隋利強 王建 徐惠龍 *

(1.福建中醫(yī)藥大學，福建 福州 350122;2.濟寧市食品藥品檢驗檢測研究院，山東 濟寧 272071)

橘紅為蕓香科植物橘(CitrusreticulataBlanco)的外層干燥果皮，是臨床常用中藥，味辛，性溫，具有理氣寬中，燥濕化痰，散寒的功能，臨床常用于慢性支氣管炎，百日咳，非酒精性脂肪肝等[1-4]。橘紅常用生橘紅，《中華人民共和國藥典》(2015)版收載橘紅[5]，《福建省中藥飲片炮制規(guī)范》中收載橘紅外還收載蜜橘紅飲片，該飲片為地方特色飲片，橘紅蜜炙后可加強潤肺止咳的功效[6]。

橘紅主要含有揮發(fā)油和黃酮類成分，黃酮類成分主要以橙皮苷為代表[7]，揮發(fā)油類成分對胃腸道有溫和刺激作用，可促進消化液的分泌，排除腸管內(nèi)積氣，增加食欲[8]。橘紅蜜炙過程由于受熱，溫度較高，會影響揮發(fā)油成分的含量和組成，預實驗結果顯示，橘紅蜜炙前后揮發(fā)油含量和顏色都有明顯變化。目前橘紅的研究文獻較少，未見蜜橘紅相關文獻報道。故通過水蒸氣蒸餾法提取橘紅和蜜橘紅揮發(fā)油，結合GC-MS分析，探討橘紅蜜炙過程揮發(fā)性成分的變化，為蜜橘紅的炮制原理研究提供參考。

1 儀器與試藥

1.1儀器 GC×GC HRT plus全二維氣相色譜-高分辨飛行時間質譜聯(lián)用儀(美國LECO公司)。

1.2試藥 橘紅飲片(161104881，康美藥業(yè)股份有限公司)；蜂蜜(2016111901，福建省神蜂科技開發(fā)有限公司)。

2 方法

2.1炮制飲片 生橘紅飲片中加入適量稀釋過的煉蜜中，拌勻，悶透，放于炒藥鍋中，用文火炒至不黏手，顏色加深，取出，放涼。

2.2揮發(fā)性成分提取 精密稱取橘紅和蜜橘紅粗粉各100 g，用揮發(fā)油提取器以水蒸氣蒸餾法提取后揮發(fā)油后加無水硫酸鈉脫水,密閉保存。

2.3GC-MS分析 GC-MS條件[9-16]：DB-5MS石英彈性毛細管柱，30 m×0.25 mm×0.25 μm；載氣為He；進樣口溫度250 ℃；不采用分流進樣，程序升溫:40 ℃的溫度保持3 min，再以4.0 ℃·min-1的速度升溫至250 ℃，保持5 min；柱流量1 mL·min-1，解析4 min。電離方式EI；電子能量70 Ev；離子源230 ℃；接口230 ℃；溶劑延遲時間為3.0 min；質量掃描范圍m/z 45～550。

3 結果

按上述方法分析收集的5種蜜炙中藥揮發(fā)性成分，總離子流圖見圖1。

圖1 橘紅和蜜橘紅揮發(fā)性成分總離子流圖

通過GC-MS分析，并根據(jù)NIST11質譜數(shù)據(jù)庫對比，確定了其化合物的組成，并用峰面積的歸一法計算其相對百分含量，結果見表1。

表1 蜂蜜煉制前后主要揮發(fā)性成分測定結果

續(xù)表1 蜂蜜煉制前后主要揮發(fā)性成分測定結果

GC-MS結果顯示，橘紅揮發(fā)性成分主要為烷類、酯類、醛類、酮類、烯類等。其中烯類成分占較大比例，如香橙烯、γ-欖香烯、α-石竹烯、β-蓽澄茄烯、α-瑟林烯等。橘紅、蜜橘紅中共檢測到揮發(fā)性53種，橘紅獨有成分9種，蜜橘紅獨有成分12種，兩者共有成分32種，共有成分中27種成分炮制后相對含量升高，5種成分炮制后相對含量降低。GC-MS結果用直方圖表示如下：

圖2 橘紅、蜜橘紅主要揮發(fā)性成分分析直方圖

4 討論

本文通過水蒸氣蒸餾法提取橘紅和蜜橘紅的揮發(fā)油，結合GC-MS對揮發(fā)油進行分析。實驗過程中觀察到，橘紅蜜炙前后揮發(fā)油含量有明顯變化，生橘紅揮發(fā)油含量為1.2%，蜜炙橘紅揮發(fā)油含量為1%，該結果可能與蜜炙過程揮發(fā)性成分散失有關，此外，橘紅蜜炙后揮發(fā)油的顏色較橘紅明顯加深。除了揮發(fā)油的含量和顏色變化外，橘紅在蜜炙過程中，揮發(fā)性成分的種類和相對百分含量也發(fā)生了明顯變化，蜜炙過程，部分揮發(fā)性成分含量降低，部分揮發(fā)性成分含量升高，同時出現(xiàn)部分新增化合物，推測該現(xiàn)象與橘紅蜜炙過程的輔料蜂蜜和加熱炮制有關，蜜炙橘紅揮發(fā)油中含有少量蜂蜜中的揮發(fā)性成分，同時，橘紅蜜炙過程，揮發(fā)性成分在加熱時中出現(xiàn)揮發(fā)散失和分解。此外，橘紅蜜炙前后揮發(fā)油的氣味也有明顯差異，該差異可能與揮發(fā)油中的芳香類物質變化有關。

橘紅蜜炙后，揮發(fā)油中出現(xiàn)新增成分12種，如α-蒎烯、香樹烯、乙酸香葉酯、左旋香芹酮等。另有28種成分相對含量明顯增加，如芳樟醇、α-石竹烯、α-松油醇、香芹酚、β-欖香烯、δ-蓽澄茄烯等。其中，α-蒎烯有明顯的鎮(zhèn)咳和祛痰作用,并有抗真菌作用,且對白色念珠菌的生物合成有明顯的抑制作用,從而起到殺菌作用，α-石竹烯具有一定平喘作用,為艾葉揮發(fā)油治療老年慢性支氣管炎的有效成分之一[17]，橘紅蜜炙后α-石竹烯相對含量由0.687%增加到2.067%。此外，β-欖香烯對多種癌細胞具有抑制活性[18-19]，芳樟醇是香水、護理產(chǎn)品中使用頻率最高的香料，具有鎮(zhèn)痛、抗焦慮、鎮(zhèn)催眠、抗炎、抗腫瘤、抗菌等藥理活性[20]。推測橘紅蜜炙增強止咳、化痰作用與上述藥效成分含量增加有關。

本文中GC-MS分析結果中所顯示的橘紅蜜炙過程產(chǎn)生的新增成分，有兩種可能，一種為橘紅蜜炙過程揮發(fā)性成分在加熱過程中發(fā)生分解和轉化或者與輔料蜂蜜加熱有關，另一種可能為生橘紅中也存在該類成分，但是含量過低，無法檢測到，蜜炙后該成分含量升高，可以被檢測到。無論哪一種情況，都說明橘紅蜜炙過程中，會產(chǎn)生該成分。所以將該類成分歸為橘紅蜜炙過程新增成分。

本文通過GC-MS分析了橘紅蜜炙前后揮發(fā)性成分的變化，結果顯示橘紅蜜炙過程多個止咳、化痰藥效相關成分含量增加，該結果可為橘紅蜜炙增效原理研究提供參考。蜜炙橘紅為福建地區(qū)特色飲片，通過橘紅蜜炙過程揮發(fā)性成分變化，可為蜜炙橘紅炮制原理研究奠定基礎。今后可結合橘紅中其他藥效成分如橙皮苷等，對橘紅蜜炙過程藥效成分變化進行深入分析，并結合藥效學研究，進一步探討橘紅蜜炙增效的炮制原理。