賀澳門，徐莎莎，何彥橋，陳曉衛(wèi)，陳小飛

（塔里木大學(xué)農(nóng)學(xué)院/塔里木大學(xué)南疆有害生物綜合治理兵團(tuán)重點(diǎn)實(shí)驗室，新疆阿拉 843300）

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試菌種。供試菌株（YALAR-1）分離于新疆阿拉爾市榆葉梅葉斑病病害樣品，保存于塔里木大學(xué)農(nóng)業(yè)部阿拉爾作物有害生物科學(xué)觀測試驗站。

1.1.2 供試殺菌劑。毒力測定供試藥劑及溶劑：97%氟啶胺原藥（WP），南京幫諾生物科技有限公司；99%百菌清原藥（WP），合肥艾美爾生物藥業(yè)有限公司；99%甲基硫菌靈（WP），合肥艾美爾生物藥業(yè)有限公司；99%戊唑醇原藥(WP)，合肥艾美爾生物藥業(yè)有限公司；99%多菌靈原藥（WP），合肥艾美爾生物藥業(yè)有限公司；98.5%利福平原藥（WP），湖北九洲康達(dá)生物科技有限公司；99%硫酸新霉素（WP），湖北博藍(lán)化工有限公司；99%氯霉素（WP），陜西生物科技有限公司；36%乙酸，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司；無水乙醇，天津市鑫鉑特化工有限公司。

田間藥效試驗供試藥劑：500g/L 氟啶胺（SC），陜西華戎凱威生物有限公司；430g/L 戊唑醇（SC），上海升聯(lián)化工有限公司；75%甲基硫菌靈（WP），陜西億農(nóng)高科藥業(yè)有限公司；500g/L 百菌清（WP）；50%多菌靈（WP），上海升聯(lián)化工有限公司。

1.2 試驗設(shè)計

1.2.1 室內(nèi)毒力測定。采用菌絲生長速率法[4]測定殺菌劑對病原菌的生長抑制作用。在預(yù)試驗基礎(chǔ)上，選取5個濃度梯度。在無菌操作環(huán)境下，接種直徑為0.5cm 的菌餅置于含藥平板上，每個濃度重復(fù)3 次，另設(shè)不加藥劑的培養(yǎng)基為空白對照。于28℃全光照中培養(yǎng)7d。采用十字交叉法測量菌落直徑，計算各藥劑抑制率并得出EC50 值。

1.2.2 含藥培養(yǎng)基的配置。將8 種藥劑原藥溶于相應(yīng)溶劑（甲醇、乙醇、乙酸）制成母液（母液濃度為1g/L)，用槍頭吸取一定體積的母液加入冷卻至50℃左右的PDA培養(yǎng)基中使母液濃度稀釋，稀釋后PDA 培養(yǎng)基定容成50mL，搖晃使其充分溶解，最終配制成5 個濃度梯度的含藥培養(yǎng)基?？瞻捉M中加入相應(yīng)等量的溶劑作為對照[5]，對照也定容至50mL。最終含藥平板的濃度梯度為氟啶胺（1、2、4、6、8mg/L）；甲基硫菌靈（5、10、25、35、50mg/L）、百菌清（5、10、25、35、50mg/L）；多菌靈（2、5、10、20、40mg/L）；利福平（200、250、300、350、400mg/L）；硫酸新霉素（25、50、100、200、400mg/L）、氯霉素（25、50、100、200、400mg/L）；戊唑醇（1、2、5、10、20mg/L）。

1.2.3 大田試驗。藥效試驗選擇在阿拉爾市榆葉梅綠化帶（80°30′E、40°22′N）進(jìn)行，于榆葉梅葉斑病始發(fā)期（2021 年5 月29 日）開始開展藥效試驗。

選取EC50 值小于100mg/L 的藥劑進(jìn)行田間藥效試驗。先進(jìn)行預(yù)試驗確定藥劑稀釋區(qū)間，將藥劑設(shè)置為3 個梯度，每個濃度重復(fù)3 次，1 組濃度設(shè)為1 小區(qū)，另設(shè)置1 個施用清水的對照。每隔1 周施用1 次藥劑，施用藥劑時天氣晴朗、無沙塵等其他不良?xì)夂蛴绊懀┧? 次。第3 次施藥14d 達(dá)到發(fā)病盛期后進(jìn)行調(diào)查。

調(diào)查方法為各小區(qū)每株樹選取5 個方位的枝條，調(diào)查總?cè)~片數(shù)及病葉數(shù)，發(fā)病葉數(shù)與總?cè)~數(shù)之比為病害率，由于榆葉梅葉斑病未有病情指數(shù)等級，故大田試驗防效采用病害率之比進(jìn)行計算進(jìn)而得出防效，試驗藥劑濃度梯度及試驗有效含量見表1。

表1 5 種藥劑稀釋倍數(shù)及推薦稀釋倍數(shù)

1.3 數(shù)據(jù)處理

采用數(shù)據(jù)處理軟件ⅠBM SPSS Statistics19 進(jìn)行數(shù)據(jù)處理分析，計算EC50 值及相關(guān)參數(shù)，大田試驗選用Duncan 氏新復(fù)極差法進(jìn)行差異顯著性比較。

相關(guān)計算公式：

抑菌率（%）＝（對照菌落純生長量-處理菌落純生長量）/對照菌落純生長量×100[5]

純生長量=菌落平均直徑-菌餅直徑

病害率（%）=病葉數(shù)/總?cè)~片數(shù)×100

防效（%）=（對照病害率-處理病葉率）/對照病葉率×100

2 結(jié)果與分析

2.1 8 種殺菌劑對榆葉梅葉斑病的室內(nèi)毒力測定

2.1.1 藥劑對榆葉梅葉斑病病原菌菌絲生長作用。28℃全光照培養(yǎng)7d 后，氟啶胺、戊唑醇、多菌靈的處理對榆葉梅葉斑病病菌菌絲生長均有較高的抑制效果，其表現(xiàn)在隨著處理濃度的增加，菌絲的生長速度減弱；甲基硫菌靈、百菌清、利福平抑制效果次之；而硫酸新霉素、氯霉素對菌絲的抑制效果不明顯（見圖1）。

圖1 對菌絲抑制效果較好藥劑（a：氟啶胺；b：多菌靈；c：Tebuconazole）

2.1.2 藥劑對榆葉梅葉斑病毒力。由表2 可知，氟啶胺、戊唑醇對葉斑病病菌EC50 值最小，毒力最高，分別為0.717mg/L、2.060mg/L；其次為多菌靈、甲基硫菌靈、百菌清，EC50 值分別為9.992mg/L、18.571mg/L、79.357mg/L。而抗生素對病原菌毒力非常小，利福平、硫酸新霉素、氯霉素 EC50 值分別為 318.450mg/L、3301.010mg/L、3847.840mg/L。

表2 8 種藥劑對榆葉梅葉斑病病菌的毒力作用

2.2 田間藥效試驗

2021 年5 月29 日進(jìn)行第1 次噴霧，后2 次試驗時間分別是6 月5 日、6 月12 日，6 月26 日進(jìn)行病害數(shù)據(jù)調(diào)查。第1 次施藥時病害發(fā)病率在3%左右，第3 次施藥后已出現(xiàn)明顯發(fā)病癥狀，調(diào)查時發(fā)病率較高。由表3可知，500g/L 氟啶胺懸浮劑稀釋2000 倍防效較好，為81.75%，其次為430/L 戊唑醇懸浮劑稀釋5000 倍液，防效達(dá)到75.25%。多菌靈、百菌清、甲基硫菌靈對榆葉梅葉斑病均具有一定的效果，3 種藥劑防效在35%～65%。

表3 5 種藥劑有效含量及各濃度防效（%）

3 討論與結(jié)論

3.1 結(jié)論

供試8 種藥劑中氟啶胺、戊唑醇藥劑對榆葉梅葉斑病病菌抑制效果最好，多菌靈、甲基硫菌靈、百菌清藥劑對病菌抑制效果次之，而利福平、硫酸新霉素、氯霉素對病菌的抑制效果不明顯。田間試驗結(jié)果表明，500g/L 氟啶胺懸浮劑、430g/L 戊唑醇懸浮劑防治效果最佳，分別為81.75%和75.25%。50%多菌靈粉劑、75%甲基硫菌靈粉劑、500g/L 百菌清粉劑防治效果次之，防效為35%～65%。

3.2 討論

采用菌絲生長速率法測定了8 種藥劑對榆葉梅葉斑病菌的室內(nèi)毒力，結(jié)果表明，8 種藥劑中的5 種殺菌劑均對病原菌顯示出了一定的抑制作用，其中氟啶胺、戊唑醇毒力最高，其次是多菌靈、甲基硫菌靈和百菌清。為了結(jié)合生物防治開展病害防控，本研究試圖從3 種常用抗生素（利福平、硫酸新霉素、氯霉素）中篩選出能有效抑制病菌的藥劑，但是毒力測定表明，這3 種抗生素對病菌具有較弱抑制作用。因此，病害防控過程中應(yīng)避免使用這3 種抗生素藥劑，以免造成藥液浪費(fèi)和環(huán)境污染。

鏈格孢屬真菌是有絲分裂孢子真菌類群絲孢綱絲孢目，是引起植物病害的重要真菌類群之一。生產(chǎn)上鏈格孢屬真菌病害多為葉斑類病害，防治該類病害的生物農(nóng)藥普遍存在見效慢、穩(wěn)定性差等問題[5]。榆葉梅葉斑病也是由鏈格孢侵染所致，同樣存在運(yùn)用抗生素類藥劑防治病害效果不明顯的問題，因此當(dāng)前仍然以殺菌劑為主要防治藥劑[6]。為了有效控制病害的發(fā)生與發(fā)展，開展病害的綜合防控是必由之路，今后還應(yīng)大力開展其它類型生物農(nóng)藥的篩選研究[7]。

保護(hù)性殺菌劑與內(nèi)吸性殺菌劑的作用方式各不相同，保護(hù)性殺菌劑一般不具有內(nèi)吸性，對于已經(jīng)侵染的病斑無治療作用。而內(nèi)吸性殺菌具有內(nèi)吸傳導(dǎo)作用，能夠?qū)η秩境晒Φ牟【纬梢种谱饔?，因此具有一定治療效果。因此，在開展病害防治時，應(yīng)結(jié)合兩者的優(yōu)點(diǎn)，適時施藥，輪換使用。本研究表明，氟啶胺、戊唑醇防治榆葉梅葉斑病效果最好，可以作為生產(chǎn)中開展病害防治的理想藥劑。但是長期大量施用單一農(nóng)藥，容易使病菌產(chǎn)生抗藥性，若將2 種藥劑科學(xué)混配，又能有效延緩抗藥性的產(chǎn)生。本研究中氟啶胺、戊唑醇與其它的藥劑混配是否具有增效作用，能否在生產(chǎn)中提高防效，還有待進(jìn)一步研究。

本試驗中氟啶胺、百菌清均為保護(hù)性殺菌劑，應(yīng)該在病害發(fā)生之前噴藥保護(hù)樹體，而其它藥劑均為內(nèi)吸性殺菌劑，應(yīng)該在發(fā)病初期噴霧防治[8]。試驗作為一個年度榆葉梅葉斑病防控試驗，田間試驗可能受年份及區(qū)域環(huán)境因素影響，后續(xù)可擴(kuò)大研究區(qū)域，選擇具有代表性的環(huán)境驗證試驗等，以降低氣象因素及環(huán)境條件對試驗數(shù)據(jù)及防效的影響[9-10]。