陳愛萍，何 伍，白 玉，王少戎

(1.國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)檢查長(zhǎng)三角分中心，上海 201210；2.國家藥品監(jiān)督管理局藥品審評(píng)中心，北京 100022)

根據(jù)2016 年世界衛(wèi)生組織的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，全球有12.4 億以上的人口患有鐵缺乏癥,貧血是鐵缺乏的主要癥狀之一[1]。鐵缺乏常見表現(xiàn)還包括：疲勞、嗜睡、頭暈、耳鳴、面色蒼白和頭痛等；對(duì)于易感患者，鐵缺乏可能會(huì)引起不寧腿綜合征；此外，鐵缺乏還會(huì)導(dǎo)致部分疾病癥狀的惡化和預(yù)后不良，如：心衰和缺血性心臟病等[2-3]。

治療鐵缺乏癥患者，首先是明確并去除缺鐵病因，其次需進(jìn)行補(bǔ)鐵治療。目前，補(bǔ)鐵制劑已經(jīng)發(fā)展了3代：第一代為無機(jī)鐵鹽的口服補(bǔ)鐵劑，自1831年被Blaud首次使用FeSO4治療“黃萎病”來，以FeSO4、FeCl2和Fe2P2O7為代表的第一代口服補(bǔ)鐵劑已廣泛收載于各國藥典和食品添加劑法典[4]；第二代為有機(jī)酸鐵鹽螯合物的口服補(bǔ)鐵劑，如：葡萄糖酸亞鐵、富馬酸亞鐵等[4]；第三代為靜脈注射的納米鐵制劑,即為本文討論的對(duì)象?？诜a(bǔ)鐵制劑普遍應(yīng)用較早，服用方便，經(jīng)濟(jì)實(shí)惠，但是其生物利用度低(僅為10%左右)，而且由于Fe2+性質(zhì)不穩(wěn)定，會(huì)引起很多胃腸道的不良反應(yīng)，如：惡心、嘔吐、便秘和腹瀉等，導(dǎo)致30%～70%患者依從性差，因此并不是理想的補(bǔ)鐵劑[2]?，F(xiàn)代腸外鐵劑的上市徹底改變了補(bǔ)鐵治療的模式，可實(shí)現(xiàn)快速、安全的全劑量補(bǔ)鐵。納米鐵制劑是一類在臨床上可靜脈注射的腸外補(bǔ)鐵劑，和口服鐵劑相比，納米鐵制劑能被人體完全吸收，可使患者在短時(shí)間內(nèi)達(dá)到較高的血紅蛋白(Hb)水平，有著更好的療效和更少的不良反應(yīng)[5]。但是，納米鐵制劑通常為大分子混合物，屬于非生物復(fù)雜藥物(NBCD)，其活性成分的結(jié)構(gòu)和特征不能被完全表征，這對(duì)納米鐵制劑及仿制藥的研發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制等都提出了巨大挑戰(zhàn)。如何保證仿制藥和原研藥的質(zhì)量可比，療效和安全性等同，臨床用藥具有可替換性是藥品研究者和監(jiān)管機(jī)構(gòu)共同面對(duì)的難題。因此，圍繞已上市納米鐵制劑的理化性質(zhì)、作用機(jī)制和臨床應(yīng)用情況等方面，分析了從研發(fā)、生產(chǎn)到臨床應(yīng)用過程中可能影響納米鐵制劑的質(zhì)量和療效等因素，同時(shí)參考各國藥品監(jiān)管機(jī)構(gòu)的指南，以期為我國納米鐵制劑仿制藥的研發(fā)提供參考。

1 納米鐵制劑的結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)

1.1 納米制劑的結(jié)構(gòu)

納米鐵制劑是一種糖-鐵復(fù)合物的膠體溶液，糖-鐵復(fù)合物由Fe(Ⅲ)-羥基氧化物的聚合核芯和碳水化合物外殼組成，通常含有6～1 000個(gè)鐵原子，直徑大約為8～30 nm[6-8](圖1)，鐵制劑常用的經(jīng)驗(yàn)式如圖2所示(來自丹麥Pharmacosmos A/S公司Monoferric?的藥品說明書)。在生理環(huán)境下，鐵核幾乎不溶，碳水化合物可以增加其溶解性，同時(shí)可以防止納米粒聚集，維持膠體溶液穩(wěn)定，并且可以減緩生物活性鐵的釋放，防止鐵中毒[4,9]。

圖1 納米鐵制劑結(jié)構(gòu)示意Fig.1 Schematic diagram of monoferric structure

圖2 納米鐵制劑經(jīng)驗(yàn)式Fig.2 Empirical formula of monoferric

1.2 納米制劑的理化性質(zhì)

大小不同的鐵核和不同的碳水化合物外殼組成不同的糖-鐵復(fù)合物，其理化性質(zhì)如：形態(tài)、粒徑、表面電荷、分子量及其分布、總鐵(Fe(Ⅱ) + Fe(Ⅲ))和不穩(wěn)定鐵含量等均有較大差異。這些差異決定了糖-鐵復(fù)合物和體內(nèi)受體(如：轉(zhuǎn)鐵蛋白、鐵蛋白等)相互作用的能力，可能對(duì)其分布、清除和生物活性鐵釋放率及其他體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)有重要影響；也可能影響其安全性，如：和低分子的右旋糖酐鐵(分子量為96 000)相比，高分子的右旋糖酐鐵(分子量265 000)會(huì)引起嚴(yán)重的危及生命的過敏反應(yīng)，因此目前已被撤市[9-11]。

此外，不同廠家的納米鐵制劑可能由于起始物物料、制備工藝和質(zhì)量控制過程不同而導(dǎo)致關(guān)鍵理化性質(zhì)具有很大差異，影響其關(guān)鍵質(zhì)量屬性，進(jìn)而影響其藥理、藥代和毒理學(xué)性質(zhì)。美國藥典(USP)蔗糖鐵個(gè)論中規(guī)定了蔗糖鐵注射液極譜圖，明確Fe(Ⅲ)/Fe(Ⅱ)還原電位特征峰為(-750±50) mV，F(xiàn)e(Ⅱ)/Fe(0)還原電位為特征峰(-1 400±50) mV[12]。為了研究蔗糖鐵注射液仿制藥和原研藥臨床療效和安全性差異的原因，Tobbli等[13]參考USP蔗糖鐵注射液各論比較，測(cè)定了不同廠家來源的蔗糖鐵注射液仿制藥和原研藥的極譜，結(jié)果見圖3。由圖3可知：3批原研藥(d～f)的Fe(Ⅲ)/Fe(Ⅱ)及Fe(Ⅱ)/Fe(0) 還原電位特征峰基本一致，而仿制藥(a～c)的還原電位特征峰和原研藥有較大差異，尤其是b、c廠家來源的蔗糖鐵注射液，其結(jié)果表明：蔗糖鐵仿制藥和原研藥的關(guān)鍵理化性質(zhì)的指標(biāo)極譜不可比，說明其分子結(jié)構(gòu)有較大差異。

圖3 蔗糖鐵注射液仿制藥和原研極譜[13]Fig.3 Polarograms of iron sucrose injection for generics and originals[13]

2 納米鐵制劑的作用機(jī)制和臨床應(yīng)用

2.1 納米鐵制劑的作用機(jī)制

迄今為止，納米鐵的作用機(jī)制尚未完全明確。一般來說，靜脈注射的納米鐵進(jìn)入血液循環(huán)后被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)(RES)攝取，然后經(jīng)肝臟、脾臟和骨髓的吞噬細(xì)胞進(jìn)行清除。在這個(gè)過程中，碳水化合物的外殼開始降解并釋放出Fe3+，釋放的Fe3+要么被鐵蛋白結(jié)合儲(chǔ)存到細(xì)胞間隙的鐵池中，要么被血漿中的轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合運(yùn)輸?shù)郊t系前體細(xì)胞中，生成血紅蛋白[7,14]。

2.2 納米鐵制劑的臨床應(yīng)用

自1949年第一個(gè)納米鐵制劑——蔗糖鐵注射液被批準(zhǔn)替代口服補(bǔ)鐵劑用于治療鐵缺乏癥以來，目前世界范圍內(nèi)已上市的納米鐵制劑有：低分子量的右旋糖酐鐵(InFeD?,Allergan Sales,LLC),葡萄糖酸鈉鐵(Ferrlecit?,Sanofi-Aventis Canada Inc.),蔗糖鐵(Venofer?,ViforPharma Ltd),羧基麥芽糖鐵(Ferinject?,ViforPharma Ltd),Ferumoxytol(FeraHeme?,AMAG Pharmaceuticals Inc.)和Ferric Derisomaltose(Monoferrix?,Pharmacosmos Ltd)。不同納米鐵的碳水化合物外殼、分子量、鐵含量、最大劑量和血漿半衰期見表1。

表1 已上市納米鐵制劑的特性Table 1 Characteristics of the marketed nanoparticle iron products

其中，低分子量的右旋糖酐鐵、羧基麥芽糖鐵、Ferumoxytol、Ferric Derisomaltose的結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，不易釋放出游離鐵，且發(fā)生副反應(yīng)的概率極低，可以大劑量給藥。葡萄糖酸鈉鐵和蔗糖鐵雖然不易發(fā)生過敏反應(yīng)，但這兩種鐵劑入血后容易釋放出游離鐵產(chǎn)生毒性，產(chǎn)生如低磷血癥、消化道等癥狀[15-16]，因此只能以中等劑量使用。

我國是一個(gè)仿制藥大國，但是由于納米鐵制劑結(jié)構(gòu)復(fù)雜，研發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制難度較大，限制了納米鐵仿制藥的研發(fā)。目前，國內(nèi)市場(chǎng)的靜脈鐵劑僅有右旋糖酐鐵和蔗糖鐵兩種，而且仿制藥的質(zhì)量良莠不齊。研究發(fā)現(xiàn)：右旋糖酐鐵國產(chǎn)仿制藥基本均為高分子右旋糖酐鐵(表2)[17]，質(zhì)量與原研品差距較大，極易出現(xiàn)過敏反應(yīng)[18-21]。馮磊[22]探討了右旋糖酐鐵注射液治療缺鐵性貧血(IDA)的療效與安全性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)：與原研藥(科莫非?)相比，國產(chǎn)某仿制藥升高Hb含量的程度較低[(78.3±9.2)g/Lvs(89.5±8.8)g/L]，緩解癥狀需要的時(shí)間更長(zhǎng)[(36.2±11.7) dvs(15.7±5.5) d]，不良反應(yīng)發(fā)生率更高(55.4%vs2.8%)。此外，國外藥品監(jiān)管和醫(yī)療機(jī)構(gòu)也已經(jīng)關(guān)注到了臨床用藥中納米鐵仿制藥和原研藥的可替代性令人擔(dān)憂，Martin-malo等[23]、Lee等[24]、Stein等[25]都報(bào)道了蔗糖鐵仿制藥和原研藥的有效性和安全性的差異，為了達(dá)到和原研藥相同的治療效果，一般患者的給藥劑量需要比原研藥多增加34%。

表2 右旋糖酐鐵注射液仿制藥和原研藥的分子量比較[19]Table 2 Comparison of the molecular weight between iron dextran injection original drug and generic drug[19]

3 納米鐵制劑仿制藥在研發(fā)中所遇到的困難與建議

3.1 研發(fā)納米鐵制劑仿制藥的過程中所遇到的困難

小分子化學(xué)藥品的結(jié)構(gòu)明確，現(xiàn)有的分析測(cè)試手段可以充分表征其活性成分的結(jié)構(gòu)和特性，通?？梢院?jiǎn)化臨床研究，采用體內(nèi)生物等效性實(shí)驗(yàn)或體外豁免實(shí)驗(yàn)來證明仿制藥和原研藥的質(zhì)量和療效上的一致。和小分子化學(xué)藥品相比，納米鐵制劑結(jié)構(gòu)復(fù)雜，現(xiàn)有分析手段不能完全表征其活性成分結(jié)構(gòu)和產(chǎn)品特性，故各國藥品監(jiān)督機(jī)構(gòu)普遍認(rèn)為小分子化學(xué)仿制藥的一般評(píng)價(jià)方案(生物等效性試驗(yàn)或體外豁免研究)不適用于納米鐵制劑的上市評(píng)價(jià)。自2006年以來，美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)就納米鐵制劑仿制藥發(fā)布了多份個(gè)藥指南草案[26-30]，就納米鐵仿制藥的體內(nèi)外研究提供了技術(shù)指導(dǎo)。在指南草案中，F(xiàn)DA建議使用血清總鐵和血清轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合鐵作為藥代動(dòng)力學(xué)終點(diǎn)，進(jìn)行納米鐵制劑仿制藥和原研藥的生物等效性比較研究，此外還需進(jìn)行理化特性的研究，以證明仿制藥和原研藥質(zhì)量和療效相似。歐洲藥品管理局(EMA)就納米鐵藥物的研發(fā)形成了一系列意見書[31-33]，EMA對(duì)證明納米鐵制劑仿制藥生物等效性研究表達(dá)了不同的意見。除了比較理化特性和人體血漿藥代動(dòng)力學(xué)研究外，EMA還建議比較仿制藥和原研藥在動(dòng)物模型中的組織分布和毒性。如在理化特性、非臨床或人體藥代動(dòng)力學(xué)研究中觀察到細(xì)微差異，則建議進(jìn)行等效性研究，以對(duì)其進(jìn)行療效和安全性方面的評(píng)估。

3.2 對(duì)于研發(fā)納米鐵制劑仿制藥過程中相關(guān)難點(diǎn)的幾點(diǎn)思考或建議

基于筆者對(duì)納米鐵藥物的理解，參考FDA、EMA納米鐵制劑相關(guān)指導(dǎo)原則，結(jié)合我國注射劑仿制藥研發(fā)的一般要求，對(duì)納米鐵仿制藥的研發(fā)建議如下：首先應(yīng)符合《化學(xué)藥品注射劑仿制藥質(zhì)量和療效一致性評(píng)價(jià)技術(shù)要求》，仿制藥的輔料種類(Q1)和用量(Q2)通常應(yīng)與原研藥(RLD)相同，無菌/滅菌工藝應(yīng)符合國內(nèi)外無菌/滅菌工藝相關(guān)指導(dǎo)原則要求，批量應(yīng)符合《化學(xué)合仿制藥注冊(cè)批生產(chǎn)規(guī)模的一般要求》；其次由于本品結(jié)構(gòu)復(fù)雜，應(yīng)對(duì)原研藥進(jìn)行充分解析，建立目標(biāo)產(chǎn)品質(zhì)量概況(QTPP)，明確產(chǎn)品關(guān)鍵質(zhì)量屬性(CQA)，關(guān)注生產(chǎn)工藝特別是關(guān)鍵工藝參數(shù)的研究，從藥學(xué)、非臨床和臨床研究等多個(gè)方面證明仿制藥和原研藥療效和安全方面的一致性。

3.2.1 生產(chǎn)工藝研究

納米鐵制劑生產(chǎn)工藝通常包括：制備多聚鐵核、鐵核和碳水化合物螯合形成的絡(luò)合物、純化、終產(chǎn)品的制備，生產(chǎn)過程中關(guān)鍵生產(chǎn)工藝和參數(shù)，詳見表3。

表3 納米鐵制劑制備過程中的關(guān)鍵因素Table 3 The critical factors in the process of the preparation of nanoparticle iron products

3.2.1.1 原料制備工藝

鐵(Ⅲ)鹽(如FeCl3)和堿反應(yīng)生成多聚鐵核[Fe(Ⅲ)- 羥基氧化物 (β-FeOOH)]，經(jīng)水化后逐步水解為單核羥基氧化鐵Fe(OH)(H2O)5和Fe(OH)2(H2O)4，然后進(jìn)一步水解為Fe(OH)3(H2O)3,待Fe(OH)3(H2O)3形成后，單核羥基氧化鐵逐漸生成不溶于水的多聚鐵核，經(jīng)純化得到多聚鐵核沉淀，然后在特殊反應(yīng)條件下(如：溫度、pH和時(shí)間)，多聚鐵核和碳水化合物配體絡(luò)合生成納米鐵的復(fù)合物[34-35]。生產(chǎn)工藝研究過程中，首先，需結(jié)合反應(yīng)機(jī)制說明生產(chǎn)工藝的合理性，應(yīng)對(duì)原研藥進(jìn)行充分研究，明確產(chǎn)品的關(guān)鍵質(zhì)量屬性(特別是納米粒特性)，在此基礎(chǔ)上考察各工藝參數(shù)對(duì)關(guān)鍵質(zhì)量屬性的影響，特別要關(guān)注影響產(chǎn)品關(guān)鍵屬性的特殊反應(yīng)條件。對(duì)于中性碳水化合物，強(qiáng)pH可以增強(qiáng)鐵離子的絡(luò)合作用，因?yàn)榱u基去質(zhì)子化帶負(fù)電荷后與鐵離子的相互作用增強(qiáng)；在中性pH下，陰離子碳水化合物比如葡萄糖酸鹽是更好的納米粒子穩(wěn)定劑[36]。為穩(wěn)定糖鐵絡(luò)合物，工藝過程一般設(shè)置陳化工序。如：右旋糖酐鐵-羥基氧化鐵的糖-鐵的絡(luò)合程度與反應(yīng)溫度和時(shí)間有關(guān)，一定溫度范圍內(nèi)反應(yīng)時(shí)間越長(zhǎng)，絡(luò)合越完全[37]。其次，小試、中試及大生產(chǎn)批量放大過程中因批量放大導(dǎo)致的設(shè)備和工藝參數(shù)的變化可能引起的產(chǎn)品質(zhì)量的變化，需結(jié)合多批次小試、中試、放大和驗(yàn)證工藝的評(píng)估，從而確保工藝的穩(wěn)健性。此外，起始物料(鐵源、堿和碳水化合物等)，反應(yīng)過程都需嚴(yán)格控制，結(jié)合反應(yīng)終點(diǎn)和中間體的嚴(yán)格監(jiān)控才能保證納米鐵仿制藥與原研藥的高度相似，起始物料碳水化合物的質(zhì)量和純度對(duì)終產(chǎn)品的質(zhì)量非常關(guān)鍵，需進(jìn)行嚴(yán)格的結(jié)構(gòu)確證和質(zhì)量控制[28]。

3.2.1.2 制劑制備工藝

納米鐵膠體溶液的原料經(jīng)配液、調(diào)節(jié)pH、過濾、灌裝以及滅菌后得納米鐵注射液成品。制劑制備過程中，pH的調(diào)節(jié)、過濾、滅菌工藝，甚至是直接接觸藥品包材的選擇都可能影響納米鐵制劑的理化性質(zhì)。納米鐵膠體溶液中碳水化合物配體非緊密結(jié)合于羥基氧化鐵，結(jié)合態(tài)和非結(jié)合態(tài)碳水化合物處于動(dòng)態(tài)平衡，原料藥溶解、滅菌均涉及配體重建，即部分游離碳水化合物與羥基氧化鐵的重新絡(luò)合[37]。工藝溫度或濕熱滅菌可能改變碳水化合物配體的組成，需重點(diǎn)關(guān)注[28]。在批量放大過程中也需關(guān)注熱處理時(shí)間的延長(zhǎng)對(duì)產(chǎn)品質(zhì)量的影響。Shah等[38]研究表明：蔗糖鐵注射液(Venofer?)121 ℃下分別保溫0.5、1和3 h，由于蔗糖鐵顆粒的聚集，蔗糖鐵注射液的分子量隨保溫時(shí)間而顯著增加。這種保溫時(shí)間的延長(zhǎng)還可能會(huì)導(dǎo)致降解雜質(zhì)的增加，建議權(quán)衡利弊，進(jìn)而合理制定工藝參數(shù)。

3.2.2 質(zhì)量研究

質(zhì)量研究包括：性狀，有關(guān)物質(zhì)和含量等方面，與生產(chǎn)過程相關(guān)的質(zhì)量研究有：密封性、相容性等方面，此外，還應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注可能與體內(nèi)行為相關(guān)的納米粒特性的研究，特殊雜質(zhì)研究及穩(wěn)定性研究。建議至少采用多批仿制藥和多批原研藥進(jìn)行質(zhì)量對(duì)比，根據(jù)研究結(jié)果選擇相應(yīng)的質(zhì)量控制指標(biāo)，酌情列入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。為了更好地表征納米粒特性，研究過程應(yīng)考慮采用兩種或兩種以上的不同原理和方法。

3.2.2.1 納米粒特性的研究

1)鐵核特征包括：鐵核形態(tài)，大小，鐵(Ⅲ)-羥基氧化物晶體結(jié)構(gòu)，鐵核環(huán)境(鐵的價(jià)態(tài)、鐵的自旋態(tài)，鐵原子的配位態(tài)類型和配體結(jié)合的細(xì)節(jié))，F(xiàn)e(Ⅲ)/Fe(Ⅱ)還原電位等[9,27-30]。掃描透射電子顯微鏡(STEM)和原子力顯示鏡(AFM)可以表征鐵核形態(tài)和聚集狀態(tài)；透射電鏡(TEM)，X線衍射(XRD)，穆斯堡爾譜可以測(cè)定鐵核大??；紫外(UV)，XRD，紅外(IR)，透射電鏡/選區(qū)電子衍射(TEM/SAED)，透射電鏡/納米束電子衍射(TEM/NBED)，X線近邊吸收結(jié)構(gòu)譜(XANES)，拉曼光譜和穆斯堡爾譜可以表征鐵核的晶體結(jié)構(gòu)；UV，拉曼，穆斯堡爾譜和電子順磁共振波譜可以提供鐵周圍環(huán)境的相關(guān)信息。UV全波長(zhǎng)掃描可以表明納米鐵的特征吸收帶有氧→金屬躍遷產(chǎn)生250～390 nm高強(qiáng)度譜帶，配體的d→d躍遷產(chǎn)生470～500 nm、560～580 nm兩條低強(qiáng)度特征譜帶。

2)配體特征包括：糖殼的結(jié)構(gòu)和組成、糖-鐵核相互作用等。可以通過核磁(NMR)、IR、熱分析(TGA或DSC)、稀釋下的粒徑變化或極譜法等方法進(jìn)行表征[31-34]。如：通過比較多糖與多糖復(fù)合物IR光譜圖的峰形及峰位置的變化，可以判斷多糖與鐵離子是否絡(luò)合；進(jìn)一步通過稀釋或透析樣品的鐵吸收帶的光譜形狀或摩爾吸光系數(shù)來評(píng)估鐵核結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性。

3)取供試品和原研藥中分離得到的糖進(jìn)行特征比較，包括：平均分子量和分子量分布，糖支鏈化程度和不同糖苷鍵百分比等[31-34]。首選原子力顯示鏡(AFM)進(jìn)行配體微觀形態(tài)的表征。

4)膠體顆粒的理化性質(zhì)包括：鐵、游離和鍵合的糖的摩爾比，平均分子量和分子量分布,黏度，表面電荷(即z-電勢(shì))等。如：電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)、原子吸收光譜(AAS)或原子發(fā)射光譜法可以測(cè)定納米鐵的鐵含量，分子排阻色譜 (SEC)、膠滲透色譜(GPC)、分析型超速離心(AUC)和靜態(tài)光散射(SLS)可以測(cè)定平均分子量和分子量的分布，高效液相色譜(HPLC)可以測(cè)定游離的糖；元素分析可以測(cè)定鐵與糖的摩爾比。為了獲得準(zhǔn)確的測(cè)定結(jié)果，元素分析前可以采用透析等方法去除樣品中未結(jié)合和松散結(jié)合的糖，低分子量納米鐵復(fù)合物、輔料和雜質(zhì)[36,38-40]。

5)除了制劑中存在的松散結(jié)合可通過稀釋，將顆粒中的鐵離子釋放出來外，制劑中還含有不穩(wěn)定的鐵離子。不穩(wěn)定的鐵是指稀釋時(shí)不溶解但可通過鐵絡(luò)合劑(如：EDTA、FerroZine)在血液或體外轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)鐵蛋白的鐵。博來霉素分析法，轉(zhuǎn)鐵蛋白鍵合法，EDTA螯合法等都可以測(cè)定不穩(wěn)定的鐵含量[41-42]。

6)首選動(dòng)態(tài)光散射法(DLS)測(cè)定粒徑[用Z-average或多黏分散系數(shù)(PDI)來表示]。建議在不同稀釋條件下進(jìn)行粒度表征，并使用充分稀釋的樣品，以確保測(cè)量樣品的黏度與分散劑黏度相似。為表征仿制藥和原研藥粒徑的一致性，對(duì)至少3批自制樣品和3批原研藥進(jìn)行體外試驗(yàn)。3批測(cè)試樣品應(yīng)使用3批不同的原料生產(chǎn)。此外，3批試驗(yàn)樣品中至少有一批為商業(yè)化規(guī)模樣品，并用于體內(nèi)生物等效性試驗(yàn)。需采用群體生物等效性(PBE)方法對(duì)仿制藥和原研藥的粒徑和PDI進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析[43-44]。

3.2.2.2 特殊雜質(zhì)的研究

二價(jià)鐵、低分子量鐵(指從膠體溶液中透析或超濾出來的游離鐵)與藥品的質(zhì)量和毒性密切相關(guān)[45]，建議采用適宜的方法對(duì)二價(jià)鐵(極譜法、鈰滴定法、Ferrozine法)和游離鐵(透析或超濾方法)進(jìn)行研究和控制[41]，對(duì)分析方法進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)合與原研藥對(duì)比研究結(jié)果擬定合理的限度。

3.2.2.3 穩(wěn)定性研究

建議關(guān)注貯存過程的凝膠化現(xiàn)象,如：右旋糖酐中二聚體(通常是異麥芽糖、麥芽糖)含量應(yīng)控制在2.9%以下，二聚體-羥基氧化鐵絡(luò)合物物理穩(wěn)定性差，易導(dǎo)致制劑體系貯存過程的凝膠化[46]。

3.3 非臨床研究的考慮

基于納米鐵制劑結(jié)構(gòu)的復(fù)雜性，通過體外藥學(xué)比較，僅可以證明仿制藥與原研藥在現(xiàn)有藥學(xué)質(zhì)量控制手段下高度相似，無法確證其物質(zhì)基礎(chǔ)完全一致。因此單純的藥學(xué)比較研究難以說明仿制藥與原研產(chǎn)品在安全性和有效性上具有等效性。需要在藥學(xué)比較研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)行仿制藥與原研藥的分布比較，研究可以提示二者的體內(nèi)行為是否具有一致性；基于分布比較研究的結(jié)果確定后續(xù)是否需要進(jìn)行進(jìn)一步研究，如：安全性試驗(yàn)，血/血漿、組織比較，生物分布研究(含毒性靶器官)以及還原性鐵對(duì)細(xì)胞損傷的體內(nèi)評(píng)價(jià)[31-33]。非臨床研究樣品應(yīng)采用商業(yè)化生產(chǎn)工藝，理想情況下和臨床試驗(yàn)樣品為同一批次。

3.4 臨床研究的考慮

納米鐵制劑屬于典型的NBCD，現(xiàn)有的藥學(xué)質(zhì)量控制手段只能證明與原研產(chǎn)品具有一定的相似性，無法保證體內(nèi)藥代、組織分布等相同，因此對(duì)這類制劑建議不予豁免臨床研究[26-33]。

由于補(bǔ)鐵劑在臨床上的應(yīng)用較為成熟，有效性風(fēng)險(xiǎn)較低，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注其安全性，主要表現(xiàn)為嚴(yán)重過敏反應(yīng)，但由于發(fā)生率不高，需較大的臨床樣本量才能表明仿制藥與原研藥之間是否存在差異，因此開展Ⅲ期研究的價(jià)值相對(duì)有限。建議首先開展藥學(xué)、非臨床和人體生物等效性試驗(yàn)(BE)研究，如果上述數(shù)據(jù)全部顯示出納米鐵仿制藥與原研藥相似，則通常不需要進(jìn)一步進(jìn)行等效性的研究。若仍然對(duì)產(chǎn)品的安全性存在顧慮，則可以再考慮是否有必要進(jìn)行進(jìn)一步的Ⅲ期臨床研究。人體生物等效性試驗(yàn)設(shè)計(jì)和評(píng)價(jià)指標(biāo)建議參考國內(nèi)外相關(guān)技術(shù)指導(dǎo)原則。建議在BE試驗(yàn)過程中同時(shí)檢測(cè)非轉(zhuǎn)鐵蛋白結(jié)合鐵(NTBI)作為參考，通過描述性比較分析評(píng)價(jià)兩者的相似性。

4 納米鐵制劑藥物的警戒

藥品上市許可持有人(MAH)是藥品研發(fā)、生產(chǎn)和銷售的主體，負(fù)責(zé)整個(gè)生命周期內(nèi)的藥品質(zhì)量，應(yīng)當(dāng)基于藥品安全特征開展藥物警戒活動(dòng)，可以最大限度地降低藥品安全風(fēng)險(xiǎn)，保護(hù)和促進(jìn)公眾健康。靜脈注射納米鐵制劑的主要安全問題包括：急性效應(yīng)(如過敏反應(yīng))和鐵過載導(dǎo)致的器官損傷。過敏反應(yīng)是納米鐵制劑的特殊安全性問題，應(yīng)當(dāng)通過上市后風(fēng)險(xiǎn)管控計(jì)劃制定風(fēng)險(xiǎn)最小化措施；鐵過載導(dǎo)致的器官損傷是靜脈注射的納米鐵固有的不良反應(yīng)，通過嚴(yán)格遵守適應(yīng)癥或避免超范圍用藥可以大大降低這種風(fēng)險(xiǎn)[28]。此外，持有人應(yīng)聯(lián)合生產(chǎn)企業(yè)、經(jīng)營企業(yè)和醫(yī)療機(jī)構(gòu)加強(qiáng)藥品的不良反應(yīng)監(jiān)測(cè)，重點(diǎn)關(guān)注上市后的潛在的、特殊的、新的和嚴(yán)重的不良反應(yīng)，建立并不斷完善信息收集途徑，主動(dòng)、全面、有效地收集藥品使用過程中的疑似藥品不良反應(yīng)信息，包括：來源于自發(fā)報(bào)告，上市后相關(guān)研究及其他有組織的數(shù)據(jù)收集項(xiàng)目，學(xué)術(shù)文獻(xiàn)和相關(guān)網(wǎng)站等的信息，同時(shí)也要關(guān)注納米鐵上市后的有效性信息。

5 結(jié)論

總之，由于分子結(jié)構(gòu)與組成的特殊性，納米鐵制劑的生產(chǎn)、儲(chǔ)存和使用過程都與臨床療效和安全性密切相關(guān)。為保證此類仿制藥與原研藥臨床用藥的可互換性/可替代性，建議在對(duì)原研藥充分調(diào)研的基礎(chǔ)上，充分考察生產(chǎn)工藝對(duì)關(guān)鍵質(zhì)量屬性的影響，確定影響結(jié)構(gòu)的組成和質(zhì)量的關(guān)鍵步驟和工藝參數(shù)，從起始物料開始建立有效的過程控制措施，確保自制樣品與原研藥高度相似，并通過體外藥學(xué)研究確保仿制藥與原研藥高度相似的基礎(chǔ)上，進(jìn)行必要的非臨床和臨床研究，重點(diǎn)關(guān)注其安全性，并加強(qiáng)藥物警戒。