≥24.0 kg/m2、不良孕產史、血糖控制不良占比及血清miR-15a表達水平與母體結局良好組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，以上均是妊娠期糖尿病患者母體不良結局的危險因素(P<0.05)，見表5、6。

表5 可能影響妊娠期糖尿病患者母體不良結局的因素分析[n(%)]

表6 妊娠期糖尿病患者母體不良結局的危險因素分析

2.4 血清miR-15a表達水平與妊娠期糖尿病患者圍生兒不良結局的關系圍生兒結局不良組年齡>35歲、孕前體質量指數(shù)≥24.0 kg/m2、不良孕產史、血糖控制不良占比及血清miR-15a表達水平與圍生兒結局良好組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，以上均是妊娠期糖尿病患者圍生兒不良結局的危險因素(P<0.05)，見表7、8。

表7 可能影響妊娠期糖尿病患者圍生兒不良結局的因素分析[n(%)]

表8 妊娠期糖尿病患者圍生兒不良結局的危險因素分析

3 討論

妊娠期糖尿病是威脅孕婦及圍生產兒健康的主要妊娠合并癥，經飲食、運動及藥物積極干預后，多數(shù)患者血糖水平能夠得到有效控制，可獲得良好的母兒結局，但有部分患者即使經治療后血糖控制良好，其發(fā)生不良妊娠結局的風險仍較高。本研究中，實驗組母體與圍生兒不良結局發(fā)生率均較對照組高，此與Kim et al[6]研究結果基本符合，證實了妊娠期糖尿病患者母嬰不良結局發(fā)生風險顯著增加。因此，尋找能夠有效評估妊娠期糖尿病母嬰結局的相關生物學指標以指導臨床工作對減少母嬰不良結局的發(fā)生很有必要。

本研究結果顯示，實驗組血清miR-15a表達水平較對照組高，提示妊娠期糖尿病患者血清miR-15a表達水平異常升高。miR-15a位于人染色體13q14，為miR重要類型，已有研究[7-8]表明，miR-15a在2型糖尿病、糖尿病性視網膜病變中表達異常。另有研究[9]表明，在高糖環(huán)境下，可刺激苗勒細胞過表達miR-15a，參與糖尿病發(fā)生、發(fā)展進程。劉林平 等[10]研究顯示，單純白內障患者血清中miR-15a表達水平低于2型糖尿病伴白內障者、非增生性糖尿病視網膜病變者、增生性糖尿病視網膜病變者，進一步說明miR-15a可能與糖尿病及其相關并發(fā)癥的發(fā)生有關。此外，有研究[11]顯示，miR-15a表達可對胰島素的分泌與敏感性產生一定的影響。miR-15a表達水平異常與糖尿病的發(fā)生存在一定的相關性，結合本研究結果，表明血清miR-15a表達水平可能參與了妊娠期糖尿病的發(fā)病進程。

另本研究結果表明，母體結局不良組與圍生兒結局不良組血清miR-15a表達水平分別高于母體結局良好組、圍生兒結局良好組，且多因素分析顯示血清miR-15a表達水平是妊娠期糖尿病母嬰不良結局的影響因素，提示血清miR-15a表達水平與妊娠期糖尿病母嬰不良結局的發(fā)生關系密切。相關研究[12]報道，部分miR與妊娠丟失密切相關；另有研究[13]指出，miR-222表達水平升高可引起妊娠期糖尿病患者新生兒早產、病理性黃疸，以上進一步說明miR可能與新生兒不良結局存在一定的關系。有研究[14]表明，miR-15a與糖尿病的發(fā)生相關，可影響血糖代謝與胰島素抵抗等。妊娠期糖尿病患者miR-15a表達水平升高，可影響母體血糖調節(jié)，促進妊娠期糖尿病進展，加重母體糖代謝紊亂，則可增加母嬰不良結局發(fā)生風險。此外，本研究中孕婦年齡、孕前體質量指數(shù)、不良孕產史、血糖控制情況亦是妊娠期糖尿病患者母嬰不良結局的影響因素，此可能是因高齡產婦生育能力下降，而孕前體質量指數(shù)過高易引起肥胖，加重糖脂代謝紊亂，另既往不良孕產史可增加其精神與心理壓力，此外，若患者血糖控制不佳，則母體長期高血糖環(huán)境可誘發(fā)不良妊娠結局。

綜上，妊娠期糖尿病患者血清miR-15a表達水平高于正常孕婦，母嬰不良妊娠結局發(fā)生率明顯增加，且血清miR-15a表達水平變化與妊娠期糖尿病母嬰不良妊娠結局的發(fā)生密切相關，可增加其發(fā)生風險。