陳 晶，傅欣彤，陳有根，郭洪祝

基于UHPLC-QE Plus-MS/MS法分析柴黃顆粒及柴胡中化學(xué)成分

陳 晶，傅欣彤，陳有根，郭洪祝*

北京市藥品檢驗研究院 國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質(zhì)量評價重點實驗室中藥成分分析與生物評價北京市重點實驗室 北京 102206

基于UHPLC-QE Plus-MS/MS方法分析柴黃顆粒以及柴胡的化學(xué)成分，明確其質(zhì)量特征。以5%氨甲醇溶液超聲提取，采用Luna Omega色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.6 μm），以乙腈-0.1%甲酸溶液進行梯度洗脫，體積流量0.3 mL/min。電噴霧離子源（ESI），負離子模式下采集。根據(jù)精確相對分子質(zhì)量以及二級離子碎片信息，結(jié)合相對保留時間，通過查閱文獻以及和對照品比對，進行成分指認。鑒定出柴胡藥材中化合物50個；柴黃顆粒中71個化合物，其中36個峰歸屬于黃芩，33個歸屬于柴胡。建立的方法能快速、準確分析柴黃顆粒和柴胡化學(xué)成分，歸納各主要成分裂解規(guī)律，并通過與兩者成分比較，發(fā)現(xiàn)柴胡配伍前后化學(xué)成分的變化，提示柴黃顆粒及柴胡中的質(zhì)控成分。

柴黃顆粒；柴胡；黃芩；UHPLC-QE Plus-MS/MS；柴胡皂苷v；柴胡皂苷p；柴胡皂苷a；野黃芩苷

柴胡為方中君藥，主要有皂苷、揮發(fā)油、香豆素、甾醇類成分，黃芩含多種黃酮類衍生物。雖然柴胡黃芩這組藥對所含化學(xué)成分較多，但目前多集中于對柴胡皂苷a、d和黃芩苷的研究，對于柴胡煎煮前后皂苷成分的整體變化則更鮮有報道。本研究通過液質(zhì)聯(lián)用對柴黃顆粒中的化學(xué)成分進行分析，因柴胡中具有13, 28-氧環(huán)的三萜類化合物，其結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，在制劑加工過程中易斷裂生成次生物，故增加柴胡藥材的化學(xué)成分分析，通過中成藥與藥材中化學(xué)成分的比對，推斷配伍前后皂苷類成分變化規(guī)律，從整體上反映物質(zhì)基礎(chǔ)，為實現(xiàn)柴黃顆粒整體控制質(zhì)量提供依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜Ultimate 3000/Q Exactive Plus（Thermo公司）；DTC-27J型超聲波清洗器，湖北鼎泰恒勝科技設(shè)備有限公司。

1.2 材料

乙腈為色譜純（Thermo Fisher），甲酸為質(zhì)譜級，其它試劑為分析純。水為屈臣氏蒸餾水。柴胡（北柴胡）對照藥材（批號120992-201509）由中國食品藥品檢定研究院提供。對照品柴胡皂苷a（批號110777- 201912，質(zhì)量分數(shù)94.8%）、柴胡皂苷d（批號110778-201912，質(zhì)量分數(shù)96.3%）、野黃芩苷（批號110842-201709，質(zhì)量分數(shù)91.7%）、黃芩苷（批號110715-201821，質(zhì)量分數(shù)95.4%）、漢黃芩苷（批號112002-201702，質(zhì)量分數(shù)98.5%），為中國食品藥品檢定研究院提供；柴胡皂苷i（批號DST191109-015，97%），柴胡皂苷b1（批號DST200409-009，質(zhì)量分數(shù)98%），柴胡皂苷b2（批號DST191020-010，質(zhì)量分數(shù)98%），柴胡皂苷c（批號DST191118-007，質(zhì)量分數(shù)98%），柴胡皂苷g（批號DST191118-016，質(zhì)量分數(shù)98%），柴胡皂苷h（批號DST191118-014，質(zhì)量分數(shù)98%），柴胡皂苷f（批號DST191118-013，質(zhì)量分數(shù)98%），柴胡次苷D（批號DST191118-203，質(zhì)量分數(shù)98%），由樂美天醫(yī)藥|德斯特生物提供；尼泊柴胡皂苷k（批號7285，質(zhì)量分數(shù)98%），由NATURE STANDARD提供。柴黃顆粒（批號20191003）購自河南靈佑藥業(yè)股份有限公司。

2 方法

2.1 色譜條件

2.1.1 色譜條件 十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（Luna Omega色譜柱（100 mm×2.1 mm，1.6 μm），以0.1%甲酸溶液為流動相A，乙腈為流動相B，梯度洗脫（0～3 min，20%→30%B；3～15 min，30%→35%B；15～30 min，35%→65%B；30～35 min，65%→90%B；35～40 min，90%→100%B），體積流量0.3 mL/min，柱溫30 ℃，進樣量0.5 μL。

2.1.2質(zhì)譜條件電噴霧（ESI）源，離子源溫度：300 ℃，鞘氣體積流量40 arb，輔助氣體積流量10 arb，掃描范圍/150～1200，負離子全掃模式電壓3 kV。

2.2 溶液的制備

2.2.1 柴胡藥材溶液的制備 精密稱取柴胡對照藥材0.5 g，加5%氨甲醇溶液25 mL，超聲處理30 min，濾過，即得。

基于椒江流域土壤數(shù)據(jù)，參考梁音等[12]關(guān)于我國長江以南東部丘陵地區(qū)K因子的研究，完成不同土壤類型K值的賦值.通過查閱文獻[13-16]，選取與椒江流域自然地理相似區(qū)域C、P因子的研究成果，用于流域土壤侵蝕估算.

2.2.2 柴黃顆粒溶液的制備 精密稱取柴黃顆粒樣品（相當于柴胡藥材0.5 g）0.08 g，加5%氨甲醇溶液25 mL，超聲處理30 min，濾過，即得。

3 結(jié)果

用UHPLC-QE Plus-MS/MS負離子模式分析柴胡和柴黃顆粒5%氨甲醇溶液的質(zhì)譜總離子流圖，如圖1所示。因為黃芩中黃酮類成分含量與柴胡中三萜類成分含量不在同一個數(shù)量級，在同一張圖譜上不能完全反映出來，故根據(jù)兩者相對分子質(zhì)量以荷質(zhì)比660為分界在2個圖中展示。查閱大量柴胡、黃芩的文獻，建立相應(yīng)的化學(xué)成分數(shù)據(jù)庫，根據(jù)準分子離子得到其可能的分子式（誤差范圍±5×10?6），通過與TCMSP數(shù)據(jù)庫及本實驗室建立的數(shù)據(jù)庫鑒定識別其成分。個別化合物經(jīng)過了對照品進行指認。共識別出柴胡中50個化合物，柴黃顆粒中71個化合物，結(jié)果見表1、2。

3.1 柴胡中化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律分析

3.1.1 四糖三萜皂苷類 3號峰負離子/1 151.550 9 [M＋HCOO]?，其可能的分子式為C53H86O24，二級碎片中791.42、629.37響應(yīng)值較高，分別為失去－H2O－CO－xyol－glc－H2O，進而再丟失1個六碳糖葡萄糖所得，/483.31是脫掉1個甲基五碳巖藻糖。通過其裂解規(guī)律結(jié)合文獻報道[1]，鑒定為柴胡皂苷v。

3.1.2 三糖三萜皂苷類 6號峰與3號峰的二級碎片相同，其一級質(zhì)譜中分子離子以[M＋HCOO]?存在，/為989.498 17，與柴胡皂苷v相差162即1個六碳糖，查閱文獻報道[2]確定為柴胡皂苷v-1。

峰5、11、19的一級質(zhì)譜中分子離子荷質(zhì)比為1 003.512 51、1 003.514 95、1 003.514 59，軟件推測其分子式均為 C48H78O19，但二級碎片峰不同，峰2/957.50 [M－H]?丟失1個甲基五碳糖形成/811.46 [M－H－rha]?，再丟失1個六碳糖形成/649.39[M－H－rha－glc]?，或者先丟失1個六碳糖形成/795.47[M－H－glc]?，再丟失1個甲基五碳糖形成/649.39 [M－H－glc－rha]?，在/649.39基礎(chǔ)上丟失1個六碳糖成/487.34，由此推出3個糖是以支鏈形式與苷元結(jié)合，且甲基五碳糖外側(cè)不再與其它糖基結(jié)合，查閱文獻報道[3-5]歸屬了5號峰為柴胡皂苷q，同理歸屬11號峰為30-β吡喃葡萄糖-30-羥基柴胡皂苷b2，19號峰為柴胡皂苷p。

圖1 柴黃顆粒LC-MS/MS基峰離子流圖(提取范圍170～660，A；提取范圍660～1200，B) 及柴胡LC-MS/MS基峰離子流圖(C)

表1 柴胡中化學(xué)成分鑒定結(jié)果

續(xù)表1

*經(jīng)對照品確認的化合物，表2同

*compounds identified by reference standards, same as table 2

表2 柴黃顆粒中化學(xué)成分鑒定結(jié)果

續(xù)表2

續(xù)表2

s-來源于黃芩 b-來源于柴胡

s-souce ofb-souce of

12號峰通過精確相對分子質(zhì)量/1 005.529 42 [M＋HCOO]?確定其分子式為C48H80O19，根據(jù)碎片離子峰/959.52、797.47、635.42、487.34可得出其依次脫掉1個甲酸、2個六碳糖葡萄糖、1個甲基五碳巖藻糖和2個氫，查閱文獻報道[6]，與11α,16β,23,28-四羥基齊墩果烷-12-烯-3β吡喃巖藻糖基(3→1)-β葡萄糖基(2→1)-β葡萄糖苷一致。

13號峰與18號峰通過精確相對分子質(zhì)量確定分子式為C48H80O18，裂解規(guī)律相同，查閱的文獻[7-8]中，羥基柴胡皂苷c和尼泊柴胡皂苷k吻合，峰13出峰時間早，極性大，所以應(yīng)該對應(yīng)羥基柴胡皂苷c，峰18對應(yīng)尼泊柴胡皂苷k，且在相同質(zhì)譜條件下與尼泊柴胡皂苷k的保留時間和裂解規(guī)律一致，驗證了推斷結(jié)果。

14、15、17號峰[M＋HCOO]?分子離子峰質(zhì)荷比為843.476 26、843.476 50、43.477 05，軟件推斷的化學(xué)式相同即為C42H70O14，都出現(xiàn)[M－H－162]?碎片離子，14號峰與15號峰出現(xiàn) [M－H－162－146－146－18]?、[M－H－162－146－146－18－1]?碎片離子，在丟掉1個六碳糖與甲基五碳糖基礎(chǔ)上又失去了1個水，與羥基柴胡皂苷a、d裂解模式相同，16位連有β-OH的羥基柴胡皂苷a極性大于連有α-OH鍵的羥基柴胡皂苷d，故根據(jù)保留時間可確定對應(yīng)化合物。17號峰碎片離子/456.73是在丟失2個糖之后再斷裂1個羥甲基形成的，與文獻報道[9]中的bupleurosideXIII裂解規(guī)律相同。

同理推算，根據(jù)精確相對分子質(zhì)量和裂解規(guī)律結(jié)合文獻報道[10-12]，推算出16、20、22、23、24和37號峰，且20、22號峰與相應(yīng)的對照品出峰時間和二級碎片一致，結(jié)果詳見表1。

3.1.3 二糖三萜皂苷類 25號峰/825.464 97 [M＋HCOO]?，其響應(yīng)值與39號峰都非常高，脫掉HCOOH得到準分子離子779.46，再脫去1個葡萄糖（glc）和巖藻糖（fuc）得到617.41、471.35離子，其保留時間和裂解規(guī)律與柴胡皂苷a對照品相一致，確定25號峰為柴胡皂苷a，同理確定27、33、39號峰分別為柴胡皂苷b2、柴胡皂苷g、柴胡皂苷d。

26、29、31、40、41、42號峰通過準分子離子峰/865.461 12、865.460 82、865.459 84、865.460 75、865.460 39、865.459 47 [M－H]?分析其分子式均為C45H70O16，其裂解碎片中有脫落丙二酸單?；乃槠?，其他碎片峰與25號峰相近，根據(jù)文獻報道[13]，確認31號峰為6′′--丙二酸單酰柴胡皂苷a，42號峰為6′′--丙二酸單酰柴胡皂苷d，26、29、40、41號峰為丙二酸單?；c柴胡皂苷a/d中糖基的其他位置結(jié)合形成，因具體位置不確定，統(tǒng)稱為丙二酸單酰柴胡皂苷a/d。同理推測峰28、30、32、38、43、44、45、48為乙酰柴胡皂苷a或d，再結(jié)合其極性判斷是葡萄糖上2、3、4、6位分別被乙?；〈７?9、50為二乙?；窈碥誥或d，因取代位置可能性太多[14]，未能確定具體取代位置，因此命名時也未明確標注取代位置。

36號峰/809 [M＋HCOO]?，碎片峰為763 [M－H]?、601 [M－H－glc]?，均比柴胡皂苷a少1個氧，查閱文獻報道[15]確認為柴胡皂苷e。

3.1.4 單糖三萜皂苷類 34、35、46號峰一級質(zhì)譜以[M＋HCOO]?形式存在，質(zhì)荷比分別為663.412 54、663.413 21、663.412 60，碎片離子[M－H]?均為617.41，比對柴胡藥材和柴黃顆粒中/663提取的峰，結(jié)合醚鍵煎煮后結(jié)構(gòu)發(fā)生改變的規(guī)律，再參考文獻數(shù)據(jù)[16]，確認34號峰為柴胡次皂苷F，35號峰是46號峰柴胡次皂苷G的醚鍵斷裂產(chǎn)物柴胡次皂苷D。47號峰不飽和度值比38號峰大1，說明雙鍵數(shù)目要多1個，根據(jù)文獻數(shù)據(jù)[16]確認為柴胡次皂苷I。

3.1.5 非三萜皂苷類 7，9，10號峰通過荷質(zhì)比確定分子式均為C25H24O12，其裂解規(guī)律相似，均為丟失1個咖啡?；玫?353.09碎片峰，繼而再丟失1個咖啡?；玫?191.06碎片峰，或者丟失奎寧酸得到/179.03碎片峰，/173.04峰是/191.06碎片峰失去1個水分子所得，推斷為苯丙素類化合物異綠原酸，依據(jù)其極性[17-18]確定具體歸屬。21號峰半夏酸[19]分子離子峰/329.233 64 [M－H]?，分子式為C18H34O5，不飽和度僅為2，提示可能為不飽和羥基脂肪酸，/229.14為丟失戊酸所得，去掉丁烷得/171.10，去掉1個水分子得/211.13。黃酮類成分裂解規(guī)律同黃芩中的黃酮類成分。

3.2 柴黃顆粒中化合物的質(zhì)譜裂解規(guī)律分析

3.2.1 柴胡中三萜皂苷類成分 成藥中柴胡是水煎煮后入藥，在煎煮過程中，13,28-氧環(huán)不穩(wěn)定，醚鍵會斷裂生成次生物[10,20-22]。如柴胡皂苷a轉(zhuǎn)化成柴胡皂苷b1和柴胡皂苷g，柴胡皂苷d轉(zhuǎn)化成柴胡皂苷b2。6′′--乙酰柴胡皂苷a轉(zhuǎn)化成6′′--乙酰柴胡皂苷b1，6′′--乙酰柴胡皂苷d轉(zhuǎn)化成6′′--乙酰柴胡皂苷b2。草柴胡皂苷Ⅱ醚鍵斷裂成烯鍵形成的化合物為柴胡皂苷n，其同分異構(gòu)體16--草柴胡皂苷Ⅱ則轉(zhuǎn)換成柴胡皂苷s。柴胡皂苷c生成柴胡皂苷h和柴胡皂苷i，柴胡次皂苷F斷裂成柴胡次皂苷H和柴胡次皂苷A。以柴胡皂苷c為例，醚鍵斷裂規(guī)律見圖2，二級裂解碎片及裂解規(guī)律見圖3。藥材與成藥中皂苷類成分比對見表3，部分未檢出可能因為含量過低。

3.2.2 黃芩中黃酮類成分 碳苷類成分查閱文獻報道[23-24]，負離子質(zhì)譜中六碳黃酮碳苷二級碎片中會出現(xiàn)[M－H－60]?、[M－H－90]?、[M－H－120]?離子峰，五碳黃酮碳苷的二級譜圖中只能產(chǎn)生脫掉60和90的碎片峰。3號峰負離子一級質(zhì)譜中準分子離子峰為/547.147 34 [M－H]?，二級碎片峰457.12 [M－H－90]?、427.10 [M－H－120]?、487.13 [M－H－60]?、367.08 [M－H－120－60]?/[M－H－90－90]?、337.07 [M－H－120－90]?說明掉了1個六碳糖和五碳糖，二級碎片及裂解規(guī)律見圖4，通過比對文獻數(shù)據(jù)[25]，推測3號峰為白楊素-6--α--阿拉伯糖-8--β葡萄糖苷，同理推斷4～6、8、20、28號峰的歸屬。

圖2 柴胡皂苷c轉(zhuǎn)化成柴胡皂苷h和柴胡皂苷i示意圖

圖3 柴胡皂苷c裂解過程

表3 柴胡藥材及柴黃顆粒中皂苷類成分組成

“?”未檢出，“＋”含量低，“＋*”含量高

“?” trace, “＋”low, “＋*” high

圖4 白楊素-6-C-葡萄糖-8-C-阿拉伯糖苷裂解過程

葡萄糖醛酸苷類成分葡萄糖醛酸苷類成分二級質(zhì)譜中有一響應(yīng)值很高的丟失葡萄糖醛酸的苷元離子，部分可看到脫水分子。如野黃芩苷準分子離子峰/461.073 52 [M－H]?，根據(jù)精確相對分子質(zhì)量確定分子式為C21H18O12，二級碎片離子285.04分別是丟失1分子葡萄糖醛酸和1分子水得到。黃芩提取物中黃芩苷含量高于85%，在5%氨甲醇溶液中黃芩苷的分子離子峰為丟失2個氫所得，二級碎片峰269.05比野黃芩苷碎片離子285.04少1個氧，結(jié)構(gòu)式中應(yīng)該少1個羥基，其保留時間和碎片離子峰與對照品一致，確定為黃芩苷。對于相對分子質(zhì)量形同的同分異構(gòu)體，如19、29、31號峰，查閱文獻報道[26-28]，再根據(jù)結(jié)合位置極性大小，在反相柱中的出峰時間確定其具體歸屬。對于不確定具體取代位置的，則統(tǒng)一命名，如三羥甲氧基黃酮葡糖醛酸。

葡萄糖苷類成分17號峰與32號峰依據(jù)其精確相對分子質(zhì)量推斷出分子式為C21H20O10，二級質(zhì)譜中都有/269.05 [M－H－glc]?碎片離子，也相應(yīng)能觀察到葡萄糖碎片，檢索TCMSP數(shù)據(jù)庫，再結(jié)合其極性，推斷17號峰為芹菜素-7--β葡萄糖苷，32號峰為千層紙苷A。

黃酮苷元類成分黃酮苷元為黃酮類成分，多遵循RDA裂解規(guī)律，如黃芩素269.045 96 [M－H]?，脫去1分子水后得到/251.03碎片峰，分子離子峰通過RDA裂解方式得到碎片峰166.99和133.97，然后在黃酮本體（119、101）基礎(chǔ)上，根據(jù)2個碎片峰的相對分子質(zhì)量推算出各環(huán)上連接的基團，167比119多48，所以A環(huán)上連有3個羥基，133是167脫去2個羥基所得。分子離子峰269去掉167后是102，比101多1，B環(huán)上未連有其他基團。

3.3 輔料

柴黃顆?？傠x子流圖中0.74 min和1.15 min的2個峰響應(yīng)值最高，且質(zhì)荷比較小，1號峰一級譜圖顯示[M＋HCOO]?峰，二級碎片有去氫準分子離子峰341.11，單糖峰179.06、161.04以及單糖斷裂碎片峰119.03、89.02，根據(jù)其裂解規(guī)律及對照品定位確定為蔗糖，蔗糖在柴胡藥材中有少量存在，本實驗室依據(jù)樣品中柴胡的提取方式制備柴胡提取物，發(fā)現(xiàn)蔗糖轉(zhuǎn)移率低，對比后確定大部分蔗糖是作為輔料加入。2號峰/[M－Na]?178.053 1，二級譜圖中有亞硫酸根離子峰79.96以及去掉1個氧的161.89碎片離子，與文獻報道[29]中甜蜜素的裂解規(guī)律相同，與甜蜜素對照品保留時間與裂解規(guī)律一致，明確為甜蜜素，同時與該企業(yè)產(chǎn)品說明書中標明加入的2種甜味劑蔗糖和甜蜜素相吻合。

3.4 質(zhì)量特征成分

對柴黃顆粒及柴胡藥材中的化學(xué)成分分析，共識別出柴胡中50個化合物，其中皂苷類42個、苯丙素類4個、黃酮類成分3個及羥基不飽和脂肪酸1個，柴黃顆粒中71個化合物，36個歸屬于黃芩、33個歸于柴胡、11個皂苷類成分相對藥材有明顯檢出，該方法對柴黃顆粒及其中柴胡藥味中的成分可以在較短時間內(nèi)得到很好分離。

從分析結(jié)果可以看出，柴黃顆粒化學(xué)成分中來自黃芩提取物的成分以黃芩苷為主要代表，均以原形存在，組成基本穩(wěn)定，黃芩苷在現(xiàn)行質(zhì)量標準中已經(jīng)作為質(zhì)控成分，此外漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素也可納入質(zhì)控范圍；從表3柴胡藥材及成藥中皂苷類成分存在情況判斷，來自柴胡中的原型皂苷類成分柴胡皂苷a、f、c，伴隨次生皂苷類成分柴胡皂苷b1、b2、h、g，可以作為柴黃顆粒整體質(zhì)量控制的指標成分組合。柴胡皂苷c、f、a、d，6′′丙二酸單酰柴胡皂苷a、d，6′′乙酰柴胡皂苷a、d可以作為柴胡藥材的質(zhì)控指標性成分，其中6′′丙二酸單酰柴胡皂苷a、d可以用來衡量柴胡藥材儲存時間長短。

4 討論

柴胡中具有醚鍵的皂苷成分不穩(wěn)定，加入氨可以中和植物中酸，防止皂苷次生化[30]，因此為了真實反映柴胡原藥材與水煎煮后柴黃顆粒中皂苷類成分，選取藥典中柴胡含量測定項下的提取溶劑，即含5%濃氨試液的甲醇溶液進行提取。

柴黃顆粒組方簡單，只有柴胡和黃芩提取物兩味藥，柴胡中的三萜皂苷和黃芩中的黃酮氧苷類成分裂解規(guī)律相似，都是苷鍵易斷裂，黃酮碳苷類因為碳苷鍵較穩(wěn)定，多從糖基內(nèi)部斷裂，黃酮苷元多遵循RDA裂解規(guī)律。

對柴胡藥材與成藥中成分進行比較時發(fā)現(xiàn)，柴胡中有醚鍵的三萜成分，16位是β-OH的穩(wěn)定性遠大于α-OH，α型醚鍵原型成分在成藥中較難檢出。醚鍵三萜轉(zhuǎn)化成11,13-雙烯結(jié)構(gòu)成分要多于9,12-雙烯結(jié)構(gòu)，對于部分文獻報道的轉(zhuǎn)化成11-甲氧基，12-烯結(jié)構(gòu)，并未檢出，可能因為再加甲氧基相對自身雙鍵轉(zhuǎn)化阻力更大。葡萄糖上連有丙二酸?；脑碥疹愒诔伤幹锌赡芤蚝窟^低未有檢出，推測其在藥材儲存和煎煮過程中，酯鍵斷裂，生成柴胡皂苷a/d或其次生產(chǎn)物。

本實驗對柴黃顆粒和柴胡的基礎(chǔ)成分做了鑒別，尤其對柴胡水煎后入藥成分變化以及變化規(guī)律做了分析，初步明確了質(zhì)控指標性成分組合，為柴黃顆粒和柴胡的整體質(zhì)量控制提供了依據(jù)。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

[1] 梁鴻, 趙玉英, 白焱晶, 等. 柴胡皂甙v的結(jié)構(gòu)鑒定 [J]. 藥學(xué)學(xué)報, 1998, 33(4): 282-285.

[2] Liu Q X, Liang H, Zhao Y Y,. Saikosaponin v-1 from roots ofDC. [J]., 2001, 3(2): 139-144.

[3] 羅何生, 趙玉英, 馬立斌, 等. 柴胡皂甙q及其甙元的結(jié)構(gòu)鑒定 [J]. 藥學(xué)學(xué)報, 1995(6): 435-439.

[4] 羅何生, 趙玉英, 喬梁, 等. 柴胡皂甙 p的結(jié)構(gòu)鑒定 [J]. 植物學(xué)報, 1996, 38(11): 910-913.

[5] Seto H, ōtake N, Luo S Q,. Isolation of triterpenoid glycosides (saikosaponins) fromand their chemical stmctures [J]., 1986, 50(4): 943-948.

[6] Pistelli L, Bilia A R, Marsili A,. Triterpenoid saponins from[J]., 1993, 56(2): 240-244.

[7] Ebata N, Nakajima K, Hayashi K,. Saponins from the root of[J]., 1996, 41(3): 895-901.

[8] Hinako Ishiguro, Miwa Takeuchi, Akira Namera,. Studies on medicinal plant resources of the Himalayas、Chemical evaluation ofvar.collected in Nepal [J]., 2001, 55(2): 55-60.

[9] Matsuda H, Murakami T, Ninomiya K,. New hepatoprotective saponins, bupleurosides III, VI, IX, and XIII, from Chinese: Structure- requirements for the cytoprotective activity in primary cultured rat hepatocytes [J]., 1997, 7(17): 2193-2198.

[10] Ding J K, Fujino(nee Kimata) H, Kasai R,. Chemical evaluation ofspecies collected in Yunnan, China [J]., 1986, 34(3): 1158-1167.

[11] 方偉, 楊印軍, 郭寶林, 等. 藏柴胡中三萜皂苷類成分的研究 [J]. 中國中藥雜志, 2016, 41(7): 1251-1256.

[12] 賈琦, 張如意. 柴胡屬植物中皂甙化學(xué)研究進展 [J]. 藥學(xué)學(xué)報, 1989, 24(12): 961-971.

[13] Ebata N, Nakajima K, Hayashi K,. Saponins from the root of[J]., 1996, 41(3): 895-901.

[14] Seto H, Kawai H, ōtake N,. Structures of new saponins isolated fromY. Li et S. L. pan [J]., 1986, 50(6): 1613-1620.

[15] Huang H Q, Zhang X, Lin M,. Characterization and identification of saikosaponins in crude extracts from threespecies using LC-ESI-MS [J]., 2008, 31(18): 3190-3201.

[16] 魏曉萌. 錐葉柴胡化學(xué)成分及質(zhì)量控制方法研究 [D]. 北京: 北京中醫(yī)藥大學(xué), 2018.

[17] 段慧芳, 吳啟南, 朱亞瑩, 等. UPLC同時測定不同產(chǎn)地金銀花中10種成分 [J]. 中草藥, 2019, 50(23): 5858-5864.

[18] 郭敏娜, 劉素香, 趙艷敏, 等. 基于HPLC-Q-TOF-MS技術(shù)的柴胡化學(xué)成分分析 [J]. 中草藥, 2016, 47(12): 2044-2052.

[19] 史月姣, 王瑛, 朱惠照, 等. LC-MS快速分析紫蘇水煎液中的主要化學(xué)成分 [J]. 藥物分析雜志, 2015, 35(8): 1417-1423.

[20] 譚利, 趙玉英, 王分, 等. 柴胡皂甙s的結(jié)構(gòu)鑒定 [J]. 植物學(xué)報, 1998(2): 176.

[21] 張如意, 陳喜奎, 楊憲斌, 等. 柴胡皂甙m和柴胡皂甙n的結(jié)構(gòu)鑒定 [J]. 藥學(xué)學(xué)報, 1994, 29(9): 684-688.

[22] Shimizu K, Amagaya S, Ogihara Y. New derivatives of saikosaponins [J]., 1985, 33(8): 3349-3355.

[23] 吳新安, 都模勤. 黃酮碳苷類化合物ESIMS-MS裂解規(guī)律初探 [J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā), 2011, 23(6): 1085-1087.

[24] 楊悅, 劉穎, 劉曉謙, 等. 基于超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的山楂核抗菌?抗氧化藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究[J]. 世界中醫(yī)藥, 2021, 16(17): 2527-2532.

[25] Zhang F X, Li Z T, Li M,. An integrated strategy for profiling the chemical components ofand their exogenous substances in rats by ultra-high- performance liquid chromatography/quadrupole time-of- flight mass spectrometry [J]., 2020, 34(18): e8823.

[26] 龍海林. 黃芩表觀型化學(xué)組成特征及其在基源鑒定中的應(yīng)用研究 [D]. 北京: 北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院, 2014.

[27] 周丹丹, 鄒秦文, 林瑞超. 基于超高效液相色譜-四級桿-靜電場軌道阱質(zhì)譜的胃復(fù)春片化學(xué)成分研究[J].世界中醫(yī)藥, 2020, 15(13): 1841-1848.

[28] 柴沖沖, 曹妍, 毛民, 等. 基于HPLC特征圖譜、UPLC-Q-TOF/MS定性及多成分定量的黃芩酒炙前后化學(xué)成分變化研究 [J]. 中草藥, 2020, 51(9): 2436-2447.

[29] 李云飛, 殷紅, 楊玲春, 等. 超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜快速測定食品中6種甜味劑 [J]. 環(huán)境化學(xué), 2016, 35(8): 1737-1740.

[30] 閔宇航, 王京輝, 范妙璇, 等. 柴胡飲片皂苷類成分變化及質(zhì)量控制研究 [J]. 藥物分析雜志, 2014, 34(5): 836-843.

Analysis of chemical constituents of Chaihuang Granules by UHPLC-QE Plus-MS/MS

CHEN Jing, FU Xin-tong, CHEN You-gen, GUO Hong-zhu

NMPA Key Laboratory for Quality Evaluation of Traditional Chinese Patent Medicine, Beijing Key Laboratory of Components Analysis and Biological Evaluation on Chinese Medicine, Beijing Institute for Drug Control, Beijing 102206, China

To analyze and identify the chemical components and characteristic components of Chaihuang Granules (柴黃顆粒) and Chaihu () by UHPLC-QE Plus-MS/MS.The samples were extracted with 5% ammonia-methanol solution by ultrasonic. The analyses was performed on a Luna Omega C18column (100 mm×2.1 mm, 1.6 μm), the mobile phase was acetonitrile?0.1% formic acid solution with gradient elution mode at the flow rate of 0.3 mL/min. Electrospray ion source (ESI) was applied in negative ion mode. The chemical constituents were analyzed by exact relative molecular weight, fragment ion and the relative retention time and comparation with the related literature and reference standards.A total of 50 chemical compounds were identified from, 71 chemical compounds in Chaihuang Granules were identified, among which 36 compounds were attributed to Huangqin ()and 33 compounds were attributed to.The method is fast and highly sensitive for the screening and confirmation of the chemical constituents from Chaihuang Granules and. The fragmentation characteristics were summarized in this paper. By comparing the chemical constituents in Chaihuang Granules and, the chemical composition changes before and after compatibility can be found, which suggested a reference for the quality control components of Chaihuang Granules and.

Chaihuang Granules;;; UHPLC-QE Plus-MS/MS; saikosaponin v; saikosaponin p; saikosaponin a; scutellarin

R284.1

A

0253 - 2670(2022)15 - 4634 - 11

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.15.006

2022-03-09

陳 晶（1987—），女，碩士，主管藥師，主要從事中藥成分分析研究。Tel: 18010281088 E-mail: chenjing4477@163.com

通信作者：郭洪祝，男，博士生導(dǎo)師，主任藥師，主要從事中藥鑒定、成分分析及藥效代謝學(xué)研究。Tel: 18010281003 E-mail: guohz@bidc.org.cn

[責(zé)任編輯 王文倩]