曹政華，劉寅，孫莉

1.長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林 長(zhǎng)春 130117； 2.吉林省中醫(yī)藥科學(xué)院第一臨床醫(yī)院，吉林 長(zhǎng)春 130021

眩暈是指以頭暈?zāi)垦橹靼Y的一種疾病，眩是指眼花或眼前發(fā)黑，暈是指頭暈甚或感覺(jué)自身或外界景物旋轉(zhuǎn)[1]。眩暈的發(fā)病率很高，美國(guó)成人頭暈及平衡障礙的年患病人數(shù)超過(guò)3 300萬(wàn)，年患病率為14.8%[2]。中醫(yī)藥治療眩暈病歷史悠久，具有獨(dú)特的見(jiàn)解和優(yōu)勢(shì)，尤其在改善癥狀方面具有巨大潛力。苓桂術(shù)甘湯出自《傷寒論》，現(xiàn)代藥理學(xué)研究認(rèn)為其對(duì)β淀粉樣蛋白沉積以及由此引發(fā)的神經(jīng)細(xì)胞炎癥具有良好的改善作用，具有調(diào)控脂質(zhì)代謝和胰島素抵抗、保護(hù)心肌細(xì)胞和調(diào)節(jié)水液代謝的藥理作用[3]，但缺乏苓桂術(shù)甘湯全面的藥理作用機(jī)制總結(jié)，導(dǎo)致對(duì)其治療眩暈病的作用機(jī)制尚不明確。本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)構(gòu)建苓桂術(shù)甘湯的“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”多層次網(wǎng)絡(luò)圖，從苓桂術(shù)甘湯整體出發(fā)，探索其對(duì)眩暈病的有效活性成分、潛在靶點(diǎn)和作用機(jī)制，為進(jìn)一步研究治療眩暈病的作用機(jī)制提供一定理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 苓桂術(shù)甘湯相關(guān)靶點(diǎn)的篩選借助中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和分析平臺(tái)(traditional Chinese medicine systems pharmacology，TCMSP，https：//old.tcmsp.com/tcmsp.php)，對(duì)苓桂術(shù)甘湯中的“茯苓”“桂枝”“白術(shù)”和“甘草”的活性成分以口服利用度(oral bioavailability，OB)>30%、類(lèi)藥性(drug-likeness，DL)>0.18為標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行篩選以獲得活性化合物及其作用的蛋白質(zhì)靶點(diǎn)，并對(duì)其進(jìn)行整理篩選。對(duì)整理的苓桂術(shù)甘湯有效活性成分所涉及的蛋白質(zhì)靶點(diǎn)，統(tǒng)一通過(guò)蛋白質(zhì)數(shù)據(jù)庫(kù)(universal protein，UniProt)(www.uniprot.org)進(jìn)行規(guī)范化命名，使用Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)靶點(diǎn)信息進(jìn)行補(bǔ)充去重。

1.2 苓桂術(shù)甘湯有效活性成分及其靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建根據(jù)得到的苓桂術(shù)甘湯的有效活性成分及其蛋白質(zhì)預(yù)測(cè)靶點(diǎn)，采用Cytoscape_v3.7.2軟件，構(gòu)建苓桂術(shù)甘湯有效活性成分潛在靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)。

1.3 眩暈病相關(guān)靶點(diǎn)的篩選以“vertigo disease”“dizziness”“giddy”等與眩暈病相關(guān)的關(guān)鍵詞，通過(guò)Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)(www.genecards.org)和在線人類(lèi)孟德?tīng)栠z傳數(shù)據(jù)庫(kù)(oneline mendelian inheritance in man，OMIM)(www.omim.org)搜索眩暈病的相關(guān)靶點(diǎn)，并通過(guò)DRUGBANK數(shù)據(jù)庫(kù)(www.drugbank.ca)對(duì)其相關(guān)靶點(diǎn)進(jìn)行補(bǔ)充。在Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)中，Score值越高代表其與疾病的聯(lián)系越密切。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)，若靶點(diǎn)過(guò)多，對(duì)Score值取中位數(shù)進(jìn)行篩選，根據(jù)實(shí)際情況可繼續(xù)取中位數(shù)進(jìn)行篩選潛在靶點(diǎn)，合并3個(gè)疾病數(shù)據(jù)庫(kù)，并對(duì)其重復(fù)靶點(diǎn)進(jìn)行剔除后得到眩暈病的相關(guān)靶點(diǎn)。

1.4 苓桂術(shù)甘湯-眩暈病共同靶點(diǎn)的篩選在Venny2.1在線作圖軟件作圖工具平臺(tái)(bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny)中分別錄入苓桂術(shù)甘湯與眩暈病的靶點(diǎn)，并繪制韋恩圖，得到苓桂術(shù)甘湯與眩暈病的共同靶點(diǎn)。

1.5 苓桂術(shù)甘湯-眩暈病共同靶點(diǎn)蛋白質(zhì)相互作用(protein-protein interaction，PPI)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建將其所得到的共同靶點(diǎn)輸入STRING11.0數(shù)據(jù)庫(kù)(string-db.org)中進(jìn)行搜索，將物種設(shè)置為“Homo sapiens”，并把minimum required interaction score設(shè)置成大于0.4，其余設(shè)置為默認(rèn)，構(gòu)建其共同靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)。將PPI網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape_v3.7.2軟件中使其結(jié)果可視化，根據(jù)Degree值篩選出核心靶點(diǎn)，并構(gòu)建其核心靶點(diǎn)的網(wǎng)絡(luò)圖。

1.6 構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖將數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape_v3.7.2軟件中，構(gòu)建“苓桂術(shù)甘湯-成分-靶點(diǎn)-眩暈病”網(wǎng)絡(luò)圖，并對(duì)其網(wǎng)絡(luò)圖進(jìn)行可視化分析。

1.7 苓桂術(shù)甘湯-眩暈病共同靶點(diǎn)的通路分析將其共同靶點(diǎn)錄入到Metascape平臺(tái)(metascape.org)，設(shè)置P<0.01，進(jìn)行基因本體(gene ontology，GO)功能富集分析、京都基因和基因組百科全書(shū)(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)通路富集分析，并篩選出排名前20位的生物過(guò)程(biological process，BP)和信號(hào)通路，繪制條形圖和氣泡圖。

1.8 分子對(duì)接驗(yàn)證將獲取的部分核心基因通過(guò)PDB數(shù)據(jù)庫(kù)下載結(jié)構(gòu)，去除水分子和小分子配體，與其對(duì)應(yīng)的化合物使用AutoDock Vina軟件進(jìn)行分子對(duì)接，使用Pymol軟件進(jìn)行可視化繪圖。

1.9 核心基因在大腦組織中的分布通過(guò)HPA數(shù)據(jù)庫(kù)(www.proteinatlas.org/)對(duì)其核心基因進(jìn)行免疫組織化學(xué)數(shù)據(jù)收集，確定核心基因在人體大腦組織分布情況。

2 結(jié)果

2.1 苓桂術(shù)甘湯的活性成分及靶點(diǎn)以0B>30%和DL>0.18為條件篩選白術(shù)的活性成分7種，茯苓的活性成分15種，桂枝的活性成分7種，甘草的活性成分92種，桂枝與甘草共有活性成分1種，苓桂術(shù)甘湯的有效活性成分共有將活性成分120種(圖1)。再選擇“Related Targets”，篩選出苓桂術(shù)甘湯的有效活性成分及所對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)，其中白術(shù)有效活性成分4種，茯苓有效活性成分6種，桂枝有效活性成分6種，甘草有效活性成分88種。共預(yù)測(cè)靶點(diǎn) 1 896 個(gè)，白術(shù)預(yù)測(cè)靶點(diǎn)23個(gè)，茯苓預(yù)測(cè)靶點(diǎn)30個(gè)，桂枝預(yù)測(cè)靶點(diǎn)74個(gè)，甘草預(yù)測(cè)靶點(diǎn) 1 769 個(gè)，經(jīng)過(guò)剔除重復(fù)靶點(diǎn)后一共得到249個(gè)預(yù)測(cè)靶點(diǎn)，記錄各個(gè)有效活性成分的靶點(diǎn)數(shù)目，其中甘草取靶點(diǎn)數(shù)目較多的前10位的有效活性成分(表1)。對(duì)應(yīng)的靶點(diǎn)輸入U(xiǎn)niProt數(shù)據(jù)庫(kù)，并使用Swiss Target Prediction數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)靶點(diǎn)信息進(jìn)行補(bǔ)充，刪除去重，共篩選出212個(gè)藥物靶點(diǎn)。

圖1 苓桂術(shù)甘湯活性成分分布

2.2 苓桂術(shù)甘湯的活性成分及預(yù)測(cè)靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建通過(guò)分析得知苓桂術(shù)甘湯共有靶點(diǎn)212個(gè)(去重之后)，其中桂枝和甘草共有靶點(diǎn)1個(gè)(表1)，構(gòu)建苓桂術(shù)甘湯有效活性成分靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)(圖2)，包含319個(gè)結(jié)點(diǎn)，1 592條邊。

表1 苓桂術(shù)甘湯有效活性成分的部分基本信息

注：黃色是苓桂術(shù)甘湯的藥物，淺藍(lán)色是白術(shù)的有效活性成分，藍(lán)色是茯苓的有效活性成分，淡紫色是甘草的有效活性成分，紫色是桂枝的活性成分，紅色是桂枝和甘草共有的活性成分，桃紅色是其靶點(diǎn)。圖案大小不同代表不同的節(jié)點(diǎn)度值，圖案越大度值越大；透明度漸變也表示不同的節(jié)點(diǎn)度值，顏色越深，度值越大

2.3 疾病相關(guān)靶點(diǎn)的篩選從Genecards數(shù)據(jù)庫(kù)獲得“dizziness”靶點(diǎn)4 959個(gè)，“vertigo”靶點(diǎn)4 732個(gè)，“giddy”靶點(diǎn)59個(gè)。根據(jù)經(jīng)驗(yàn)Score大于中位數(shù)的目標(biāo)靶點(diǎn)為眩暈病的潛在靶點(diǎn)，如通過(guò)Genecards所得到的“dizziness”靶點(diǎn)Score最大值為80.85，最小值為0.18，中位數(shù)為8.31，根據(jù)既往經(jīng)驗(yàn)及靶點(diǎn)數(shù)目，需再取一次中位數(shù)，第2次中位數(shù)為14.54，故設(shè)定Score>14.54的靶點(diǎn)為“dizziness”的潛在靶點(diǎn)。結(jié)合OMIM數(shù)據(jù)庫(kù)獲得的“dizziness”靶點(diǎn)526個(gè)，“vertigo”靶點(diǎn)537個(gè)，“giddy”靶點(diǎn)534個(gè)；同時(shí)結(jié)合DRUGBANK數(shù)據(jù)庫(kù)補(bǔ)充相關(guān)靶點(diǎn)，對(duì)其數(shù)據(jù)進(jìn)行合并刪除重復(fù)值，最終得到1 776個(gè)眩暈病相關(guān)靶點(diǎn)。

2.4 苓桂術(shù)甘湯-疾病共同靶點(diǎn)的獲取在Venny2.1在線軟件作圖工具平臺(tái)上輸入212個(gè)藥物靶點(diǎn)、1 776個(gè)疾病靶點(diǎn)，繪制韋恩圖，兩者取交集后獲得藥物-疾病共同靶點(diǎn)114個(gè)(圖3)。

圖3 苓桂術(shù)甘湯-眩暈病共同靶標(biāo)韋恩圖

2.5 苓桂術(shù)甘湯-眩暈病共同靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建將苓桂術(shù)甘湯-眩暈病114個(gè)共同靶點(diǎn)錄入STRING數(shù)據(jù)庫(kù)中，將物種設(shè)置為人，取中置信度0.400，得到了苓桂術(shù)甘湯-眩暈病共同靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)(圖4)，共得到114個(gè)結(jié)點(diǎn)，2 115條邊，平均節(jié)點(diǎn)度37.1。將得到的PPI網(wǎng)絡(luò)數(shù)據(jù)導(dǎo)入Cytoscape_v3.7.2軟件中，以degree>34為條件，得到苓桂術(shù)甘湯治療疾病的核心靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖(圖5)。其中degree排名前10位依次為白細(xì)胞介素-6(interleukin-6，IL-6)、RAC-α絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶(AKT1)、腫瘤壞死因子(TNF)、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(VEGFA)、細(xì)胞腫瘤抗原p53(TP53)、半胱天冬酶3(CASP3)、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、轉(zhuǎn)錄因子AP-1(JUN)、基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)、前列腺素G/H合酶2(PTGS2)，說(shuō)明以上靶點(diǎn)在苓桂術(shù)甘湯治療眩暈病中起到關(guān)鍵作用，其中degree值最高的前10關(guān)鍵靶點(diǎn)，見(jiàn)表2。

圖4 苓桂術(shù)甘湯-眩暈病共同靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)

注：以Degree的度進(jìn)行排序，顏色越深，形狀越大，其度值越大

表2 度值最高前10的苓桂術(shù)甘湯和眩暈病關(guān)鍵靶點(diǎn)信息

2.6 構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖采用Cytoscape_v3.7.2軟件構(gòu)建“苓桂術(shù)甘湯-成分-靶點(diǎn)-眩暈病”網(wǎng)絡(luò)圖(圖6)，圖中共有213個(gè)結(jié)點(diǎn)，其中苓桂術(shù)甘湯活性成分97個(gè)。根據(jù)degree值篩選，其中MOL000098(quercetin/槲皮素)、MOL000422(kaempferol/山柰酚)、MOL000392(formononetin/刺芒柄花素)，其度值分別是178、62、36，說(shuō)明以上活性成分在苓桂術(shù)甘湯治療眩暈病中起到較為重要的作用。

注：綠色是苓桂術(shù)甘湯的有效活性成分，紅色代表著靶點(diǎn)，黃色代表著苓桂術(shù)甘湯，紫色代表著眩暈病

2.7 GO功能富集分析對(duì)苓桂術(shù)甘湯治療眩暈病的114個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能富集分析，其中GO BP富集分析結(jié)果為2 031個(gè)，主要富集于對(duì)無(wú)機(jī)物的反應(yīng)、活性氧代謝過(guò)程、對(duì)脂多糖的反應(yīng)、對(duì)受傷的反應(yīng)、積極調(diào)節(jié)細(xì)胞運(yùn)動(dòng)、凋亡信號(hào)通路、對(duì)氧氣水平的反應(yīng)、DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子活性的調(diào)節(jié)、對(duì)細(xì)胞外刺激的反應(yīng)、細(xì)胞分化的負(fù)調(diào)控等。

GO細(xì)胞組分(cell composition，CC)分析結(jié)果為93個(gè)，主要富集于對(duì)膜筏、質(zhì)膜蛋白復(fù)合物、細(xì)胞外基質(zhì)、膜面、細(xì)胞質(zhì)的核周區(qū)域、空泡、細(xì)胞體、細(xì)胞的頂端部分、黏著斑、早期內(nèi)體等。

GO分子功能(molecular function，MF)富集分析結(jié)果為151個(gè)，主要富集于轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合、細(xì)胞因子受體結(jié)合、泛素樣蛋白連接酶結(jié)合、蛋白激酶結(jié)合、蛋白酶結(jié)合、血紅素結(jié)合、絲氨酸水解酶活性、磷酸酶結(jié)合、蛋白質(zhì)異二聚活性等。

苓桂術(shù)甘湯治療眩暈病關(guān)鍵靶點(diǎn)的GO功能富集分析(圖7)。分別對(duì)GO功能富集分析的GO BP、GO CC和GO MF富集分析做出前20條信號(hào)通路氣泡圖(圖8、圖9、圖10)。

圖7 關(guān)鍵靶點(diǎn)的GO功能富集分析條形圖

圖8 GO BP前20條信號(hào)通路氣泡圖

圖9 GO CC前20條信號(hào)通路氣泡圖

圖10 GO MF前20條信號(hào)通路氣泡圖

2.8 KEGG通路富集分析將114個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行KEGG通路富集分析，得到了304條KEGG通路，主要富集于癌癥的途徑、糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號(hào)通路、IL-17信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、松弛素信號(hào)通路、p53信號(hào)通路等。KEGG通路富集分析前20條信號(hào)通路條形圖(圖11)和氣泡圖(圖12)。

圖11 關(guān)鍵靶點(diǎn)的KEGG功能富集分析條形圖

圖12 關(guān)鍵靶點(diǎn)的前20條KEGG功能富集氣泡圖

2.9 分子對(duì)接驗(yàn)證選取部分核心基因IL-6、AKT1和VEGFA靶蛋白與度值較高的化合物槲皮素、山柰酚和刺芒柄花素進(jìn)行分子對(duì)接，其結(jié)合能為-6.21～-3.03 kcal·mol-1，自由結(jié)合能越低，其結(jié)合活性越高，其相互作用可能性越大。核心靶點(diǎn)與有效成分對(duì)接結(jié)果(表3)，使用Pymol軟件進(jìn)行可視化繪圖(圖13)。

表3 部分核心靶點(diǎn)與有效成分對(duì)接結(jié)果 (kcal·mol-1)

注：A：IL-6與槲皮素；B：IL-6與山柰酚；C：IL-6與刺芒柄花素；D：AKT1與槲皮素；E：AKT1與山柰酚；F：AKT1與刺芒柄花素；G：VEGFA與槲皮素；H：VEGFA與山柰酚；I：VEGFA與刺芒柄花素

2.10 核心基因在大腦組織的分布通過(guò)HPA數(shù)據(jù)庫(kù)分析，發(fā)現(xiàn)IL-6主要在大腦組織的基底神經(jīng)節(jié)、大腦皮層、海馬結(jié)構(gòu)、腦橋和髓質(zhì)中分布；AKT1主要在大腦皮層的內(nèi)皮細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞和神經(jīng)氈中分布，使用抗體CAB003765染色，其中神經(jīng)元細(xì)胞為高度染色；VEGFA主要在大腦皮層的內(nèi)皮細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞、神經(jīng)元細(xì)胞和神經(jīng)氈中，使用抗體CAB005429染色，其中神經(jīng)元細(xì)胞為高度染色(圖14)。

注：A：IL-6在大腦皮層免疫組織化學(xué)結(jié)果；B：AKT1在大腦皮層免疫組織化學(xué)結(jié)果；C：VEGFA在大腦皮層免疫組織化學(xué)結(jié)果

3 討論

“心下有痰飲，胸脅支滿(mǎn)，目眩者，苓桂術(shù)甘湯主之?！币话阏J(rèn)為，其主治胸脅苦滿(mǎn)，目眩心悸，短氣而咳，舌苔白滑，脈弦滑或沉緊。苓桂術(shù)甘湯的組成為茯苓、桂枝、白術(shù)、甘草，其中茯苓味淡，具有利水消腫、健脾寧心的功效，有抗腫瘤、抗氧化、抗炎、保肝等藥理活性[4]；桂枝發(fā)汗解肌，溫通經(jīng)脈，助陽(yáng)化氣，平?jīng)_降逆，有抗菌和抗炎以及抗過(guò)敏等活性[5]；白術(shù)有益氣健脾，止汗固表、安胎等功效，用于機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)[6]；甘草有緩急止痛，調(diào)和諸藥的功效，具有抗炎、抗微生物等作用[7]。四藥合用，可溫陽(yáng)化飲、健脾利濕，用于治療中陽(yáng)不足痰飲所致的眩暈病。周劍宇等[8]發(fā)現(xiàn)，苓桂術(shù)甘湯能有效治療內(nèi)耳眩暈。劉姝伶等[9]總結(jié)王慶國(guó)使用苓桂術(shù)甘湯的經(jīng)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)其對(duì)眩暈病療效顯著。趙智儒等[10]對(duì)苓桂術(shù)甘湯的研究發(fā)現(xiàn)，其可明顯改善患者的眩暈癥狀，促進(jìn)患者的康復(fù)。

本研究共檢索出苓桂術(shù)甘湯的有效活性成分103種，得到預(yù)測(cè)靶點(diǎn)212個(gè)，其中苓桂術(shù)甘湯對(duì)眩暈病的關(guān)鍵靶點(diǎn)114個(gè)。其有效活性成分為槲皮素、山柰酚、刺芒柄花素、常春藤皂苷元等。槲皮素具有抗炎的作用，可以上調(diào)腦損傷后PGC-1α的表達(dá)，從而減少腦損傷后炎癥反應(yīng)所致的腦組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡，起到有效的腦保護(hù)作用[11]。山柰酚能通過(guò)抑制氧化應(yīng)激反應(yīng)[12]，對(duì)由氧化應(yīng)激引起的神經(jīng)損傷起到一定的保護(hù)作用。刺芒柄花素能夠?qū)股窠?jīng)細(xì)胞損傷[13]，其潛在機(jī)制可能與抑制腦內(nèi)炎癥反應(yīng)和神經(jīng)保護(hù)的氧化應(yīng)激有關(guān)。常春藤皂苷元有抗炎的作用，可以恢復(fù)受損的神經(jīng)功能[14]，其中核心靶點(diǎn)為IL-6、AKT1、VEGFA、MMP-9等。IL-6為具有多種生物學(xué)功能的細(xì)胞因子，在細(xì)胞分化中起著重要作用，可誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞分化，作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞。IL-6在神經(jīng)組織的生理穩(wěn)態(tài)中起關(guān)鍵作用[15]，在周?chē)窠?jīng)的再生中起著至關(guān)重要的作用，并且是神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子。AKT1可以調(diào)節(jié)代謝、細(xì)胞增殖、細(xì)胞存活、細(xì)胞生長(zhǎng)和血管生成的過(guò)程，控制新生神經(jīng)元整合過(guò)程的速度，包括正確的神經(jīng)元定位，樹(shù)突發(fā)育和突觸形成，通過(guò)調(diào)節(jié)AKT1抑制小鼠模型細(xì)胞凋亡起到對(duì)神經(jīng)的保護(hù)作用[16]，促進(jìn)神經(jīng)元樣PC12細(xì)胞的神經(jīng)突生長(zhǎng)[17]。VEGFA可以誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞遷移，抑制細(xì)胞凋亡并誘導(dǎo)血管透化，可促進(jìn)神經(jīng)損傷的修復(fù)[18]，也可影響前庭細(xì)胞增殖與凋亡的關(guān)系[19]。MMP-9在細(xì)胞外基質(zhì)的局部蛋白水解和白細(xì)胞遷移中可能起重要作用，在神經(jīng)損傷時(shí)起修復(fù)神經(jīng)系統(tǒng)的作用[20]。

本研究GO功能富集分析發(fā)現(xiàn)，GO BP富集主要集中于對(duì)無(wú)機(jī)物的反應(yīng)、活性氧代謝過(guò)程、對(duì)脂多糖的反應(yīng)等，活性氧代謝過(guò)程可以通過(guò)激活ERK或p38信號(hào)通路，促進(jìn)或抑制腦細(xì)胞增殖[21]。GO CC富集分析結(jié)果主要涉及膜筏、質(zhì)膜蛋白復(fù)合物、細(xì)胞外基質(zhì)等。膜筏的消耗能夠促進(jìn)中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周?chē)窠?jīng)系統(tǒng)中軸突再生長(zhǎng)[22]。GO MF富集分析集中在蛋白酶結(jié)合等。神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)蛋白對(duì)周?chē)椭袠猩窠?jīng)系統(tǒng)的發(fā)育和維持至關(guān)重要[23]。KEGG通路富集分析集中在IL-17信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、p53信號(hào)通路等。IL-17信號(hào)通路可介導(dǎo)星形膠質(zhì)細(xì)胞炎癥反應(yīng)[24]，其在中樞炎癥免疫反應(yīng)中起重要作用；p53信號(hào)通路通過(guò)對(duì)神經(jīng)損傷后軸突再生的調(diào)節(jié)，達(dá)到對(duì)神經(jīng)損傷的修復(fù)作用[25]；HIF-1信號(hào)通路[26]通過(guò)發(fā)揮對(duì)神經(jīng)的保護(hù)作用，保護(hù)神經(jīng)損傷及減輕神經(jīng)元的凋亡。

結(jié)合分子對(duì)接技術(shù)模擬核心基因與有效成分相互作用關(guān)系，發(fā)現(xiàn)篩選出的核心靶點(diǎn)IL-6、AKT1、VEGFA等和有效成分為槲皮素、山柰酚、刺芒柄花素等結(jié)合性較高，驗(yàn)證了其可能通過(guò)腦神經(jīng)的保護(hù)及修復(fù)，介導(dǎo)炎癥，維持腦組織穩(wěn)態(tài)等方面治療眩暈病。結(jié)合核心基因的免疫組織化學(xué)分析，發(fā)現(xiàn)其核心基因主要集中在大腦皮層中，尤其是神經(jīng)元細(xì)胞中，這正與眩暈病的病位在腦相符，側(cè)面驗(yàn)證苓桂術(shù)甘湯的有效成分在病位處緩解眩暈的癥狀。

綜上所述，苓桂術(shù)甘湯治療眩暈病通過(guò)核心靶點(diǎn)——IL-6、AKT1、TNF、VEGFA等參與IL-17信號(hào)通路、HIF-1信號(hào)通路、p53信號(hào)通路的調(diào)控，可能與調(diào)控中樞神經(jīng)炎癥，保護(hù)及重塑腦神經(jīng)和調(diào)節(jié)腦組織有關(guān)。本研究只是從理論上對(duì)其進(jìn)行探討，其結(jié)果有待于進(jìn)一步基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。