馬婧 鄭梓揚(yáng)

（1.漳州衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院藥學(xué)系，福建 漳州 363000；2.莆田市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，福建 莆田 351100）

復(fù)方克力乳膏是由氯霉素、醋酸曲安奈德和克拉霉素組成的復(fù)方外用乳膏，臨床主要用于過(guò)敏性皮炎、神經(jīng)性皮炎、濕疹等，有抗真菌、抗過(guò)敏、消炎及止癢作用。為了更好地控制其產(chǎn)品質(zhì)量，通過(guò)實(shí)驗(yàn)，確定并建立HPLC 法測(cè)定其氯霉素和醋酸曲安奈德等主要成分含量的方法，從而進(jìn)一步有效控制該制劑的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

LC-2030C3D 攜帶PDA 檢測(cè)器（日本島津公司）；XPE-206DR 電子天平（梅特勒托利多儀器有限責(zé)任公司）；甲醇為色譜純；水為超純水；乙醚為色譜純。對(duì)照品：醋酸曲安奈德（批號(hào)100125-201406）、氯霉素（批號(hào)130555-201704）均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；復(fù)方克力乳膏（某市皮防院制劑）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件色譜柱：Agilent ZORBAXSB-C18（250 mm×4.6 mm，5μm），流動(dòng)相：甲醇—水—乙醚（64∶34∶2），檢測(cè)波長(zhǎng)：240 nm，柱溫：30 ℃，流速：1.0 mL·min-1，進(jìn)樣量：10μL。

2.2 溶液的制備對(duì)照品溶液：精密稱(chēng)取氯霉素和醋酸曲安奈德對(duì)照品約200.10 mg 和15.06 mg，用甲醇配制成混合對(duì)照品儲(chǔ)備液，濃度為含氯霉素約4.002 mg·mL-1，含醋酸曲安奈德約301.2μg·mL-1。精密量取上述混合對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL，用甲醇配制氯霉素濃度為200.1μg·mL-1、醋酸曲安奈德濃度為15.06μg·mL-1的混合對(duì)照溶液。供試品溶液：精確稱(chēng)取新制備的復(fù)方克力乳膏約2.5 g，置50 mL 量瓶中，加入甲醇30 mL，80 ℃水浴中振蕩20 min，待基質(zhì)充分溶解后，冷卻至室溫，用甲醇定容，冰浴2 h，迅速濾過(guò)，取續(xù)濾液作為樣品供試液。

2.3 陰性干擾試驗(yàn)按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件，測(cè)得陰性對(duì)照品溶液、對(duì)照品溶液和供試品溶液的色譜圖見(jiàn)圖1～圖3。

圖1 對(duì)照品溶液

圖2 供試品溶液

圖3 陰性對(duì)照溶液

可見(jiàn)，所測(cè)樣品中其他成分對(duì)氯霉素和醋酸曲安奈德的測(cè)定無(wú)干擾。氯霉素和醋酸曲安奈德兩峰的理論板數(shù)均不低于3000，且氯霉素和醋酸曲安奈德兩峰之間的分離度大于2.0。

2.4 線(xiàn)性關(guān)系的考察精密量取“2.2”項(xiàng)下混合對(duì)照液0.3 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、3.5 mL，分 別置于10 mL 量瓶中，用流動(dòng)相稀釋至刻度，搖勻，即得系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。按“2.1”項(xiàng)下的色譜條件測(cè)定，以峰面積（A）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度（C）為橫坐標(biāo)繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，分別得氯霉素、醋酸曲安奈德回歸方程氯霉 素A=56.192C-10.247（r=0.9993，n=5）、醋酸曲安奈德A=23.642C-3.217（r=0.9999，n=5）。結(jié)果表明氯霉素和醋酸曲安奈德在60.03～700.35μg·mL-1和4.518～52.71μg·mL-1范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

2.5 精密度試驗(yàn)取“2.2”項(xiàng)下的醋酸曲安奈德和氯霉素混合對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，連續(xù)進(jìn)樣6 次，測(cè)得氯霉素RSD 為0.21%（n=6），醋酸曲安奈德RSD 為0.18%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.6 重現(xiàn)性試驗(yàn)取樣品共5 份，按“2.2”項(xiàng)下制備供試液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果氯霉素、醋酸曲安奈德峰面積的RSD分別為0.19%、0.23%，表明重現(xiàn)性良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)取“2.2”項(xiàng)下供試品溶液，于室溫放置0 h、3 h、5 h、8 h、10 h，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，結(jié)果氯霉素、醋酸曲安奈德峰面積的RSD分別為0.48%、0.36%。表明供試品溶液在10 h 內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.8 回收率試驗(yàn)精密量取9 份同一批號(hào)已知濃度的氯霉素和醋酸曲安奈德樣品約2.5 g，精密加入氯霉素和醋酸曲安奈德對(duì)照品約為已知樣品含量的80%、100%、120%的各3 份，按“2.2”項(xiàng)下制備供試液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品中氯霉素和醋酸曲安奈德含量，測(cè)得氯霉素和醋酸曲安奈德的平均回收率為99.92%，（RSD 為0.12%，n=9）和99.23%（RSD 為0.73%，n=9），由表中可以看出，該實(shí)驗(yàn)方法的回收率良好。見(jiàn)表1、表2。

表1 氯霉素回收率試驗(yàn)結(jié)果 （n=9）

表2 醋酸曲安奈德回收率試驗(yàn)結(jié)果 （n=9）

2.9 樣品含量測(cè)定取3 批樣品，按“2.2”項(xiàng)下方法制備對(duì)照品溶液和供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算樣品中氯霉素和醋酸曲安奈德含量。見(jiàn)表3。

表3 樣品測(cè)定結(jié)果 （%）

3 討論

3.1 溶劑選擇因?yàn)槁让顾睾痛姿崆材蔚聦?duì)甲醇均有一定的溶解度[1]，所以前處理時(shí)，選擇用甲醇充當(dāng)溶媒；由于制劑配制時(shí)存在很多基質(zhì)，需要80 ℃加熱先除去部分基質(zhì)，再冰浴2 h 凝固部分基質(zhì)，最后迅速過(guò)濾，盡可能減少基質(zhì)干擾。

3.2 波長(zhǎng)選擇由于制劑配方中，氯霉素占比較大，醋酸曲安奈德小，故以醋酸曲安奈德的最大吸收為主，通過(guò)PDA 檢測(cè)器波段掃描分析得知在240 nm 波長(zhǎng)處，有最大吸收且基質(zhì)的干擾最少，所以選擇檢測(cè)波長(zhǎng)為240 nm。

3.3 流動(dòng)相選擇由于在酸性條件下醋酸曲安奈德相對(duì)穩(wěn)定，而在堿性條件下則水解嚴(yán)重[2]；氯霉素在酸性或堿性溶液中均易分解，故在分析中，在流動(dòng)相中加入弱酸性的乙醚，有利于兩組分穩(wěn)定。從酸堿性上考慮，而在pH4～pH7 的微酸性或中性溶液中較為穩(wěn)定[3]，最后根據(jù)多次試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)流動(dòng)相在此比例下，跟各種基質(zhì)的分離度最好，所以選擇此比例流動(dòng)相。