盧志華 張洪彬 黃文濱 張滿娥 鄧文華 鄧巧芳

乙型肝炎（又稱乙肝），是因為乙肝病毒所導(dǎo)致具有著極大危害性的一類病毒性肝炎，在中國乙型肝炎患病率較高。乙肝肝硬化是一種因多種病因反復(fù)發(fā)作引起的肝臟彌漫性損害，主要表現(xiàn)出肝功能減退、門靜脈高壓、全身性系統(tǒng)惡心、嘔吐等癥狀，臨床目前多使用抗病毒性藥物治療乙肝肝硬化失代償患者，以此阻斷肝硬化進程，緩解患者癥狀。乙肝病毒基因（即HBV-DNA）是主要判斷乙肝病毒是否存在復(fù)制的“黃金標(biāo)準(zhǔn)”。依據(jù)乙肝病毒復(fù)制過程里核苷酸堿基錯誤配對的差異性，可分成8種基因型，其分別使用A～H進行表示。據(jù)相關(guān)研究數(shù)據(jù)顯示，對乙肝患者的不同臨床特點給予研究，對HBV的治療以及評估有著重要意義[1-2]。HBV感染的臨床轉(zhuǎn)歸不僅與患者年齡和免疫力有關(guān)，而且也與病毒株的基因型密切相關(guān)，鑒于此，文章將分析福建閩西地區(qū)乙肝病毒基因分型與臨床指標(biāo)的相關(guān)性，文章選擇2019年2月—2020年2月于本院就診的300例HBV感染者的血清標(biāo)本作為研究對象，通過HBV基因分型的研究，可以了解基因型的地區(qū)分布特點以及在人群中的變異和進化趨勢。

1 資料與方法

1.1 一般資料

將2019年2月—2020年2月于本院就診的300例HBV感染者的血清標(biāo)本數(shù)據(jù)資料進行整合分析，數(shù)據(jù)分析結(jié)果歸入本次研究數(shù)據(jù)庫。300例感染者，B型151例，男性111例，女性40例，年齡12～75歲，平均（38.12±2.41）歲；C型87例，男性65例，女性22例，年齡12～74歲，平均（37.52±2.19）歲；非B非C型62例，男性49例，女性13例，年齡12～76歲，平均（38.21±2.94）歲。所有患者均同意參與本次研究調(diào)查，并均簽署知情同意書，并征得院倫理委員會同意并批準(zhǔn)，所有感染者均符合中華醫(yī)學(xué)會2015年病毒性肝炎會議制定的標(biāo)準(zhǔn)[3]，原發(fā)性肝癌診斷標(biāo)準(zhǔn)符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范（2011年版）》[3]。所有病例均排除甲、丙、戊型肝炎病毒陽性。

1.2 檢測方法

采用熒光定量 PCR測定300例分類感染人群的HBV-DNA含量和基因芯片反向斑點雜交技術(shù)檢測乙肝病毒基因分型，熒光定量PCR檢測HBV-DNA定量檢測采用達安公司試劑盒，具體操作按說明書?；蛐酒聪虬唿c雜交檢測采用深圳亞能生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，具體操作按說明書[4]。

乙型肝炎病毒去氧核糖核酸是提取的乙型肝炎病毒試劑盒和擴增的讀出時間飯后內(nèi)電阻熒光法。操作步驟按照說明書執(zhí)行，并提供負(fù)控制和正調(diào)節(jié)[5]。

采用熒光定量乙型肝炎病毒內(nèi)電阻法測定了300例分類感染人群的HBV-DNA含量。所有操作都嚴(yán)格按照熒光定量試驗指南進行。用拷貝數(shù)表達HBV-DNA載量。

1.3 評價指標(biāo)

目的觀察乙型肝炎病毒（HBV，Hepatitis B）感染者HBV基因型及其與HBV-DNA、HBsAg、HBeAg的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

應(yīng)用SPSS 21.0統(tǒng)計學(xué)軟件包，計數(shù)資料以例（%）表示，行χ2檢驗或Fisher精確檢驗法，計量資料以（±s）表示，行t檢驗，P＜0.05則差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 基因分型測定結(jié)果

福建省閩西地區(qū)300例感染者基因分布是：B型151例，C型87例，非B非C型62例。

2.2 基因分型與乙肝病毒 DNA 定量測定

HBV-DNA定量與HBV基因分型有一定的相關(guān)性。結(jié)果表明，福建省閩西地區(qū)C型與B型HBV-DNA定量檢測結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義t＝2.517，P＜0.012。C型HBV-DNA定量檢測均值高于B型。見表1。

表1 乙肝病毒DNA定量測定（IU/mL， ±s）

表1 乙肝病毒DNA定量測定（IU/mL， ±s）

2.3 基因分型與乙肝表面抗原定量測定

在兩對乙型肝炎病毒半定量檢測項目中，HBsAg和HBeAg與HBV基因分型高度相關(guān)。結(jié)果表明，C型乙型肝炎表面抗原定量值高于B型肝炎，χ2=6.014，P＜0.014。見表2。

表2 基因分型與乙肝表面抗原[例（%）]

2.4 基因分型與乙肝 E 抗原定量測定

對300例感染者乙型肝炎E抗原定量測定值進行統(tǒng)計分析，結(jié)果表明：福建省閩西地區(qū)C型患者乙型肝炎E抗原定量測定值高于B型感染者，t=157.052，P＜0.001。見表3。

表3 乙肝E抗原定量測定（IU/mL， ±s）

表3 乙肝E抗原定量測定（IU/mL， ±s）

2.5 乙肝E抗原定量陽性率

C型肝炎E抗原陽性率高于B型肝炎，χ2=23.985，P＜0.001。見表4。

表4 乙肝E抗原定量陽性率[例（%）]

3 討論

乙型肝炎病毒其是一種嗜肝DNA病毒（hepadnaviridae），就目前研究現(xiàn)狀來看，乙型肝炎病毒是能夠感染人類DNA最小的病毒之一，其能夠?qū)е氯祟惣毙曰蚵圆《拘愿窝?，且能夠發(fā)展為肝硬化，其與肝癌疾病的病發(fā)有密切聯(lián)系，繼而能夠嚴(yán)重威脅人們的生命健康。全球78億人口中約有25億人感染過乙型肝炎病毒，現(xiàn)今依舊有近3億慢性乙型肝炎感染者，全球每年約有80萬人死于與HBV感染相關(guān)的肝臟疾病。據(jù)相關(guān)研究數(shù)據(jù)顯示，2019年中國人口乙肝表面抗原陽性率約為7.5%，乙型肝炎病毒攜帶者約有9 800萬人。由此，乙型肝炎病毒問題仍舊是對全球國家安全的威脅。

乙型肝炎病毒是最主要導(dǎo)致乙肝的病原菌，在人體表面能長時間生存，并可影響到未注射乙肝病毒者的易傳播群，其傳播源一般為：急性乙肝患者、緩慢乙肝患者，以及乙型肝炎病毒攜帶者。一般的傳染性路徑分為：母嬰傳染、透過血漿和血漿制品傳染、醫(yī)源性傳染，以及親密接觸傳染。HBV感染者，不管在潛伏時間、急性期或者慢性期，其血漿中均存在著感染性。不同地區(qū)的乙型肝炎病毒感染情況大不相同，感染情況主要取決于當(dāng)?shù)氐貐^(qū)人們的生活習(xí)慣、免疫水平以及主要傳播途徑等相關(guān)影響因素。由于目前全世界執(zhí)行乙型肝炎病毒疫苗免費接種方針以及地區(qū)人口流動等相關(guān)因素的影響，全世界乙型肝炎病毒流行病學(xué)有所變化。就現(xiàn)狀而言，我國防止乙型肝炎病毒的主要方法是免費注射疫苗，以提升新生兒乙肝疫苗的接種率。從1992年開始我國就于各省市范圍內(nèi)廣泛推行乙型肝炎病毒疫苗的接種工作，在2002年時我國將乙型肝炎病毒疫苗納入計劃免疫中，目前全國乙型肝炎病毒疫苗接種率＞98%。從2012年開始，我國對乙肝表面抗原陽性的準(zhǔn)父母所生下的新生兒采取乙肝免疫球蛋白聯(lián)合乙肝疫苗注射，乙型肝炎病毒母嬰傳播途徑的阻斷率大大提升。WHO于2016年提出了“2030年消除病毒性肝炎公共衛(wèi)生威脅的目標(biāo)”，其中明確提到2030年中國新發(fā)乙型肝炎病毒感染者下降90%，病死率下降65%。我國目前7 800萬左右的乙型肝炎病毒攜帶者中，僅有0.2%的攜帶者進行了有效治療，離實現(xiàn)目標(biāo)依舊有著很大的距離。除此之外，在治療方面全世界的慢性乙型肝炎患者僅有8.6%及時接受抗病毒治療，近90.0%的慢性乙型肝炎患者仍舊未能得到有效治療，在我國慢性乙型肝炎患者及時接受抗病毒治療的占比為10.0%。

不同國家的乙型肝炎病毒感染情況大不相同，其中，不同地區(qū)乙肝病毒基因型有顯著差異性，不同國家和地區(qū)乙肝患病率的差異除了生活習(xí)慣、免疫水平以及主要傳播途徑等相關(guān)影響因素之外，還與乙肝病毒的生物基因型、血清亞型和基因變異有顯著關(guān)系。不同地理區(qū)域的乙型肝炎病毒基因型不同，不同種族間乙型肝炎病毒的流行及傳播方式也不同。我國乙型肝炎病毒主要流行于A、B、C、D型肝炎，分別占1.5%、40.0%、51.0%和8.4%。不同省區(qū)的基因型也有很大差異。北部以C型為主，占81.6%；南部以B型為主，C型較少[6-7]。

本次研究中福建省閩西地區(qū)300例感染者基因分布是：B型151（50.33%）例，C型87（29.00%）例，非B非C型62（20.67%）例。統(tǒng)計結(jié)果與我國南方地區(qū)常見的乙型肝炎病毒感染情況一致。

不同基因型的乙型肝炎病毒具有不同的致病性和流行特征，因此了解乙型肝炎病毒基因型具有重要的臨床意義。結(jié)果表明，杭州地區(qū)C型乙型肝炎病毒DNA定量值高于B型，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），提示C型乙型肝炎病毒DNA復(fù)制更為活躍。然而，乙型肝炎病毒引起的免疫應(yīng)答和血清中乙型肝炎病毒的高滴度是危險因素之一。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，C型患者HBV-DNA水平高于B型患者，這可能是由于長期存在高HBV-DNA復(fù)制水平，導(dǎo)致C型患者肝臟炎癥活動更為嚴(yán)重，發(fā)生肝硬化所[8-9]。本研究報告，乙型和丙型感染者血清HBV-DNA差異無統(tǒng)計學(xué)意義。盡管HBV復(fù)制狀態(tài)與其基因型的關(guān)系仍存在爭議，但筆者認(rèn)為C型感染患者的乙肝病毒反復(fù)進入免疫清除期，造成肝組織持續(xù)損傷，預(yù)后比B型差。

據(jù)相關(guān)報道結(jié)果顯示，乙型肝炎病毒相較于丙型肝炎病毒（HCV）更加簡單的通過前C區(qū)基因突變引誘e抗原轉(zhuǎn)化，據(jù)本次研究結(jié)果顯示：丙型肝炎表面抗原定量值高于乙型肝炎（P＜0.05），丙型肝炎E抗原定量值高于乙型肝炎，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）乙型肝炎病毒復(fù)制活躍，易形成持久性病毒血癥，但不容易出現(xiàn)e系統(tǒng)的血清轉(zhuǎn)化，據(jù)相關(guān)報道結(jié)果顯示，有83%的肝癌患者出現(xiàn)甲胎蛋白水平升高，肝硬化患者的甲胎蛋白水平也出現(xiàn)不同程度的升高。據(jù)相關(guān)報道結(jié)果顯示，乙型肝炎病毒感染者相較于慢性乙型肝炎患者更加易發(fā)展成嚴(yán)重肝病，例如肝硬化，且疾病發(fā)展程度更為嚴(yán)重。與肝癌的發(fā)生關(guān)系更密切[10]。乙型肝炎病毒基因分型結(jié)果與AFP定量值是否存在相關(guān)性，有待進一步的統(tǒng)計學(xué)研究[11]。大量研究表明，抗HBV藥物治療尤其是干擾素治療的臨床療效直接關(guān)系到HBV-DNA的定量水平，低HBV-DNA載量可使干擾素治療有效，高HBV-DNA載量可導(dǎo)致干擾素治療效果差[12-13]。

本研究分析了福建省閩西地區(qū)乙型肝炎病毒基因型的分布，以及乙型肝炎病毒基因型與HBV-DNA定量、HBV雙半定量和AFP定量指標(biāo)的關(guān)系。由于不同乙型肝炎病毒基因型的地理分布、分子生物學(xué)特征和臨床轉(zhuǎn)歸不同，深入研究乙型肝炎病毒基因型對于進一步闡明乙型肝炎病毒的分子流行病學(xué)特征，確定傳播關(guān)系，具有重要意義，明確感染源，闡明發(fā)病機制及臨床治療效果。通過與其他研究進行對比，本研究數(shù)據(jù)結(jié)果與相關(guān)參考文獻相符[14]。

總而言之，通過對福建省閩西地區(qū)乙肝病毒基因分型的研究，對福建省閩西地區(qū)乙肝防治工作有著重要作用，并未乙肝病毒的精準(zhǔn)抗病毒治療提供臨床研究資料，由于本次研究樣本不多，需擴大樣本病例數(shù)，深入研究福建省閩西地區(qū)乙肝病毒基因分型情況。