黃平 鐘細(xì)妹 陳光元 張梅芳 劉文毅 劉霄

卵巢癌會(huì)威脅到女性身體健康,從而形成惡性腫瘤,于婦科惡性腫瘤中占據(jù)第二,死亡率第一。此病發(fā)病隱匿,早期不會(huì)有顯著癥狀且容易轉(zhuǎn)移,患者預(yù)后不良。當(dāng)前,卵巢癌病因不夠清楚,所以,卵巢癌的形成原因、惡性進(jìn)展分子機(jī)制為臨床的重要熱度課題［1］。lncRNA 轉(zhuǎn)錄長(zhǎng)度高于200 nt,編碼蛋白質(zhì)功能不會(huì)有DNA 分子,是以RNA 形式存在遺傳、轉(zhuǎn)錄層面的調(diào)控基因表達(dá),繼而加入機(jī)體諸多生理與病理環(huán)節(jié)。近幾年研究發(fā)現(xiàn)：lncRNA 在腫瘤發(fā)生與發(fā)展中發(fā)揮作用顯著,容易發(fā)展為部分惡性腫瘤比較特異的標(biāo)志物,治療需用靶向療法［2］。NEAT1 為大小約3.2 kB 的lncRNA,所處位置為細(xì)胞核亞結(jié)構(gòu)關(guān)鍵的lncRNA。研究發(fā)現(xiàn)：lncRNA NEAT1 可參與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程［3］。CtBP2 為進(jìn)化上高度保守的輔助轉(zhuǎn)錄抑制因子,能通過(guò)下調(diào)特定的腫瘤抑制因子,參與多種惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展［3］。但當(dāng)前l(fā)ncRNA NEAT1、CtBP2 在卵巢癌形成和惡性進(jìn)展中發(fā)揮的作用尚未有明確定論。本研究主要對(duì)卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 表達(dá)與患者臨床病理特征進(jìn)行剖析?，F(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2018 年12 月～2020 年12 月本院收治的卵巢癌患者68 例,患者均經(jīng)術(shù)后組織病理檢查確診,年齡20～68 歲,平均年齡(54.31±7.17)歲。另選取本院同期收治的卵巢良性囊腫患者20 例,年齡21～69 歲,平均年齡(55.20±6.66)歲。兩組患者年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),具有可比性。

1.2 方法 手術(shù)切除,剝離卵巢癌組織、卵巢囊腫組織,液氮下碾為粉末,用TRIzol 法提取組織總RNA,使用紫外分光光度計(jì)鑒定,OD260/OD280為1.8～2.0,可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。依據(jù)Revert AidTMFirst Strand cDNA Synthesis Kit 描述,將提取的總RNA 逆轉(zhuǎn)錄為cDNA,以cDNA 為模型,按SYBR Green 熒光定量PCR 試劑盒說(shuō)明進(jìn)行PCR 擴(kuò)增。全部引物均由沈陽(yáng)萬(wàn)類生物科技有限公司設(shè)計(jì)合成,引物序列：lncRNA NEAT1上游引物5'-GGGATGAT-GCAAACAATTAC-3',下游引 物5'-TACCATACA-GAGCAACATAC-3'；CtBP2 上游引物5'-ATCCAC-GAGAAGGTTCTAAACG-3',下游引 物5'-CCG-CACGATCACTCTCAGG-3'；GAPDH 上游引物5'-CACCCACTCCTCCACCTTTG-3',下游引物5'-CCAC-CACCCTGTTGCTGTAG-3'。PCR 反應(yīng)體系共25 μl：2×SYBR Green qPCR Mix 12.5 μl,上下游引物各0.5 μl,模板cDNA 2 μl,去離子水9.5 μl；反應(yīng)條件：95℃ 15 min、95℃ 15 s、60℃ 40 s 共40 個(gè)循環(huán)。以GAPDH 為內(nèi)參,采用2-△△CT法計(jì)算目的基因相對(duì)表達(dá)量。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3 次,取平均值。術(shù)后,電話或門診定期隨訪9～60 個(gè)月,平均隨訪33 個(gè)月。

1.3 觀察指標(biāo) 比較卵巢癌組織與卵巢囊腫組織中l(wèi)ncRNA NEAT1、CtBP2 相對(duì)表達(dá)量,分析卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對(duì)表達(dá)量與患者臨床病理特征的關(guān)系。臨床病理特征包括腫瘤FIGO 分期(1 期、2 期、3～4 期)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移(有、無(wú))、年齡(≤55 歲、＞55 歲)、腫瘤直徑(≤3 cm、＞3 cm)、病理類型(漿液性、黏液性、其他)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS20.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差()表示,采用t檢驗(yàn)。P＜0.05 表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 卵巢癌組織與卵巢囊腫組織中l(wèi)ncRNA NEAT1、CtBP2 相對(duì)表達(dá)量比較 卵巢癌組織中l(wèi)ncRNA NEAT1、CtBP2 相對(duì)表達(dá)量均明顯高于卵巢囊腫組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。見(jiàn)表1。

表1 卵巢癌組織與卵巢囊腫組織中l(wèi)ncRNA NEAT1、CtBP2 相對(duì)表達(dá)量比較()

表1 卵巢癌組織與卵巢囊腫組織中l(wèi)ncRNA NEAT1、CtBP2 相對(duì)表達(dá)量比較()

注：與卵巢囊腫組織比較,aP＜0.05

2.2 卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對(duì)表達(dá)量與患者臨床病理特征的關(guān)系 卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對(duì)表達(dá)量與患者腫瘤FIGO 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對(duì)表達(dá)量與患者年齡、腫瘤直徑、病理類型無(wú)關(guān),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。見(jiàn)表2。

表2 卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對(duì)表達(dá)量與患者臨床病理特征的關(guān)系()

表2 卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對(duì)表達(dá)量與患者臨床病理特征的關(guān)系()

注：不同腫瘤FIGO 分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況比較,P＜0.05

3 討論

目前,我國(guó)卵巢癌發(fā)病率相對(duì)較低,但是死亡率一直居高不下,近幾年其5 年生存率僅30%左右,嚴(yán)重危害女性的生命健康［4-6］。隨著我國(guó)逐漸脫貧致富踏上小康道路,我國(guó)人民生活質(zhì)量與生活水平都得到顯著升高,同時(shí)卵巢癌的發(fā)病率呈現(xiàn)出上升趨勢(shì),且呈現(xiàn)年輕化趨勢(shì)。由于醫(yī)學(xué)界對(duì)卵巢癌的發(fā)病病因尚未得出確切結(jié)論,因此,探索研究卵巢癌的病因與醫(yī)治方式成為當(dāng)前醫(yī)學(xué)界臨床研究的重大熱點(diǎn)之一［7,8］。

lncRNA 是一類非編碼的RNA,其廣泛存在于真核生物體內(nèi),其序列長(zhǎng)、結(jié)構(gòu)復(fù)雜。研究發(fā)現(xiàn)：lncRNA NEAT1 能夠促進(jìn)卵巢癌OVCAR-3 細(xì)胞的增殖和侵襲,而敲除lncRNA NEAT1 的卵巢癌OVCAR-3 細(xì)胞增殖和侵襲明顯受到抑制［9,10］。

CtBP 家族因能夠和不同的氨基酸序列結(jié)合,進(jìn)化上高度保守,是一類輔助轉(zhuǎn)錄抑制因子,家族有多個(gè)亞型,最為重要的當(dāng)屬CtBP2,基因定位在染色體21q21.3。CtBP2 的中心結(jié)構(gòu)域可與煙酰胺腺嘌呤二核苷酸結(jié)合,碳基末端能夠?qū)蜻M(jìn)行翻譯后修飾,氨基末端則可特異性識(shí)別并結(jié)合特定轉(zhuǎn)錄抑制因子,三個(gè)結(jié)構(gòu)域協(xié)同發(fā)揮輔助轉(zhuǎn)錄抑制因子功能［11］。CtBP是一類輔助轉(zhuǎn)錄抑制因子,可參與多種卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展。研究表明：CtBP2 高表達(dá)可引起患者預(yù)后不良,因此,CtBP2 有可能成為測(cè)定卵巢癌患者預(yù)后的指標(biāo)之一［12］。本研究中,卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對(duì)表達(dá)量與患者腫瘤FIGO 分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況有關(guān),差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 相對(duì)表達(dá)量與患者年齡、腫瘤直徑、病理類型無(wú)關(guān),差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。表明lncRNA NEAT1、CtBP2 在卵巢癌組織中呈高表達(dá),參與了卵巢癌的發(fā)生和轉(zhuǎn)移全程。

綜上所述,卵巢癌組織lncRNA NEAT1、CtBP2 表達(dá)水平均高,兩者表達(dá)變化可能協(xié)同促使腫瘤惡性進(jìn)展,致使患者預(yù)后不良。lncRNA NEAT1、CtBP2 有可能成為卵巢癌早期診斷和預(yù)后監(jiān)測(cè)的生物標(biāo)志物。