李玉龍，鮑相渤，高祥剛，段 妍，王 彬，董 婧，李云峰

(遼寧省海洋水產(chǎn)科學(xué)研究院，遼寧省分子生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，遼寧 大連 116023)

食性分析是生態(tài)學(xué)研究領(lǐng)域的重要內(nèi)容之一，食性分析及食物網(wǎng)絡(luò)的動(dòng)態(tài)研究是探討食物網(wǎng)結(jié)構(gòu)特征和營養(yǎng)流動(dòng)、評(píng)估物種生存狀況和生態(tài)系統(tǒng)功能等熱點(diǎn)問題的重要基礎(chǔ)[1-2]。水母是一類海洋膠質(zhì)類浮游動(dòng)物，是海洋生態(tài)系統(tǒng)的重要組成部分，在海洋生態(tài)系統(tǒng)物質(zhì)、能量傳遞過程中具有重要作用[3]，有關(guān)水母類的攝食生態(tài)問題已成為新興的研究熱點(diǎn)[4-8]。在食性相關(guān)研究中，食性分析方法的準(zhǔn)確性和精確性尤為重要，然而對(duì)水母這一海洋膠質(zhì)類浮游動(dòng)物而言，因其攝食范圍廣泛，食物組成包括橈足類，枝角類，一些無脊椎動(dòng)物的浮游幼蟲、魚卵、仔稚魚，甚至包括一些細(xì)菌、真菌、微藻和碎屑[7-12]，食物在消化循環(huán)腔中被降解、消化后，通過傳統(tǒng)鏡檢法很難簡(jiǎn)單判斷其食物來源，使得傳統(tǒng)鏡檢方法在解析水母食物組成方面存在著諸多局限性[6-8]。

為了對(duì)水母食物組成進(jìn)行更快速、準(zhǔn)確的鑒定，急需在傳統(tǒng)鏡檢基礎(chǔ)上建立并結(jié)合便捷準(zhǔn)確的分子鑒定手段，DNA條形碼提供了可信息化的分類標(biāo)準(zhǔn)和有效的分類學(xué)手段，已成為近年來物種分類與鑒定研究中重要的技術(shù)依托[13-18]。DNA條形碼通常是指使用基因片段序列如線粒體COⅠ作為種類鑒定標(biāo)簽條碼的技術(shù)[13-15]，除了快速、準(zhǔn)確，DNA條形碼技術(shù)最大優(yōu)點(diǎn)是無需待檢測(cè)樣品保存關(guān)鍵形態(tài)特征。隨著DNA條形碼技術(shù)的發(fā)展和物種數(shù)據(jù)庫的完善，越來越多的學(xué)者開始嘗試采用DNA條形碼來解決一些諸如魚類、頭足類以及一些小型浮游動(dòng)物等海洋動(dòng)物的食性鑒定問題[16,18-22]，說明DNA條形碼在海洋動(dòng)物食物種類組成鑒定中具有應(yīng)用價(jià)值。

海蜇(Rhopilemaesculentum)屬刺胞動(dòng)物門缽水母綱根口水母目根口水母科海蜇屬，主要分布于我國沿海近岸淺海海域，在日本西部、朝鮮半島西部和俄羅斯遠(yuǎn)東地區(qū)也有少量分布，是食用價(jià)值與經(jīng)濟(jì)價(jià)值最高的一種大型食用水母，也是目前為數(shù)不多的得到系統(tǒng)性研究的大型水母種類[23-26]。迄今為止，關(guān)于海蜇食性方面的研究主要有基于鏡檢鑒定的消化腔內(nèi)含物分析法[23,27]和穩(wěn)定同位素分析法[6]對(duì)遼東灣自然海域分布的海蜇的食性進(jìn)行的分析，尚未見利用分子生物學(xué)技術(shù)分析海蜇食性的相關(guān)報(bào)道。因此，筆者以遼東灣海域自然分布的海蜇為研究對(duì)象，利用通用引物同時(shí)擴(kuò)增線粒體COⅠ基因片段和核基因ITS-5.8S rDNA這兩種常用DNA條形碼分子標(biāo)記，比較兩種分子標(biāo)記作為海蜇食性鑒定條形碼的適用性和潛力，并結(jié)合海蜇傳統(tǒng)食性分析方法和穩(wěn)定同位素分析方法的相關(guān)結(jié)果評(píng)估這兩個(gè)DNA條形碼用于檢測(cè)海蜇食物組成的應(yīng)用前景，以期為海蜇乃至水母的食性研究提供基礎(chǔ)資料和技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 樣品采集及前處理

研究所用海蜇水母體樣品共計(jì)30個(gè)，傘徑40～570 mm，為2013年6—7月進(jìn)行的遼東灣海蜇跟蹤監(jiān)測(cè)調(diào)查所得樣品，調(diào)查站位見圖1，隨機(jī)取樣。根據(jù)海蜇水母體以口腕和肩板上的吸口來攝食餌料生物的特性，采集樣品時(shí)取口腕及肩板組織吸口分布豐富的區(qū)域以利于餌料生物的擴(kuò)增，樣品采集后于99%乙醇中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 DNA提取、擴(kuò)增、測(cè)序及基因克隆

采用CTAB法提取基因組DNA，COⅠ序列以通用引物L(fēng)CO-1490(5′-GGTCAACAAATCATAA

AGATATTGG-3′)和HCO-2198(5′-TAAACTTC AGGGTGACCAAAAAATCA-3′)[28]擴(kuò)增，ITS-5.8S rDNA序列使用引物JF-18F1750(5′-AAAGTCGTA ACAAGGTTTCCG-3′)和JF-28R765(5′-TTGGTC CGTGTTTCAAGACG-3′)[29]進(jìn)行擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增均在Gene Amp PCR System 9700型PCR儀上進(jìn)行，反應(yīng)體系及反應(yīng)條件見表1。

圖1 遼東灣海蜇樣品取樣站位示意Fig.1 The sampling locations of jellyfish R. esculentum species

表1 COⅠ和ITS-5.8S rDNA序列PCR擴(kuò)增信息

對(duì)每份樣品的擴(kuò)增產(chǎn)物使用1%瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，純化后直接進(jìn)行雙向測(cè)序進(jìn)行分子物種鑒定，以剔除海蜇自身序列的樣品。經(jīng)分子物種鑒定檢測(cè)后，選取測(cè)序雙峰的樣品經(jīng)瓊脂糖膠DNA純化試劑盒Ver 2.0回收后與pMD18-T載體連接，采用藍(lán)白斑篩選陽性克隆，經(jīng)PCR 檢測(cè)確認(rèn)無誤后每個(gè)樣品隨機(jī)挑取若干個(gè)單克隆進(jìn)行測(cè)序，用于海蜇食性組成分析 (上海英濰捷基有限公司)。

1.3 數(shù)據(jù)分析

將克隆測(cè)序得到的COⅠ和ITS-5.8S rDNA序列進(jìn)行拼接和人工校對(duì)，去掉兩端引物后進(jìn)行判讀分析，用于比對(duì)潛在食物DNA測(cè)序結(jié)果，并剔除自身序列對(duì)結(jié)果的干擾。使用美國國家生物技術(shù)信息中心(https:∥www.ncbi.nlm.nih.gov)的BLAST程序檢索測(cè)序片段在其GenBank數(shù)據(jù)庫中的匹配序列。對(duì)序列進(jìn)行篩選, 在相同的基因序列區(qū)域內(nèi)，當(dāng)覆蓋度不低于95%、一致性超過98%時(shí)，且對(duì)應(yīng)物種可能為海蜇的潛在攝食種類時(shí)認(rèn)為檢索結(jié)果有效，判定樣品來自匹配序列對(duì)應(yīng)的物種。若存在不止一種物種的匹配序列，則根據(jù)物種的分布特征及海蜇可能的食物種類排除不符合的物種，并推測(cè)可能的近緣物種或認(rèn)為物種鑒定失敗。

2 結(jié) 果

2.1 海蜇食性樣品COⅠ序列的擴(kuò)增

30個(gè)海蜇食性樣品經(jīng)COⅠ通用引物擴(kuò)增后直接進(jìn)行測(cè)序，其中26個(gè)樣品經(jīng)分子物種鑒定檢測(cè)后為海蜇自身序列，剩余4個(gè)測(cè)序結(jié)果為雙峰的樣品經(jīng)克隆構(gòu)建文庫后，隨機(jī)挑選每個(gè)樣品中的10個(gè)單克隆進(jìn)行測(cè)序，共獲取片段長(zhǎng)度約660 bp的隨機(jī)克隆序列共40條，剔除海蜇自身序列及污染的人類的COⅠ序列后，共得到36個(gè)有效序列，分屬于脊椎動(dòng)物亞門、子囊菌亞門及變形菌門3個(gè)門類共4個(gè)物種(表2)。其中：占比最高的是硬骨魚綱的矛尾蝦虎魚(Chaeturichthysstigmatias)，與GenBank同源序列相似度為99.41%，在全部序列中占比77.8%，全部在雙臺(tái)子河口外的3個(gè)海蜇食性樣品中檢測(cè)到；其次是硬骨魚綱的黃鯽(Setipinnataty)，與GenBank同源序列相似度為98%，在凌河口外采集的1個(gè)海蜇樣品中檢測(cè)到。此外在凌河口外的該海蜇樣品中還檢測(cè)到1條海洋真菌序列和1條光合細(xì)菌序列，由于與GenBank中同源序列相似度較低(86%～88%)，故未進(jìn)行最低分類階元的推定。

表2 基于COⅠ序列的海蜇食物分子運(yùn)算分類單元分子鑒定結(jié)果

2.2 海蜇食性樣品ITS-5.8S rDNA序列的擴(kuò)增

樣品經(jīng)ITS-5.8S rDNA引物擴(kuò)增后直接進(jìn)行測(cè)序，其中僅4個(gè)樣品測(cè)序結(jié)果為雙峰，剩下26個(gè)樣品經(jīng)分子物種鑒定為海蜇自身序列。在4個(gè)測(cè)序結(jié)果為雙峰的樣品中隨機(jī)挑選10～20個(gè)單克隆進(jìn)行測(cè)序，共獲取片段長(zhǎng)度約1500 bp的ITS-5.8S rDNA序列共50條，剔除海蜇自身序列后，共得到30個(gè)有效物種序列，來源于10個(gè)物種(表3)，為軟體動(dòng)物1種及子囊菌門真菌9種。其中：占比最高的是海綿共附生真菌Aspergilluspenicillioides或A.clavatophorus，與GenBank同源序列(KT390118.1、KY087703.1)的相似度分別為99.51%、99.81%，占比46.7%；其次為同屬的薄曲霉A.gracilis，與GenBank同源序列(EF652045.1)的相似度分別為99.74%，占比16.7%；剩余紅酵母屬(Rhodotorula)、路德酵母屬(Lodderomyces)、炭疽菌屬(Colletotrichum)、短梗霉屬(Aureobasidium)、節(jié)菱孢菌屬(Sordariomycetes)、被孢霉科和爪甲團(tuán)囊菌目真菌種類占比較少，僅為3.3%～6.7%；軟體動(dòng)物1種為扇貝科扇貝屬的蝦夷扇貝(Patinopectenyessoensis)，與GenBank同源序列(DQ417586.1)的相似度為98.65%，在全部序列中占比6.7%。

表3 基于ITS-5.8S rDNA序列的海蜇餌料生物運(yùn)算分類單元分子鑒定結(jié)果

3 討 論

3.1 DNA條形碼技術(shù)在海蜇食性鑒定中的適用性

以往對(duì)海蜇食性的研究大多是在鏡檢分類、飼喂試驗(yàn)、育苗實(shí)踐及資源調(diào)查中觀察得出結(jié)論[23,27]，此類方法不僅需要專門的形態(tài)學(xué)分類知識(shí)，還易受到諸如樣品形態(tài)因素、環(huán)境條件以及樣品采集者的經(jīng)驗(yàn)和主觀判斷的影響，經(jīng)驗(yàn)不足時(shí)存在著誤判的可能性，所得數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及精確性無法保證。穩(wěn)定同位素方法能夠判斷物種的主要食物來源，在食物網(wǎng)結(jié)構(gòu)和能量流動(dòng)方面具有優(yōu)勢(shì)，但取樣可能造成損傷，且受限于取樣條件的限制，不能準(zhǔn)確提供攝食者在短期內(nèi)的食物組成[30]。

利用DNA條形碼技術(shù)對(duì)海蜇的食物組成進(jìn)行分析，可以彌補(bǔ)傳統(tǒng)技術(shù)手段和穩(wěn)定同位素技術(shù)的缺陷，為深入查明海蜇主要餌料生物來源提供幫助。相較于傳統(tǒng)技術(shù)手段，DNA條形碼技術(shù)存在諸多優(yōu)勢(shì)：試驗(yàn)原理簡(jiǎn)單、操作簡(jiǎn)便，研究者不需具備專業(yè)的形態(tài)分類知識(shí)也可獲得鑒定結(jié)果；所需樣品量較少，不受樣品形態(tài)完整性影響限制；物種鑒定適用范圍廣，運(yùn)用DNA條形碼如COⅠ基因片段能夠?qū)Τ^95%的物種進(jìn)行準(zhǔn)確鑒定[31-32]。席曉晴等[21]在馬鞍列島海域皮氏叫姑魚 (Johniusbelengerii)胃含物分析中，比較了DNA條形碼分子生物學(xué)手段與傳統(tǒng)觀測(cè)手段對(duì)皮氏叫姑魚餌料生物的識(shí)別，發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)觀測(cè)方法僅獲得口蝦蛄(Oratosquillaoratoria)、日本鼓蝦(Alpheusjaponicus)、沙蠶(Perinereisaibuhitensis)、日本蟳(Charybdisjaponica)幼體4種胃含物，尚存在大量不可辨認(rèn)的蝦類、蟹類，而通過COⅠ條形碼分子標(biāo)記對(duì)不可辨認(rèn)食物糜的鑒定，識(shí)別出中華管鞭蝦(Solenoceracrassicornis)、鮮明鼓蝦(Alpheusdistinguendus)、長(zhǎng)臂蝦(Palaemongravieri)、中國毛蝦(Aceteschinensis)、褐菖鲉(Sebastiscusmarmoratus)、日本鳀(Engraulisjaponius)等10多種胃含物種類，在較大程度上解決了對(duì)食物團(tuán)中不可辨認(rèn)成分鑒定的困惑；劉夢(mèng)娜等[22]基于DNA條形碼對(duì)中國槍烏賊(Loligochinensis)和鳶烏賊(Sthenoteuthisoualaniensis)的食物種類組成進(jìn)行的研究也表明，DNA條形碼技術(shù)可以將多數(shù)餌料物種準(zhǔn)確鑒定到種，且在鑒定效率和準(zhǔn)確性方面較傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)方法具有明顯的優(yōu)勢(shì)。上述研究均已證實(shí)，基于傳統(tǒng)測(cè)序的DNA條形碼技術(shù)在胃含物餌料生物鑒定中具有應(yīng)用價(jià)值。

本研究中，基于COⅠ基因通用引物擴(kuò)增海蜇現(xiàn)場(chǎng)樣品所構(gòu)建的克隆文庫共獲取36個(gè)有效序列，來源于4個(gè)物種，分屬于脊椎動(dòng)物亞門、子囊菌亞門、變形菌門3個(gè)門類，其中在多個(gè)海蜇樣品中檢測(cè)到矛尾蝦虎魚和黃鯽的物種序列，占比較高且具有多種單倍型序列，推測(cè)其可能為兩種魚類的卵、仔稚魚或成魚碎屑等。基于ITS-5.8S rDNA條形碼序列僅檢測(cè)到蝦夷扇貝幼蟲這一種海蜇潛在食物種類，但檢測(cè)到多種海洋真菌序列，如霉菌屬、紅酵母屬、路德酵母屬、炭疽菌屬、短梗霉屬、節(jié)菱孢菌屬、被孢霉科和爪甲團(tuán)囊菌目真菌種類。目前有學(xué)者認(rèn)為，水母會(huì)選擇性地?cái)z食一些浮游植物、真菌和碎屑等[33-34]。張健等[7]基于脂肪酸標(biāo)記法和穩(wěn)定同位素技術(shù)對(duì)通州灣養(yǎng)殖水域海蜇進(jìn)行食性分析發(fā)現(xiàn)，海蜇對(duì)細(xì)菌也存在攝食；徐盛楠等[8]基于高通量測(cè)序技術(shù)在對(duì)兩種水螅水母現(xiàn)場(chǎng)食物進(jìn)行研究時(shí)也發(fā)現(xiàn)，水母攝食組成中含有真菌，如枝孢菌(Cladosporium)、酵母菌和短梗霉菌(Aureobasidium)等，提示海蜇的攝食組成中可能也含有細(xì)菌、真菌等。但作為海蜇主要攝食種類的浮游動(dòng)物類群，筆者采用基于兩種基因片段的DNA條形碼技術(shù)均未檢出，說明基于傳統(tǒng)測(cè)序的DNA條形碼技術(shù)由于通量低等限制對(duì)海蜇這一廣食性種類的食物譜進(jìn)行分析時(shí)具有較大的局限性，但在進(jìn)行動(dòng)物餌料生物鑒定時(shí)仍具有較高的準(zhǔn)確性，其在不易辨認(rèn)餌料生物種類鑒定中的應(yīng)用價(jià)值應(yīng)得到重視。

3.2 傳統(tǒng)測(cè)序方法的局限性及未來的發(fā)展方向

通過內(nèi)含物形態(tài)鑒定、飼喂試驗(yàn)等傳統(tǒng)技術(shù)手段[19,21]對(duì)海蜇?cái)z食的研究表明，海蜇是廣食性生物，對(duì)食物種類不加選擇，而對(duì)其大小卻有嚴(yán)格的限制，僅濾食其口器附近大小合適的食物顆粒(1 mm以下)，其食物以小型的浮游生物為主，主要有橈足類、枝角類、介行類、漣蟲類以及端足類等，也攝食魚卵、仔稚魚、輪蟲、鹵蟲(Artemia)無節(jié)幼體、貝類浮游幼體、單細(xì)胞藻類和有機(jī)碎屑等，且食量很大。近期基于脂肪酸標(biāo)記法和穩(wěn)定同位素分析法對(duì)遼東灣和通州灣自然海域的海蜇水母體食性進(jìn)行的分析也支持這一結(jié)果[6-7]，≤1000 μm 浮游動(dòng)物、1000～1500 μm浮游動(dòng)物和>1500 μm浮游動(dòng)物、底棲生物、懸浮物、浮游植物、魚卵甚至一些海洋細(xì)菌等都是其食物類群，且≤1000 μm浮游動(dòng)物是其主要攝食種類。本研究中，利用線粒體COⅠ和ITS-5.8S rDNA兩種DNA條形碼對(duì)遼東灣近岸采集的海蜇水母體食物組成進(jìn)行分析，僅檢測(cè)到魚卵、仔稚魚或成魚碎屑、貝類浮游幼體、海洋真菌類、海洋細(xì)菌類等物種類別，且兩種DNA條形碼標(biāo)記檢測(cè)到的海蜇食物種類并不一致。借鑒上述傳統(tǒng)技術(shù)手段和穩(wěn)定同位素方法分析的相關(guān)結(jié)果，海蜇的潛在食物種類包括魚卵、仔稚魚或成魚碎屑、貝類浮游幼體、細(xì)菌、真菌等，但檢測(cè)到的海蜇潛在食物類群多樣性較低，且缺乏海蜇餌料中最常見的浮游生物類群[6,23,27]。這一方面是因?yàn)闃悠妨肯拗苹蛘呤峭ㄓ靡镌诓煌惾褐械臄U(kuò)增效率差別很大，甚至無法成功擴(kuò)增部分種類的目標(biāo)序列[35-38]，如：Zhan等[35]比較了COⅠ、16S rRNA和18S rRNA等分子標(biāo)記基因在浮游動(dòng)物條形碼研究中的差別，發(fā)現(xiàn)其所用的COⅠ通用引物無法提供高質(zhì)量的PCR產(chǎn)物；王敏曉等[36]也發(fā)現(xiàn)，COⅠ條形碼通用引物在部分浮游生物種類中的擴(kuò)增效率較低，從而造成測(cè)序結(jié)果的偏差而無法獲取更多的物種信息。因此，在利用DNA條形碼技術(shù)進(jìn)行動(dòng)物食性研究時(shí)設(shè)計(jì)通用性更好的引物序列有利于得到更多的物種信息。如Leray等[19]在研究天竺鯛科、金鱗魚科等珊瑚礁魚類的胃內(nèi)容物時(shí)，對(duì)COⅠ基因設(shè)計(jì)了5組通用引物，結(jié)果顯示，其中1組引物比傳統(tǒng)通用引物(LCO1490/HCO2198)在后生動(dòng)物類群中的擴(kuò)增效率更高，能夠獲得更多的物種信息。此外，由于傳統(tǒng)測(cè)序方法測(cè)序通量低，且需要結(jié)合克隆文庫進(jìn)行多次PCR反應(yīng)并挑取有限數(shù)量的克隆序列，程序繁瑣且隨機(jī)性強(qiáng)，獲取總有效食物序列數(shù)量有限，受限于工作量和研究成本，因此以傳統(tǒng)測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)的DNA條形碼技術(shù)會(huì)很大程度上低估海蜇這一廣食性種類的食物組成，并影響海蜇食物組成物種分析的可靠性。

近年來，隨著物種分子鑒定技術(shù)的發(fā)展、測(cè)序技術(shù)的進(jìn)步和DNA條形碼數(shù)據(jù)庫的豐富完善，DNA分子追蹤食物鏈和食物網(wǎng)正成為攝食生態(tài)學(xué)研究的主流方法[8,14-22]?；诟咄繙y(cè)序技術(shù)獲得生物特異性基因識(shí)別DNA條形碼序列的擴(kuò)增子測(cè)序方法，稱為DNA宏條形碼技術(shù)。該技術(shù)可將整個(gè)混合樣本的DNA片段擴(kuò)增后再進(jìn)行高通量測(cè)序，進(jìn)而確定取樣環(huán)境中生物的分布狀況[17-18,35]。這一技術(shù)具有通量高、檢測(cè)靈敏度高和信息量大等特點(diǎn)，彌補(bǔ)了傳統(tǒng)測(cè)序技術(shù)的不足，目前已開始應(yīng)用于包括水母類在內(nèi)的海洋動(dòng)物食性分析等領(lǐng)域[8,19,39-40]，并展現(xiàn)出較大的應(yīng)用潛能。如林先智等[39]以18S rDNA為條形碼標(biāo)記分別使用傳統(tǒng)測(cè)序和高通量測(cè)序?qū)疱X魚(Scatophagusargus)稚魚食物組成進(jìn)行了分析，發(fā)現(xiàn)高通量測(cè)序方法在反映食物多樣性和覆蓋范圍上更具優(yōu)勢(shì)，且靈敏度更高，檢測(cè)出傳統(tǒng)測(cè)序方法未發(fā)現(xiàn)的甲藻和褐藻種類，與傳統(tǒng)測(cè)序技術(shù)相比，高通量測(cè)序技術(shù)在金錢魚稚魚攝食研究上優(yōu)勢(shì)明顯，可以顯著提升數(shù)據(jù)與結(jié)果的可信度。因此，未來基于高通量測(cè)序技術(shù)的DNA宏條形碼方法將為海蜇乃至其他大型水母的食物組成分析提供有力工具。

4 結(jié) 論

基于DNA條形碼技術(shù)，利用COⅠ基因和ITS-5.8S rDNA通用引物對(duì)遼東灣近海海蜇的現(xiàn)場(chǎng)食物組成進(jìn)行分析，分別檢測(cè)到海蜇的食物來源于4個(gè)和10個(gè)物種，其食物種類主要包括魚卵、仔稚魚或成魚碎屑、貝類浮游幼體等，然而未檢測(cè)到海蜇餌料中最常見的浮游生物類群。研究結(jié)果表明，以傳統(tǒng)測(cè)序?yàn)榛A(chǔ)的DNA條形碼技術(shù)由于測(cè)序通量低，在研究海蜇這一廣食性種類的食物譜時(shí)可能具有較大的局限性。本研究結(jié)果可為深入研究海蜇乃至水母的食物組成提供參考，未來可以利用基于高通量測(cè)序技術(shù)的DNA宏條形碼方法并結(jié)合傳統(tǒng)和穩(wěn)定同位素技術(shù)對(duì)海蜇的食物譜進(jìn)行研究，從而對(duì)海蜇的食性有一個(gè)更加全面準(zhǔn)確的了解。