何佳瑩，袁芳英，劉 灣，程 勐, 2，劉 美，金 一，奉建芳, 3，涂亮星*

中藥多糖對葛根素口服生物利用度及其跨膜轉運機制的影響

何佳瑩1，袁芳英1，劉 灣1，程 勐1, 2，劉 美4，金 一1，奉建芳1, 3，涂亮星1* 

1. 江西中醫(yī)藥大學中藥固體制造技術國家工程研究中心，江西 南昌 330000 2. 江西中醫(yī)藥大學附屬醫(yī)院，江西 南昌 330006 3. 廣西中醫(yī)藥大學藥學院，廣西 南寧 530200 4. 四川省食品檢驗研究院，四川 成都 611731

通過研究6種中藥多糖（人參多糖、白芨多糖、茶多糖、大豆多糖、枸杞多糖、葛根多糖）對葛根素在大鼠體內的藥動學變化，探討中藥多糖對葛根素口服吸收的影響，并采用犬腎MDCK細胞單層模型研究了中藥多糖的促口服吸收機制。大鼠ig葛根素及不同中藥多糖-葛根素混懸液后，于不同時間點采集血樣，經適當處理后，采用高效液相色譜（HPLC）測定血漿中葛根素的質量濃度，并以此計算和比較藥動學參數。采用MDCK細胞單層模型考察中藥多糖借助葡萄糖轉運提高葛根素跨膜吸收的能力。與中藥多糖聯合給藥后，葛根素的主要藥動學參數有不同程度的變化，主要呈現出促進葛根素口服吸收的趨勢，其中以人參多糖的促吸收效果最為卓越，人參多糖可將葛根素的達峰濃度（max）及曲線下面積（AUC0～∞）分別提高1.77及3.14倍。CCK-8實驗表明藥物質量濃度為5～1000 μg/mL、人參多糖質量濃度為20～10 000 μg/mL時，藥物及多糖無明顯細胞毒性。在50～1000 μg/mL質量濃度內，葛根素的表觀滲透系數（apparent permeability coefficient，app）無明顯變化；人參多糖可將葛根素的app顯著升高（＜0.05、0.01、0.001）；加入葡萄糖轉運抑制劑（根皮素、根皮苷）后，葛根素組的app無明顯變化，而人參多糖組的app顯著下降（＜0.001）。中藥多糖會通過葡萄糖轉運途徑提高葛根素的口服吸收，提示利用中藥多糖作為遞藥系統(tǒng)修飾劑，或許可成為一種有潛力的提高難吸收藥物口服吸收的技術手段。

人參多糖；白芨多糖；茶多糖；大豆多糖；枸杞多糖；葛根多糖；葛根素；藥動學；MDCK細胞單層；轉運機制；葡萄糖轉運途徑

多糖也稱多聚糖，是10個以上單糖通過糖苷鍵聚合而成的生物大分子，存在于動植物和微生物中。中藥多糖是用現代科技方法從中藥中提取的有效多糖[1]，具有抗炎、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、免疫調節(jié)[2]等生物活性。多糖為天然產物，具有較好的生物相容性[3-4]及免疫原性，且多糖分子含有大量的活性基團，可以進行化學修飾或結構改造[5-7]。近年來，基于多糖直接構建遞藥系統(tǒng)[8]或者以多糖作為靶向基團提高納米顆粒遞藥精準度[9]的研究常有報道，中藥多糖可作為遞藥載體遞送難溶性藥物，增加其生物利用度。同時也有研究證實中藥多糖可直接影響其他藥物的吸收，如天麻去除多糖后，其有效成分天麻素在體內的含量明顯減少，天麻多糖可以提高天麻素生物利用度[10-11]；麥冬的多糖含量較高[12]，五味子與麥冬合用后五味子的入血成分顯著提高；大豆多糖能夠增強染料木黃酮的生物利用度。因此中藥多糖可以被設計為藥物載體應用于新型遞藥系統(tǒng)中，也可以直接與藥物聯合給藥，提高藥物生物利用度[13]。目前有部分學者認為中藥多糖可能通過抑制P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）外排[14-17]、調節(jié)腸道菌群[18-19]等途徑促進藥物的口服吸收?？紤]到胃腸道中葡萄糖轉運途徑可高效遞送糖類物質，中藥多糖是否能借助葡萄糖轉運途徑提高難溶性中藥活性成分的口服吸收目前尚無相關研究。

葛根素是從豆科植物野葛(Willd.) Ohwi中提取的一種異黃酮類衍生物，是中藥葛根的主要藥效物質，具有抑制動脈硬化、抗心肌缺血、抗心律失常等作用[20]。葛根素溶解性較差[21-22]，腸道滲透性低，被歸為生物藥劑學分類系統(tǒng)（biopharmaceutics classification system，BCS）IV類藥物[23]。因此，盡管葛根素具有廣泛的藥理活性，但其臨床應用受到限制，主要以iv為主。且由于體內消除半衰期短，故需頻繁或大劑量給藥，可能導致嚴重的不良反應，目前如何提高以葛根素為代表的難溶性藥物的口服生物利用度是目前藥劑研究中的重點方向。

本研究擬使用中藥多糖作為修飾劑，將6種中藥多糖與葛根素聯合給藥，探索中藥多糖對難吸收藥物葛根素在大鼠體內口服吸收的影響；并使用犬腎MDCK細胞跨膜轉運模型來探索葡萄糖轉運途徑在其促葛根素口服吸收中的作用，驗證其是否能夠成為一種有潛力的提高難吸收藥物口服生物利用度的技術手段，也為中藥多糖在遞藥系統(tǒng)中的應用提供一種新的思路與方法。

1 材料

1.1 動物

SPF級雄性SD大鼠35只，7～8周齡，體質量200～220 g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，動物許可證號SCXK（湘）2019-0004。大鼠飼養(yǎng)于溫度（23±2）℃、相對濕度（55±5）%的江西中醫(yī)藥大學中藥固體制劑制造技術工程研究中心動物房中，實驗動物使用許可證號SYXK（贛）2018-0002。動物實驗遵循江西中醫(yī)藥大學實驗動物管理和使用的規(guī)定，均符合3R原則。

1.2 細胞

MDCK細胞株由中國科學院干細胞庫提供。

1.3 藥品與試劑

葛根素（質量分數為98%，批號20190105）購自南京欣厚生物科技公司；葛根素對照品（質量分數為95.4%，批號110752-201816）購自中國食品藥品檢定研究院；人參多糖、茶多糖、白芨多糖、枸杞多糖、大豆多糖（質量分數為98%，批號分別為BCSW200928-3、BCSW200927-3、BCSW200805-2、BCSW200814-2、BCSW200901-1）購自西安百川生物科技有限公司；葛根多糖（質量分數為85%，批號20200617412）購自武漢澤山成生物醫(yī)藥技術有限公司；枸櫞酸（質量分數為100%，批號20200204）購自成都華邑藥用輔料制造有限責任公司；對羥基苯甲酸（質量分數為99.5%，批號H108509）、根皮苷（質量分數為98%，批號P139206）、根皮素（質量分數為98%，批號P127748）購自上海阿拉丁生化科技股份公司；CCK-8試劑盒購自大連美侖生物技術有限公司；胎牛血清購自美國Gibco公司；DMEM高糖培養(yǎng)基、非必需氨基酸、0.25%胰酶-0.02% EDTA、PBS溶液購自北京索萊寶科技有限公司；高氯酸、甲醇、乙醇均為分析純。

1.4 儀器

Transwell小室（孔徑0.4 μm，直徑12 mm，底面積1.12 cm2）、培養(yǎng)瓶購自美國Costar公司；XW-80A型旋渦混合器（上海精科實業(yè)有限公司）；高效液相色譜儀（HPLC，日本島津公司）；TGL-16C型離心機（上海安亭科學儀器廠）；KQ-500DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；BSA124S型分析天平（賽多利斯科學儀器有限公司）；HZT-A3000型電子天平（美國HZ公司）；細胞電壓電阻儀（美國Millipore公司）。

2 方法

2.1 血漿樣品測定方法學建立

2.1.1 內標溶液的配制 精密稱取一定量對羥基苯甲酸，用甲醇配制成30 μg/mL的內標溶液。

2.1.2 葛根素對照品溶液的配制 精密稱取葛根素對照品10.00 mg，置于10 mL量瓶中，加甲醇溶解后，定容至刻度，搖勻，即得質量濃度為1.00 mg/mL的葛根素儲備液。逐級稀釋得到質量濃度為0.05、0.1、0.25、0.5、1、2.5、5、10 μg/mL的系列葛根素對照品溶液。

2.1.3 質控樣品的配制 向大鼠空白血漿中分別加入低、中、高3個質量濃度的葛根素對照品溶液，配制成不同質量濃度的質控樣品，于?20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.1.4 血漿樣品處理方法 精密吸取50 μL血漿置于1.5 mL EP管中，依次加入10 μL內標溶液、50 μL高氯酸甲醇溶液，渦旋3 min，12 000 r/min離心10 min，取上清液進樣檢測，記錄峰面積并計算血藥濃度。

2.1.5 液相條件 Welch Ultimate XB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-0.1%枸櫞酸溶液（27∶73）；柱溫為30 ℃；檢測波長為250 nm；體積流量為1 mL/min；進樣體積為10 μL。

2.1.6 專屬性 分別處理空白血漿、空白血漿＋內標溶液、空白血漿＋內標溶液＋葛根素溶液、含藥血漿，處理后，注入液相系統(tǒng)，按“2.1.5”項下條件分析并記錄圖譜。

2.1.7 標準曲線 向大鼠空白血漿中分別加入不同質量濃度的葛根素對照品溶液，每個質量濃度各取3份，按照“2.1.4”項進行處理，注入液相分析。此時，該標準溶液中葛根素的質量濃度分別為0.023、0.045、0.114、0.227、0.454、1.136、2.273、4.545 μg/mL。數據處理時，以葛根素峰面積與內標峰面積比值（）對質量濃度（）建立標準曲線。

2.1.8 精密度 分別取“2.1.3”項配制的質控樣品，按照“2.1.4”項進行處理，得到含葛根素質量濃度分別為0.114、0.454、4.545 μg/mL的低、中、高質量濃度溶液，在一天內不同的時間進樣5次，記為日內精密度；每日配制樣品，共測定5 d，記為日間精密度。

2.1.9 提取回收率 分別取“2.1.3”項配制的質控樣品，每個質量濃度各取3份，按照“2.1.4”項進行處理，進樣分析，得樣品中葛根素的峰面積。取空白血漿，按“2.1.4”項方法沉淀蛋白后，取上清液，分別加入相對應的低、中、高質量濃度葛根素對照品溶液，進樣分析，得到未經提取的葛根素的峰面積。以2次峰面積的比值計算提取回收率。

2.1.10 定量限 分別按照“2.1.3”項配制出不同質量濃度的質控樣品，每個質量濃度各取3份，按照“2.1.4”項進行處理，注入液相分析，考察該方法的定量限。

2.1.11 穩(wěn)定性 分別取“2.1.3”項配制的質控樣品，按照“2.1.4”項進行處理，得到含葛根素質量濃度分別為0.114、0.454、4.545 μg/mL的低、中、高質量濃度溶液，分別在進樣器放置12 h后，進液相分析，檢測進樣器放置穩(wěn)定性。將空白血漿從?20 ℃冰箱拿出，室溫放置4 h，再進行樣品處理，進液相分析，考察血漿樣品在室溫短期放置后再處理，葛根素的穩(wěn)定性。將未處理的血漿樣品在?20 ℃冰箱和室溫間反復凍融3次，再進行樣品處理，測定其含量，檢測樣品的凍融穩(wěn)定性。

2.2 中藥多糖對葛根素口服藥動學的影響

2.2.1 藥動學實驗 實驗前將動物禁食不禁水飼養(yǎng)12 h，給藥前根據動物體質量，分別ig葛根素原料藥（100 mg/kg）及人參多糖-葛根素溶液、白芨多糖-葛根素溶液、枸杞多糖-葛根素溶液、茶多糖-葛根素溶液、葛根多糖-葛根素溶液、大豆多糖-葛根素溶液（葛根素100 mg/kg，多糖1 g/kg）。

分別于5、15、30及1、2、4、6、8、12、24 h從眼眶靜脈叢中取血300 μL（給藥4 h后，大鼠適當補水，保持良好的生理狀態(tài)），將血液置于離心機中以3000 r/min離心10 min，取上清液，置?20 ℃冰箱中，待測。

2.2.2 數據處理 將血藥濃度、給藥劑量、給藥途徑等參數輸入DAS 3.2中進行藥動學分析和參數計算，并根據軟件所得的曲線下面積（AUC）計算葛根素原料藥、各種多糖葛根素溶液的相對生物利用度（Fr）。

2.3 細胞毒性研究

2.3.1 細胞培養(yǎng) MDCK細胞接種于常規(guī)培養(yǎng)瓶中，用含10%胎牛血清、1%非必需氨基酸的DMEM培養(yǎng)基，于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。隔天更換培養(yǎng)基，當細胞達到80%～90%融合時，吸棄舊培養(yǎng)液，用37 ℃的PBS溶液清洗2遍，0.25%胰酶-0.02% EDTA消化，傳代。

2.3.2 CCK-8法評價細胞毒性 調整MDCK細胞密度為8×104個/mL，接種于96孔板中，每孔100 μL，保留3個孔不接種細胞用于排除培養(yǎng)液吸光度（）的干擾，于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24 h，用PBS溶液清洗細胞，排除培養(yǎng)基的干擾，加入用DMEM培養(yǎng)基稀釋的不同質量濃度（5、10、20、50、100、500、1000 μg/mL）的葛根素和不同質量濃度（20、50、100、200、500、1000、2000、5000、10 000 μg/mL）的人參多糖，對照組和3個沒有接種細胞的孔加入不含藥物的DMEM培養(yǎng)基，分別培養(yǎng)2、24 h，棄去藥液并用PBS清洗細胞2次；各孔加入10 μL CCK-8溶液，搖勻；放入培養(yǎng)箱孵育2 h后，取出；采用酶標儀測定450 nm處的值，計算細胞存活率。

細胞存活率＝(給藥－空白)/(對照－空白)

采用GraphPad Prism 5軟件和SPSS 23.0軟件進行數據的處理及統(tǒng)計分析。所得結果用表示，采用檢驗進行兩組均數比較。

2.4 多糖對葛根素跨MDCK細胞單層轉運的影響

2.4.1 葛根素質量濃度對葛根素轉運的影響 當細胞生長至覆蓋瓶底的80%～90%時，胰酶消化，將細胞以4×105個/mL接種于Transwell的聚碳酸酯膜上，每孔0.5 mL，在Transwell接受池（BL）加入1.5 mL培養(yǎng)液，接種24 h后更換培養(yǎng)液，培養(yǎng)約1周，定時測定跨膜電阻（TEER）值，并用電子顯微鏡觀察細胞生長情況，當TEER值＞200 Ω/cm2時，用于轉運實驗。用DMEM培養(yǎng)基洗去黏附在細胞表面的代謝物。分別將0.5 mL不同質量濃度（50、200、500、1000 μg/mL）的葛根素溶液加入到供給池（AP），同時在BL加入1.5 mL DMEM培養(yǎng)基，將Transwell置于37 ℃培養(yǎng)箱中孵育，于90 min從BL池吸取接收液0.5 mL。收集樣品于?4 ℃保存待測。樣品按1∶4比例加入甲醇進行稀釋，12 000 r/min離心10 min，取上清液，按“2.1.5”項下條件進行HPLC測定，計算表觀滲透系數（apparent permeability coefficient，app）[24]。

app＝d/d×1/×1/0

d/d為單位時間內轉運量，為轉運膜的表面積（1.12 cm2），0為AP中葛根素的初始質量濃度

2.4.2 人參多糖質量濃度對葛根素轉運的影響 用DMEM培養(yǎng)基配制葛根素（500 μg/mL）與人參多糖質量濃度比分別為1∶0、1∶1、1∶5、1∶10、1∶20的藥液。構建MDCK細胞模型，將0.5 mL藥液加入到AP，其余操作同“2.4.1”項。

2.4.3 葡萄糖轉運體抑制劑[25-28]對葛根素轉運的影響 根據文獻調研發(fā)現根皮素可以有效抑制葡萄糖轉運蛋白1（glucose transporter 1，GLUT1），并且對GLUT其他亞型也有一定的抑制作用；根皮苷能夠抑制鈉-葡萄糖共轉運蛋白（sodium-glucose co-transporter，SGLT），特別是SGLT1這個亞型。考察根皮素（1 mmol/L）、根皮苷（1 mmol/L）對葛根素（500 μg/mL）及葛根素（500 μg/mL）＋人參多糖（5 mg/mL）的影響。構建MDCK細胞模型，將0.5 mL藥液加入到AP，其余操作同“2.4.1”項。

3 結果

3.1 血藥濃度方法學考察

3.1.1 專屬性考察結果 如圖1所示，內標峰及葛根素峰形較好，且大鼠血漿中內源性物質對內標峰及葛根素峰沒有干擾，內標峰的保留時間在10.2 min左右，葛根素保留時間在12.2 min左右。實驗結果表明專屬性良好，符合方法學要求。

3.1.2 標準曲線 以質量濃度為橫坐標（），葛根素與內標峰面積比值為縱坐標（），得到葛根素的回歸方程為＝0.359 3－0.004 8（2＝0.999 8）。

結果顯示，體內葛根素質量濃度在0.023～4.545 μg/mL線性關系良好，符合方法學要求。

3.1.3 精密度考察結果 如表1所示，葛根素低質量濃度日內和日間精密度的RSD均小于15%，中、高質量濃度日內和日間精密度的RSD均小于5%，見表1。實驗結果表明精密度良好，符合生物樣品精密度要求。

3.1.4 提取回收率考察結果 結果顯示，在低、中、高質量濃度下葛根素提取回收率分別為（91.49±3.6）%、（90.22±2.7）%和（91.04±3.4）%。

圖1 空白血漿(A)、空白血漿＋內標溶液(B)、空白血漿＋內標溶液＋葛根素溶液(C)和含藥血漿(D) 的HPLC圖

表1 葛根素的日內和日間精密度

3.1.5 定量限 當體內樣品中葛根素的質量濃度為0.016 μg/mL時為定量限，信噪比大于10，RSD%為8.1%，均符合方法學要求。

3.1.6 穩(wěn)定性 如表2所示，血漿樣品制備好在室溫放置12 h內質量濃度不會有所變化，未處理的血漿樣品在室溫4 h內短期放置和?20 ℃冰箱到室溫反復凍融3次后處理，其質量濃度無明顯的變化，所有RSD均小于15%，符合方法學要求。

表2 葛根素血漿樣品的穩(wěn)定性

3.2 藥動學結果

大鼠分別ig葛根素和多糖葛根素后，采用上述所建立的方法測定各時間點的血藥濃度，以大鼠血藥濃度作為縱坐標，時間作為橫坐標作圖，得到平均血藥濃度-時間曲線，見圖2。采用DAS 3.2軟件進行非房室模型擬合，計算達峰時間（max）、達峰濃度（max）、AUC及半衰期（1/2）等藥動學參數，并用SPSS 23.0軟件分別對各參數進行獨立樣本檢驗，見表3。葛根素單獨給藥后max小于30 min，吸收迅速，血藥濃度達峰時間較快。與6種中藥多糖聯合給藥后，葛根素的主要藥動學參數max、AUC0～24、AUC0～∞均有不同程度的變化。其中葛根素與葛根多糖聯用后AUC0～24為對照組的0.89倍；與枸杞多糖聯用后AUC0～24為對照組的1.21倍；與白芨多糖聯用后AUC0～24為對照組的1.40倍；與茶多糖聯用后AUC0～24為對照組的1.72倍；與大豆多糖聯用后AUC0～24為對照組的1.98倍；與人參多糖聯用后AUC0～24為對照組的3.14倍。

圖2 ig不同制劑后大鼠體內平均血藥濃度-時間曲線(n = 5)

3.3 CCK-8實驗結果

如圖3所示，葛根素在5～1000 μg/mL、人參多糖在20～10 000 μg/mL作用于MDCK細胞2、24 h后，細胞存活率均大于95%，表明在此質量濃度范圍內葛根素和人參多糖對細胞無明顯毒性。

3.4 多糖對葛根素跨MDCK細胞單層轉運的影響

如圖4-A所示，各質量濃度葛根素的app值無顯著差異，說明質量濃度對葛根素轉運無影響；且app值均小于4×10?6cm/s，表明其滲透性差，可能導致其口服生物利用度低。

表3 不同制劑的主要藥動學參數(n = 5)

與葛根素組比較：*＜0.05**＜0.01***＜0.001

*< 0.05**< 0.01***< 0.001puerarin group

圖3 葛根素(A) 及人參多糖(B) 對MDCK細胞活力的影響(, n = 3)

如圖4-B所示，加入人參多糖后，葛根素的app均有顯著升高（＜0.05、0.01、0.001），且隨著二者比例增高app值有上升的趨勢，并在1∶10時達到最高。葛根素的app值在質量濃度比為1∶20時開始降低，表明人參多糖在促進葛根素的跨膜轉運方面具有一定的閾值。

如圖4-C所示，加入根皮素和根皮苷后，葛根素組中葛根素的app值無明顯變化，表明葡萄糖轉運體不參與葛根素的跨膜轉運。但在葛根素＋人參多糖組，加入抑制劑根皮素和根皮苷后，葛根素的app均顯著降低（＜0.001），表明人參多糖促吸收機制與葡萄糖轉運體有關。

4 討論

關于中藥多糖促進難溶性藥物口服吸收的相關機制，目前部分研究者已經進行了相關研究，認為中藥多糖可能通過以下途徑影響藥物吸收：①中藥多糖可以抑制外排蛋白活性，成日華、吳芬等[14-16]發(fā)現枸杞多糖和靈芝多糖肽可以將P-gp特異性底物Rh-123的外排率減低25.6%及33%；②中藥多糖可以調節(jié)腸道菌群種類及數量，李瑞剛、Shen等[18-19]發(fā)現人參多糖可以顯著提高腸道中乳桿菌和擬桿菌的豐度，從而提高人參皂苷的腸內代謝，進一步提高活性更強的次生苷吸收入血發(fā)揮藥效；③中藥多糖可以影響藥物代謝酶活性，夏雪雁等[29]發(fā)現當歸總多糖使正常小鼠肝微粒體及線粒體谷胱甘肽S-轉移酶活性分別升高152%和12%。張國偉等[30]發(fā)現豬苓多糖可以使樣本中細胞色素P450（cytochrome P450，CYP450）酶活性降低21.12%。對于人參多糖是否可通過其他途徑促進難溶性藥物的口服吸收暫未見其他報道。

A-不同質量濃度葛根素的Papp B-葛根素與人參多糖的不同質量濃度比對葛根素Papp的影響 C-葛根素在葡萄糖轉運體抑制劑（根皮素、根皮苷）作用下的Papp 與對照組比較：*P＜0.05 **P＜0.01 ***P＜0.001

Wu等[31]發(fā)現小分子果糖可以通過營養(yǎng)吸收途徑促進納米口服給藥的單向上皮轉運。根據這一實驗結果推測：①中藥多糖中含有豐富的糖類物質；②葡萄糖轉運途徑為人體中高效的能量轉運途徑，其可有效地吸收以葡萄糖為代表的糖類物質。因此，推測中藥多糖是否可以通過葡萄糖轉運途徑提高藥物的跨膜轉運，從而提高其口服生物利用度。本研究結果表明，加入人參多糖后葛根素的app有所提高，且隨著多糖質量濃度升高，app值有上升的趨勢，加入葡萄糖轉運抑制劑（根皮素、根皮苷）后葛根素組的app無明顯變化，而人參多糖組的app顯著下降。證實人參多糖促進葛根素吸收過程與葡萄糖轉運體有密切關系。并發(fā)現，在一定質量濃度范圍內（0.5～5 mg/mL），人參多糖促進葛根素跨膜轉運的速率與質量濃度呈正相關關系，人參多糖質量濃度越高，葛根素的app越大。但當人參多糖質量濃度達到10 mg/mL時，葛根素的app開始下降，可能與高質量濃度的人參多糖阻礙藥物與細胞的接觸，從而影響藥物的跨膜轉運有關。

本研究前期使用的其他多糖：葛根多糖和枸杞多糖對葛根素的口服生物利用度無明顯影響；白芨多糖、大豆多糖和茶多糖能夠提高葛根素在大鼠體內的口服吸收，但本研究暫未對其促吸收機制進行考察。因此，是否其他中藥多糖也可通過葡萄糖轉運途徑影響葛根素的口服吸收暫未得到證實，后續(xù)本課題組也將會對此進行更加深入的研究。

綜上所述，人參多糖可能會通過葡萄糖轉運途徑提高葛根素的口服吸收，提示利用人參多糖作為遞藥系統(tǒng)修飾劑，或許可成為一種有潛力的提高難吸收藥物口服吸收的技術手段，也為中藥多糖在遞藥系統(tǒng)中的應用提供一種新的思路與方法。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Effect of Chinese medicine polysaccharide on pharmacokinetic behaviors and transmembrane mechanisms of puerarin

HE Jia-ying1, YUAN Fang-ying1, LIU Wan1, CHENG Meng1, 2, LIU Mei4, JIN Yi1, FENG Jian-fang1, 3, TU Liang-xing1

1. National Pharmaceutical Engineering Center for Solid Preparation Chinese Herbal Medicine, Jiangxi University of Chinese Medicine, Nanchang 330000, China 2. The Affiliated Hospital of Jiangxi University of Chinese Medicine, Nanchang 330006, China 3. School of Pharmacy, Guangxi University of Chinese Medicine, Nanning 530200, China 4. Sichuan Institute of Food Inspection, Chengdu 611731, China

To explore the effect of traditional Chinese medicine polysaccharide on oral absorption of puerarin by studying the effect of six kinds of traditional Chinese medicine polysaccharide (ginseng polysaccharide,polysaccharide, tea polysaccharide, soybean polysaccharide,polysaccharide,polysaccharide) on pharmacokinetic changes of puerarin in rats. And to study the mechanism of promoting oral absorption of traditional Chinese medicine polysaccharides by using canine kidney MDCK cell monolayer model.After ig puerarin and different traditional Chinese medicine polysaccharide-puerarin suspensions, blood samples were collected at different time points. After appropriate treatment, concentration of puerarin in plasma was determined by high performance liquid chromatography (HPLC), pharmacokinetic parameters were calculated and compared. MDCK cells monolayer model was used to investigate the ability of traditional Chinese medicine polysaccharides to enhance the transmembrane absorption of puerarin through glucose transport.After co-administration with traditional Chinese medicine polysaccharides, main pharmacokinetic parameters of puerarin were changed to varying degrees, mainly showing a trend of promoting oral absorption of puerarin. Among them, ginseng polysaccharide had the most excellent absorption promoting effect. Peak concentration (max) and area under the curve (AUC0～∞) were increased by 1.77 and 3.14 times. CCK-8 experiment showed that when the concentration of drug was 5—1000 μg/mL and concentration of ginseng polysaccharide was 20—10 000 μg/mL, drug and polysaccharide had no obvious cytotoxicity. Within the concentration of 50—1000 μg/mL, apparent permeability coefficient (app) of puerarin had no significantly changed; Ginseng polysaccharide significantly increasedappof puerarin (< 0.05, 0.01, 0.001); After adding glucose transport inhibitors (phloretin, phlorizin),appin puerarin group had no significant changed, whileappin ginseng polysaccharide group was significantly decreased (< 0.001).Traditional Chinese medicine polysaccharides can improve the oral absorption of puerarin through the glucose transport pathway, suggesting that the use of traditional Chinese medicine polysaccharides as drug delivery system modifiers may become a potential technical means to improve the oral absorption of refractory drugs.

ginseng polysaccharide;polysaccharide; tea polysaccharide; soybean polysaccharide;polysaccharide;polysaccharide; puerarin; pharmacokinetics; MDCK cellsmonolayer; transport mechanism; glucose transport pathway

R285.5

A

0253 - 2670(2022)15 - 4738 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.15.017

2022-04-14

江西省主要學科學術和技術帶頭人培養(yǎng)計劃項目（20212BCJL23060）；江西中醫(yī)藥大學“1050”青年人才工程項目（5142001012）；江西中醫(yī)藥大學博士啟動項目（2018BSZR018）

何佳瑩，女，碩士研究生，從事新型遞藥系統(tǒng)研究。E-mail: hejiaying0511@163.com

通信作者：涂亮星，男，博士，副教授，從事新型遞藥系統(tǒng)研究。E-mail: tufrankie@163.com

[責任編輯 李亞楠]