王敦建，焦慧文，錢 依，徐江浩，徐 皓，孫魯寧1，#a，王永慶1，#b（1.徐州醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，江蘇 徐州 1004；.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院臨床藥理研究室，南京 1009；.南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院普外科，南京 1009）

伊馬替尼是第一個(gè)被美國(guó)FDA批準(zhǔn)用于胃腸道間質(zhì)瘤（gastrointestinal stromal tumors，GIST）的酪氨酸激酶抑制劑，該藥可顯著延長(zhǎng)晚期GIST患者的無(wú)復(fù)發(fā)生存期[1]。伊馬替尼被吸收進(jìn)入血液循環(huán)后，在血漿中以結(jié)合型與游離型藥物存在，其中結(jié)合型藥物在體內(nèi)主要與白蛋白（albumin，ALB）、球蛋白（globulin，GLB）和α1-酸性糖蛋白（alpha-1-acid glycoprotein，AGP）結(jié)合，而只有游離型藥物才是伊馬替尼發(fā)揮藥理作用的重要部分[2]。伊馬替尼的主要代謝物為N-去甲基伊馬替尼，兩者具有相似的生物活性和效應(yīng)，且與體內(nèi)結(jié)合蛋白均具有較高的親和力[3-4]。藥物蛋白結(jié)合率的微小變化可能會(huì)對(duì)藥物游離濃度產(chǎn)生顯著影響，進(jìn)而通過濃度-效應(yīng)關(guān)系影響其藥理作用[5]。因此，測(cè)定體內(nèi)藥物的蛋白結(jié)合率就顯得尤為重要。

雖然國(guó)內(nèi)外已有同時(shí)測(cè)定伊馬替尼及其代謝物的報(bào)道，但樣品處理方法較繁瑣，靈敏度不高，檢測(cè)范圍不符合臨床要求，且大多采用超濾法[6-8]，該方法存在藥物容易和超濾裝置發(fā)生非特異性結(jié)合的缺點(diǎn)。目前也尚未有研究報(bào)道伊馬替尼及其代謝物與不同蛋白的結(jié)合情況。為此，本研究建立了平衡透析法結(jié)合液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜（liquid chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/MS）法測(cè)定伊馬替尼及其代謝物（N-去甲基伊馬替尼）與不同蛋白結(jié)合率的方法，并同法檢測(cè)GIST患者血漿中兩者的游離藥物濃度，旨在為伊馬替尼的安全用藥提供參考。

1 材料

1.1 主要儀器

本研究所用主要儀器有1290 Infinity型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司），AB-SCIEX API 4000型串聯(lián)四極桿質(zhì)譜儀（美國(guó)Applied Biosystem公司），Stratos型高速冷凍離心機(jī)、Single-Use RED Plate with Inserts型快速平衡透析裝置（美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司）等。

1.2 主要藥品與試劑

伊馬替尼對(duì)照品（純度98%，批號(hào)LPC0P57）、N-去甲基伊馬替尼對(duì)照品（純度98%，批號(hào)LN90O52）均購(gòu)自北京百靈威科技有限公司；伊馬替尼-d8（內(nèi)標(biāo)，純度98.7%，批號(hào)2-AJK-132-1）購(gòu)自加拿大Toronto Research Chemicals公司；ALB（純度20%，批號(hào)S20170005）購(gòu)自德國(guó)CSL Behring GmbH公司；GLB（純度5%，批號(hào)S19993042）購(gòu)自成都蓉生藥業(yè)有限公司；AGP（純度≥99%，批號(hào)SLBJ6840V）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司；磷酸鹽緩沖 溶 液（phosphate buffer saline，PBS，pH 7.2，批 號(hào)20012027）購(gòu)自美國(guó)Gibco公司；甲醇、乙酸、乙腈均為色譜純，乙酸銨為分析純，水為去離子純化水。

1.3 血漿來(lái)源

空白血漿由南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院血庫(kù)提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與質(zhì)譜條件

2.1.1 色譜條件 以Agilant ZORBAX Eclipse Plus C18（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）為色譜柱，以乙腈-10 mmol/L乙酸銨（含0.1%乙酸）溶液（77∶23，V/V）為流動(dòng)相；柱溫為35 ℃；流速為0.5 mL/min；進(jìn)樣量為1.0 μL；分析時(shí)間為2.5 min。

2.1.2 質(zhì)譜條件 離子源為電噴霧離子源；監(jiān)測(cè)方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)；采集模式為正離子；離子化電壓為5 500 V；離子源溫度為550℃；霧化氣壓為45 psi；渦輪氣壓為55 psi；氣簾氣壓為 35 psi；碰撞氣壓為 10 psi；用于定量分析的離子對(duì)分別為m/z494.4→394.2（伊馬替尼）、m/z480.4→394.2（N-去甲基伊馬替尼）、m/z502.4→394.2（內(nèi)標(biāo)）。

2.2 溶液的制備

2.2.1 伊馬替尼對(duì)照品溶液及其代謝物溶液 精密稱取伊馬替尼對(duì)照品10.22 mg（經(jīng)純度換算為10.02 mg）、N-去甲基伊馬替尼對(duì)照品5.13 mg（經(jīng)純度換算為5.03 mg），分別置于10 mL棕色量瓶中，用甲醇-水（1∶1，V/V）溶解并定容，混勻，制成質(zhì)量濃度為1.00 mg/mL的伊馬替尼對(duì)照品溶液和0.503 mg/L的代謝物溶液，于-40℃冰箱保存。

2.2.2 內(nèi)標(biāo)溶液 取伊馬替尼-d8 0.50 mg，置于10 mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并定容，制成質(zhì)量濃度為50.0 μg/mL的內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液；取內(nèi)標(biāo)儲(chǔ)備液適量，用甲醇稀釋至所需質(zhì)量濃度即可。

2.2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品溶液和質(zhì)控樣品溶液 取“2.2.1”項(xiàng)下伊馬替尼對(duì)照品溶液及其代謝物溶液適量，用甲醇稀釋后，各取2.5μL，加入空白血漿50μL，渦旋混勻，制成伊馬替尼質(zhì)量濃度分別為50.0、100、250、500、1 000、3 000、4 500、5 000 ng/mL，代謝物質(zhì)量濃度分別為25.0、50.0、125、250、500、1 500、2 250、2 500 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品溶液，以及伊馬替尼質(zhì)量濃度分別為50.0、120、750、4 000 ng/mL，代謝物質(zhì)量濃度分別為25.0、60.0、375、2 000 ng/mL的質(zhì)控血漿樣品溶液。取PBS 100μL，同法制備伊馬替尼及其代謝物質(zhì)量濃度分別均為2.00、5.00、10.0、20.0、40.0、120、180、200 ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)曲線PBS樣品溶液，以及質(zhì)量濃度分別均為2.00、4.80、30.0、160 ng/mL的質(zhì)控PBS樣品溶液。

2.3 樣本的預(yù)處理

2.3.1 血漿樣本的預(yù)處理 取血漿樣本50μL、甲醇2.5μL，渦旋混勻，加入100 ng/mL的內(nèi)標(biāo)溶液300μL，渦旋后于4℃下以16 000 r/min離心15 min，取上清液100μL，置于1.5 mL離心管中，加水900μL，渦旋混勻，取上清液進(jìn)樣分析。

2.3.2 PBS樣本的預(yù)處理 取PBS樣本100μL、甲醇2.5μL，渦旋混勻，加入10.0 ng/mL的內(nèi)標(biāo)溶液300μL，渦旋后于4℃下以16 000 r/min離心15 min，取上清液進(jìn)樣分析。

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 專屬性考察 分別取PBS、空白血漿、伊馬替尼（50.0 ng/mL）及其代謝物（25.0 ng/mL）的標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品溶液、患者血漿樣本適量，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，詳見圖1（PBS和空白血漿圖略）。由圖1可知，待測(cè)成分和內(nèi)標(biāo)的保留時(shí)間分別為1.48、1.26、1.43 min，各峰峰形良好，無(wú)雜峰干擾，空白血漿中的小分子內(nèi)源性物質(zhì)及PBS對(duì)測(cè)定無(wú)干擾，表明本方法專屬性良好。

圖1 伊馬替尼及其代謝物、內(nèi)標(biāo)的典型色譜圖

2.4.2 線性關(guān)系考察 取“2.2.3”項(xiàng)下標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以待測(cè)成分質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)（x）、待測(cè)成分與內(nèi)標(biāo)峰面積的比值為縱坐標(biāo)（y）進(jìn)行線性回歸（權(quán)重系數(shù)為1/C2）。結(jié)果顯示，血漿樣品中伊馬替尼的回歸方程為y＝0.002 00x+0.002 30（r＝0.998 3），代謝物的回歸方程為y＝0.000 620x+0.000 757（r＝0.997 1）；PBS樣品中伊馬替尼的回歸方程為y＝0.003 67x+0.001 64（r＝0.998 4），代謝物的回歸方程為y＝0.003 46x+0.001 77（r＝0.999 0）。這表明血漿樣品中伊馬替尼及其代謝物的檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍分別為50.0～5 000、25.0～2 500 ng/mL，定量下限分別為50.0、25.0 ng/mL；PBS樣品中線性范圍均為2.00～200 ng/mL，定量下限均為2.00 ng/mL。

2.4.3 準(zhǔn)確度和精密度試驗(yàn) 取“2.2.3”項(xiàng)下質(zhì)控血漿樣品溶液和質(zhì)控PBS樣品溶液，每濃度各5份，于同日內(nèi)按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，考察日內(nèi)精密度；連續(xù)測(cè)定3 d，考察日間精密度。以實(shí)測(cè)濃度與理論濃度進(jìn)行比較，用相對(duì)誤差（relative error，RE）考察準(zhǔn)確度。結(jié)果顯示，各樣品的日內(nèi)、日間RSD均不高于12.9%，RE為-6.3%～3.5%，符合生物樣品定量分析的要求[5]。

2.4.4 提取回收率與基質(zhì)效應(yīng)考察 取“2.2.3”項(xiàng)下質(zhì)控血漿樣品溶液（伊馬替尼120、750、4 000 ng/mL，代謝物60.0、375、2 000 ng/mL），每濃度各6份，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積（A1）。取空白血漿適量，共6份，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理后，分別加入伊馬替尼對(duì)照品溶液和代謝物溶液使其質(zhì)量濃度與上述質(zhì)量濃度對(duì)應(yīng)，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積（A2）。同時(shí)按2020年版《中國(guó)藥典》（四部）[5]要求，配制伊馬替尼質(zhì)量濃度分別120、4 000 ng/mL，代謝物質(zhì)量濃度分別為60.0、2 000 ng/mL的低、高質(zhì)量濃度基質(zhì)效應(yīng)樣本溶液，每濃度各6份，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積（A3）。按流動(dòng)相比例制備與上述濃度對(duì)應(yīng)的伊馬替尼及其代謝物對(duì)照溶液，每濃度各6份，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積（A4）。提取回收率＝A1/A2×100%，基質(zhì)因子＝A3/A4×100%。結(jié)果顯示，伊馬替尼及其代謝物、內(nèi)標(biāo)的平均提取回收率分別 為 89.2%～102.0%（RSD≤12.8%）、88.8%～99.7%（RSD≤14.3%）、99.0%（RSD＝8.8%），平均基質(zhì)因子分別 為 98.2%～103.3%（RSD≤4.6%）、99.8%～101.1%（RSD≤6.1%）、107.0%（RSD＝11.7%），符合生物樣品定量分析的要求[5]。

2.4.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 按“2.2.3”項(xiàng)下方法配制伊馬替尼質(zhì)量濃度分別為120、4 000 ng/mL，代謝物質(zhì)量濃度分別為60.0、2 000 ng/mL的質(zhì)控血漿樣品溶液，每濃度各12份，各取3份分別于室溫放置20 h、4℃自動(dòng)進(jìn)樣器放置20 h、冷凍（-70℃）長(zhǎng)期保存、-70℃反復(fù)凍融3次后，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，記錄峰面積。以實(shí)測(cè)濃度與理論濃度進(jìn)行比較，用RE考察穩(wěn)定性。結(jié)果顯示，伊馬替尼及其代謝物濃度的RSD均不高于8.3%（n＝3），RE為-7.4%～8.5%，表明待測(cè)成分在上述各種條件下穩(wěn)定性良好。

2.4.6 殘留考察 取“2.2.3”項(xiàng)下伊馬替尼及其代謝物質(zhì)量濃度分別為5 000、2 500 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)曲線血漿樣品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理，配制定量上限血漿樣本溶液；另取空白血漿50 μL，按“2.3”項(xiàng)下方法預(yù)處理，配制空白血漿樣本；再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，考察殘留效應(yīng)，重復(fù)循環(huán)5次。結(jié)果顯示，方法無(wú)殘留，不影響后續(xù)樣本的測(cè)定。

2.5 平衡透析實(shí)驗(yàn)

2.5.1 蛋白結(jié)合率檢測(cè)樣本的制備 取“2.2.1”項(xiàng)下伊馬替尼對(duì)照品溶液及其代謝物溶液適量，用甲醇稀釋，得伊馬替尼質(zhì)量濃度分別為120、4 000 ng/mL，代謝物質(zhì)量濃度分別為60、2 000 ng/mL的蛋白結(jié)合率工作溶液。同時(shí)將ALB（200 g/L）用PBS稀釋至45.0 g/L；將AGP（10.0 g/L）用PBS稀釋至0.100 g/L；將GLB（50.0 g/L）用PBS稀釋至25.0 g/L。取上述不同質(zhì)量濃度的蛋白溶液50μL和不同質(zhì)量濃度的蛋白結(jié)合率工作溶液2.5μL，置于1.5 mL塑料離心管中，混勻，制成3種不同蛋白結(jié)合率檢測(cè)樣本。

2.5.2 不同蛋白溶液結(jié)合率的測(cè)定 在一次性平衡透析板的紅色和白色孔中分別加入蛋白結(jié)合率檢測(cè)樣本或待測(cè)血漿樣本200μL、PBS 350μL，用密封帶覆蓋裝置，以800 r/min室溫渦旋2 h，分別從兩孔中吸出樣本，進(jìn)行如下檢測(cè)：取“2.5.1”項(xiàng)下蛋白結(jié)合率檢測(cè)樣本，按“2.3”項(xiàng)下方法處理，再按“2.1”項(xiàng)下色譜與質(zhì)譜條件進(jìn)樣分析，計(jì)算樣本濃度和蛋白結(jié)合率：蛋白結(jié)合率＝（樣本濃度-PBS濃度）/樣本濃度×100%。測(cè)定3次，取平均值。使用SPSS 26.0軟件，采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析（下同）。結(jié)果顯示，與低濃度伊馬替尼（120 ng/mL）及其代謝物（60 ng/mL）比較，高濃度伊馬替尼（4 000 ng/mL）及其代謝物（2 000 ng/mL）與AGP、GLB的血漿蛋白結(jié)合率顯著提高（P＜0.05），但與ALB的血漿蛋白結(jié)合率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。結(jié)果見表1。

表1 伊馬替尼及其代謝物與不同蛋白的結(jié)合率測(cè)定結(jié)果（n＝3）

2.5.3 不同質(zhì)量濃度伊馬替尼及其代謝物與空白血漿蛋白結(jié)合率的測(cè)定 取“2.2.3”項(xiàng)下質(zhì)控血漿樣品溶液（伊馬替尼低、中、高質(zhì)量濃度分別為120、750、4 000 ng/mL，代謝物質(zhì)量濃度分別為60、375、2 000 ng/mL），按“2.5.2”項(xiàng)下方法檢測(cè)蛋白結(jié)合率并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果顯示，中濃度伊馬替尼及其代謝物的血漿蛋白結(jié)合率與低濃度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；高濃度伊馬替尼及其代謝物的血漿蛋白結(jié)合率顯著低于低、中濃度（P＜0.01）。結(jié)果見表2。

表2 不同質(zhì)量濃度伊馬替尼及其代謝物與空白血漿的蛋白結(jié)合率測(cè)定結(jié)果（n＝3）

2.6 患者血漿中的蛋白結(jié)合率測(cè)定

2.6.1 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 本研究的納入標(biāo)準(zhǔn)為：（1）經(jīng)病理組織學(xué)證實(shí)為GIST；（2）接受腫瘤完整切除術(shù)且病理證實(shí)切緣陰性；（3）之前未服用過伊馬替尼；（4）GIST切除術(shù)后風(fēng)險(xiǎn)分級(jí)為中高度復(fù)發(fā)風(fēng)險(xiǎn)；（5）美國(guó)東部腫瘤協(xié)作組評(píng)分為0～2，重要臟器功能正常；（6）年齡為18～75歲；（7）所有患者均知情同意且簽署了知情同意書。本研究的排除標(biāo)準(zhǔn)為：（1）活動(dòng)性感染者；（2）妊娠期或哺乳期婦女；（3）嚴(yán)重臟器功能不全或丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶/天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶超過正常值上限3倍者；（4）本研究開始前4周或參加本研究的同時(shí)又參加了其他臨床研究者。

2.6.2 資料來(lái)源 本研究方案經(jīng)南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審查批準(zhǔn)，審查號(hào)為2013-SR-142。選擇該院2014年12月-2017年9月收治的GIST患者64例，其中男性33例、女性31例，平均年齡（54.3±11.8）歲。所有患者均接受伊馬替尼400 mg/d治療至少4周。

2.6.3 患者血漿中蛋白結(jié)合率的測(cè)定 采集所有患者處于穩(wěn)態(tài)時(shí)的谷濃度血漿樣本，按“2.5.2”項(xiàng)下方法檢測(cè)血漿蛋白結(jié)合率。結(jié)果顯示，伊馬替尼及其代謝物的平均血漿蛋白結(jié)合率分別為（99.0±0.3）%、（99.2±0.3）%。使用SPSS 26.0軟件，經(jīng)Pearson相關(guān)性分析，結(jié)果顯示，伊馬替尼及其代謝物的總濃度越大，其游離濃度越大（r分別為0.800 4、0.682 0，P均小于0.05），血漿蛋白結(jié)合率越低（r分別為-0.298 5、-3.332 3，P均小于0.05）。結(jié)果見圖2。

圖2 患者血漿中伊馬替尼及其代謝物的總濃度和游離濃度

3 討論

血漿蛋白結(jié)合率是藥動(dòng)學(xué)的重要參數(shù)，可以影響藥物的作用時(shí)間和強(qiáng)度[9]，已成為藥學(xué)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)之一。目前，測(cè)定體內(nèi)藥物游離濃度的方法主要有超濾法、超速離心法、平衡透析法[10]，其中平衡透析法最常用，具有操作簡(jiǎn)便、分析成本低、藥物在設(shè)備上非特異性吸附少等特點(diǎn)[11]。

本課題組前期考察了不同有機(jī)相（乙腈、甲醇）對(duì)色譜峰峰形和響應(yīng)的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩種試劑對(duì)色譜峰峰形和響應(yīng)的影響相差無(wú)幾，但乙腈的沉淀效果更佳，故選擇乙腈為有機(jī)相。同時(shí)還考察了不同水相[10 mmol/L乙酸銨溶液、10 mmol/L乙酸銨（含0.1%乙酸）溶液]的響應(yīng)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，雖然以10 mmol/L乙酸銨溶液為水相時(shí)，可保持水相的穩(wěn)定性和保留時(shí)間的重現(xiàn)性，但加入0.1%乙酸后，可增強(qiáng)電離和質(zhì)譜響應(yīng)，提高檢測(cè)靈敏度，故選擇乙腈-10 mmol/L乙酸銨（含0.1%乙酸）溶液為流動(dòng)相。本課題組前期還發(fā)現(xiàn)，當(dāng)流速為0.5 mL/min時(shí)，待測(cè)成分可獲得合適的保留時(shí)間；并且樣品的制備為簡(jiǎn)單的蛋白質(zhì)沉淀過程，這有效避免了復(fù)雜的萃取過程；此外，等度洗脫程序?yàn)榉治鎏峁┝朔€(wěn)定的基線和恒定的電離效率，實(shí)現(xiàn)了生物樣本的高通量分析。另有研究認(rèn)為，同位素內(nèi)標(biāo)法能極大降低離子化效應(yīng)，準(zhǔn)確率更高[12]，因此本研究選擇伊馬替尼-d8為內(nèi)標(biāo)。

本研究結(jié)果顯示，伊馬替尼及其代謝物與ALB的蛋白結(jié)合率較高，且高濃度伊馬替尼及其代謝物與AGP、GLB的血漿蛋白結(jié)合率顯著高于低濃度，但與ALB的蛋白結(jié)合率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這提示伊馬替尼及其代謝物與ALB的結(jié)合可能屬于飽和結(jié)合，此時(shí)若再增加藥物劑量，游離藥物濃度會(huì)不成比例地增加，甚至造成患者中毒，因此在臨床使用過程中應(yīng)引起重視，尤其是患者在服用競(jìng)爭(zhēng)同一蛋白位點(diǎn)的藥物時(shí)，需嚴(yán)密監(jiān)測(cè)體內(nèi)血藥濃度的變化。伊馬替尼及其代謝物與患者血漿的蛋白結(jié)合率結(jié)果顯示，伊馬替尼及其代謝物的總濃度越大，其游離濃度越大，血漿蛋白結(jié)合率越低，這可能是由于伊馬替尼及其代謝物與體內(nèi)蛋白的結(jié)合接近飽和狀態(tài)，隨著藥物濃度的增加，游離藥物占給藥量的比例增大。

綜上所述，本研究成功建立了測(cè)定伊馬替尼及其代謝物血漿蛋白結(jié)合率的方法；GIST患者伊馬替尼及其代謝物的血漿蛋白結(jié)合率與藥物濃度呈負(fù)相關(guān)。