劉萌 魏蓮花 林賦桂 李可可 劉東霞 楊雅迪 廖蓓 關(guān)曉雯

摘要：目的 研究ε-聚賴氨酸（ε-polylysine，ε-PL）對(duì)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）標(biāo)準(zhǔn)菌株USA300的抑菌作用及其機(jī)制。方法 依據(jù)CLSI微量肉湯稀釋法測(cè)定最低抑菌濃度（minimum inhibitory concentration， MIC）和最低殺菌濃度（minimum bactericidal concentration， MBC）；繪制24 h內(nèi)不同濃度ε-PL作用后USA300菌株時(shí)間-抑菌曲線；SYBR Green I/PI檢測(cè)ε-PL處理后USA300的生存情況；測(cè)定ε-PL處理后菌液電導(dǎo)率、胞外ATP含量、可溶性蛋白含量的變化；利用掃描電鏡（scanning electron microscopy，SEM）觀察ε-PL對(duì)USA300形態(tài)的影響。結(jié)果 ε-PL對(duì)USA300的MIC、MBC分別為5.12和10.24 mg/mL。ε-PL處理后細(xì)菌死/活比例，菌液電導(dǎo)率，胞外ATP含量，胞外可溶性蛋白含量均增加，表明菌膜破損；經(jīng)SEM進(jìn)一步確證。結(jié)論 ε-PL對(duì)USA300生長(zhǎng)有良好的抑制作用，且與ε-PL濃度呈正相關(guān)。ε-PL處理后細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)破壞、通透性改變，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物大量滲出，其抑菌機(jī)制可能與破壞細(xì)菌菌體結(jié)構(gòu)有關(guān)。

關(guān)鍵詞：ε-聚賴氨酸；USA300； 抑菌機(jī)制

中國(guó)分類號(hào)：R978.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

Antibacterial effect and mechanism of ε-polylysine against methicillin-resistant Staphylococcus aureus USA300

Liu Meng1， Wei Lian-hua2， Lin Fu-gui2， Li Ke-ke2， Liu Dong-xia3， Yang Ya-di3， Liao Bei3， and Guan Xiao-wen4

（1 NingXia Medical University， Yinchuan 750004; 2 Department of Clinical Laboratory， Gansu Provincial Hospital， Lanzhou 730000;

3 Lanzhou University， Lanzhou 730000; 4 Gansu University of Traditional Chinese Medical， Lanzhou 730000）

Abstract Objective To investigate the antibacterial activity and mechanism of ε-polylysine （ε-PL） against methicillin-resistant Staphylococcus aureus （MRSA） standard strain USA300. Methods Microbroth dilution was performed to determine the minimal inhibitory concentration （MIC） and the minimum bactericidal concentration （MBC） of ε-PL according to the CLSI document. The time-inhibition curve of USA300 strain was evaluated after the treatment with ε-PL at different concentrations within 24 h. SYBR Green I/PI was used to detect bacterial survival after ε-PL treatment. The changes of electrical conductivity， extracellular ATP content and soluble protein content were determined after ε-PL treatment. The effect of ε-PL on the morphology of USA300 was observed by scanning electron microscopy （SEM）. Results The MIC and MBC of ε-PL to USA300 were 5.12 and 10.24 mg/mL， respectively. The ratio of dead to alive， electric conductivity， extracellular ATP content and extracellular soluble protein content increased after ε-PL treatment，which indicated the rupture of USA300 and further confirmed by SEM. Conclusion ε-PL has a significant inhibitory effect on the growth of USA300， which was positively correlated with the drug concentration. After treatment of ε-PL， the structure of cell membrane was destroyed and the permeability of cell membrane was changed， resulting in a large amount of exudation of cell contents. Its antibacterial mechanism may be related to the destruction of bacterial cell structure.

Key words ε-polylysine; USA300; Antibacterial mechanism

金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus， S. aureus）是人類和動(dòng)物化膿感染中最常見(jiàn)的病原菌之一，可引起局部化膿感染，也可引起敗血癥和膿毒血癥等全身感染[1]。作為“ESKAPE”生物之一，S. aureus在世界范圍內(nèi)引發(fā)了越來(lái)越大的威脅，耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）是金黃色葡萄球菌引起的主要感染類型之一[2-3]。耐甲氧西林金黃色葡萄球菌的出現(xiàn)限制了抗生素的使用，給病原菌的清除和防治帶來(lái)巨大的困難和挑戰(zhàn)。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者致力于從天然抗菌肽中尋找抗菌藥物，研究表明，多種天然抗菌肽具有良好的抗菌活性。如ε-聚賴氨酸（ε-PL），ε-PL是一種天然的廣譜抗菌陽(yáng)離子多肽，最早從白色鏈霉菌的發(fā)酵液中發(fā)現(xiàn)，由25～35個(gè)賴氨酸殘基通過(guò)α-簇基和ε-氨基脫水縮合形成酰胺鍵連接而成，分子量通常為2.5～4.5 kDa[4]。2003年，美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局（Food and Drug Administration， FDA）將其批準(zhǔn)為新型天然食品防腐劑，作為安全多肽在食品中使用[5]。ε-PL憑借抗菌譜廣、耐熱、耐酸堿等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)于革蘭陰性菌、革蘭陽(yáng)性菌、真菌等具有良好的抑菌效果[6-8]，但ε-PL對(duì)MRSA的抑制作用及機(jī)制尚無(wú)基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。本研究以USA300（MRSA標(biāo)準(zhǔn)菌株）為試驗(yàn)菌株，探究ε-PL對(duì)其的抑菌作用及機(jī)制。

1 材料

1.1 菌株

USA300菌株由復(fù)旦大學(xué)仁濟(jì)醫(yī)院李敏教授惠贈(zèng)。

1.2 主要試劑

ε-聚賴氨酸（鄭州拜納佛生物工程股份有限公司），胰蛋白胨大豆培養(yǎng)基、ATP含量檢測(cè)試劑盒、BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（增強(qiáng)型）、SYBR Green I核酸染料（10000×）、PBS緩沖液、碘化丙啶（PI）均購(gòu)自索萊寶，氯化鉀（KCl）、二甲亞砜、無(wú)水乙醇均購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，鹽酸萬(wàn)古霉素、苯唑西林鈉、氯仿/三氯甲烷均購(gòu)自麥克林，2.5%戊二醛（Servicebio）。

1.3 主要儀器設(shè)備

酶標(biāo)分析儀RT-6500（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司），紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司），倒置熒光顯微鏡（Olympus），Scientz-IID超聲波細(xì)胞粉碎機(jī)（寧波新芝生物科技股份有限公司），立式全溫振蕩培養(yǎng)箱（上海旻泉儀器有限公司），離心機(jī)（Eppendrof），便攜式電導(dǎo)率儀（青島路博偉業(yè)環(huán)?？萍加邢薰荆?，壓力蒸汽滅菌器（山東博科生物產(chǎn)業(yè)有限公司），離子濺射儀MC1000（日本Hitachi公司），掃描電鏡SU8100（日本Hitachi公司），高速冷凍離心機(jī)（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司），BSC-1004 ll A2生物安全柜（蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司）。

2 方法

2.1 菌株保存及復(fù)蘇

接種環(huán)挑取-80℃冰箱中保存的USA300菌株，接種在TSA固體培養(yǎng)基上，37℃，恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)過(guò)夜。挑取單個(gè)菌落接種于新鮮的TSB液體培養(yǎng)基中，37℃，180 r/min，培養(yǎng)16 h到穩(wěn)定期，再次轉(zhuǎn)接于新鮮培養(yǎng)基，37℃，180 r/min，活化3 h培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，將菌液與滅菌后50%（體積分?jǐn)?shù)）的甘油1：1比例混合后，分裝保存在-80℃冰箱中。復(fù)蘇時(shí)將凍存的菌液解凍后以1‰（體積分?jǐn)?shù)）接種于TSB培養(yǎng)基中，37℃，180 r/min，培養(yǎng)16 h，備用。

2.2 MIC和MBC的測(cè)定[9]

依據(jù)CLSI文件[10]微量肉湯稀釋法測(cè)定MIC，將復(fù)蘇后菌液，1‰接種于新鮮培養(yǎng)基，37℃，180 r/min震蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，使用TSB培養(yǎng)基將活化后的菌液稀釋至5×106? CFU/mL。在TSB肉湯中制備ε-PL溶液，通過(guò)連續(xù)倍比稀釋獲得不同的亞抑菌濃度（0.32～163.84） mg/mL。96孔板每孔中加入菌懸液和ε-PL稀釋液孔各100 μL，同時(shí)設(shè)置生長(zhǎng)對(duì)照孔（不加ε-PL處理）和空白對(duì)照孔（培養(yǎng)基200 μL）。37℃下培養(yǎng)24 h，黑色背景下肉眼觀察未見(jiàn)菌落生長(zhǎng)的最小藥物濃度即為MIC。將MIC實(shí)驗(yàn)中MIC不同孔培養(yǎng)混合物涂布在血瓊脂平板上，37℃培養(yǎng)24 h后生長(zhǎng)菌落數(shù)≤5個(gè)的最小藥物濃度即為MBC[11]。

2.3 ε-PL對(duì)USA300生長(zhǎng)的影響[12]

將2.1所制備的USA300菌懸液按照2.2的方法處理樣本，將不同濃度的ε-PL加入菌懸液中，37℃，180 r/min震蕩培養(yǎng)24 h，每隔2 h吸取100 μL液體，加入96孔板中測(cè)定其600 nm處的吸光度值并繪制時(shí)間-抑菌曲線。每組試驗(yàn)平行重復(fù)3次。

2.4 SYBR Green I /PI檢測(cè)ε-PL作用后不同時(shí)間USA300菌株的生存率

按照“2.2”方法處理樣本。各取上述菌液1 mL于編號(hào)為1～4的無(wú)菌EP管中，分別加入ε-PL（終質(zhì)量濃度為MBC）、萬(wàn)古霉素（終質(zhì)量濃度為Cmax=25 μg/mL）[13]、苯唑西林（終質(zhì)量濃度為Cmax=63 μg/mL）[13]、等量無(wú)菌水，2～4號(hào)分別為陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照、空白對(duì)照。37℃，180 r/min震蕩培養(yǎng)7 d。分別在3、5和7 d從相應(yīng)的EP管中吸取100 μL，5000 r/min，離心5 min，棄上清液。PBS（pH 7.4）洗滌2次，等體積PBS重懸混勻。金黃色葡萄球菌的染色染料是通過(guò)SYBR Green I與PI （1：3）在100 μL蒸餾水中混合制成的[14]。將SYBR Green I/ PI 染色混合物（10 μL）添加到每100 μL的每個(gè)樣品中。將樣品渦旋混勻，室溫條件，黑暗孵育30 min。載玻片上滴加6～7 μL樣品，熒光顯微鏡下觀察并隨機(jī)選取視野拍攝圖像。

2.5 電導(dǎo)率測(cè)定[15]

按照2.2的方法處理樣本。將稀釋的細(xì)菌懸液分成5個(gè)燒瓶，向每個(gè)燒瓶中加入不同濃度的ε-PL：1/4 MIC、1/2 MIC 、1×MIC、2×MIC，設(shè)置空白對(duì)照組（不加ε-PL處理）。37℃振蕩培養(yǎng)24 h，每隔4 h分別吸取5 mL培養(yǎng)液，5000 r/min 離心10 min，取上清液并用電導(dǎo)率儀（測(cè)定前經(jīng)KCI校準(zhǔn)）測(cè)定其電導(dǎo)率。 每組試驗(yàn)平行重復(fù)3次。

2.6 胞外ATP測(cè)定[16]

按照“2.2”的方法處理樣本。將稀釋的細(xì)菌懸液分成3個(gè)試管，分別加入不同濃度的ε-PL：0、1×MIC、2×MIC，分別在4、8和16 h取樣。實(shí)驗(yàn)具體操作按照ATP含量檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)所述步驟進(jìn)行。每組試驗(yàn)平行重復(fù)3次。

2.7 胞外可溶性蛋白含量測(cè)定[17]

按照“2.2”方法處理樣本。將稀釋的細(xì)菌懸液分成3個(gè)試管，分別加入不同濃度的ε-PL：0、1×MIC、2×MIC。分別在4、8和16 h取樣，5000 r/min離心10 min，PBS洗滌3次并重懸，將重懸后的菌體進(jìn)行低溫超聲破碎（功率200 W，超聲2 s，停1 s，3 min）后，5000 r/min離心10 min，取上清液，按照BCA蛋白濃度測(cè)定試劑盒（增強(qiáng)型）說(shuō)明書(shū)介紹的實(shí)驗(yàn)步驟測(cè)定樣品的蛋白濃度，根據(jù)蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線及加樣體積計(jì)算其含量。

2.8 掃描電鏡觀察ε-PL處理對(duì)USA300形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響[18]

按照“2.2”方法處理樣本。3000 r/min，離心10 min，用PBS（pH 7.4）洗滌3次，棄上清液，加入ε-PL（終質(zhì)量濃度為10.24 mg/mL），設(shè)置空白對(duì)照組（未加ε-PL處理）。37℃處理12 h，以5000 r/min離心5 min，PBS洗滌3次，除凈上清液，4℃條件下使用2.5%戊二醛固定12 h。2500 r/min離心4 min，0.1 mol/LPBS清洗10 min，此步驟重復(fù)3次。依次使用50%、60%、70%、80%、90%和100%濃度的乙醇對(duì)細(xì)胞進(jìn)行脫水，最后用叔丁醇替代乙醇。將樣品固定、風(fēng)干，于離子濺射儀中噴金。掃描電鏡觀察并隨機(jī)選取視野拍照。

2.9 數(shù)據(jù)處理

所有試驗(yàn)均平行重復(fù)3次，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用IBM SPSS Statistics 26軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，當(dāng)P＜0.05時(shí)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，使用GrandPad Prism軟件進(jìn)行繪圖。

3 結(jié)果與分析

3.1 最小抑菌濃度（MIC）、最低殺菌濃度（MBC）

由表1可知，ε-PL對(duì)USA300的MIC為5.12 mg/mL。

從肉眼可見(jiàn)清晰的微孔中移取菌懸液的涂布結(jié)果（表2）可知，ε-PL對(duì)USA300的MBC為10.24 mg/mL。

3.2 ε-PL對(duì)USA300對(duì)生長(zhǎng)的影響

由圖1知，空白對(duì)照組細(xì)菌生長(zhǎng)呈典型的“S”型生長(zhǎng)，1/4 MIC ε-PL（P<0.05）、1/2 MIC ε-PL（P<0.001）、MIC ε-PL（P<0.0001）組細(xì)菌A值增長(zhǎng)的幅度較空白對(duì)照組明顯減少，2×MIC ε-PL組細(xì)菌的吸光度值幾乎沒(méi)有變化（P<0.0001）。

3.3 SYBR Green I /PI檢測(cè) ε-PL作用后不同時(shí)間USA300菌株的生存率

SYBR Green I /PI檢測(cè)可以評(píng)估各種細(xì)菌病原體的生存能力。SYBR Green I是一種滲透性染料，可將所有活細(xì)胞染成綠色，而PI是一種非滲透性染料，僅將死亡或細(xì)胞膜受損的細(xì)胞染成紅色[14]。因此，易于通過(guò)熒光顯微鏡的綠色/紅色熒光比率代表細(xì)菌種群的生存能力。由圖2可知，對(duì)照組（圖2A、圖2E、圖2I）USA300菌體細(xì)胞完全存活；陽(yáng)性對(duì)照組（圖2B、圖2F和圖2J）隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，USA300的生存率逐漸下降，培養(yǎng)至第5天時(shí)（圖2F），鏡下紅色熒光比率增加，大部分菌體死亡，部分菌體裂解，培養(yǎng)至第7天時(shí)（圖2J），鏡下紅色熒光少數(shù)可見(jiàn)，幾乎全部菌體裂解、死亡；陰性對(duì)照組初期（圖2C）對(duì)USA300有一部分殺菌作用，培養(yǎng)至第5天以后（圖2G和圖2K）幾乎完全耐藥，USA300菌體細(xì)胞基本存活；ε-PL處理后（圖2D、圖2H和圖2L）USA300的生存率隨處理時(shí)間的延長(zhǎng)生存率逐漸下降。

3.4 ε-PL對(duì)USA300菌液電導(dǎo)率的影響

由圖3結(jié)果可知，藥物濃度為MIC和2×MIC組的電導(dǎo)率相對(duì)于對(duì)照組，有顯著性差異（P <0.05）。

3.5 ε-PL對(duì)USA300胞外ATP的影響

由圖4知，ε-PL處理初期，對(duì)照組和細(xì)菌組的ATP含量無(wú)明顯差別（P>0.05），當(dāng)藥物作用8 h之后，與對(duì)照組相比，藥物組胞外可溶性蛋白含量增加（P<0.05）。

3.6 ε-PL對(duì)USA300胞外可溶性蛋白含量的影響

根據(jù)蛋白濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線（y=1.8091x＋0.0558，R2=0.9906）以及加樣量，計(jì)算得出各時(shí)間點(diǎn)對(duì)照組與1×MIC及2×MIC藥物組USA300可溶性蛋白的含量，見(jiàn)表3和圖5。當(dāng)藥物作用8 h之后，與對(duì)照組相比，藥物組胞外可溶性蛋白含量有顯著性差異（P<0.05）。

3.7 ε-PL對(duì)USA300菌體細(xì)胞形態(tài)的影響

掃描電鏡可以對(duì)經(jīng)ε-PL處理后的USA300菌體細(xì)胞進(jìn)行更直觀的形態(tài)觀察。由圖可知，空白對(duì)照組（圖6A）USA300菌體細(xì)胞表面光滑、形態(tài)飽滿且呈典型葡萄狀緊密排列、大小均一，細(xì)胞膜完整，無(wú)表面損傷。實(shí)驗(yàn)組（圖6B）菌體形態(tài)結(jié)構(gòu)遭到破壞，菌體皺縮變形，表面粗糙。由此可見(jiàn)，ε-PL可以破壞USA300菌體形態(tài)結(jié)構(gòu)。

4 討論

近年來(lái)研究報(bào)道的抗菌藥物，對(duì)其作用機(jī)理的研究多集中在藥物對(duì)菌體細(xì)胞結(jié)構(gòu)及代謝過(guò)程的影響上。包括破壞細(xì)胞壁的結(jié)構(gòu)、改變細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性、影響能量代謝、干擾蛋白質(zhì)合成的表達(dá)及核酸合成過(guò)程等。MRSA除對(duì)甲氧西林耐藥外，對(duì)其他所有與甲氧西林相同結(jié)構(gòu)的β-內(nèi)酰胺類和頭孢類抗生素均耐藥，MRSA還可通過(guò)改變抗生素作用靶位，產(chǎn)生修飾酶，降低膜通透性等不同機(jī)制[19]。

ε-PL具有較高的親水性、無(wú)毒性和可降解等特點(diǎn)，且具有廣泛抗菌活性。前期研究結(jié)果表明，ε-PL對(duì)金黃色葡萄球菌有一定的抑菌作用，因此推測(cè)其對(duì)MRSA也可能有一定抑菌效果[20-21]。本研究首先通過(guò)微量肉湯稀釋法測(cè)定了USA300的MIC值，ε-PL濃度為5.12 mg/mL時(shí)，黑色背景下，肉眼可見(jiàn)菌懸液清晰，而2.56 mg/mL ε-PL菌液渾濁，有細(xì)菌生長(zhǎng)；試驗(yàn)結(jié)果表明5.12 mg/mL ε-PL可以抑制USA300的生長(zhǎng)。菌懸液涂布法試驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)10.24 mg/mL ε-PL對(duì)USA300有一定的殺菌抑制作用，因此可以確定其MIC和MBC值分別為5.12和10.24 mg/mL 。為進(jìn)一步分析ε-PL對(duì)USA300的抑菌活性，繪制了不同濃度下ε-PL的生長(zhǎng)曲線，由生長(zhǎng)曲線得出不同濃度的ε-PL對(duì)USA 300的生長(zhǎng)表現(xiàn)出不同程度的抑制作用，即呈濃度依賴性?？瞻讓?duì)照組細(xì)菌生長(zhǎng)呈典型的“S”型生長(zhǎng)，說(shuō)明細(xì)菌生長(zhǎng)狀況良好。2×MIC ε-PL組細(xì)菌其A600值幾乎沒(méi)有變化，表示ε-PL完全抑制了USA300的生長(zhǎng)。因此，從研究結(jié)果可以得出ε-PL可以有效減慢甚至完全抑制USA300的生長(zhǎng)的結(jié)論。此外，SYBR Green I /PI檢測(cè)試驗(yàn)表明ε-PL對(duì)USA300的生存率有影響，對(duì)其菌體細(xì)胞有部分殺傷作用，但作用效果弱于萬(wàn)古霉素處理效果。

細(xì)菌質(zhì)膜為小離子如Na+和K+等的通過(guò)提供了滲透性屏障，電解質(zhì)滲漏，電導(dǎo)率增加，表明滲透屏障的破壞。此外，維持離子穩(wěn)態(tài)是維持能量狀態(tài)、溶質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝調(diào)節(jié)、控制細(xì)胞運(yùn)動(dòng)等的組成部分，即使膜結(jié)構(gòu)相對(duì)較小的變化也會(huì)有害地影響細(xì)胞代謝并導(dǎo)致細(xì)菌死亡[22]。不同濃度的ε-PL處理后對(duì)細(xì)菌細(xì)胞膜的完整性有不同程度的影響，隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng)和ε-PL濃度的增加，菌懸液的電導(dǎo)率不斷增加，說(shuō)明細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性會(huì)相應(yīng)增加，導(dǎo)致電解質(zhì)的滲漏，從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡。

蛋白質(zhì)是有機(jī)體生命活動(dòng)的物質(zhì)基礎(chǔ)，本研究通過(guò)檢測(cè)USA300可溶性蛋白含量的變化，發(fā)現(xiàn)ε-PL可以抑制USA300可溶性蛋白的表達(dá)，蛋白質(zhì)作為生命活動(dòng)的主要承擔(dān)者，其合成量的降低對(duì)菌體細(xì)胞的生理生化功能將產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。這些結(jié)果表明ε-PL能夠?qū)?xì)胞質(zhì)膜造成不可逆的損傷，并通過(guò)破壞細(xì)胞膜而降低細(xì)胞可溶性蛋白的含量，蛋白質(zhì)是微生物細(xì)胞的大分子，是微生物細(xì)胞的關(guān)鍵結(jié)構(gòu)成分，在暴露于大氣中后，蛋白質(zhì)從微生物細(xì)胞中釋放出來(lái)。由于細(xì)胞質(zhì)膜的不可逆損傷，蛋白質(zhì)從處理過(guò)的細(xì)菌中迅速損失，從而導(dǎo)致菌體細(xì)胞死亡。同時(shí)，葡萄糖作為金黃色葡萄球菌最常見(jiàn)的能量代謝底物，在無(wú)氧條件下，經(jīng)糖酵解過(guò)程釋放少量ATP。ATP的代謝水平間接反映了有機(jī)體生命活動(dòng)的狀態(tài)。當(dāng)細(xì)菌在遭受到藥物作用時(shí)，通常會(huì)使其生物膜破損或流動(dòng)性降低，從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)容物溢出。ε-PL處理初期，推測(cè)可能是細(xì)菌本身對(duì)藥物有一定的適應(yīng)期，因此細(xì)菌本身細(xì)胞壁和細(xì)胞膜的組成和結(jié)構(gòu)特性等對(duì)藥物表現(xiàn)出一定的耐受性；ε-PL作用8 h以后，藥物組（1×MIC及2×MIC）ATP胞外含量增加，說(shuō)明ε-PL可以改變細(xì)胞膜的通透性，從而增加胞外ATP含量，證實(shí)了其對(duì)USA300細(xì)胞膜的破壞作用。經(jīng)掃描電鏡觀察，進(jìn)一步驗(yàn)證了ε-PL對(duì)USA300的作用。

綜上所述，ε-PL對(duì)USA300抑菌機(jī)制可能與破壞細(xì)菌菌體結(jié)構(gòu)有關(guān)，其他抑菌機(jī)制還需要進(jìn)一步研究。

參 考 文 獻(xiàn)

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